草魚免疫因子研究進(jìn)展.

1、第 18卷第 4期上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào) Vol.18,No.4 2009年7月 JOURNAL OF SHANGHA IOCE AN UN I V ERSI TY July,2009 文章編號 :1674-5566(200904-0502-06 ? 綜述 ? 草魚免疫因子研究進(jìn)展 劉 峰 ,李家樂 (上海海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部水產(chǎn)種質(zhì)資源與養(yǎng)殖生態(tài)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室,上海 201306 摘 要 :草魚是我國主要養(yǎng)殖魚類之一 ,但其病害較多。作為機(jī)體免疫的重要組 成部分 ,草魚免疫因子日益受到研究者的重視。已研究的草魚免疫因子主要有免疫 球蛋白、主要組織相容性復(fù)合物、干擾素及相關(guān)因子、腫瘤壞死相關(guān)因子、補(bǔ)體、

2、趨化因子受體、凝集素、轉(zhuǎn)化生長因子等 ;草魚抗菌肽、轉(zhuǎn)鐵蛋白、正五聚體蛋 白、天然抗體等免疫因子尚未見報(bào)道。草魚中已發(fā)現(xiàn)的免疫球蛋白為Ig M,主要在 頭腎、中腎和脾中表達(dá)；組成MHC I復(fù)合體的MHC I蛋白及B2微球蛋白具有人同 源蛋白相似的結(jié)構(gòu) ;在干擾素及相關(guān)因子中 ,已研究的主要有干擾素、 Mx 蛋白、 PKP 蛋白等 ,病毒可誘導(dǎo)草魚頭腎、脾、外周血及胸腺細(xì)胞中的干擾素表達(dá) ；已研究的草 魚腫瘤壞死相關(guān)因子主要有 T RAF1、TRAF2、T2BP、T RA I L等;補(bǔ)體C3、C9及 趨化因子受體等部分免疫因子的編碼基因也已被克隆研究?，F(xiàn)已進(jìn)行的草魚免疫因 子研究主要為編碼基因的

3、克隆、序列分析、表達(dá)譜分析及蛋白的理化性質(zhì)和生理活 性檢測等。對各類草魚免疫因子的研究現(xiàn)狀分別進(jìn)行了概述。 關(guān)鍵詞:草魚;特異性免疫 ;非特異性免疫 ;免疫因子 中圖分類號 :S917 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 :A The research progress of im mune factors i n grass carp L IU Feng,L I J ia2le (Key L aboratory of A quatic Genetic Resources and A quacultural Ecology Certificated by the M inistry of A griculture,S

4、hanghai O cean U niversity,Shanghai 201306,China Abstract:Grass car p is one of the most i m portant cultured fishes in China.But compared with other main cultured fishes,it has weaker resistance t o many pathogens.I m mune fact ors have been e mphasized by more and more researchers in recent years

5、because of their i m portant r oles in i m mune syste m.I m mune fact ors studied in grass car p include i m mune gl obulin,MHC,interfer on and correlati on p r oteins,tumor necr osis fact ors and correlati on p r oteins,comp le ments,che motatic fact or recep t ors,lectins and transfor m ing gr owt

6、h fact ors.I g M is the only i m mune gl obulin found in grass car p,and it is exp ressed in head kidney,trunk kidney and s p leen mainly.Components of MHC I ,including MHC I heavy chain and B 2m icr ogl obulin,all have structures si m ilar t o its counter part in hu man.I nterfer on,Mx p r otein an

7、d PKP p r otein are main interfer on correlati on fact ors studied in grass car p.V irus can induce interfer on exp ressi on in cells fr om head kidney, s p leen,bl ood and thy mus in grass car p.T RAF1,T RAF2,T2BP and T RA I L all bel onging t o tumor necr osis correlati on fact ors have been studi

8、ed.The encoding gene of comp le ments C3and C9,che motatic fact or 收稿日期 :2008211206 基金項(xiàng)目：上海市科委基礎(chǔ)重大項(xiàng)目(06DJ14003;上海市重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目 (Y1101 作者簡介：劉 峰(1975-,男,湖南湘潭人 ,博士研究生 ,專業(yè)方向?yàn)樗a(chǎn)種質(zhì)資源與 遺傳育種。 通訊作者：李家樂,E2mail: recep t ors and s ome other i m mune fact ors have been cl oned and studied als o .Researches on i m mu

