[生物學]實驗室生物安全程序化文件及SOP

1、枝江市人民醫(yī)院檢驗科生物安全細則（程序文件及SOP）1.生物安全管理體系1.1緊急事件 和辦公室聯(lián)系方式救護車/火警/警察120/119/110生物安全負責人：醫(yī)院院長 生物安全辦公室：檢驗科主任 實驗室平面圖、緊急出口、撤離路線：1.2生物安全管理機構生物安全負責人：醫(yī)院院長 生物安全委員會委員：醫(yī)院主管院長，主要管理部門和實驗室負責人實驗室生物安全責任人：檢驗科主任 實驗室生物安全管理員：各專業(yè)實驗室或專業(yè)組負責人 生物安全辦公室：設在檢驗科辦公室內(nèi)，主任：檢驗科主任 成員：各專業(yè)安全員1.3職責1.3.1生物安全負責人醫(yī)院法定代表人為生物安全負責人。生物安全負責人的主要職責是：u 負責建

2、立本單位生物安全管理體系，落實生物安全管理責任部門或責任人。u 定期召開生物安全管理會議，對實驗室生物安全相關的重大事項作出決定。u 批準和發(fā)布實驗室生物安全手冊、生物危害評估等重要文件。u 保持與生物安全辦公室的聯(lián)系。1.3.2實驗室生物安全責任人各專業(yè)實驗室主任為實驗室生物安全責任人，其主要職責是：u 全面負責本實驗室生物安全工作。u 決定并授權進入本實驗室的工作人員。u 監(jiān)督有關法規(guī)和標準操作規(guī)程的執(zhí)行，糾正違規(guī)行為并有權作出停止實驗的決定。u 任命實驗室生物安全管理員具體落實實驗室生物安全管理工作。u 負責制定和實施實驗室應急處置預案。u 負責實驗室安全事故的現(xiàn)場處置和調(diào)查，并將調(diào)查結

3、果以及處理意見向生物安全辦公室報告。u 負責對涉及感染性物質(zhì)的研究計劃、方案以及操作程序等，實施前的生物安全審查。1.3.3實驗室生物安全管理員實驗室生物安全管理員的主要職責是：u 負責實驗室生物安全保障以及技術規(guī)章方面的咨詢工作。u 就技術方法、程序和方案、生物因子、材料和設備進行定期的內(nèi)部安全檢查。u 糾正違反生物安全操作規(guī)程的行為。u 在出現(xiàn)潛在感染性物質(zhì)溢出或其他事故時，協(xié)助事故調(diào)查。u 檢查和監(jiān)督實驗室廢棄物的有效管理與安全處置。u 檢查和監(jiān)督實驗室各項消毒滅菌措施的落實情況。2. 生物安全評估和管理在建設實驗室或開展實驗活動之前，生物安全辦公室應參照衛(wèi)生部名錄組織各相關方面的專家對

4、擬操作的生物因子的危害程度、實驗活動的危險性、氣溶膠傳播的可能性、預防治療的獲得性、防護屏障的安全性、應急預案的有效性等因素進行評估，確定相應的生物安全防護水平等級。實驗室生物危害評估結果應由中心的法定代表人簽字認可，并歸檔保存。生物安全負責人最終對實驗室內(nèi)的安全負責，其職責之一是指導現(xiàn)行工作以判斷潛在的危害（生物安全評估），職責之二是實驗開始前采用合適的安全程序（風險管理）。特定的實驗開始前需要預先進行登記和通過生物安全負責人的批準。風險評估和風險管理的5個“P”是指：u Pathogen 病原體 危險的生物因子u Procedures 規(guī)程 推薦的實驗操作和安全的操作規(guī)范u Personn

5、el 人員 相應的培訓與技能u Protective equipment 防護設備 防護衣和安全設備u Place 地點 實驗室所在位置實驗室工作的每一方面都應考慮風險評估和風險管理的5個“P”。正確地指導和風險評估能幫助免受生物危害的暴露，以及最大程度減少實驗室受到感染的可能性。2.1 風險評估和風險管理表（見下表）表2.1風險評估和風險管理表風險評估風險管理病原體u 傳染因子類型 (見附錄A)u 感染途徑u 感染性疾病發(fā)生過程病毒性、致病性、數(shù)量、濃度、人群中影響程度、昆蟲媒介的存在u 登記n 院感辦公室n 疾控中心 選擇機構規(guī)程u 氣溶膠風險：離心 、混勻、混合、振動u 經(jīng)皮風險: 針頭

