誘變育種流程及紫外誘變育種的詳細(xì)步驟

1、1. 首先是天然菌種的選育： 調(diào)查研究及查閱充分的資料設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案J確定采集樣品的生態(tài)環(huán)境 米樣J確定特定的增殖條件增殖培養(yǎng)確定特殊的選擇培養(yǎng)基及可能的定性或半定量快速檢出法平板分離原種斜面J確定發(fā)酵培養(yǎng)基礎(chǔ)條件篩選初篩（1株1瓶）復(fù)篩（1株35瓶）J結(jié)合初步工藝條件摸索再復(fù)篩（1株35瓶）3 5株單株純種分離生產(chǎn)性能試驗(yàn)t毒性試驗(yàn)菌種鑒定2. 誘變菌種:出發(fā)菌株-菌種純化（出發(fā)菌株性能測定）-制備斜面孢子 -制備單孢子懸液（懸液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)）-誘變劑處理（存活菌數(shù) 的測定并計(jì)算存活率）-平板分離（測定變異率）-挑取變異菌落 并移植至斜面上-初篩（初篩數(shù)據(jù)分析，生產(chǎn)性狀的粗測）-斜面 傳代-復(fù)

2、篩（復(fù)篩數(shù)據(jù)分析，精確測定生產(chǎn)性狀）-變異菌株（菌 株參數(shù)分析）-小型或中型投產(chǎn)試驗(yàn)-大型投產(chǎn)試驗(yàn)。誘變育種應(yīng)把握的主要原則有以下幾點(diǎn)：1）選擇簡便有效的誘變 劑。在選用理化因素作誘變劑時(shí)，在同樣效果下，應(yīng)選用最簡便的因 素；在同樣簡便的條件下，應(yīng)選用最高效的因素。2）挑選優(yōu)良的出發(fā) 菌株。最好采用生產(chǎn)上已發(fā)生自變的菌株，選用對誘變劑敏感的菌株， 選取有利于進(jìn)一步研究或應(yīng)用性狀的菌株。4）處理單細(xì)胞或孢子懸液。單細(xì)胞懸液應(yīng)均勻而分散，孢子、芽孢等應(yīng)稍加萌發(fā)。5）選用合適的誘變劑量。一般正變較多出現(xiàn)在低劑量中，負(fù)變較多地出現(xiàn)在高 劑量中。6）選用高效的篩選方法。紫外線誘變育種：紫外線誘變一般采用

3、15W紫外線殺菌燈，波長為253-265nm燈 與處理物的距離為30cm照射時(shí)間依菌種而異，一般為幾秒至幾十 分鐘。一般我們常以細(xì)胞的死亡率表示，希望照射的劑量死亡率控制 在7080%為宜。被照射的菌懸液細(xì)胞數(shù)，細(xì)菌為106個(gè)/ml左右，霉菌孢子和酵母細(xì)胞為106107個(gè)/ml。由于紫外線穿透力不強(qiáng)，要求照射液不 要太深，約厚，同時(shí)要用電磁攪拌器或手工進(jìn)行攪拌，使照射均勻。由于紫外線照射后有光復(fù)活效應(yīng)，所以照射時(shí)和照射后的處理應(yīng) 在紅燈下進(jìn)行具體操作步驟1 .將細(xì)菌培養(yǎng)液以3000r/min離心5min,傾去上清液，將菌 體打散加入無菌生理鹽水再離心洗滌。2 .將菌懸液放入一已滅菌的, 裝有玻璃珠的三角瓶內(nèi)用手搖動(dòng),以打散菌體。 將菌液倒入有定性濾紙的漏斗內(nèi)過濾, 單細(xì)胞濾液裝入 試管內(nèi),一般處于渾濁態(tài)的細(xì)胞液含細(xì)胞數(shù)可達(dá)108 個(gè) ml 左右,作為待處理菌懸液。3. 取24mL制備的菌液加到直徑9cm培養(yǎng)皿內(nèi)，放入一無菌磁 力攪拌子，然后置磁力攪拌器上、15W紫外線下30cm處。在正式照 射前，應(yīng)先開紫外線10mi n,讓紫外燈預(yù)熱，然后開啟皿蓋正式在攪 拌下照射1050s。操作均應(yīng)在紅燈下進(jìn)行，或用黑紙包住，避免白 熾光。4 .取未照射的制備菌液和照射菌液各進(jìn)行稀釋分離,計(jì)數(shù)活菌 細(xì)胞數(shù)。5 .取照射菌液2ml于液體培養(yǎng)基中（300ml