9、ne fact ors in grass car p have been mainly focused on the cl oning of encoding genes,sequence analysises,exp ressi on pattern analysises,studies of physical and chem ical p r operties and physi ol ogical activity until now . This paper p resented a revie w about studies on types of i m mune fact or

10、s in grass car p. Key words:grass car p;s pecific i m munity;nons pecific i m munity;i m mune fact ors草魚（C ten ophary ngodon idellus是我國淡水養(yǎng)殖的主要養(yǎng)殖對象之一，產(chǎn)量 及產(chǎn)值均位居我國和世界養(yǎng)殖魚類前列。但草魚的病害較多,各種疾病的頻發(fā)一直 是困擾草魚養(yǎng)殖生產(chǎn)的主要問題之一。免疫系統(tǒng)是魚類抵御病原入侵的主要屏障。 與其他脊椎動物類似 ,魚類免疫系統(tǒng)也由特異性免疫和非特異性免疫兩部分組成。 魚類免疫系統(tǒng)的發(fā)育、維持及正常運(yùn)行都有賴于各類免疫因子的表達(dá)和調(diào) 控1。

11、魚類免疫因子的研究可為揭示脊椎動物免疫系統(tǒng)進(jìn)化史、全面理解魚 類免疫系統(tǒng)組成及機(jī)制提 供關(guān)鍵依據(jù) 2,并在魚類疾病防治及抗病育種中具有廣闊的應(yīng)用前景 3 。至今 為止,魚類免疫因子研 究主要在西方養(yǎng)殖魚類及模式生物如虹鱒 （O ncorhynchus m ykiss 4、大西洋 鮭（S al m o sa lar 5斑點(diǎn)叉 尾魚回（Ictalurus punctatus 6、斑馬魚（D an io rerio 7等中進(jìn)行，對草魚等東亞 特有魚類的研究相對較 少。但近年來 ,草魚作為我國重要養(yǎng)殖魚類 ,其免疫因子也逐漸受到研究者的重 視,并已對草魚多種免疫因子的編碼序列、表達(dá)、調(diào)控及產(chǎn)物的理化特

12、性和功能等 進(jìn)行了研究 ,現(xiàn)分類綜述如下。 1 免疫球蛋白 免疫球蛋白為有頜類脊椎動物所特有。魚類主要的免疫球蛋白類型為I g M ,在 部分魚類中也有 I g D （斑點(diǎn)叉尾魚回、I gZ （斑馬魚、I gT （虹鱒、I gH （板鰓類等球蛋白類型的報(bào)道 8。草魚中至今只發(fā)現(xiàn)了 一種免疫球蛋白。 已發(fā)現(xiàn)的草魚免疫球蛋白重鏈和輕鏈分子量分別為52ku和26ku,總分子量為 309ku,推測由重 鏈和輕鏈復(fù)合物以 4聚體形式聚合 ,結(jié)構(gòu)與已報(bào)道的魚類 I g M 相同9。草魚 免疫球蛋白 M （I g M 重鏈 基因全長c DNA也于最近獲得克隆，其編碼576個(gè)氨基酸與鯉（Cyprinus ca

13、rpio 、斑馬魚等其他鯉科魚 類具有較高的相似性。熒光定量 PCR檢測表明，草魚I g M主要在頭腎、中腎 和脾中表達(dá) 10 。 2 主要組織相容性復(fù)合物及相關(guān)蛋白 主要組織相容性復(fù)合體 （MHC 是脊椎動物中一組高度多態(tài)的蛋白復(fù)合體 ,其主 要功能為呈遞抗原 ,使其為 T 細(xì)胞所識別,激活體液免疫和細(xì)胞免疫。與哺乳類相似 , 魚類MHC也主要分為MHC I和 MHC U兩類11。在草魚中僅對 MHC I復(fù)合體及MHC關(guān)聯(lián)肽源SI M P進(jìn) 行了研究。 MHC I復(fù)合體由一條具有多態(tài)性的 MHC I蛋白重鏈與一條B微球蛋白（B 2m 輕鏈非共價(jià)結(jié)合組成。草魚 MHC I基因c DNA已被克隆

