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文檔簡介
1、. 法:準TaqmanTaqman現(xiàn)在SNP的常用檢測方法主要有:法、質(zhì)譜法、芯片法、測序法。 (能適合于大樣本、多位點確性高,適合于大樣本、少位點,價格比較貴; 質(zhì)譜法:準確性高,測序法:非常準確,但是價芯片法:準確性較低,適合于超多位點分析; 檢測25個位點); 格也非常的高,但是對于少樣本、超多位點還是非常好的選擇。 SNP檢測方法匯總 分析SNP的方法有許多種,本文收集目前還在用的方法,按通量從高到低排列: 全基因組測序 這是最貴的方法,但也是看SNP最全的方法 大概一個人樣本,花2萬元 外顯子組測序 外顯子組測序,也可以得到較全面的SNP信息 大概一個人樣本,花1.5萬元 隨著人全基
2、因組測序的價格降到2萬元左右,外顯子組測序會很快退出市場 全基因組SNP芯片 原理,核酸雜交,熒光掃描 . . Illumina和Affymetrix都有很著名的全基因組SNP芯片,例如: Affymetrix: CytoScan,SNP 6.0, Illumina: 660,中華,450K等 SNP芯片,在20005000元每樣本,還是比全基因組測序的2萬元一個樣本的價格要低 質(zhì)譜法 原理,精確測量PCR產(chǎn)物的分子量,就可以知道SNP位點上是A/C/G/T中的哪一個 Sequenome MassArray法測中等通量的SNP位點是十分準確的 單個位點、單個樣本的費用約2元人民幣 無需預制芯片
3、、預訂熒光探針,只要合成常規(guī)的PCR引物就可以做實驗了 如果測幾十個點,到上百個點,是很方便的方法 SNPseq法 此方法為天昊公司所創(chuàng),一次測幾百個位點 原理: 用Goldgate法做出針對某些位點的多重PCR片段 . . 高通量測序,數(shù)據(jù)分析得到SNP位點結(jié)果 SNPlex 中等偏高通量的方法,一次幾十個位點 原理: 用末端特異的引物做多重PCR,把模板進行擴增 基于毛細管電泳,把片段分離開,讀顏色 SNaPshot 中等通量的方法 設(shè)計3位挨著目標位點的探針 用雙脫氧的熒光標記ddNTP做一個堿基的延伸 毛細管電泳,看延伸的這個堿基是什么顏色 Taqman法 Taqman原理,如果要找原理,請回復“熒光”兩字 Taqman方法,一次一管測一個位點 . . 通量最低,但是結(jié)果可靠 原理: 設(shè)計與SNP位點互補的熒光探針,其中一個標VIC(紅色熒光基團),另一個標FAM(綠色熒光基團),同時分別有淬來基團吸光 Taq酶有5-3的外切酶活性,如果探針粘有模板上,就被切碎 探針被切碎后,熒光基團與淬滅基團分離,發(fā)出熒光??礋晒忸伾涂梢灾繱NP位點上是什么堿基 ArrayTape法 基于Taqman原理 用塑料卷代替微孔板,用水浴鍋代替PCR儀,提供通量 費用降到0.7元/SNP/樣本以下 OpenArray法
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