6、、注射器、玻璃吸液管、解剖刀、低溫刀片/刀等u 飛濺/濺潑風險: 吸液管、接種環(huán)u 建立一套結合安全使用的標準操作規(guī)程u 遵守基本的生物安全規(guī)則u 實驗室、工作區(qū)域、 BSL-2或更高傳染因子實驗室內(nèi)的設備貼上標識u 指導實驗室操作和檢查實驗設備u 用非傳染性材料做嘗試性試驗，以測試新的規(guī)程/設備人員u 人員免疫n 贅生物疾病n 感染n 免疫抑制治療n 年齡、種族、性別、妊娠n 手術 (脾、胃切除)u 免疫力u 后暴露預防u 血清庫u 對安全的態(tài)度u 安慰u 外傷、破損皮膚、濕疹、皮炎u 安全培訓u 以前從事生物危害的經(jīng)歷u 技術的熟練程度u 立即向生物安全負責人和生物安全辦公室報告所有的暴露

7、事件、被忽視的事件以及相關疾病的癥狀u 調(diào)查/核實事件/飛濺等，以防止再次發(fā)生防護設備u 防護：l 氣溶膠-可以吸入粒子直徑5ml 飛濺/濺潑l 銳器u 口罩u 手套u 生物安全柜u 安全離心管/轉子地點u 風險組/生物安全等級、設備u 氣溶膠風險u 受限制的過道u 基本的實驗室-門、易清潔的地方、沖眼器、窗戶u 標簽u 用直接氣流預防2.2 暴露途徑生物因子要導致疾病發(fā)生，首先必須有足夠數(shù)量的因子進入或侵入人體，進入的途徑有經(jīng)口、呼吸道、黏膜及與動物的接觸（叮、抓傷），當生物危害物進入人體，它產(chǎn)生疾病還需滿足其它條件，它們必須在人體細胞、組織和/或器官內(nèi)生長繁殖，克服人體的自然免疫機制和變異

8、或適合人體的變化。年齡、免疫狀況、職業(yè)、物理或地理環(huán)境等因素會導致個體對疾病的不同易感性。在涉及生物危害時，確定其最低感染量是很困難的。同一病原體相同劑量在一個人身上可能無癥狀，而在另一人身上可能導致嚴重的癥狀甚至致命。有些微生物只要一個進入到人體就足以侵入并促使疾病的發(fā)生，結核桿菌就是一個例子。暴露途徑的更多信息見下圖。感染因子的傳播途徑黏膜：通過飛濺或濺潑暴露眼、鼻、嘴里的黏膜Mucous Membranes:吞咽；口腔吸入、吃、喝、在實驗室里抽煙Exposures to mucous membranes of the eyes, nose and mouth through splash

9、es or splatters.Ingestion:Mouth pipetting, eating, drinking, smoking in the lab.吸入：吸入氣溶膠粒子 (直徑5m), 離心滲漏物、溢出物、吸液等Inhalation:Breathing in respirable sized aerosols (5m), centrifuge leaks, spills, pipetting, etc.經(jīng)皮:被感染過的銳器刺傷完好或破損皮膚、動物叮咬、抓傷、濕疹Percutaneous:Through intact or non-intact skin via needlestic

10、k, puncture with contaminated sharp object, animal scratch or bite, through wounds abrasions, or eczema.接觸 (間接傳播):通過接觸污染面（如凳子、 、電腦、設備把手等）的手來觸摸黏膜或破損皮膚，或實驗后洗手不徹底Contact (indirect transmission):Via mucous membranes or nonintact skin from hands that have been in contact with a contaminated surface (i.e.

11、 benches, phones, 2.2.1 實驗室內(nèi)傳染因子的傳播途徑 暴露途徑 防護措施黏膜：通過飛濺或濺潑暴露眼、鼻、嘴里的黏膜通過以下方式進行面部的預防：u 戴護眼鏡或面罩u 在生物安全柜內(nèi)或保護罩后工作u 進行規(guī)范的微生物操作吸入：由于離心滲漏、溢出或產(chǎn)生氣溶膠的操作如吸液、混勻等而吸入了可吸入的氣溶膠粒子 (直徑5m)。 通過以下方式避免暴露氣溶膠： u 在生物安全柜內(nèi)工作u 離心時使用密封轉子或杯u 進行規(guī)范的微生物操作吞咽；口腔吸入、吃、喝、在實驗室里抽煙通過以下方式防止經(jīng)吞咽產(chǎn)生的暴露：u 不在實驗室內(nèi)吃、喝或吸煙u 始終使用手工吸液u 進行規(guī)范的微生物操作經(jīng)皮:被感染過的

