10004菌種管理規(guī)程完整

1、 文件名稱(chēng) 菌種管理規(guī)程 文件編號(hào) QB-WI/10-004-00 版本號(hào) 00頁(yè)碼 制定人 制定日期 審核人 審核日期 批準(zhǔn)人 批準(zhǔn)日期 生效日期 管理部門(mén) 質(zhì)量部 分發(fā)部門(mén) 總經(jīng)理口技術(shù)部口質(zhì)量部口生產(chǎn)部口管理者代表口 商務(wù)部口銷(xiāo)售部口行政部口倉(cāng)庫(kù)口 序號(hào) 修訂原因及目的 修訂容 01 文件新建 / 文件名稱(chēng) 菌種管理規(guī)程 文件編號(hào) QB-WI/10-004-00 版本號(hào) 00 頁(yè)碼 1. 目的 規(guī)微生物學(xué)檢定用菌種的管理，最大限度降低變異率，確保菌種的溯源性與穩(wěn)定性，從而確保微生 物學(xué)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。 2. 適用圍 適用于微生物實(shí)驗(yàn)用菌種管理，包括菌種的申購(gòu)、傳代、使用及銷(xiāo)毀等。 3

2、. 引用/參考文件 ChP2015 實(shí)用藥品微生物檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)指南 4. 職責(zé) 質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)菌種的申購(gòu)、傳代、使用、銷(xiāo)毀等工作，QA負(fù)責(zé)監(jiān)控和參與00S調(diào)查。 5. 程序 5.1術(shù)語(yǔ)和定義 5. 1. 1標(biāo)準(zhǔn)菌株 由中國(guó)藥品生物制品檢左所醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心或者其他經(jīng)認(rèn)可的機(jī)構(gòu)提供的冷凍干燥 菌。 5. 1. 2傳代菌株 用標(biāo)準(zhǔn)菌種制備的采用特左保存方法長(zhǎng)期固立保存的菌種，用于傳代及制備工作用菌種，3代后的 傳代菌株在需要時(shí)可以作為工作菌株使用。 5. 1.3工作菌株 用標(biāo)準(zhǔn)菌種或傳代用菌種接種至普通瓊脂斜而培養(yǎng)后，作為日常工作使用的菌種。 5.1.4菌種的代 將菌種接種至一新鮮培

3、養(yǎng)基上或培養(yǎng)基，每萌發(fā)一次即稱(chēng)為一代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥 菌種為第0代。 5. 2菌種來(lái)源 5. 2. 1標(biāo)準(zhǔn)菌株由中國(guó)藥品生物制品檢左所醫(yī)學(xué)菌種保藏中心(CMCC)或者英他經(jīng)認(rèn)可的機(jī)構(gòu)提供的冷 凍干燥菌種。 5.2.2質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室涉及到的菌種種類(lèi)、代碼、保存方法及保存條件如下。 菌種名稱(chēng) 菌種代碼 保存方法 保存溫度 保存期限 金黃色匍萄球菌 CMCC(B)26003 TSA斜而 281 1個(gè)月 冷凍干燥管 -2or 1年 銅綠假單胞菌 CMCC(B)10104 TSA斜而 2 8C 1個(gè)月 冷凍干燥管 -20C 1年 枯草芽抱桿菌 CMCC(B) 63501 TSA斜而 2 8

4、C 1個(gè)月 冷凍干燥管 -2oc 1年 白色念珠菌 CMCC(F)98001 SDA斜而 2 8C 3個(gè)月 冷凍干燥管 -2or 1年 黑曲霍菌 CMCC(F)98003 SDA斜而 2 8C 3個(gè)月 冷凍干燥管 -2or 1年 生砲梭菌 CMCC(B)64941 TSA斜而 2 8C 1個(gè)月 冷凍干燥管 -20C 1年 5.3菌種的申購(gòu)、驗(yàn)收、保存 5.3. 1菌種的申購(gòu) 5. 3. 1.1微生物室QC依據(jù)菌種的庫(kù)存及菌種的使用情況，提岀采購(gòu)申請(qǐng)，申請(qǐng)需明確菌種的名稱(chēng)，標(biāo) 準(zhǔn)編號(hào)以及申購(gòu)數(shù)量等信息。 5. 3. 1.2質(zhì)量部經(jīng)理對(duì)申購(gòu)汁劃進(jìn)行審批，審批后由公司的商務(wù)部按要求進(jìn)行采購(gòu)，采購(gòu)過(guò)程

