輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程

1、輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【目 的】規(guī)范輸血科各級(jí)檢驗(yàn)人員室內(nèi)質(zhì)控操作程序，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確、可靠【適用范圍】 適用于輸血相容性檢測(cè)項(xiàng)目?！韭?責(zé)】輸血科全體員工均遵守執(zhí)行。（一） ABO、RhD血型室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【檢驗(yàn)原理】選擇已知型別的紅細(xì)胞和血清，根據(jù)其與在用試劑標(biāo)準(zhǔn)血清：抗A、抗B、抗D ABC血型反定型紅細(xì)胞及 ABC血型抗原檢測(cè)卡（微柱凝膠）陽性及陰性檢測(cè)結(jié)果，通過每天或每批與待檢標(biāo)本相同的試劑和方法進(jìn)行檢測(cè)，以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行ABC RhD血型檢測(cè)過程中應(yīng)用的試劑、設(shè)備及實(shí)驗(yàn)流程，并評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性?！局饕噭┙M成】1.質(zhì)控品：樣本1 A1型RhD（ +）紅細(xì)胞樣本2 B

2、 型RhD（ +）紅細(xì)胞樣本3 A 血清 樣本4 B 血清樣本5 C型RhD（ +）紅細(xì)胞樣本6 RhD （-）紅細(xì)胞2. 血型鑒定試劑:標(biāo)準(zhǔn)血清：抗 A,抗B,抗DABC 血型反定型紅細(xì)胞： Ac, Be, CcABC 血型抗原檢測(cè)卡（微柱凝膠）【主要儀器】卡式專用離心機(jī)【檢驗(yàn)方法】首先將質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)血清及 ABC血型反定型紅細(xì)胞從冰箱取出后平衡至室溫操作步驟按不同檢驗(yàn)方法（平板法、試管法、微柱凝膠法）具體如下:1. 平板法：在玻片上（或紙片上）按表 1加樣各1滴（50ul ），混勻（直徑約 20mm大?。?前后緩慢搖晃玻片，2分鐘左右肉眼判讀結(jié)果，并記錄。2. 試管法：取13支（95mm

3、（ 12mn或75mm 12mm試管做好標(biāo)記，按表1加樣各1滴（50ul ）, 混勻，離心（離心速度和時(shí)間可以選擇轉(zhuǎn)速 1000rpm時(shí)間1分鐘或轉(zhuǎn)速3400rpm時(shí)間15秒）， 判定結(jié)果，并記錄。表1平板法、試管法ABC及 RhD血型室內(nèi)質(zhì)控加樣表抗A+樣本1抗B+樣本1抗D+樣本14%Ac +樣本34%Bc +樣本34%Cc +樣本3抗A+樣本2抗B+樣本2抗D+樣本24%Ac +樣本44%Bc +樣本44%Cc +樣本4抗A+樣本5抗B+樣本5抗D+樣本5抗D +樣本63.柱凝膠法:取4張待檢ABC血型抗原檢測(cè)卡（微柱凝膠）做好標(biāo)記。將樣本1分別加入第1張卡的1-3孔中各1滴（50ul

4、），將樣本2分別加入第2張卡的1-3孔中各1滴（50ul ），將樣本5分別 加入第 3 張卡的 1-3 孔中各 1 滴（ 50ul ），將樣本 6 加入第 4 張卡的第 3 孔內(nèi)。使用卡式專用 離心機(jī)離心，取出，肉眼判定結(jié)果，并記錄?！窘⒖贾怠?首次使用質(zhì)控品或不連續(xù)使用時(shí)，需要連續(xù)做三天試驗(yàn)，結(jié)果一致，方可定為參考值；更換不同批號(hào)質(zhì)控品時(shí)，需新舊質(zhì)控品同時(shí)做，連續(xù)兩天，舊批號(hào)質(zhì)控品在控，新批號(hào)質(zhì)控品質(zhì) 控品結(jié)果一致，可確定參考值；更換試劑時(shí)，需新舊批號(hào)試劑同時(shí)做兩次質(zhì)控品，兩次結(jié)果一 致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學(xué)均要單獨(dú)定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！臼Э?/p>