14、,可根據(jù)a區(qū)分為兩個(gè)類 群。其 mRNA 在多種組織中均有表 達(dá)12,符合脊椎動物MHC I在各類有核細(xì)胞中表達(dá)的特性。草魚 B 2m基因由 4個(gè)外顯子和3個(gè)內(nèi)含子組成。編碼氨基酸三維結(jié)構(gòu)模擬結(jié)果表明 ，草魚MHC I蛋 白和B 2m與人MHC蛋白具有類似的結(jié) 構(gòu)13。 SI M P為MHC關(guān)聯(lián)肽源,是MHC I呈遞途徑的必要組分，并具有寡糖基轉(zhuǎn)移 酶的活性位點(diǎn),在蛋白糖基化中起重要作用。草魚 SI M P 基因編碼具有 11個(gè)跨膜 區(qū)的膜內(nèi)在蛋白 ,含有 4個(gè)潛在 N 連鎖糖基化位點(diǎn)。該基因由 16個(gè)外顯子和 15個(gè) 內(nèi)含子組成 ,長度超過 24kb 。草魚 SI M P 蛋白及其編碼基因的

15、結(jié)構(gòu)均很保守 ,與哺 乳動物基本相同。草魚 SI M P 的 mRNA 在各種組織中廣泛表達(dá) ,但在腦中的表達(dá)量 最高,與人 SI M P 在各組織中較均一的表達(dá)模式不同 14。 3 干擾素及相關(guān)因子 干擾素 （I F N 及其誘導(dǎo)的抗病毒因子是脊椎動物抵御病毒入侵的核心系統(tǒng)之 一。在草魚中 ,現(xiàn)已 3054期劉 峰,等:草魚免疫因子研究進(jìn)展 405 上 海 海 洋 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 18卷 對干擾素及相關(guān)因子Mx蛋白、PKP蛋白進(jìn)行了研究。 至今的研究表明，魚類至少具有兩類干擾素，分別與哺乳動物I型（a /和U型（丫 干擾素相似15-16。草魚中至今也分離出了兩類干擾素，可分別由病毒及PHA誘

16、 導(dǎo)。滅活草魚出血病毒可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的草魚頭腎、脾、外周血和胸腺細(xì)胞的干擾 素表達(dá)。病毒誘導(dǎo)的草魚干擾素理化特性與高等脊椎動物a/干擾素特性基本一致 在魚類細(xì)胞中表現(xiàn)出抗病毒作用 ,并對草魚巨噬細(xì)胞具有激活作用 ,但該型草魚干擾 素主要由T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，細(xì)胞來源上與人丫干擾素相同，而不同于a /干擾素17。 經(jīng)PHA誘導(dǎo)由草魚白細(xì)胞產(chǎn)生的草魚干擾素理化特性不同于a /干擾素,而與人丫 干擾素相同18。草魚干擾素基因開放閱讀框長 543bp,編碼181個(gè)氨基酸，前22個(gè) 氨基酸為信號肽。草魚I型干擾素基因與其他鯉科魚類具有較高同源性，與哺乳類 和鳥類的同源性則較低。該基因體外表達(dá)產(chǎn)物具有抗病毒及

17、誘導(dǎo) Mx 蛋白表達(dá)的活 性。RT2PCR檢測表明，經(jīng)Poly I :C及出血病毒誘導(dǎo)，干擾素可在草魚的腦、心和頭 腎中高水平表達(dá) 19-20。 Mx 蛋白是一類由干擾素誘導(dǎo)表達(dá)的抗病毒蛋白 ,在哺乳動物中具有直接的抗病 毒活性。草魚Mx基因編碼區(qū)長1884bp,編碼628個(gè)氨基酸。推測的草魚 Mx蛋白 具有脊椎動物Mx蛋白共有結(jié)構(gòu)特征，有一個(gè)三聯(lián)體GTP結(jié)合區(qū)、一個(gè)發(fā)動蛋白家 族典型結(jié)構(gòu)域及 C 端高度保守的亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域。經(jīng)病毒誘導(dǎo) ,在草魚肝臟中可 檢測到 Mx 的誘導(dǎo)后表達(dá) 21。 PKR蛋白也是一種由干擾素誘導(dǎo)的重要抗病毒蛋白，可作用于真核細(xì)胞翻譯起 始因子2a激酶(Eif22抑制