5、執(zhí)行采 購(gòu)控制程序。 5. 3. 1. 3菌種的采購(gòu)需向法定的業(yè)務(wù)部門(mén)或者認(rèn)可的機(jī)構(gòu)采購(gòu)。 5. 3. 1.4購(gòu)買(mǎi)菌種的同時(shí)應(yīng)保留相關(guān)證明資料，說(shuō)明菌種的名稱(chēng)、代數(shù)、數(shù)量等。 5.3.2菌種的驗(yàn)收 5. 3. 2.1微生物室QC負(fù)責(zé)對(duì)采購(gòu)回的菌種以及相關(guān)的證明資料進(jìn)行驗(yàn)收： 5. 3.2.2驗(yàn)收應(yīng)包括菌種外包裝的完好性、具體驗(yàn)收的依據(jù)為批準(zhǔn)后的申購(gòu)訃劃。 5. 3. 2. 3驗(yàn)收符合后簽字確認(rèn)并領(lǐng)回菌種，及時(shí)填寫(xiě)菌種驗(yàn)收、入庫(kù)記錄，并將菌種的相關(guān)證明資 料貼在菌種接收登記表當(dāng)頁(yè)背面留存。如驗(yàn)收不符合則拒絕簽字領(lǐng)用，商務(wù)部負(fù)責(zé)退貨處理。 5.3.3菌種的保存 5. 3. 3.1驗(yàn)收合格的冷凍干燥

6、菌種，應(yīng)保存在溫度設(shè)左為-20冰箱中保存，有效期可至1年。 5. 3. 3. 2驗(yàn)收后的菌種需在驗(yàn)收合格接收后14天完成轉(zhuǎn)種。 5.4菌種的傳代 5. 4. 1菌種的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代，從菌種保藏中心獲得的冷凍干燥的菌種為第0代（GO）,冷凍干燥 的原始菌種開(kāi)啟后轉(zhuǎn)種，為第1代（G1）； 5.4.2標(biāo)準(zhǔn)菌種的復(fù)、確認(rèn)及傳代 5. 4. 2.1標(biāo)準(zhǔn)菌種的復(fù) 5. 4. 2.1.1將一次性吸管數(shù)支、培養(yǎng)皿、銀子、凍干菌種管、裝有TSB試管或SDB試管等移入生物安全 柜中，開(kāi)啟生物安全柜的紫外燈火菌30min后關(guān)閉紫外燈，備用。 5. 4. 2.1.2將凍干菌種管外壁用75%的乙醇棉球擦拭一遍，放

7、入培養(yǎng)皿中，待干。點(diǎn)燃酒精燈，將標(biāo)準(zhǔn) 菌種管封口的一端過(guò)火后開(kāi)啟，用一次性吸管吸取少量相應(yīng)液體培養(yǎng)基或者稀釋液，加入凍干管將菌種 溶解。黑曲殆的菌種因?yàn)槭潜ё討乙汗懿恍枰尤胍后w培養(yǎng)基，直接擰開(kāi)即可。 5. 4. 2.1. 3將菌種加入到相應(yīng)的液體培養(yǎng)基中，根據(jù)菌種類(lèi)型的不同將其置于不同溫度下培養(yǎng)不同時(shí) 間。原凍干菌種管、使用過(guò)的一次性吸管待121C, 30min髙溫濕熱火活后處理。不同菌種稀釋液與培 養(yǎng)條件見(jiàn)下表。 菌種名稱(chēng) 菌種代碼 稀釋液 培養(yǎng)溫度 培養(yǎng)時(shí)間 金黃色匍萄球菌 CMCC(B) 26003 TSB 30-35C 72h 銅綠假單胞菌 CMCC(B) 10104 TSB 30-

8、35C 72h 枯草芽抱桿菌 CMCC(B)63501 TSB 30-35C 72h 生砲梭菌 CMCC(B) 64941 硫乙醇酸鹽流體 培養(yǎng)基 30-35C 18-24h 白色念珠菌 CMCC(F)98001 SDB 20-25C 120h 黑曲霉菌 CMCC(F)98003 SDB 20-25C 120h 5. 4. 2. 1.4取出培養(yǎng)物，觀察液體培養(yǎng)基是否渾濁，渾濁說(shuō)明菌種復(fù)，若不生長(zhǎng)，應(yīng)繼續(xù)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間 （細(xì)菌：至少7天，真菌和酵母菌至少15天），仍不渾濁，12C, 30min髙溫濕熱火菌后廢棄，需要 時(shí)，啟動(dòng)偏差調(diào)査。 5. 4. 2. 2菌種的確認(rèn) 用已經(jīng)過(guò)消毒的接種環(huán)挑取上述

