脫細(xì)胞真皮基質(zhì)分析報(bào)告

1、文檔、尸、 亠前言大面積深度燒傷或其他創(chuàng)傷導(dǎo)致皮膚真皮成分缺損， 通過刃厚小皮片或微粒 植皮技術(shù)雖然能使創(chuàng)面愈合， 但由于其缺乏真皮層， 導(dǎo)致愈合后創(chuàng)面彈性差， 凸 凹不平，易攣縮且不耐摩擦。移植自體皮瓣或全厚及中厚皮片固然是最好的方法， 但大面積深度燒傷后， 能作為供皮區(qū)的部位已很少， 供皮區(qū)又將形成同等程度的 缺損，日后形成瘢痕。 為解決這一問題， 國內(nèi)外學(xué)者致力于尋找一種理想的真皮 替代品。1. 脫細(xì)胞真皮基質(zhì)概述脫細(xì)胞真皮基質(zhì)（ acellular dermal matrix ADM ）是用物理、化學(xué)等方法將人 或動(dòng)物皮膚中的表皮層及細(xì)胞成分徹底去除僅保留真皮中含膠原網(wǎng)架的細(xì)胞外 基質(zhì)

2、。脫細(xì)胞真皮基質(zhì)由于完全沒有了細(xì)胞成分和I、 U型細(xì)胞相容性抗原的主要 免疫活性 , 故一般不會(huì)誘發(fā)排斥反應(yīng)。但脫細(xì)胞真皮基質(zhì)保留有正常膠原的三維 結(jié)構(gòu)和真皮中含膠原支架的細(xì)胞外基質(zhì)能為組織細(xì)胞的再生提供一個(gè)良好的支 架結(jié)構(gòu)，具有創(chuàng)面覆蓋、組織缺損填充、引導(dǎo)組織再生和支架等作用。脫細(xì)胞真皮基質(zhì)中無細(xì)胞成分 ,免疫活性低 ,不會(huì)誘發(fā)免疫反應(yīng)。它保留了表 皮和真皮間的基底膜 , 移植后可形成真皮面和基底膜面?；啄っ婵芍С?jǐn)鄬悠?片的生長 ,這對(duì)表皮細(xì)胞的增殖分化以及移植皮的外觀和功能起著重要作用 ,同 時(shí)也有利于種子細(xì)胞的點(diǎn)附增殖等。真皮面利于脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的快速血管化 , 為成纖維細(xì)胞的增殖提

3、供支架 ,有助于膠原成分改建 , 促使成纖維細(xì)胞排列分布 規(guī)則, 形成結(jié)構(gòu)形態(tài)正常的膠原纖維 ,此外, 還有誘導(dǎo)、調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞和新生血管 長入, 促進(jìn)上皮形成等作用。此外 ,細(xì)胞外基質(zhì)蛋白也可以促進(jìn)表皮細(xì)胞的再生。 因此, 脫細(xì)胞真皮基質(zhì)可作為真皮替代品 , 在為燒傷創(chuàng)面提供真皮的同時(shí) , 可明顯 減少瘢痕形成。是一種理想的真皮替代材料。1.1 脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備方法根據(jù)來源的不同脫細(xì)胞真皮基質(zhì)分為異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì) （來源主要為尸體 皮）和異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)（來源為動(dòng)物皮以豬皮和牛皮為主）兩種。制備過程 都是盡可能的去除具有抗原性的細(xì)胞 （ 表皮細(xì)胞、毛囊、皮脂腺、汗腺及真皮中血管內(nèi)皮細(xì)胞

4、、成纖維細(xì)胞等 ）, 保留完整的膠原纖維成分和組織基本結(jié)構(gòu)。早 期人們?cè)梅磸?fù)凍融法、胰酶消化法等制備ADM但由于這些方法不能完全去除真皮內(nèi)細(xì)胞成分，導(dǎo)致AD移植后引起宿主強(qiáng)烈的排異反應(yīng)，而且制備過程也 過于復(fù)雜,因而并未廣泛開展。目前AD啲制備方法主要有Dispasell-Trit on法、高滲鹽-SDS法、高滲鹽-酶消化法、NaO消蝕法等。只要條件控制適度,這些方法 均可制備出合乎條件的 ADMDispasell-Triton 法皮膚標(biāo)本先經(jīng)Dispasell處理（2.5 U/ml溶液，4 C下作用48 h）,再經(jīng) TritonX2100處理（0.5%溶液，室溫下作用48 h）可將皮膚中