12、銳器刺傷完好或破損皮膚、動物叮咬、抓傷、濕疹通過以下方式防止皮膚破損：u 用塑料制品代替玻璃制品u 使用銳器要非常小心u 用后立即將銳器丟棄在堅固防漏容器內(nèi)u 適當限制動物u 戴不易劃破的手套、袖套、u 用防水繃帶包扎好破損皮膚并戴雙層手套接觸 (間接傳播):通過接觸污染面（如凳、 、電腦、設備把手等）的手來觸摸黏膜或破損皮膚，或實驗后洗手不徹底。通過以下方式防止間接暴露：u 工作臺面消毒u 工作后、脫去手套后總是洗手。u 不要用戴手套或不戴手套的手觸摸臉部（良好的個人習慣）u 實驗室內(nèi)不使用化妝品。在實驗室內(nèi)的任何時候始終執(zhí)行以下工作制度：u 不在實驗室內(nèi)吃、喝或吸煙u 工作結束后或脫去手套

13、后總是洗手u 實驗室內(nèi)穿戴好個人防護設備，離開實驗室前務必脫去個人防護設備u 不用口吸、始終用手工吸液u 使用銳器格外小心u 用合適的設備抑制氣溶膠的產(chǎn)生u 對工作臺面、溢出物和廢棄物進行消毒2.3 生物安全等級國家和衛(wèi)生部對微生物和生物醫(yī)學實驗室確立了從事生物危害工作對應的生物安全等級。提供了微生物操作、實驗室設備和安全設施的結合使用，以及所選的感染因子與使用推薦的四種生物安全等級的實驗室操作。以下是1-4級生物安全所要求的實驗室操作、防護設備、實驗室設施和傳染因子的概括。2.3.1 所推薦的生物安全等級與相應感染因子生物安全等級感染因子規(guī) 程安全設備（第一道屏障）實驗室設備（第二道屏障）B

14、SL-1已知對健康成人 和動物不造成疾病。標準微生物操作。不需要。u 開放工作臺。u 防止節(jié)肢動物和嚙齒動物進入。u 實驗室靠近出口處有洗手池。u 實驗室的窗戶有紗窗。u 適當?shù)南驹O備。BSL-2能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原體。實驗室感染不導致嚴重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險有限。BSL-1操作加：u 限制進入u 生物危害警示標記u 銳器謹慎使用u 制定安全手冊，確定所有廢物消毒和醫(yī)療監(jiān)督計劃I 級or II級生物安全柜或其它物理防護設備，這些設備應用于可能會產(chǎn)生飛濺或氣溶膠的感染因子的操作；個人防護設備：外套、手套、所需

15、要的面部防護BSL-1加：u 實驗室門應帶鎖并可自動關閉。u 應設洗眼設施、高壓滅菌鍋。BSL-3能引起人或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能用抗生素抗寄生蟲藥治療的病原體。BSL-2操作加：u 控制進入u 所有廢棄物消毒u 實驗室衣服洗之前對其進行消毒II級（B2）或級生物安全柜和用于所有感染因子操作的其它物理防護設備；個人防護設備：防護衣、手套、需要的呼吸道防護。清潔區(qū)設置淋浴裝置。BSL-2加：u 自成隔離區(qū)，進入實驗室的過道用物理方式隔開。u 入口處采用自動關閉雙層門。u 獨立的送排風系統(tǒng)，空氣排至室外，不在室內(nèi)循環(huán)。u 實驗室負壓u 實驗室污染

16、區(qū)內(nèi)設不排蒸汽的高壓蒸汽滅菌器。BSL-4能引起人或動物非常嚴重的疾病，一般不能治愈，容易直接、間接或因偶然接觸在人與人，或動物與人，或人與動物，或動物與 動物之間傳播的病原體。BSL-3操作加：u 進入實驗室前更衣u 出口處沖淋u 所有材料在出口處消毒按照級生物安全的所有步驟進行，全身穿上有空氣供應系統(tǒng)、正壓個人防護衣。BSL-3加：u 遠離建筑物或單獨的區(qū)域u 安裝供應、排放真空系統(tǒng)u BMBL上的其它需求根據(jù)國家標準GB 19489-2004實驗室生物安全通用要求編制2.3.2生物安全評估目前實驗室內(nèi)開展的病原體檢測的范圍為：病毒名稱危害程度分類未經(jīng)培養(yǎng)的感染材料的操作英文名中文名分類學

17、地位Hepatitis A virus甲型肝炎病毒小RNA病毒科第三類BSL-2Hepatitis B virus乙型肝炎病毒嗜肝DNA病毒科第三類BSL-2Hepatitis C virus丙型肝炎病毒黃病毒科第三類BSL-2Hepatitis D virus丁型肝炎病毒衛(wèi)星病毒第三類BSL-2Hepatitis E virus戊型肝炎病毒嵌杯病毒科第三類BSL-2序號病原菌名稱危害程度分類樣本檢測所需生物安全實驗室級別學名中文名1.Mycobacterium bovis牛型分枝桿菌第二類BSL-22.Mycobacterium tuberculosis結核分枝桿菌第二類BSL-23.Vib