5、判定】陽性結(jié)果與預(yù)期結(jié)果比較出現(xiàn)超過 1+凝集強(qiáng)度的差異，或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，均視 為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。 失控解決方案：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。記錄表格】輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控參考值登記表 SXK-JL65輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控登記表 SXK-JL66輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控失控及失控處理記錄表 SXK-JL67注意事項(xiàng)】1. 室內(nèi)質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)血清、標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞保存在 28 C,嚴(yán)禁在室溫長期存放。2. 用后剩余質(zhì)控品不宜與新質(zhì)控品混合，以防污染，不同批號(hào)質(zhì)控品不得混用。3. 紅細(xì)胞質(zhì)控品：輕拿輕放，避免劇烈震蕩；若發(fā)生凝集，出血菌落或嚴(yán)重溶

6、血，不得使用；若出現(xiàn)輕微溶血可用生理鹽水對(duì)其進(jìn)行洗滌，重新懸浮后使用。4. 質(zhì)控血清： 出現(xiàn)渾濁或沉淀時(shí)， 應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)離心， 去除雜物后將上清液移至潔凈容器中使用 【參考資料】1. 長春愽迅生物技術(shù)有限公司 ABQ RhD血型檢測(cè)質(zhì)控品（微柱凝膠法）說明書2. 長春愽迅生物技術(shù)有限公司 ABQ RhD血型檢測(cè)卡（微柱凝膠法）說明書3. 上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司抗 A抗B血型定型試劑（單克隆抗體）說明書4. 密理博（上海）貿(mào)易有限公司康 D （IgM+IgG）血型定型試劑（單克隆抗體）說明書（二）不規(guī)則抗體篩檢室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程【檢驗(yàn)原理】選擇已知血清，標(biāo)本其與在用試劑抗人球蛋白檢測(cè)卡（微柱凝

7、膠）中的陽性及陰性結(jié)果，通過每天或每批與待檢標(biāo)本相同的試劑和方法進(jìn)行檢測(cè)，以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行不規(guī)則抗體篩檢過 程中應(yīng)用的試劑、設(shè)備及實(shí)驗(yàn)流程，并評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性?！局饕噭┙M成】1. 質(zhì)控品：樣本 1 O 型血清樣本2 IgG 型抗D (+) AB血清2. 不規(guī)則抗體篩檢試劑：抗人球蛋白不規(guī)則抗體篩檢卡(微柱凝膠)I、川抗體篩檢紅細(xì)胞【主要儀器】 卡式專用離心機(jī)【檢驗(yàn)方法】 微柱凝膠法，具體操作步驟如下：1. 將質(zhì)控品、抗體篩檢紅細(xì)胞從冰箱取出后平衡至室溫。2. 取 1 張抗人球蛋白不規(guī)則抗體篩檢卡做好標(biāo)記。3. 將I、口、川抗體篩檢細(xì)胞用低離子強(qiáng)度鹽溶液稀釋至0.8%,對(duì)應(yīng)加入上述檢測(cè)卡1

8、6管中，50ul/管。4. 分別在前 3 管加入樣本 1 ,后 3 管加入樣本 2, 50ul/ 管。5. 將檢測(cè)卡置37C孵育器中15分鐘。6. 即刻使用卡式專用離心機(jī)離心,取出,肉眼判定結(jié)果,并記錄。【建立參考值】首次使用質(zhì)控品或不連續(xù)使用時(shí),需要連續(xù)做三天試驗(yàn),結(jié)果一致,方可定為參考值；更 換不同批號(hào)質(zhì)控品時(shí),需新舊質(zhì)控品同時(shí)做,連續(xù)兩天,舊批號(hào)質(zhì)控品在控,新批號(hào)質(zhì)控品質(zhì) 控品結(jié)果一致,可確定參考值；更換試劑時(shí),需新舊批號(hào)試劑同時(shí)做兩次質(zhì)控品,兩次結(jié)果一 致,可確定參考值；不同儀器或不同方法學(xué)均要單獨(dú)定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。【失控判定】陽性結(jié)果與預(yù)期結(jié)果比較出