18、病毒蛋白的合成。以PolyI:C對草魚進(jìn)行誘導(dǎo),再采用鯽 PKR抗體對誘導(dǎo)前后草魚組織進(jìn)行 W estern2bolt檢測,可檢測到草魚PKR的誘導(dǎo)后 表達(dá),表明草魚可能具有與哺乳類相似的 PKR表達(dá)模式22。 4 腫瘤壞死及抑制相關(guān)因子 腫瘤壞死因子(T NF由淋巴細(xì)胞等產(chǎn)生，除可殺傷腫瘤細(xì)胞外，還具有免疫調(diào)節(jié) 及誘導(dǎo)白細(xì)胞遷移、增殖、分化、凋亡等功能。腫瘤壞死因子通過受體及一系列相 關(guān)因子發(fā)揮其生理功能。草魚中已研究的腫瘤壞死相關(guān)因子有 TRAF1、 TRAF2、 T2BP、 T RA I L 等。 T NF受體相關(guān)因子1(T RAF1在調(diào)節(jié)T NF信號傳導(dǎo)和阻止細(xì)胞凋亡中起到重 要作用，

19、是T NF活性的負(fù)調(diào)節(jié)因子。而 T NF受體相關(guān)因子2(T RAF2是整個(gè)T NF 受體超家族信號途徑中的關(guān)鍵組件。草魚 TRAF1及TRAF2基因全長c DNA均已 被克隆。編碼氨基酸序列分析表明，草魚T RAF1N端含有一個(gè)鋅指結(jié)構(gòu),C端含一個(gè) T RAF結(jié)構(gòu)域，與哺乳類TRAF1 一樣,也不含T RAF家族其它成員所共有的 R I N G 結(jié)構(gòu)。草魚 TRAF2N 端具有 R I N G 型結(jié)構(gòu),在中部含有一個(gè)鋅指 ,并具有一個(gè)由近 C端亞域和近N端亞域組成的保守T RAF結(jié)構(gòu)域。定量PCR及W estern2bolt檢測 表明 ,兩個(gè)基因均在各種組織中廣泛表達(dá) 23-24 。 草魚 T

20、 NF 受體相關(guān)因子結(jié)合蛋白 （T2BP 基因也已被克隆。與人 T2BP 基因在 5非翻譯區(qū)具有一個(gè)內(nèi)含子不同，草魚的T2BP基因沒有內(nèi)含子。該基因在多種組織 中表達(dá),在大中華鳋感染后表達(dá)上調(diào) ,且表達(dá)水平具有個(gè)體差異 25。 T NF相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（T RA I L屬于T NF超家族的II型跨膜蛋白，能在各種 細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。草魚 T RA I L 基因由 5個(gè)外顯子和 4個(gè)內(nèi)含子組成 ,啟動子 中含有多個(gè)在T NF表達(dá)中起重要作用的轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合區(qū)，其編碼蛋白C端具有一 個(gè)腫瘤壞死因子同源域。該基因在各種組織中廣泛表達(dá) 26。 QM 為最先在人體發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤抑制因子 ,在細(xì)胞生長、

21、分化及凋亡中起重 要作用。草魚 QM 基因在脾、心及腦中持續(xù)表達(dá) ,經(jīng)嗜水氣單孢菌和草魚出血病毒 誘導(dǎo)后,在頭腎、脾及肝中的表達(dá)顯著上調(diào) ,顯示其是一個(gè)與抗菌和抗病毒相關(guān)的炎 性應(yīng)激誘導(dǎo)因子 27。 5 凝集素 凝集素（lectin是一類能專一識別糖并與之非共價(jià)可逆結(jié)合的非酶、非抗體蛋白 質(zhì),可識別異己成 分如入侵病原菌 ,并通過凝集、包圍、調(diào)理、促進(jìn)吞噬等方式將其排出體外。 凝集素還參與凝血、細(xì)胞粘 連、蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)及創(chuàng)傷修復(fù)等系列生理進(jìn)程 28-29。草魚中已發(fā)現(xiàn)了 3種凝集 素。 最先發(fā)現(xiàn)的草魚凝集素為一種血清凝集素，分子量67ku,等電點(diǎn)6.2,能識別和凝 集紅細(xì)胞、細(xì)菌 及酵母 ,活性可