18、rio cholerae霍亂弧菌第二類BSL-24.Staphylococcus spp葡萄球菌屬第三類BSL-25.Streptococcus spp鏈球菌屬第三類BSL-26.Enterococcus spp腸球菌屬第三類BSL-27.Micrococcus spp微球菌屬第三類BSL-28.Moraxella spp莫拉菌屬第三類BSL-29.Neisseria spp奈瑟菌屬第三類BSL-210.Corynebacterium spp棒狀桿菌屬第三類BSL-211.Bacillus spp芽胞桿菌屬第三類BSL-212.Listeria spp李斯特菌屬第三類BSL-213.Erysi

19、pelothrix spp丹毒絲菌屬第三類BSL-214.Rhodococcus equi馬紅球菌第三類BSL-215.Nocardia spp諾卡菌屬第三類BSL-216.Eikenella corrodens嚙蝕艾肯菌第三類BSL-217.Enterobacteriaceae腸桿菌科第三類BSL-218.Vibrio spp弧菌屬（除霍亂弧菌）第三類BSL-219.Aeromonas spp氣單胞菌屬第三類BSL-220.Plesiomonas spp鄰單胞菌屬第三類BSL-221.Pseudomonas spp假單胞菌屬第三類BSL-222.Acinetobacter spp不動桿菌屬第

20、三類BSL-223.Flavobacterium spp黃桿菌屬第三類BSL-224.Haemophilus spp嗜血菌屬第三類BSL-225.Pasteurella spp巴斯德菌屬第三類BSL-226.Gardnerella spp加德納菌屬第三類BSL-227.Legionella pneumophila嗜肺軍團菌第三類BSL-228.Campylobacter spp彎曲菌屬第三類BSL-229.Helicobacter spp螺桿菌屬第三類BSL-230.Clostridium spp梭菌屬第三類BSL-231.Bacteroides spp擬桿菌屬第三類BSL-232.Fusob

21、acterium spp梭桿菌屬第三類BSL-233.Peptostreptococcus anaerobius厭氧消化鏈球菌第三類BSL-234.Actinomadura spp放線菌屬第三類BSL-235.Arcanobacterium spp隱秘桿菌屬第三類BSL-236.Chlamydia pneumoniae肺炎衣原體第三類BSL-237.Mycoplasma pneumoniae肺炎支原體第三類BSL-238.Ureaplasma urealyticum解脲脲原體第三類BSL-239.Candida albicans白假絲酵母菌第三類BSL-240.Cryptococcus neo

22、formans新生隱球菌第三類BSL-2根據(jù)上述病原體檢測的表格，本實驗室僅僅允許在生物安全等級為1和2 的實驗室里工作。2.3.3生物安全檢查為確保實驗室生物安全制度、措施落實到位，避免生物安全事故，特制訂本制度。 1、主任每年至少組織一次生物安全全面檢查，對關鍵控制點可根據(jù)風險評估報告適當增加檢查頻率。檢查內(nèi)容包括：a) 生物安全管理體系、實驗室活動運行情況；b) 生物安全管理制度是否完善、是否落實；c) 實驗室設施、設備和人員的狀態(tài)；d) 應急裝備、消防裝備、報警體系和撤離程序功能及狀態(tài)是否正常；e) 危險物品如可燃易燃性、傳染性、放射性以及有毒物質(zhì)的防護、控制情況；f) 廢物處理及處置

23、情況；g) 不符合規(guī)定的工作是否及時得到糾正；h)現(xiàn)有資源能否滿足工作要求等。2、 科室負責人負責實驗室生物安全的全面管理，檢查、督促生物安全監(jiān)督員工作，每季度進行科室生物安全工作檢查，檢查內(nèi)容包括：a) 生物安全監(jiān)督員工作記錄；b) 菌（毒）株、樣本的運輸、保存、使用、銷毀情況；c) 生物安全實驗室的消毒和滅菌情況以及感染性廢物的處理情況；d) 生物安全設備的運行、維護情況；e) 防護物資的儲備情況等。3、 生物安全監(jiān)督員負責實驗室日常工作的生物安全監(jiān)督、檢查，內(nèi)容包括：a) 生物安全管理制度執(zhí)行情況；b) 個人防護要求執(zhí)行情況；c) 實驗室人員的生物安全操作是否規(guī)范等；d) 及時發(fā)現(xiàn)、糾正

24、違規(guī)行為，避免生物安全事故發(fā)生。4、對于檢查中發(fā)現(xiàn)的問題及時糾正，必要時制定糾正措施或實施整改，并進行跟蹤驗證。5、按照資料、檔案管理制度保存所有檢查記錄，及時歸檔。6、將自查發(fā)現(xiàn)的問題作為實驗室生物安全培訓計劃解決。 7、為保證檢查工作的質(zhì)量，應依據(jù)事先制定的適用于不同工作領域的檢查表實施檢查。 8、當發(fā)現(xiàn)不符合規(guī)定的工作、發(fā)生事件或事故時，應立即查找原因并評估后果；必要時，停止工作。9、生物安全委員會應參與安全檢查。10、外部的評審活動不能代替實驗室的自我安全檢查。3 標志3.1 墻面標志3.1.1 實驗室入口處的墻面上應有實驗室名稱。3.2 門上標志3.2.1 實驗室入口處門上必須有生物