9、培養(yǎng)物接種到TSA （細(xì)菌）或SDA （真菌和酵母菌）平板上，然后 在相應(yīng)溫度下培養(yǎng)相應(yīng)的時(shí)間（細(xì)菌:3035C, 48-72h：酵母菌:2025C, 72120h；黑曲霍：20 25C, 57d）,觀察菌落形態(tài)，與標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)進(jìn)行比對(duì)確認(rèn)，確認(rèn)結(jié)果應(yīng)及時(shí)記錄在菌種確認(rèn)記錄。 5. 4. 2. 3標(biāo)準(zhǔn)菌種的傳代 5. 4. 2. 3.1按照菌種說(shuō)明書(shū)要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種至適宜的液體增菌培養(yǎng)基復(fù)后的培養(yǎng)物稱(chēng)為第1代 （G1）,菌種傳代應(yīng)填寫(xiě)菌種傳代記錄。 5. 4. 2. 3. 2菌種確認(rèn)后，如確認(rèn)符合，則從液體培養(yǎng)物中挑取培養(yǎng)物第1代（G1）轉(zhuǎn)接至相應(yīng)瓊脂培 養(yǎng)基斜而上各數(shù)支（每種菌種至少3支），經(jīng)

10、過(guò)相應(yīng)溫度培養(yǎng)時(shí)間（細(xì)菌：3035C, 72h；酵母菌：20 25C, 120h；黑曲霉：2025C, 57d）培養(yǎng)：同時(shí)G1在121C, 30min高溫濕熱火菌后廢棄。 5. 4. 2. 3. 3取出其中2支作為傳代菌種，此為第2代（G2）,保存在溫度設(shè)泄為28C冷藏柜中保存： 另外1只G2進(jìn)行傳代，此為第3代（G3）, G3根據(jù)檢測(cè)需要確泄傳代數(shù)量，斜而菌株均保存在28C 冷藏柜中，工作菌種和傳代用菌種分別包扎后保存。 5. 4. 2. 3. 4按照上述操作，G5為最后一代，不得繼續(xù)進(jìn)行傳代，需要重新申購(gòu)冷凍干燥菌種管，重復(fù) 上述操作，保存和使用菌種。 5. 4. 2. 3. 5細(xì)菌每1個(gè)

11、月傳代1次；靈菌、酵母菌及芽抱每3個(gè)月傳代一次。 5. 4. 2. 4菌種傳代時(shí)注意無(wú)菌操作，使菌株不死亡、不污染、不丟失。同時(shí)微生物室QC也應(yīng)采取有效 的預(yù)防措施進(jìn)行自我保護(hù)，如工作時(shí)須穿工作服，佩戴手套，口罩等。實(shí)驗(yàn)完成后對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)域、設(shè)施設(shè) 備、用具等進(jìn)行適當(dāng)方式消毒。如發(fā)生意外，如菌種泄漏或人員受傷，微生物室QC應(yīng)及時(shí)向QA報(bào)告以 便及時(shí)處理。 5. 4. 2. 5工作菌種和傳代菌種無(wú)實(shí)質(zhì)區(qū)別，必要時(shí)，可作為另一種的備用菌種使用。 5.4.3菌種的編號(hào) 5. 4. 3.1菌種編號(hào)原則：英文縮寫(xiě)字母-代次-順序號(hào)-傳代日期： 5. 4. 3.1. 1菌種的英文縮寫(xiě)字母：金黃色葡萄球菌（S.

12、 a）、銅綠假單胞菌、（P. a）、枯草芽抱桿菌（B. ）、 白色念珠菌（C.a）、黑曲霉（A.n）。 5.4. 3.1.2代數(shù)的表示用帶有下標(biāo)數(shù)字的字母表示，例如：G3表示菌種的第3代。 5.4. 3.1.3每種菌種每次傳代順序號(hào)從01開(kāi)始，例如一種菌種一次性轉(zhuǎn)種到4支試管上，那么順序號(hào) 一次為 01, 02, 03, 04o 5. 4. 3.1. 4傳代日期用八位數(shù)字表示：年份四位數(shù)，月、日分別用兩位數(shù)表示。 5. 4. 3. 1. 5例如P. a-G2-03-20170306標(biāo)識(shí)2017年03月06日傳代的第2代銅綠假單胞菌的第3只。 5.5菌種的保藏 5.5.1菌種設(shè)專(zhuān)人加鎖保管，除銅