22、被半乳糖、甘露糖等抑制 ,耐酸、堿、熱 ,并可促進(jìn)巨噬細(xì)胞的吞 噬30 。 從草魚卵巢和魚卵中分離得到的凝集素可與鼠李糖特異性結(jié)合。該凝集素分子 量為205ku,由6 個(gè)亞基組成 ,對熱、酸、堿及胰蛋白酶敏感 31。經(jīng)免疫活性檢測 ,該凝集素可 促進(jìn)小鼠脾細(xì)胞及腹腔滲 出細(xì)胞的有絲分裂 ,并可刺激鯛吞噬細(xì)胞的吞噬活性 ,具有免疫促進(jìn)作用 32。 最近已對一種草魚新型凝集素 I ntelectin 的基因序列進(jìn)行了測定。該基因與人 及斑馬魚的 I ntelectin 基因同源,由 7個(gè)外顯子和 6個(gè)內(nèi)含子組成 ,在除肝外的多種組 織中均有表達(dá) ,經(jīng) LPS 誘導(dǎo)后, 在頭腎、中腎、脾及小腸中的表

23、達(dá)水平顯著上調(diào),表達(dá)模式類似于哺乳類的 I ntelectin I 33。 6 補(bǔ)體 補(bǔ)體系統(tǒng)是機(jī)體免疫的重要組成部分 ,其功能主要是促進(jìn)吞噬和溶解靶細(xì)胞。 通過補(bǔ)體介導(dǎo)的溶 裂途徑清除病原 ,是先天免疫反應(yīng)的重要效應(yīng)機(jī)制 34-35。 草魚中至今已研究的補(bǔ)體有 C3和C9兩種,其編碼基因已被克隆，并已對其體內(nèi) 表達(dá)進(jìn)行了檢測。草魚C3基因在感染大中華鳋（S inergasilus m ajor草魚的肝、 脾、鰓等組織中的表達(dá)量增加 ,表明其可能 參與抗寄生蟲感染36-37。草魚C9基因由11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子組成，與 人和河豚的同源基因結(jié) 構(gòu)相似。其啟動子和第 1 內(nèi)含子區(qū)域具有多個(gè)轉(zhuǎn)錄

24、因子結(jié)合位點(diǎn) ,推導(dǎo)氨基酸 序列包含一個(gè)低密度脂蛋白受體結(jié)構(gòu)域、一個(gè)表皮生長因子前體結(jié)構(gòu)域、一個(gè) MACPF 結(jié)構(gòu)域和兩個(gè) TSP 結(jié)構(gòu)域。 RT 2PCR 檢 測發(fā)現(xiàn)，草魚C9在各組織中組成型表達(dá)，經(jīng)柱狀黃桿菌誘導(dǎo)后在頭腎、脾、肝 中的表達(dá)顯著上調(diào) 38 。 7 其他 7.1 趨化因子及受體 趨化因子為分泌型細(xì)胞因子 ,在炎癥或損傷發(fā)生時(shí) ,可誘導(dǎo)各類白細(xì)胞到達(dá)感染 區(qū)域。趨化因子在 誘導(dǎo)過程中 ,通過位于膜上的 7 跨膜區(qū)受體蛋白起作用 39-40。草魚趨化因子 受體 CXCR3 基因編碼 341個(gè)氨基酸,具有哺乳類中同源基因共有的 7個(gè)跨膜區(qū)。其 mRNA 在除心臟 外的多種組織中均有表

25、達(dá) ,其中在腦中的表達(dá)量最高。免疫組化分析表明 ,該蛋白分 布于血液中的單核細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞內(nèi) ,并可在腦的蒲肯野氏細(xì) 胞及神經(jīng)元中表達(dá)。推測該受體在魚類中除具有免疫相關(guān)功能 外,還可能與神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān) 41。 7.2 蛋白酶抑制因子 a巨球蛋白為動物體內(nèi)重要蛋白酶抑制因子之一。對分離純化的草魚a2巨球 蛋白研究表明 ,其具有與哺乳類同源蛋白相似的構(gòu)象改變特性 ,并可抑制嗜水氣單孢 菌胞外蛋白酶的活性。從已克隆的草魚 a2巨球蛋白部分c DNA序列推測該蛋白 “Bait區(qū)與鯉a2巨球蛋白等同源蛋白間差異較大，可 能與病原體差異導(dǎo)致的選擇壓力有關(guān) 42。 7.3 轉(zhuǎn)化生長因子 轉(zhuǎn)化