25、危害警告標志。標志包括國際生物危害符號、生物危害等級（如BSL-1或2或3），有特殊要求的專用實驗室應標明特殊進入等要求。 國際生物危害警告標志3.2.2 BSL-2實驗室入口處門上必須有人員出入限制標志和相關信息，如實驗室責任人的姓名、聯(lián)系 等。3.3 標貼和顏色3.3.1 在實驗室內(nèi)，生物危害符號應貼在醫(yī)用垃圾容器、冰箱、冷凍箱、培養(yǎng)皿和含BSL-2或BSL-3傳染因子的離心機、污水池、超聲腐蝕器及生物安全柜等上。3.3.2 當設備用于處理人血液標本、其它潛在感染物質(zhì)或感染因子時，生物危害符號應臨時貼在相關的設備上。3.3.3生物危害符號也應貼在其它用于儲存、運送BSL-2或BSL-3傳染

26、因子、血液標本或“其它潛在感染物質(zhì)”（注意：未懷疑包含傳染因子或“其它潛在感染物質(zhì)”的運送可以不貼生物危害符號，而貼診斷樣品標志）的容器上。標貼應用帶子、線、粘膠或其它方式盡可能貼近容器以防止松動或意外弄丟。3.3.4生物危害警告標志底色應該是桔紅色，字母和符號用對比明顯的顏色。如果有下列情況，生物危害警告標志可以免貼：（1） 廢棄物是放在黃色有的袋內(nèi)；（2） 在儲存、轉移、運送、處理過程中，單個盛血液或“其它潛在物質(zhì)”的容器被放置在貼有生物危害符號的第二個容器中。（3） 當實驗室門上貼有生物危害警告標志時，其室內(nèi)的儀器等物品可免貼。3.4 外送維修或處理的設備3.4.1已污染或可能污染的設備

27、外送維修或處理必須盡可能徹底消毒，在設備上貼上生物危害警示。3.4.2 對一些不能進行徹底消毒的儀器設備，在外送之前，將這些儀器設備盡可能的消毒（沖洗或擦干凈外部），并貼上生物危害警示。3.4.3 生物危害警示還必須注明哪些部分仍存在污染，生物危害符號貼在污染區(qū)域附近。生物危害警示本設備的外部和內(nèi)部表面已消毒，已無任何生物危害。本設備將作為（在內(nèi)打勾） 服務/維修 重新安置 報廢 消毒操作人員 所使用的消毒劑 消毒日期 設備放置地點 實驗室聯(lián)系 設備的以下區(qū)域 仍存在污染4.生物安全要求和人員管理以下的內(nèi)容描述了實驗人員的要求。每個專業(yè)科室負責人的職責是確保實驗室能遵循規(guī)章制度。4.1生物物質(zhì)

28、的使用登記各專業(yè)科室實驗室生物安全責任人要完成和遞交“生物物質(zhì)的使用登記表”。生物安全辦公室必須保存有關人員使用生物物質(zhì)的準確的信息（例如：微生物、細胞系、人源物質(zhì)、動物和毒物），并要求各專業(yè)科室負責人每年遞交準確信息，以及一年里有關生物物質(zhì)的增加或刪除、房間位置的增加或刪除等變化。4.1.1人類病毒在開始研究人類致病因子前需要在生物安全辦公室登記。生物安全辦公室必須在實驗開始前批準全部包括有傳染性因子或潛在生物危害的生物物質(zhì)導入動物。實驗人員必須在新的實驗開始前接受生物安全培訓。生物安全培訓由生物安全辦公室組織安排。生物安全負責人的職責是確保實驗室全體人員得到適當操作和技術的培訓。生物安全負

29、責人和/或實驗室生物安全責任人在用風險組2（生物安全水平2）因子工作前必須到生物安全辦公室登記。風險組2和較高致病因子名單見附錄A。生物安全辦公室將定期監(jiān)控設備和操作，同時回答任何關于安全的問題。在下列情況發(fā)生之前必須聯(lián)系生物安全辦公室：u 開始用新的可感染因子工作u 改變現(xiàn)有工作的范圍或位置u 將可感染因子提供給科內(nèi)外其他工作人員u 在實驗室安排非本實驗室的工作人員工作4.1.2人類血液、體液、組織和其他潛在有傳染性的物質(zhì)血液耐受致病標準適用于“職業(yè)暴露”于人類血液或其他潛在有傳染性物質(zhì)下的工作人員。其他潛在有傳染物質(zhì)包括：u 人類細胞或組織培養(yǎng)u 來自于人類（活的或死的）任何不固定的組織或

