現(xiàn)代藥物分析重點

1、最新資料推薦現(xiàn)代藥物分析重點現(xiàn)代藥物分 析選論 光學小分子 設計及應用 一、熒光的基本 原理 熒光物質(zhì)的 分子吸收了 特征頻率的 光能后，由基態(tài)躍遷 到能級較高 的第一電子 激發(fā)態(tài)單線 態(tài)或第二電 子激發(fā)態(tài)單 線態(tài)，然后通過無 輻射躍遷返 回到第一電 子激發(fā)態(tài)單 線態(tài)的 最低 振動能級上 ，再從該能級 降落至基態(tài) 的各個不同 的振 動能級 上，同時釋放出 相應能量的 分子熒光， 最后以無輻 射 躍遷形式 回到基態(tài)的 最低振動能 級。二、常見的染料 種類 熒光素類染 料：FITC （異硫氰酸熒 光素） FAM（羥基熒光素 ）TET（絲氯熒光素 ） 羅丹明類：R101 RB200 TAMRA 菁染

2、料：噻唑橙（ TO） 惡唑橙（ YO） 其他類： 二苯乙烯、萘酰亞胺、香豆素類、吖啶芘類 三、分析化學藥 物 分子相關 的期刊名稱 Sprin ger 、Chemi cal Revie ws 、 Talan ta 、Organ ic Lette rs 、dyes and pigme nts 體內(nèi)藥物分 析 析 一、生物樣品處 理方法以及 特點 【生物樣品的 特點】 樣品珍 貴，濃度低、量少；來源廣泛、組成復雜、基質(zhì)復雜；樣品脆弱，容 易失活；提純步驟繁 瑣。【生物樣品處 理方法】 1. 不穩(wěn)定樣品 的預處理 （氧化 水解）1）易被氧化藥 物：1 / 11a. 樣品中加入 抗氧劑（ VitC+E

3、DTA、半胱氨酸、 2- 巰基乙醇）b. 將不穩(wěn)定的 藥物轉化為 穩(wěn)定的衍生 物（2）易水解藥物 預處理： 酯酶抑制劑 2. 常規(guī)方法：（1）蛋白質(zhì)沉淀 法：加入甲醇、乙腈等有機 溶劑，同時采用超 速離心機；加入中性 鹽 沉淀； （ 2）超濾法：操作條件溫 和，沒有相態(tài)變 化，能量消耗小 ，破壞有效成 分 可能小 需要血量少 （3）液液萃取法 ：一次提取可 取出大量雜 質(zhì)，根據(jù)不同的 有機溶劑， 可具有高選 擇性 （ 4） SPE（固相萃取技 術）特點：基質(zhì)效應小 （5）直接進樣技 術與柱切換 技術在線處 理和分 離（樣品處理柱 和樣品分析 柱） （6）衍生化 可以提高穩(wěn) 定性 檢 測特性等

4、問題 （ 7）離子交換樹 脂：具有高選擇 性，但較麻煩適 用于高極性 ，可電離的物 質(zhì)。（8）其他（頂空 GC、制備 HPL C、微透析技術 ） 二、體內(nèi)藥 物分 析評價指標 、合格標準 1. 方法特異性 ：特異性是指 樣品中存在 干擾成分的 情況下，分析方法專 一的測定分 析物的能力 ，注意在待測 物出峰位置 ，空白基質(zhì) 應 無干擾 2. 標準曲線與 線性范圍：定量范圍應 查文獻，結合預實驗 結果確定；至少 6 個點 線 性大于 0 .99 每個濃度點 和加入濃度 的差異， L20% 其他 15% 3. 方法定量限 LOQ：最新資料推薦滿足 35 個消除半 衰期時樣品 中的藥物濃 度或能檢測

5、 出 Cmax 的 1/1020 時的藥 物濃度 4. 精密度與準 確度；三個 濃度點 每個濃度點 五份樣 批內(nèi)批間精 密度低 20%中高 15% 準 確度不單 獨考察 5. 提取回收率 ；中低 3 個濃 度（ 80%、100%、 120%）的提取回收 率, 其結果應當精密和可重 現(xiàn). 應考察高中 低三個濃度 的提取回收 率 = 樣品處理過 程后/ 純標 準品 * 100%6 . 介質(zhì)效應（ ME）； 用 LC-MS 測定樣 品時，由于 內(nèi)源性 干擾物的存 在，待測物在離 子化過程中 發(fā)生離子增 強或離子抑 制的作用 . 使測物響應 值不穩(wěn)定在 85%-115% 范圍 內(nèi)可認 為沒有介質(zhì) 效應