26、生長因子作為細(xì)胞調(diào)控因子 ,對免疫系統(tǒng)具有多效性。草魚轉(zhuǎn)化生長因子 B 1(TGF 2 B基因c DNA全長序列已被測定。RT 2PCR檢測表明，該基因主要在草魚胸 腺、頭腎和脾中表達(dá)。采用人重組 TGF 2 B對草魚外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行處理后發(fā)現(xiàn)，該蛋白可誘導(dǎo)外周血淋巴細(xì)胞增殖 和細(xì)胞內(nèi)MHC I的表達(dá)，同時(shí)顯著阻滯植物凝集素或脂多糖誘導(dǎo)的外周血淋巴細(xì) 胞的增殖 ,表明轉(zhuǎn)化生長因子在草魚體 內(nèi)可能具有較復(fù)雜的免疫調(diào)控機(jī)制 43 。 7.4 富亮氨酸重復(fù)蛋白 富亮氨酸重復(fù) (LRR s 為通用型結(jié)合基序 ,含有 LRR s 的蛋白組成一個(gè)大的家族 該家族成員可傳 5054期劉 峰,等:草魚免疫因

27、子研究進(jìn)展 605 上 海 海 洋 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) 18卷 遞特異病原相關(guān)分子 ,激活先天免疫系統(tǒng) ,在蛋白間相互作用及宿主防御中起作 用。在草魚中已克隆獲得兩個(gè)富亮氨酸重復(fù)蛋白基因 ,分別與哺乳動物中編碼含富 亮氨酸重復(fù)的 G ARP 和 LRG 基因同源。在草魚體內(nèi) ,這兩個(gè)基因均可被寄生蟲感 染誘導(dǎo)表達(dá) 44 。 7.5 核因子 細(xì)胞活化核因子是 T 細(xì)胞核 DNA 結(jié)合復(fù)合體的主要組件 ,作為抗體受體反應(yīng)元 件 2(ARRE22 與白介素 22基因啟動子結(jié)合 ,調(diào)控 I L22 的轉(zhuǎn)錄。草魚核因子 NF45 全長 c DNA 已被克隆 ,其編碼蛋白高度保守。該因子在草魚頭腎、脾、心、腦

28、、 肝、鰓等多種組織中均有表達(dá) ,經(jīng) PHA 誘導(dǎo),其在大多數(shù)組織中的表達(dá)上調(diào) 45。 綜上所述,近年來，草魚免疫因子的研究已有一定進(jìn)展。但由于起步相對較晚，與 西方主要養(yǎng)殖魚類相比，草魚免疫因子研究仍有一定差距。至今為止，草魚抗菌肽、 轉(zhuǎn)鐵蛋白、正五聚體蛋白、天然抗體等免疫因子尚未見報(bào)道，已研究的免疫因子也 僅為各免疫因子家族的少數(shù)成員1。仍有大量草魚免疫因子尚未被發(fā)現(xiàn)，部分已進(jìn) 行的研究也還有待深入。鑒于魚類復(fù)雜的免疫系統(tǒng)及眾多的免疫因子，草魚免疫因 子的研究仍需進(jìn)一步加強(qiáng)，以期全面了解草魚免疫系統(tǒng)及其相關(guān)調(diào)控，并發(fā)掘影響草 魚抗病力的重要免疫因子，為最終解決草魚疾病防治難題奠定基礎(chǔ)。 參

29、考文獻(xiàn)： 1 Berglj ot M.l nnate i m munity of fishJ.Fish&Shellfish I m munol ogy,2006,20(2:137-151. 2 Debbie A P,Patrick C H,Joh n G W,et al.Comparis on of select inn ate i m mune mecha nis m s of fish and mammalsJ.Xe no2 trans p Ian tati o n,2005,12(4:266-277. 3 B rick nell I,Dal m o R A.The use of i m

30、muno sti m ula nts in fish larval aquacultureJ.Fish&Shellfish I m munol ogy,2005,19(5:457- 472. 4 Pani grahia A,Kir ona V,Sat oh S,et al.I m mune modulati on and exp ressi on of cyt okine genes in rain bow tr out O n corh yn chus m ykiss upon p r obi otic feed in gJ.Devel opme ntal and Comparative I