30、器官，除了完整無缺的皮膚。u 人類體液，包括尿液、糞、唾液或眼淚等。u HIV或HBV包括培養(yǎng)液或其他溶液u 血液，器官或其他來自于感染了HIV或HBV或其他血液耐受致病原的實驗動物組織。如果工作人員沒有直接接觸血液或其他潛在有傳染物質(zhì)，但使用那些用于處理或貯存血液，其他潛在有傳染物質(zhì)或血液耐受致病原的儀器，那么此人也被認為是職業(yè)暴露。員工暴露于由人類血液、組織和體液，可引起一個重要的健康風險，它們含有血液耐受致病原諸如： 人類免疫缺陷病毒（HIV） 巴貝西蟲 科羅拉多壁虱熱 乙型肝炎（HBV） 疏螺旋體菌 蟲媒病毒丁型肝炎（HDV） 布氏桿菌 減少螺菌 丙型肝炎（HCV） 鉤端螺旋體 Cre

31、utzfeldt-Jakob virus 瘧原蟲 弗朗西斯菌 Human T-lymphotropicVirus Type I I型人類T淋巴促激素病毒 密螺旋體 Streptobacillus moniliformis念珠鏈桿菌 Hemorrhagic Fever viruses出血熱病毒4.2生物安全柜空氣清潔設備能確?？剖覇T工的健康和安全，同時可保護實驗和預防臨床傳染性物質(zhì)釋放到環(huán)境中。生物安全柜的功效依賴于操作者的行為，如在設備中物品的定位和實驗室人員的移動。本中心的全部生物安全柜必須具有中心證明/服務合同以及至少每年鑒定。生物安全辦公室聯(lián)系確定需每年鑒定的日期。當轉讓給新買主、報廢、

32、從中心搬走或從其他單位或制造商獲得生物安全柜時，須預先通知生物安全辦公室。如設備有服務或維修需要（例如，更換熒光燈、開關等）應聯(lián)系生物安全辦公室。在生物安全柜被重新貯存、維修（內(nèi)部）或報廢前，必須由有證的技師用甲醛等專業(yè)排污。購買生物安全柜應與生物安全辦公室協(xié)調(diào)。生物安全辦公室評價全部生物安全柜的購買要求?？剖也毁徺I和使用超凈工作臺，因為超凈工作臺的空氣吹向工作表面而進入操作者的面部和（皮膚）破損處。超凈工作臺不能提供保護人員或環(huán)境防止可傳染性或潛在可傳染性因子、過敏原、化學品或物質(zhì)。4.3人員管理實驗室應建立工作人員上崗考核制度，所有與實驗活動相關的人員都應經(jīng)過培訓并取得上崗資質(zhì)。培訓對象應

33、包括實驗室管理人員、實驗室技術人員、樣本運輸人員、廢棄物處置人員、儀器設備維修人員及保潔工等。實驗室相關人員應每年接受生物安全培訓。培訓組織機構應采取有效方法對培訓的效果進行評估?？剖覒⑷藛T培訓檔案。人為的失誤和不規(guī)范的操作會極大地影響所采取的安全措施對實驗室人員的防護效果。因此，熟悉如何識別與控制實驗室危害的有安全意識的工作人員，是預防實驗室感染、差錯和事故的關鍵?；谶@一原因，不斷地進行安全措施方面的在職培訓是非常必要的。一個有效的安全規(guī)程首先始于實驗室管理者，管理者應確保安全的實驗室操作及程序融合到工作人員的基本培訓中。安全措施方面的培訓是新工作人員崗前培訓的有機組成部分，應向工作人

34、員介紹生物安全操作規(guī)范和實驗室操作規(guī)程，包括安全手冊或實驗的操作手冊。應采用諸如簽名傳閱的方法，來確保工作人員閱讀并理解這些規(guī)程。專業(yè)科室主任在對屬下工作人員進行規(guī)范性實驗室操作技術培訓時起著關鍵作用，生物安全委員會可以幫助進行人員培訓并研制教具和教案。4.3.1培訓規(guī)劃不斷進行崗位安全教育對于維持實驗室工作人員和后勤保障人員的安全意識是很重要的。下列各項是保證生物安全培訓規(guī)劃行之有效的必備要素：需求評估。這一過程包括確定相關的任務、重要性等級（以發(fā)生頻率、危害程度以及復雜性來表示）以及完成這些任務的必要步驟等細節(jié)。確立培訓目的。最令人滿意的情況是，期望受培訓者在進