6、 措施：（ 1）選擇合適樣 品前處理方 法，LLE 和 S PE 介質(zhì)效 應 相對較少 （2）改變待測物 的色譜分離 條件，優(yōu)化色譜條 件 使內(nèi)源性 物質(zhì)與待測 物分開 （ 3）采用小進樣 量 （ 4）利用 液相色 譜電解質(zhì)效 應，加入有機酸 或堿，促進離子化 （ 5） 使用較低流 速，降低了待測 成分與基質(zhì) 成分在離子 源的競爭 （6）改用不同的 離子源，考慮 APC I 和 APP A ，ESI 對基 質(zhì) 的敏感性 更高 7. 樣品穩(wěn)定性 ：室溫放置 8 h 時間、反復凍融、長期冰凍、進樣器放置 89h 三、 代謝物研究 的制備方法 1. 體外方法：肝微粒體溫 孵法、肝細胞溫孵 法、基因重

7、組酶 溫孵法、肝組織 切片 法、離體肝灌流 法腸道菌群 體外溫孵法 （甘草皂苷） 2. 體3 / 11內(nèi)方法：膽汁 尿液 糞便 血液 其他（乳汁 肝勻漿等） 蛋白質(zhì)組學 一、蛋白質(zhì)組學 的定義和特 點 蛋白質(zhì)組學是指在大 規(guī)模水平 上 研究蛋白質(zhì) 的特征，包括蛋白質(zhì) 的表達水平 ，翻譯后的修 飾， 蛋白與蛋白 相互作用等 ，由此獲得蛋 白質(zhì)水平上 的關于疾病 發(fā) 生，細胞代謝等 過程的整體 而全面的認 識。蛋白質(zhì)組學 從蛋白質(zhì)的 水平上，對蛋白質(zhì)進 行定量，動態(tài)、 整體的研究 、闡明生物體 全部蛋白質(zhì) ，表達模式及 功能模式 【特 點】 蛋白質(zhì)組學 是動態(tài)的，表現(xiàn)出多樣 性。1 ）從 mRNA

8、 表達水平并 不能預測蛋 白質(zhì)表達 2 ）蛋白質(zhì)動態(tài) 修飾和加工 并非必須來 自同一基因 序列 3 ）蛋白質(zhì)組動 態(tài)反映生 物 系統(tǒng)所處的 狀態(tài) 4 ）蛋白質(zhì)組學 較之前的基 因組學對于 生 命現(xiàn)象的 解釋更直接 、更準確。二、蛋白質(zhì)組學 的定量方法 1. 利用熒光染 料進行定量 的蛋白質(zhì)組 分析技術。適用于檢測 蛋自質(zhì)的熒 光染料有兩 類: 1）用于蛋白質(zhì) 熒 光染色，如 Sypr o Ruby 和 RuBS 2） 用于蛋白質(zhì) 的熒光標記 ， 如 Cy2,Cy3 和 C y5, 可進行熒光 雙向差示凝 膠電泳。2 運用質(zhì)譜 進行定量的 蛋白質(zhì)組分 析技術：a 穩(wěn)定同位 素代謝標記 技術 b

9、同位素親 和標簽技術 主要是使用 一種稱為 I CAT 的化 學試劑。其結構由三 部分組成：最新資料推薦第一 親和標簽（生物素），用來分離經(jīng) 標記后的多 肽；第二 連 接子，用來整合穩(wěn) 定的同位素 ；第三 活性基團，用來特異結 合 巰基。三、二維電泳 第一相等電 聚焦電泳分 離 第二相按質(zhì) 量分離 固相 PH 梯 度等電聚焦 優(yōu)點：克服了載體 兩性電解質(zhì) 陽極漂移，可精確設定 PH 準備步驟： 樣品準備第一維 固相 PH 梯 度第二維 SD S-PAGE 染色考馬斯 亮藍圖像分析，自動掃描 優(yōu)點：可分離 10 100 kD 范圍內(nèi)蛋白 質(zhì)；高靈敏度和 高分辨率； 便于計算機 進行圖像分 析處理

10、；與質(zhì)譜分析 匹配 缺點：極酸、極堿性蛋白 質(zhì)，疏水性蛋白 質(zhì)，極大蛋白質(zhì) 、極小 蛋白質(zhì) 及低豐度蛋 白質(zhì)用此種 技術難于有 效分離。膠內(nèi)酶解過 程費時、費力，難于與質(zhì)譜 聯(lián)用實現(xiàn)自 動化 創(chuàng) 新藥物研 發(fā)中的難點 一、雜質(zhì)分析 雜質(zhì)分類：無機雜質(zhì)（試劑、配位體、催化劑、重金屬、其他金屬、無機鹽、 活性炭）、有機雜質(zhì)（起始原料、副產(chǎn)物、中間體、降解產(chǎn)物、試劑、 配位體、催化劑、幾何異構立 體異構） 殘留雜質(zhì) 已鑒定雜質(zhì) ： 已確證了結 構特征的雜 質(zhì) 特定雜質(zhì)：在質(zhì)量標準 中規(guī)定雜質(zhì) 并有自己限 度標準的雜 質(zhì)已鑒定或 未鑒定 潛在雜質(zhì)：按照理論推 測在生產(chǎn)或 儲藏過程中 可能產(chǎn)生的 雜質(zhì)，

