白細胞計數(shù)和分類實驗報告

1、 白細胞計數(shù)和分類目的：掌握血涂片制備的操作要領、瑞氏染色方法、正常外周血五種白細胞形態(tài)特點、原理：各種白細胞必須經(jīng)過染色，才易于區(qū)分其類別。常用者為瑞氏（Wrights）染色法和姬姆薩(Giemsa)染色法。測定外周血液中各種白細胞的相對比值，以觀察其數(shù)量、形態(tài)和質(zhì)量變化，通過顯微鏡觀察染色血涂片，計算血液中各類白細胞的百分率，稱為白細胞分類計數(shù)。利用白細胞總數(shù)和各類白細胞的百分率，即可計算每mm3血液中各類白細胞的絕對值。實驗器材： 香柏油、蓋玻片、推片、采血針或注射器、小滴管、消毒棉球、瑞氏染液、pH6.46.8磷酸鹽緩沖液、蒸餾水、計數(shù)板及專用蓋片、針 1ml刻度移液管、1ml EP管

2、、光學顯微鏡。20ul刻度移液管、推片實驗步驟白細胞分類1血片制作：取一滴血，滴于潔凈無油脂的玻片一端。左手持玻片，右手再取邊緣光滑的另一玻片作為推片。將推片邊緣置于血滴前方，然后向后拉，當與血滴接觸后，血即均勻附在二玻片之間。此后以二玻片約呈3045度的角度平穩(wěn)地向前推至玻片另一端。推時角度要一致，用力應均勻，即推出均勻的血膜（血膜不可過厚、過?。⒅坪玫难科栏?，不可加熱。 4 / 4文檔可自由編輯注：（1）良好涂片標準：) 呈頭、體、尾舌形) 血膜厚薄適宜) 兩邊留有空隙（2）涂片好壞與下列因素有關：1）血滴大小2）推片與玻片之間角度3）推片速度2、血涂片的染色步驟： （1）用蠟筆在

3、血膜兩端各劃一道線，以免染料外溢，置涂片于染色架上。 （2）滴加瑞氏染液，共計七八滴數(shù)，以蓋滿血膜為度，靜置1分鐘。 （3）再滴加等量的磷酸緩沖鹽溶液，輕輕搖動，并輕吹液體使染色液與緩沖液混合均勻，靜置15分鐘。 （4）用清水沖洗。切勿先傾去染液再沖洗，否則沉淀物附于血膜上不宜出去。沖洗后斜置血涂片于空氣中干燥?；蛳扔脼V紙吸取水分迅速干燥，即可鏡檢。 3、白細胞分類計數(shù)：先用低倍鏡檢查涂片及染色是否均勻。然后加一滴香柏油于血膜厚薄均勻處（一般在體尾交界處），在油鏡下由此處開始按其形態(tài)特征進行分類計數(shù)，計數(shù)移動時避免重復。根據(jù)所見到的100個白細胞，記錄各種白細胞所占的百分數(shù)。 4、各類白細胞的

4、形態(tài)特征嗜中性白粒細胞：圓形，胞漿淡紅色，胞漿內(nèi)有多量紫紅色細小顆粒（染色不佳時則看不清楚）。核為藍紫色。嗜酸性白細胞：大小、形態(tài)與中性白細胞大體相似，唯胞漿內(nèi)含有粗大的鮮紅色顆粒。核多數(shù)為兩葉。嗜堿性白細胞：大小、形態(tài)與中性白細胞大體相似，但胞漿內(nèi)含有粗大的深藍色，常遮蓋在核上。核分葉不明顯淋巴細胞：分大小兩種，小淋巴細胞圓形，核染成深紫色，圓形或腎形，胞漿很少，常呈一小片月牙狀，染成藍色。大淋巴細胞，核圓形或腎形，胞漿相對較多，染成天藍色，在胞漿與核之間有淡染帶。有時內(nèi)含少數(shù)紫紅色大顆粒。單核細胞： 核染成紫色，其染色質(zhì)疏松，核形不規(guī)則。胞漿較多，染成淺灰藍色白細胞計數(shù)加稀釋液用吸管吸取白

5、細胞稀釋液0.38ml于小試管中。吸取血液用微量吸管吸取新鮮全血或末梢血20ul，擦去管尖外部余血。將吸管插入小試管中白細胞稀釋液的底部，輕輕放出血液，并吸取上層白細胞稀釋液清洗吸管2-3次 混勻?qū)⒃嚬苤醒号c稀釋液混勻，待細胞懸液完全變?yōu)樽睾稚珱_池再次將小試管中的細胞懸液混勻。用滴棒蘸取細胞懸液1滴，充入改良Neubauer計數(shù)板的計數(shù)池中，室溫靜置2-3min，待白細胞完全下沉。計數(shù)在低倍鏡下計數(shù)四角4個大方格內(nèi)的白細胞總數(shù)計算 白細胞總數(shù) =4大格白細胞數(shù)（N） /410 20 106 = N 20 109/L注：計數(shù)板上下各一個計數(shù)池計數(shù)區(qū)域分為9個大方格，四角的大方格各劃分為16個中方格，中央大方格劃分為25個中方格。四角的大方格為白細胞計數(shù)區(qū)，大方格四邊壓線細胞計左不數(shù)右，計上不數(shù)下實驗結(jié)果白細胞總數(shù) 白細胞=(35+42+39+37) /20*109=7.65*109/L中性粒細胞65個,占65% 單核細胞5個,占5%淋巴細胞:27個,占27% 嗜酸性粒細胞3個,占2%嗜堿性粒細胞1個,占1%注意事項1、.采血時針刺深度必須適當，不能過度擠壓，防止組織液滲入或采血時間太長引起血液凝固。2、白細胞總數(shù)在參考范圍內(nèi)，大方格間的細胞數(shù)不得相差10個以上，兩次重復計數(shù)誤差不得超過10。3