35、行培訓之后，能在工作中加以應用。培訓的目的是要了解開展實驗的條件以及所需的熟練水平。規(guī)定培訓的內(nèi)容和方法。培訓內(nèi)容是受培訓者為了實現(xiàn)實驗操作目標所必須掌握的知識或技術。通常由那些對工作和相關要求最為了解的人員來確定生物安全培訓規(guī)劃的內(nèi)容。其他的內(nèi)容可能集中在練習如何解決工作中發(fā)生的問題，以及學習糾正人們在使用某一技術過程中所犯的錯誤。還不能確定某種教學方法（專題講座、計算機輔助教學、交互式影像方式等）是否會比另一種更好，教學方法的好壞很大程度上取決于特定的培訓需要、培訓對象的構成等。培訓應該由取得當?shù)貙嶒炇疑锇踩珟熧Y培訓合格證的人員進行。 人員培訓的內(nèi)容：生物安全相關法律、法規(guī)

36、、辦法、標準、驗室生物安全的基本知識、基本技能、生物安全管理制度、消防和應急處置預案、化學、生物危險和傳染預防、應急救護等應急預案、緊急事件的上報和處置程序、生物安全風險評估、生物安全操作規(guī)范、儀器設備的使用、保養(yǎng)、維護、個人防護用品的正確使用、菌（毒）株及樣本的收集、運輸、保藏、使用、銷毀、實驗室的消毒與滅菌、感染性廢物的處置等課程。重點還應包括：A. 吸入危險（氣溶膠產(chǎn)物），如何使用接種環(huán)、劃線接種瓊脂平板、移液、制作涂片、打開培養(yǎng)物、采血/血清標本、離心等。B. 食入危險，如處理標本、涂片以及培養(yǎng)物。C. 在使用注射器和針頭時刺傷皮膚的危險。D. 處理血液以及其它有潛在病理學危險的材料E

37、. 感染性材料的清除污染和處理。當有關部門新頒發(fā)、修訂生物安全相關法律、法規(guī)、規(guī)范、標準等，實驗室生物安全手冊進行修改后應組織開展相關內(nèi)容的培訓和考核。建立并保存生物安全工作人員的培訓、考核檔案。5.醫(yī)學監(jiān)督程序醫(yī)學監(jiān)督程序由生物安全辦公室管理。程序的目的是對員工作定期的健康評估，關注對特殊的生物因子員工可能的處理（方式）有關的因素或條件。對特殊的員工醫(yī)學監(jiān)督程序可以做一些預防測定，包括免疫、定期身體檢查和采集血清樣本。許多傳染病并非明顯疾病條件引起。可預先收集新進員工、傳染病實驗室員工的血清作為本底血清。實驗室應定期對實驗人員開展與其從事實驗活動相關的健康體檢，建立人員健康檔案。實驗室工作人

38、員應在身體狀況良好的情況下進入實驗區(qū)工作，若出現(xiàn)疾病、過勞狀態(tài)或其他意外狀況，則不應進入實驗區(qū)或立即退出實驗區(qū)。醫(yī)學監(jiān)督程序的目的是：u 推薦下列的合適的醫(yī)學預防（措施）u 做員工的定期評價以決定假如與工作相關的醫(yī)學條件是普遍的，這樣的話，采取確定的測定以減輕他們的（影響）對一個特定的員工醫(yī)學監(jiān)督的范圍將是非常不同和依賴于： 課題本身存在的潛在因素 那些直接或潛在暴露生物因子的員工與現(xiàn)在或以前健康狀況有關的某些附加因素醫(yī)學監(jiān)督將可提供員工可能導致的潛在暴露。5.1暴露于結核桿菌員工的篩選面對職業(yè)暴露于結核桿菌的員工在科室生物安全辦公室登記。職業(yè)安全和健康管理從下列范圍鑒定潛在暴露：u 可能處理

39、肺結核菌的實驗室有風險新員工在雇用時必須用肺結核皮膚試驗（PPD）測試TB暴露以建立其基礎值。有風險全體員工必須每年做PPD試驗。暴露于活性TB案例中的員工必須報告在暴露時初始TB試驗基線和以后暴露3個月測試的事件和經(jīng)歷。5.2實驗室人員健康醫(yī)療監(jiān)護5.2.1 目的 規(guī)范實驗室人員的健康監(jiān)護工作，預防、控制實驗室感染。5.2.2范圍適用于檢驗科實驗室所有工作人員。5.2.3職責檢驗科負責人負責實驗室人員健康監(jiān)護工作的組織實施。5.2.4制度要求實驗室人員體檢.1對新從事實驗室技術人員必須進行的上崗前體檢，體檢指標除常規(guī)項目外還應包括與準備從事工作有關的特異性抗原、抗