11、實際生5 / 11產(chǎn)中 不一定存在雜質(zhì)譜：存在于藥品 中的雜質(zhì)組 成或模式雜質(zhì)譜分析 的基本途徑 ：揮發(fā)性雜質(zhì) 殘留溶劑 HS-GC 其他 GC-MS 有機 RP-HPLC不同檢測器 / 梯度洗脫互補方法 HPECo r HPTLCor HPGPC 無 機雜質(zhì) ICP-MS or 離子色 譜 二、手型 （一）不同 構型的 立體異構體 生物活性不 同 1. 藥物的生物 活性完全或 主要由其中 的一個對應 體產(chǎn)生 s- 萘普生 2. 兩個對應體 具有 完全相 反的生物活 性 哌西那朵 3. 一個對映體 有嚴重的毒 副作用 四咪唑 4. 兩個對應體 的生物活性 不同，但合并用藥 有 利 奈必洛爾5.

12、 兩個對應體 具有完全相 同的生物活 性普羅帕酮 （二） 手性藥 物研 究 1. 原料藥制備 工藝研究 結構確證 2. 選擇制劑的劑型、處方與工藝 3. 質(zhì)量研究 4. 制訂質(zhì)量標 準 5. 穩(wěn) 定性研究 （三）絕對構型（或通過衍生 物的構型）確證方法 1.比旋度測定 4. 手性柱色譜 （Chira l HPLC/GC） 核磁共振 6.限度 報告限度：旋光色散 （ ORD） 2.5.圓二色譜（ CD） 3.單晶 X- 衍射（XRSD） 三、超出此限度 的雜質(zhì)均應 在檢測報告 中報告，并應報告具 體的 檢測數(shù) 據(jù)。鑒定限度：最新資料推薦超出此限度 的雜質(zhì)均應 進行定性分 析，確定其化學 結構 質(zhì)

13、控 限度：質(zhì)量標準中 一般允許的 雜質(zhì)限度，如制訂限度 高于此限度 ， 則應有充分 的依據(jù)。原材料的雜 質(zhì)限度 最大日計量 報告限度 鑒定濃度 質(zhì)控濃 度 2g 0.05% 0.1% 或 1.0mg （取最小值） 0.15%或 1.0mg 2g 0.03% 0.05% 0.05% 報告限度 最大日劑量 小于等于 1 g 大于 1g 限 度 0.1% 0.05% 鑒定限度 最大日劑量 小于 1mg 110mg 大于 10m g2g 大于 2g 限度 1.0%或 5ug（取最小值） 0.5%或 20ug （取 最小值） 0.2%或 2m（g 取最小值） 0.10% 質(zhì)控限度 最大日劑量 小 于 1

14、0m 10100mg 大于 100 mg2g 大于等于 2 g 限度 1.0% 或 50ug （取最小值） 0.5% 或 200u g （取最小值） 0.2% 或 3mg（取 最小值） 0.15% 計算藥物分 析 析 模式識別：識別出某個 樣本與哪一 類供模仿用 的樣本相同 或相似。即對表征事 物或現(xiàn)象的 各種形式的 信息（數(shù)值的，文字的，邏 輯關系的 ）進行處理與 分析，以對其進行 描述、辨認、分類和解 釋 ，是信息科學 和人工智能 的重要組成 部分。借助數(shù)學的 方法和計算 機技術揭示 事物或現(xiàn)象 的隱含性質(zhì) 和內(nèi)部規(guī)律 ?；竟δ苁?對樣本分類 或辨別 聚類：是研究物以類聚的一種統(tǒng)計 方法

15、，是數(shù)據(jù)挖掘 、信息分析中 的7 / 11一個活躍 研究領域。聚類分析的 目的在于辨 別在某些特 性上相似的 事物，并按這 些特 性將樣本劃 分成若干類 （群）。同一類內(nèi)的 事物具有高 度的同質(zhì)性 ，而不同類的 事物則有高 度的異質(zhì)性 。聚類分析可 歸屬為無監(jiān) 督的模式識 別方法。系統(tǒng)聚類法 ：先將 n 個樣 本各自看成 一類，然后規(guī)定樣 本之間的距 離和類 與類 之間的距離 ，開始各樣本 自成一類， 這時類之間 的距離與樣 本之間的距 離相同， 然后選擇距 離最小的兩 類合并成新 類，并計 算該新 類與其他類 之間的距離 ，接著再將距 離最近的兩 類合并， 重復此過程 ，直至所有的 樣本都聚