9、現(xiàn)超過1+凝集強(qiáng)度的差異,或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí),均視為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。 失控解決方案：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。【記錄表格】輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控參考值登記表 SXK-JL65輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控登記表 SXK-JL66輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控失控及失控處理記錄表 SXK-JL67注意事項(xiàng)1. 室內(nèi)質(zhì)控品、抗篩細(xì)胞、保存在 28 C,嚴(yán)禁在室溫長期存放。2. 用后剩余質(zhì)控品不宜與新質(zhì)控品混合,以防污染,不同批號(hào)質(zhì)控品不得混用。3. 質(zhì)控血清： 出現(xiàn)渾濁或沉淀時(shí), 應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)離心, 去除雜物后將上清液移至潔凈容器中使用 參考資料1. 長春愽迅

10、生物技術(shù)有限公司不規(guī)則抗體篩檢質(zhì)控品說明書2. 長春愽迅生物技術(shù)有限公司抗人球蛋白檢測(cè)卡不規(guī)則抗體篩檢操作說明書3. 長春愽徳生物技術(shù)有限責(zé)任公司不規(guī)則抗體檢測(cè)試劑（人紅細(xì)胞）使用說明書三）交叉配血室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程檢驗(yàn)原理】凝聚胺介質(zhì)法：紅細(xì)胞表面帶有大量的負(fù)電荷，以避免其產(chǎn)生自發(fā)性聚集，其懸浮在電解 質(zhì)中形成 Zeta 電位， Zeta 電位決定紅細(xì)胞之間的排斥作用。而凝聚胺介質(zhì)法則是首先利用低 離子溶液降低介質(zhì)的離子強(qiáng)度，減少紅細(xì)胞周圍的陽離子云，以促進(jìn)紅細(xì)胞和血清（血漿）中 的抗體結(jié)合，其后加入凝聚胺溶液（ Polybrene ，為高價(jià)陽離子多聚物、肝素中和劑），以中和 紅細(xì)胞表面帶有的

11、負(fù)電荷，使紅細(xì)胞表面帶有的負(fù)電荷，使紅細(xì)胞 Zeta 電位降低，縮短紅細(xì)胞 之間的距離，使紅細(xì)胞產(chǎn)生非特異性的凝聚，最后加入懸浮液（Resuspending ），中和凝聚胺（ Polybrene ）陽離子作用，使正常的紅細(xì)胞非特異性凝聚散開，試驗(yàn)結(jié)果為陰性， 但如果紅細(xì)胞被相應(yīng)的抗體致敏，則會(huì)被凝聚胺凝結(jié)，試驗(yàn)結(jié)果為陽性。微柱凝膠法：選擇已知的血清和相應(yīng)的細(xì)胞，標(biāo)本其與在用試劑抗人球蛋白檢測(cè)卡（微柱 凝膠）中的陽性及陰性結(jié)果，通過每天或每批與待檢標(biāo)本相同的試劑和方法進(jìn)行檢測(cè)，以監(jiān)控 實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行交叉配血過程中應(yīng)用的試劑、設(shè)備及實(shí)驗(yàn)流程，并評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性。 【主要試劑組成】1. 質(zhì)控品：樣本

12、 1 AB 型 RhD（ +）紅細(xì)胞樣本 2樣本 3樣本 4O 型 RhD（ +）紅細(xì)胞RhD （- ）紅細(xì)胞O 血清樣本5 IgG 抗DAB血清2. 交叉配血檢測(cè)試劑：凝聚胺介質(zhì)試劑：低離子溶液（LIM）、凝聚胺（Polybrene八 懸浮液（Resuspending ）抗人球蛋白交叉配血檢測(cè)卡（微柱凝膠）【主要儀器】 卡式專用離心機(jī)【檢驗(yàn)方法】首先將質(zhì)控品、凝聚胺介質(zhì)從冰箱取出后平衡至室溫。操作步驟按不同檢驗(yàn)方法（試管法、微 柱凝膠法）進(jìn)行。1. 凝聚胺介質(zhì)法 為試管法，操作步驟如下：1.1 取4支（95mnX 12mn或75mnX 12mr）i試管做好標(biāo)記.1.2 按照組合 1 （樣本