5、的細(xì)胞徹底脫除。DispaseI主要分解IV型膠原和纖維粘蛋白，能裂解基底膜中的致密層。DispaseII 是一種快速有效的分離表皮與真皮的酶。標(biāo)本經(jīng)Dispasell處理后，表皮真皮間的基底膜及皮膚附屬器官周圍結(jié)締組織成分均被破壞。Dispasell同時(shí)也破壞了纖維細(xì)胞和結(jié)締組織基質(zhì)間的連結(jié)，更有利于TritonX2100的浸透。TritonX2100屬于 非離子型表面活性劑 , 在溶液中穩(wěn)定性高 , 不易受強(qiáng)電解質(zhì)無機(jī)鹽存在的影響 , 能與生物膜中的磷脂等脂質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物 , 溶解于溶液中。同時(shí) , TritonX2100 中的疏水端也能和膜蛋白破壞生物膜 , 從而使細(xì)胞溶解破壞。 該方

6、法細(xì)胞脫除徹 底, 但同時(shí)基底膜結(jié)構(gòu)破壞大 , 不利于上皮細(xì)胞底黏附生長。高滲鹽-SDS法皮膚標(biāo)本先經(jīng)高滲鹽作用（1 mol/LNaCl溶液，37 C下作用24h）使錨著細(xì)絲與表 皮基底細(xì)胞的半橋粒分離 , 從而完整地去除表皮。然后在未改變膠原結(jié)構(gòu)的情況 下，再用破膜劑十二烷基硫酸鈉（0.5%SDS溶液，室溫下作用1h）將皮膚標(biāo)本中的 細(xì)胞脫除。該方法細(xì)胞脫除也比較徹底，基底膜完整保留，但真皮中W型膠原、纖 維結(jié)合素、彈力素、HLA-D等含量較多，因此具有相對(duì)高的抗原性。高滲鹽-NaOH消蝕法該方法利用高滲鹽（1 mol/LNaCl溶液，37C下作用24h）去除表皮，同時(shí)再利 用NaOH（低濃

7、度溶液，室溫下作用18h）中堿離子的吸水作用奪取組織細(xì)胞的水 分, 使細(xì)胞脫水而死亡 ; 最后使用超聲清洗儀清洗除去細(xì)胞。 該方法細(xì)胞徹底脫除 膠原纖維結(jié)構(gòu)完整，排列較正常松散。但要注意控制 NaOH的作用時(shí)間，如果過 長（如：36h）會(huì)使膠原變性，蛋白裂解,得到的是真皮皮漿。酶消化-去垢劑法該方法用胰蛋白酶 （0.25%溶液,4 C下作用24 h）,接著用TritonX2100 （0.1%溶液,室溫下作用8 h）, 最后用Dispase（560 units/L, 4 C下作用24 h）。 Ray等 7使用胰蛋白酶（0.25%溶液，室溫下作用18 h）和SDS（0.1%液，室溫 下作用12 h

8、）,然后用胰蛋白酶再作用12h,最后用Dispase（560 units/L, 25C下 作用12 h）,制得的基質(zhì)均無細(xì)胞成分，膠原支架完整。Step1表皮和真皮的 分離高滲鹽法酶消化法Step2細(xì)胞成分去除去垢劑 法堿性化 學(xué)試劑 法生物酶 法脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的制備流程1.2脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的作用機(jī)制脫細(xì)胞真皮基質(zhì)保留了真皮與表皮之間的基底膜 ，故在應(yīng)用時(shí)可形成基底 膜與真皮兩個(gè)面?；啄っ嬷С忠浦灿谄浔砻娴臄鄬悠て纳L ，對(duì)表皮細(xì)胞的 分化成熟和移植皮的外觀與功能起著非常重要的作用 ，亦有利于組織工程中種子 細(xì)胞或培養(yǎng)的角朊細(xì)胞的黏附、擴(kuò)展等。真皮面有利于ADM在宿主內(nèi)快速血管化, 為成纖