16、成 一類為止。類與類之間 的距離也有 多種的定義 方法，不同的定義 方法就 產(chǎn)生 了不同的系 統(tǒng)聚類方法 ；如最短距離 法、最長距離法 、中 間距離法 、重心類、平均法、利差平方和 法、可變類平均 法、可 交法等；步驟基本上 是一樣的，不同是類與 類之間的距 離有不同 的 定義方法。主成分分析 ：通過數(shù)學交 換處理，從原始測量 數(shù)據(jù)中抽提 出能夠反映 其內(nèi) 在數(shù)據(jù) 結構和規(guī)律 的新的綜合 變量，用以簡化數(shù) 據(jù)復雜性， 描述 樣本，建立簡化數(shù) 學模型，以便對原始 數(shù)據(jù)的進一 步分析。映射技術：最新資料推薦是將高維空 間中的點集 在最優(yōu)的意 義下變換成 為低維空間 中點集的一 種數(shù)學方法 ，即將較

17、多數(shù) 變量（高維）變換為少數(shù) 幾 個變量（低維），而這些較少 的新變量能 夠最大限度 地表征原多 個 變量的信 息。人工神經(jīng)網(wǎng) 絡：一種模仿生 物神經(jīng)系統(tǒng) （ BNN）信息處理方 式的技術。人腦中存在 著由巨量神 經(jīng)細胞結合 而成的神經(jīng) 網(wǎng)絡，它構成 了大 腦信息處理 的物質(zhì)基礎 。生物神經(jīng)系 統(tǒng)信息處理 的特點：高度并行性 ； 信息的處理 和存儲合二 為一 并行處理：多進程同時 處理（以空間復雜 性降低時間 復雜性） 串行處理：單進程順序 處理 名解： 數(shù)學分離、聚類、特征、空間、主成分、降維方法、特征提取、 類距離、類間距離 論述題：解釋、比較、綜合幾個方 法 距離公式（基本公式） MP

18、神經(jīng)元輸入 計算公式（基本公式） 藥物基因組 學 一、列舉 6 類代 表性基因多 態(tài)性檢測技 術 1. 基于實時熒 光定量 PC R 的 SNP 檢測技術（熒光標記） 2. 基于核酸入 侵反應的 S NP 檢測 技 術 3. 基于生物質(zhì) 譜的 SNP 檢測技術（ MALDI- TOF-MS） 4. 基于 基因芯 片的 SNP 檢測技術 5. 基于生物發(fā) 光焦測序的 SNP 檢測 6. 新一代大規(guī) 模測序技術 二、簡述焦測序 技術原理及 其應用9 / 11 四個酶 DNA Polym erase 、ATP sulfu rylas e 、 Lucif erase 、Apyra se 1. 目標 D

19、NA 單鏈與鏈霉 素親和素相 結合（此 鏈霉親和 素包裹在磁 納米之外） 2. 借助各種分 離技術（如磁場） 經(jīng)多步操作 將干擾物分 離，使溶液中僅 剩 DNA 單 鏈 3. 利用聚合 酶 在引物后進 行合成，加入四種原 料的其中一 種（ ATGC）若可以 發(fā)生 互補配對，則聚合酶作 用時釋放焦 磷酸 4. 焦 磷酸在硫 酸化酶的作 用下形成產(chǎn) 物，再經(jīng)熒光素 酶產(chǎn)生熒光 1 個 當 量 P P 對 應 一 個 當 量 熒 光 ， 如 此 循 環(huán) 2 .3 直 到 整個測序完 畢 5. 若 NTP 與 DNA 不反 應，則會被降解 酶降解以排 除干擾 應用：1. 通過人工方 式將一個或 多個基因引 入基因組轉基因技術2. 序列標簽、定量性能 3. 診斷 21 三 體綜合癥、唐氏綜合癥 4. 診斷大腸癌 ，糞便中脫落 細胞 5. 單細胞檢測 芯片 PCR ： 芯片表面將 單細胞捕獲 三、概述抗凝藥 物氯吡格雷 的個體 化給 藥注意事項 FDA 對氯 吡咯雷用藥 的黑框警告 ：1. 使用氯吡咯 雷前需檢查 病人 CYP 2C19 基 因多態(tài)性，主要 檢測 C YP2C1 9*2