13、4+樣本 1 ）、組合 2（樣本 4+樣本 2）、組合 3（樣本 5+樣本 1 ）、組合 4（樣本 5+樣本 3）分別加入各管，各 1 滴（ 50ul ）。1.3 各管加入低離子溶液（ LIM）0.65rl ，混合均勻后，各管加入凝聚胺（Polybrene ）溶液 2滴（ 100ul ），并混合均勻。1.4 用離心機(jī) 3400rpr 時(shí)間 10秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約 0.1rl 液體。1.5 輕輕搖動(dòng)試管，目測(cè)紅細(xì)胞有無凝聚，如無凝聚，則必須重做。1.6最后加入懸浮液（Resuspending ） 2滴（100ul ），輕輕搖動(dòng)試管混合并同時(shí)觀察結(jié)果。如 凝聚散開，表示由

14、Polybrene弓I起的非特異性凝集，抗體篩檢結(jié)果為陰性。如果凝集不散開， 則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)果的特異性反應(yīng)，抗體篩檢結(jié)果為陽性，應(yīng)進(jìn)一步作抗體鑒定。2、微柱凝膠法 操作步驟如下：2.1取1張待檢抗人球蛋白交叉配血檢測(cè)卡（微柱凝膠）做好標(biāo)記。2.2交叉配血實(shí)驗(yàn)按照組合 1 （樣本4+樣本1）、組合2 （樣本4+樣本2）、組合3 （樣本5+ 樣本1）、組合4 （樣本5+樣本3）加樣，各50ul。2.3將檢測(cè)卡置37C孵育器中15分鐘。2.4即刻使用卡式專用離心機(jī)離心，取出，肉眼判定結(jié)果，并記錄?！窘Y(jié)果解釋】交叉配血室內(nèi)質(zhì)控根據(jù)其檢測(cè)作用可分為IgG組和IgM組如表2表2交叉配血室內(nèi)質(zhì)控IgG

15、、IgM分組表組合質(zhì)控品組合檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)作用組合1樣本4 +樣本1+檢測(cè)IgM類抗原抗體反應(yīng)組合2樣本4 +樣本2-檢測(cè)IgM類抗原抗體反應(yīng)組合3樣本5 +樣本1+檢測(cè)IgG類抗原抗體反應(yīng)組合4樣本5 +樣本3-檢測(cè)IgG類抗原抗體反應(yīng)【建立參考值】首次使用質(zhì)控品或不連續(xù)使用時(shí)，需要連續(xù)做三天試驗(yàn)，結(jié)果一致，方可定為參考值；更 換不同批號(hào)質(zhì)控品時(shí)，需新舊質(zhì)控品同時(shí)做，連續(xù)兩天，舊批號(hào)質(zhì)控品在控，新批號(hào)質(zhì)控品質(zhì) 控品結(jié)果一致，可確定參考值；更換試劑時(shí)，需新舊批號(hào)試劑同時(shí)做兩次質(zhì)控品，兩次結(jié)果一 致，可確定參考值；不同儀器或不同方法學(xué)均要單獨(dú)定值。質(zhì)控規(guī)則：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！臼Э嘏卸ā筷栃越Y(jié)果與預(yù)期結(jié)果比較出現(xiàn)超過 1+凝集強(qiáng)度的差異，或陰性質(zhì)控出現(xiàn)陽性結(jié)果時(shí)，均視 為失控。失控原因分析：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行。失控解決方案：按輸血相容性檢測(cè)的室內(nèi)質(zhì)控程序執(zhí)行?！居涗洷砀瘛枯斞嗳菪詸z測(cè)室內(nèi)質(zhì)控參考值登記表 SXK-JL65輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控登記表 SXK-JL66輸血相容性檢測(cè)室內(nèi)質(zhì)控失控及失控處理記錄表 SXK-JL67【注意事項(xiàng)】1. 室內(nèi)質(zhì)控品保存在28C,嚴(yán)禁在室溫長期存放。2.