9、維細(xì)胞的生長提供良好的支架 ,有助于對(duì)脫細(xì)胞真皮膠原成分的改建 , 促 使成纖維細(xì)胞形成形態(tài)結(jié)構(gòu)及排列分布正常的膠原纖維 , 還具有調(diào)節(jié)、誘導(dǎo)、促 進(jìn)宿主細(xì)胞長入 , 促進(jìn)纖維細(xì)胞增生、新生血管和上皮形成等作用。真皮成分的 多寡是創(chuàng)面愈合后彈性、 外觀是否良好的重要因素 , 瘢痕形成的量及攣縮程度與 所植皮片中真皮的含量成反比。 真皮含量不足時(shí)成纖維細(xì)胞只能合成不成熟的基 質(zhì), 此種基質(zhì)經(jīng)改建后即成為瘢痕組織。 脫細(xì)胞真皮基質(zhì)作為一種真皮代替物能 被宿主接納 , 并被改建成為自體真皮組織 , 減少皮片移植后的瘢痕形成及攣縮 , 能與全厚皮片移植后的效果相媲美。1.3 脫細(xì)胞真皮基質(zhì)的臨床應(yīng)用范

10、圍1. 腹壁外科（1）嬰幼兒腹壁缺損（2）嵌頓性或絞窄性腹壁疝（ 3）腹壁缺損伴有污染或感染創(chuàng)面 （4）食道裂孔疝（ 5）盆底腹膜修復(fù)（6）腹腔室間隔綜合癥腹腔關(guān)閉（7）全腹壁切除或缺損的腹壁再造 （8）其他復(fù)雜的腹壁修復(fù)情況2. 泌尿外科 長段尿道狹窄或缺損、先天性尿道下裂、尿瘺、膀胱擴(kuò)容、腎組織修補(bǔ)3. 結(jié)直腸、肛門外科（1）非急性期的單純性高位和低位肛瘺（ 2）陰道前庭瘺（3） 對(duì)肛門括約肌功能影響大的肛瘺和肛周感染 （4）管狀消化道瘺4 口腔科（ 1）口腔黏膜缺損 （2）牙周手術(shù)治療 （3）腭裂修復(fù)術(shù)中修復(fù)軟組織缺損5 整形外科（1）燒傷創(chuàng)面及燒傷后期瘢痕攣縮畸形的修復(fù)（2）慢性創(chuàng)面及

11、病理性瘢痕的修復(fù)（3）面部整形及美容 : 矯正鼻畸形、眼瞼，結(jié)膜層缺損的修復(fù)、隆唇6 耳鼻喉科（1）鼓膜穿孔的修補(bǔ) （2）鼻中隔穿孔的修補(bǔ) （3）咽部缺損的修復(fù)（4）腦脊液鼻漏修補(bǔ)及蝶鞍的修復(fù)1.4產(chǎn)品性能要求和技術(shù)可行性檢測標(biāo)準(zhǔn)外觀目測規(guī)格型號(hào)企標(biāo)單位面積重量企標(biāo)酸堿度企標(biāo)干燥失重企標(biāo)耐溫性企標(biāo)熾灼殘?jiān)髽?biāo)重金屬含量GB/T 14233.1-2008降解時(shí)間GB/T 16886.13-2001抑菌性能GB/T 20944.3-2008致熱性GB/T16886.11-2011 附錄 F皮內(nèi)反應(yīng)試驗(yàn)GB/T 16886.10-2005生 遲發(fā)型超敏反應(yīng)GB/T 16886.10-2005物細(xì)胞毒