31、 m munol ogy,2007,31:372-382. 5 Qyvind H,Jacob T,Mohasina S,et al.Exp ressi on p r ofiles of infla mmat ory and i m mune2related genes in A tlantic sal m on(Sal m o salar L.at early ti m e post vaccinati onJ.Vaccine,2005,23:5488-5499. 6 Eric P,Puttharat B,Jeffery T,et al.Exp ressi on analysis of the

32、 acute phase res ponse in channel catfish(Ictalurus punctatusafter infecti on with a Gram2negative bacteriumJ.Devel opmental and Comparative I m munol ogy,2007,31:1183-1196. 7 Con S,Car ol H K.Zebrafish as a model f or infecti ous disease and i m mune functi onJ.Fish&Shellfish I m munol ogy,2008,25(

33、4:341 -350. 8 Danil ova N,Buss mann J,Jekosch K,et al.The i m munogl obulin heavy2chain l ocus in zebrafish:identificati on and exp ressi on of a p refi ously unknown is otype,i m munogl obulin ZJ.Nat I m munol,2005,6:295- 302. 9 李亞南.嗜水產(chǎn)氣單胞菌誘導(dǎo)的草魚免疫球蛋白分析J.動物學(xué) 報(bào),2001,47(2:132-138. 10 王欣欣,孫寶劍,昌鳴先,等.草魚免

34、疫球蛋白 M 重鏈基因的克隆及表達(dá) J. 水產(chǎn)學(xué)報(bào) ,2008,32(1:13-20. 11 Cardwell T N,Shefer R J,Hedrick P W.MHC variati on and tissue trans p lantati on in fishJ.J Hered,2001,92:305-308. 12 Yang T Y,Hao H F,J ia Z H,et al.Characterisati on of grass car p(C tenopharyngodon idellusMHC class I domain lineagesJ.Fish& Shellfish

35、I m munol ogy,2006,21(5:583-591. 13 Hao H F,L i X S,Gao F S,et al.Secondary structure and3D homol ogy modeling of grass car p(C tenopharyngodon idellusmaj or hist ocompatibility comp lex class ImoleculesJ.Pr otein Exp ressi on and Purificati on,2007,51:120-125. 14 Xu Z Y,N ie P,ChangM X,et al.Cl oni

36、ng,characterizati on and exp ressi on analysis of SI M P(s ource of i m munodom inantMHC2ass ociated pep tidesin grass car p C tenopharyngodon idellaJ.Fish&Shellfish I m munol ogy,2008,24(6:701-714. 15 Goodboum L,D idcock S,Randall R E.I nterfer ons:cell signalling,i m mune modulati on,antiviral res

37、 ponses and virus counter measures J.J Gen V ir ol,2008,81:2341-2364. 16 Boesen H T,Pederesn K,Koch C.I m mune res ponse of rainbow tr out(O ncorhynchus m ykisst o antigenic p reparati ons fr om V ibrio anguillarum ser ogr oup O lJ.Fish&Shellfish i m munol,1997,7(8:543-553. 17 邵建忠，項(xiàng)黎新.草魚干擾素的分離純化及某些理

38、化和生物學(xué)特性 J水產(chǎn) 學(xué)報(bào),2000,24(1:11-16. 18 邵健忠，項(xiàng)黎新.PHA體外誘導(dǎo)草魚白細(xì)胞產(chǎn)生干擾素的研究J.海洋與湖 沼,2001,32(2:117-124. 19 王 莉.克隆與表達(dá)草魚干擾素基因及其抗彈狀病毒效果的研究D.2005. 4 期劉 峰 ,等 : 草魚免疫因子研究進(jìn)展 20 林慧芳 . 魚類干擾素和核因子 45 基因克隆 、 結(jié)構(gòu)分析及其在酵母中表達(dá) 的研究 D . 杭州 : 浙江大學(xué) , 2006. 507 21 吳海峰 ,白俊杰 ,勞海華 ,等 . 草魚 Mx 蛋白體內(nèi)誘導(dǎo)表達(dá)的初步研究 J . Anim al B iotechnology Bullet