13、綠假單胞菌于室溫保藏外，苴他斜而菌種均在2-8C條件下保藏 5. 5.2菌種的建期檢查與鑒定 5.5. 2.1日常檢査 菌種在保藏期間，工作日應(yīng)每天上午和下午兩次檢查保藏菌種冷藏柜的溫度是否正常、必要檢査菌 種管的塞子是否松動(dòng)、是否染菌，檢査結(jié)束應(yīng)及時(shí)填寫(xiě)菌種日常檢查記錄。 5.6菌種的使用 根據(jù)工作需要，領(lǐng)取工作用菌種或者傳代用菌種，同時(shí)填寫(xiě)菌種使用記錄。菌液一般在制備完 后當(dāng)天使用，制備方法參照ChP2015執(zhí)行。 5.7廢棄菌種的銷(xiāo)毀 5.7.1下列情況的菌種、培養(yǎng)物或者被污染的器具等，必須經(jīng)過(guò)121C, 30min髙壓濕熱火菌處理： 5. 7. 1.1新一代菌種制備成功后的上一代菌種：

14、 5.7. 1.2使用完后的菌種和帶有標(biāo)準(zhǔn)菌種的器具和培養(yǎng)物： 5.7. 1.3超過(guò)有效期的菌種： 5.7. 1.4凡是被污染、變異、可疑等異常情況菌種： 5. 7. 1. 5其他應(yīng)廢棄的菌種。 5.7.2被污染的器具在污染后，濕熱火菌前應(yīng)放苣在密閉容器中防止對(duì)外界再污染。 5.7.3廢棄菌種的銷(xiāo)毀須有兩個(gè)人以上同時(shí)在場(chǎng)進(jìn)行，并及時(shí)填寫(xiě)廢棄菌種、物品銷(xiāo)毀記錄。 5.8安全要求 5.8.1菌種、菌液的保藏需要保藏于加鎖的冷藏柜或者冰箱中； 5.8.2操作人員在操作前應(yīng)該按照規(guī)泄著裝，佩戴防護(hù)設(shè)施： 5.8.3操作結(jié)朿后，應(yīng)及時(shí)對(duì)工作區(qū)域、工作服及苴他儀器等進(jìn)行適當(dāng)消毒： 5. 8. 4非微生物室

15、操作人員未經(jīng)質(zhì)量部經(jīng)理批準(zhǔn)不得進(jìn)入微生物室： 6. 記錄 菌種驗(yàn)收、入庫(kù)記錄(QB-QR/10-008-00) 菌種傳代記錄(QB-QR./10-009-00) 菌種確認(rèn)記錄(QB-QR/10-010-00) 菌種日常檢査記錄(QB-QR/10-011-00) 菌種使用記錄(QB-QR/10-012-00) 廢棄菌種、物品銷(xiāo)毀記錄(QB-QR/10-013-00) 醫(yī)療技術(shù) 日期 入庫(kù)數(shù)量 入庫(kù)代次 入庫(kù)狀態(tài) 菌種來(lái)源 驗(yàn)收情況 接收人 菌種名稱(chēng): 儲(chǔ)存條件: 記錄編號(hào):QB-QR/10-008-00 菌種代碼: 醫(yī)療技術(shù) 菌種傳代記錄 記錄編號(hào)：QB-QR/10-009-00 菌種名稱(chēng) 菌種代碼 傳代前菌種代次 傳代前菌種狀態(tài) 傳代日期 傳代數(shù)量 預(yù)期用途 數(shù)量（支） 代次 菌種編號(hào) 傳代用培養(yǎng)基 工作用菌種 傳代用菌種 操作過(guò)程描述： 操作人： 備注： 醫(yī)療技術(shù) 菌種確認(rèn)記錄 記錄編號(hào)：QB-QRZ10-010-00 菌種代碼： 確認(rèn)日期確認(rèn)用培養(yǎng)基 確認(rèn)原因 操作過(guò)程描述: 確認(rèn)結(jié)論: 操作人/日期: 醫(yī)療技術(shù) 菌種日常檢查記錄 記錄編號(hào)：QB-QR/10-011-00 日期 時(shí)間 溫度CC) 塞子是否 松動(dòng) 是否