12、性試驗(yàn)GB/T 16886.5-2003學(xué)全身毒性（急性）GB/T 16886.11-2011評(píng)亞慢性毒性GB/T 16886.11-2011價(jià)遺傳毒性GB/T 16886.3-2008植入GB/T 16886.6-1997血液相容性GB/T 16886.4-2003無菌試驗(yàn)GB/T 14233.2-2005注：以上產(chǎn)品性能指標(biāo)需要進(jìn)行檢測之后才能設(shè)定企業(yè)本身的產(chǎn)品性能要求。從質(zhì)量控制角度，可從有脫細(xì)胞真皮生產(chǎn)能力的廠家采購真皮材料， 根據(jù)公 司制定的原材料檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)采購的真皮材料質(zhì)量進(jìn)行控制，質(zhì)量合格方能進(jìn)入生 產(chǎn)，然后利用公司現(xiàn)有分切設(shè)備，包裝等設(shè)備進(jìn)行生產(chǎn)，經(jīng)過滅菌后根據(jù)產(chǎn)品企 業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)

13、行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格后方能出廠銷售。從關(guān)鍵技術(shù)控制角度，可對(duì)關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)進(jìn)行設(shè)定，要求供應(yīng)商達(dá)到采購設(shè) 定的性能技術(shù)要求，并制定原材料檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)采購的真皮材料進(jìn) 行關(guān)鍵技術(shù)指標(biāo)的檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格后方能入庫生產(chǎn)。因此，終上所述，可吸收止血紗布技術(shù)可行，產(chǎn)品質(zhì)量可控2. 國內(nèi)外上市脫細(xì)胞真皮基質(zhì)現(xiàn)況異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)國內(nèi)外上市的產(chǎn)品有美國 Life Cell公司推出的Allodern， 該產(chǎn)品的異體真皮來源于尸體皮。臨床上應(yīng)用于燒傷，瘢痕切除創(chuàng)面取得良好的 效果。而國內(nèi)上市的產(chǎn)品主要有北京桀亞萊福生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的J-1型異體脫細(xì)胞真皮基質(zhì)和北京清源偉業(yè)生物組織工程科技有限公司生產(chǎn)的脫

14、細(xì)胞異 體真皮基質(zhì)醫(yī)用組織補(bǔ)片（商品名稱：瑞諾）。雖然異體脫細(xì)胞基質(zhì)在臨床上的應(yīng) 用效果較好但也存在著不可忽視的不足（1）異體皮供體來源有限；（2）有傳播 人類疾病的可能性；（3）存在著倫理問題；（4）需要低溫保存，保存運(yùn)輸不方 便。而目前，異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)在國內(nèi)以上市的有：（1）北京瑞克倍爾醫(yī)療器械有限公司出產(chǎn)的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)敷料，該產(chǎn)品以豬皮為主要原材料，采用新型物理、化學(xué)及生化等方法除去了豬皮內(nèi)的各種雜 質(zhì)，完整地保留了真皮細(xì)胞外基質(zhì)的形態(tài)，保持原有的三維立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。主要 適用于1.外傷撕脫傷創(chuàng)面；2.骨外露、肌腱外露創(chuàng)面；3.慢性潰瘍、褥瘡及肉 芽創(chuàng)面；4.中厚皮供皮區(qū)創(chuàng)面；5.刃

15、厚皮、郵票皮、微粒皮移植手術(shù)創(chuàng)面，6.燒傷創(chuàng)面、切削痂后的創(chuàng)面。（2） 江蘇優(yōu)創(chuàng)生物醫(yī)學(xué)科技有限公司生產(chǎn)的異種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)敷料（商品 名：東慈真皮基質(zhì)）同樣該產(chǎn)品也是以豬皮為原料，經(jīng)病毒滅活與脫細(xì)胞等工藝 制備而成具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，主要用于淺U度燒（燙）傷創(chuàng)面、供皮區(qū)創(chuàng)面、深度 燒傷切（削）痂創(chuàng)面，肉芽創(chuàng)面等創(chuàng)面的覆蓋治療。（3）江陰奔翔生物科技有限公司生產(chǎn)的豬皮脫細(xì)胞真皮基質(zhì)敷料，同樣也是以豬皮為原料經(jīng)純化處理冷凍干燥后成型加工而成，該產(chǎn)品適用于U度燒傷創(chuàng)面、供皮區(qū)創(chuàng)面覆蓋。（4）煙臺(tái)正海生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的口腔修復(fù)膜 （商品名：海奧）和皮膚 修復(fù)膜（商品名：海孚）兩者均為牛的皮膚組織經(jīng)一系列