39、in, 2004, 19 ( 1 : 12 - 17. 22 彭 悟 ,湯雅男 ,胡成鈺 . CaPKR 2like 在鯽魚與草魚組織中的表達(dá) 特性分析 J . 動物學(xué)研究 , 2007, 28 ( 5 : 465 - 469. 23 Xu Z Y, Sun B J, Chang M X, et a l . Characterization and exp ression analysis of TNFR associated factor 1 ( TRAF1 in grass carp C tenopha ryngodon idella J . Veterinary I mmunology

40、and I mmunopathology, 2008, 121 : 44 - 57. 24 Xu Z Y, N ie P, Sun B J, et a l . Molecular identification and exp ression analysis of tumor necrosis factor recep tor2associated factor 2 in grass carp C tenopha ryngodon idella J . Acta B iochim B iophys Sin, 2007, 39 ( 11 : 857 - 868. 25 Chang M X, N

41、ie P, Sun B J. Molecular cloning of TRAF2 binding p rotein gene and its p romoter region from the grass carp C tenopha ryngodon idellus J . Veterinary I mmunology and I mmunopathology, 2005, 105 : 105 - 113. 26 Chang M X, N ie P, Xie H X, et al . Characterization and exp ression analysis of TNF 2rel

42、ated apop tosis inducing ligand ( TRA I L in grass carp C tenopha ryngodon idella J . Veterinary I mmunology and I mmunopathology, 2006, 110 : 51 - 63. 27 W en Y, Shao J Z, Pan X X , et a l . Molecular cloning, characterization and exp ression analysis of QM gene from grass carp ( C tenopha ryngodon

43、 idellus homologous to W ilm s tumor supp ressor J . Comparative B iochem istry and Physiology , 2005, 141 : 356 - 365. 28 McGreal E P, Martinez2Pomares L, Gordon S . D ivergent roles for C 2type lectins exp ressed by cells of the innate immune system J . Mol I mmunol, 2004, 41 : 1109 - 1121. 29 Hol

44、m skov U , Thiel S, Jensenius J C. Collections and ficolins: humoral lectins of the innate immune defense J . Annu Rev I mmunol, 2003, 21 : 547 - 587. 30 邵健忠 ,項(xiàng)黎新 . 草魚血清中一種 新的凝集素免疫因子 J . 海洋與湖沼 , 2001, 32 ( 5 : 519 - 526. 31 Nga T B , Lama Y W , Woo N Y S . The immunostim ulatory activity and stabili

45、ty of grass carp ( C tenopha ryngodon idellus roe lectin J . Veterinary I mmunology and I mmunopathology, 2003, 94 : 105 - 112. 32 Lam Y W , Ng T B. Purification and characterization of a rhamnose2binding lectin with immunoenhancing activity from grass carp ( C tenopha ryngodon idellus ovaries J . P

46、rotein Exp ression and Purification, 2002, 26 : 378 - 385. 33 Chang M X, N ie P. Intelectin gene from the grass carp C tenopha ryngodon idella: cDNA cloning, tissue exp ression, and immunohistochem ical localization J . Fish & Shellfish I mmunology, 2007, 23 ( 1 : 128 - 140. 34 W ang T, Secombes C J

47、. Comp letes equencing and exp ression of three comp lement components, C Ir, C4 and C I inhibitor, of the classical activation pathway of the comp lement system in rainbow trout O ncorhynchus m ykiss J . I mmunogenetic, 2003, 55 : 615 - 628. 35 Holland M C H, Lambris J D. The comp lement system in

48、teleost J . Fish & Shellfish I mmunol, 2002, 12 ( 5 : 399 - 420. 36 昌鳴先 ,聶 品 . 草魚補(bǔ)體 C3 基因的克隆 及在感染大中華鳋草魚個(gè)體的表達(dá)分析 J . 自然科學(xué)進(jìn)展 , 2004, 14 ( 8 : 870 - 881. 37 Chang M X, N ie P, L iu G Y . Identification of immune genes in grass carp C tenopharyngodon idella in response to infection of the parasitic copepod S inergasilus m a jor J . Parasitol Res, 2005, 96 : 224 - 229. 38 L i L, Chang M X, N ie P. Molecular cloning, p romoter analysis and induced exp ression of the comp lement component C9 gene in the grass carp C tenopha ryngodon idella J . Veterinary I mmunology and I