40、體檢測。不符合崗位健康要求不得從事相關工作。.2 實驗室技術人員要在身體狀況良好的情況下從事相關工作，發(fā)生發(fā)熱、呼吸道感染、開放性損傷、懷孕等或因工作造成疲勞狀態(tài)免疫耐受及使用免疫抑制劑等情況時，需由實驗室負責人同意從事相關工作，但不宜再從事高致病性病原微生物的相關工作。.3 檢驗科負責人在批準外來學習、工作人員進入實驗室前應了解其健康狀況，必要是可先行安排進行臨時性體檢，檔案保留。 實驗室人員免疫預防在某些情況下，做特殊研究的人員要用合適的疫苗免疫，諸如狂犬病，風疹和麻疹。疫苗建議B型肝炎疫苗推薦給使用人類血液，體液或組織工作的人員其他疫苗由員工健康

41、醫(yī)生決定。在一些案例中定期收集適當?shù)纳鲜鲅鍢颖緶y定疫苗引起的抗體。.1實驗室人員應根據(jù)崗位需要進行免疫接種和預防性服藥，免疫接種時，應考慮適應癥、禁忌癥、過敏反映等情況并記入健康監(jiān)護檔案。.2 檢驗科應制定年度免疫接種計劃，報主管領導批準后由檢驗科組織實施。免疫接種情況應記入健康監(jiān)護檔案。.3 檢驗科實驗室可根據(jù)工作開展情況對各類人員進行必要的臨時性免疫接種和預防性服藥，并記入健康監(jiān)護檔案。.4 對體檢結果異常的人員應隨時進行必要的免疫接種或采取其他預防手段，并記入健康監(jiān)護檔案。.5發(fā)生實驗室意外事件或生物安全事故后應根據(jù)

42、需要進行必要的應急免疫接種或預防性服藥，并記入健康監(jiān)護檔案。 發(fā)生事故后的人員管理.1 發(fā)生實驗室意外事件或一般生物安全事故后由醫(yī)務科/檢驗科確定相關人員救治、免疫接種和醫(yī)學觀察方案，發(fā)現(xiàn)異常，由醫(yī)務科/人事科/檢驗科決定人員臨時性或永久性調(diào)離崗位。臨時調(diào)離崗位的人員在重新上崗前必須進行體檢，體檢結果達到崗位健康要求后由醫(yī)務科/檢驗科批準其上崗。.2 發(fā)生重大生物安全事故后由醫(yī)務科/檢驗科制定并上報相關人員救治、免疫接種和醫(yī)學觀察方案，同時采取有效措施盡量控制人員感染范圍，主管領導對方案進行審批。醫(yī)學觀察發(fā)現(xiàn)異常，由醫(yī)務科/人事科/檢驗科決定人員臨時性

43、或永久性調(diào)離崗位，臨時調(diào)離崗位的人員在重新上崗前必須進行體檢，體檢結果達到崗位健康要求后由醫(yī)務科/檢驗科批準其上崗。 5.3醫(yī)學限制5.3.1懷孕一般認為在懷孕期間暴露于某些傳染因子例如母親被因子感染可能會影響胎兒。懷孕的或將懷孕的婦女要告知生物安全辦公室。員工要與生物安全委員會及生物安全辦公室討論關于實驗操作與懷孕的風險問題。生物安全辦公室是懷孕婦女詢問任何問題或涉及到有關她們工作環(huán)境風險的機構，同時辦公室又扮演著懷孕員工和她們各自的部門負責人之間的聯(lián)絡員角色。5.3.2生殖生物學危害生殖生物學危害包括但并不僅僅限于下列：u 巨細胞病毒（CMV）u B型肝炎病毒（HBV）u E型肝炎病毒u

44、人類免疫缺陷病毒（HIV）u 人類細小病毒B19u 風疹（德國麻疹）u 淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒u 水痘帶狀皰疹病毒（雞疹）只要需要，生物安全辦公室與各專業(yè)科室一起去評價實驗室工作程序以確保最小的暴露。5.3.3其它限制經(jīng)過與員工及醫(yī)生討論后，制定員工的限制和推薦的基線。以條件為例證明特殊預防感染、免疫抑制條件和抑制免疫系統(tǒng)的藥物治療。因此，假如你正處于上述任何條件，你必須將有關情況告知你的醫(yī)生和辦公室。6個人防護裝備（PPE）個人防護裝備是減少操作人員暴露于氣溶膠、飛濺物以及意外接觸等危險的一個屏障。實驗室應具備足夠的符合不同級別的個人防護裝備，供實驗人員選擇和使用。6.1 實驗服、隔離衣

45、進入實驗區(qū)域必須穿實驗服，反復使用的實驗服必須是耐用的。每隔適當?shù)臅r間應更換實驗服以確保清潔，當實驗服或隔離衣已被危險材料污染時應立即更換，放在指定的位置，告知保潔人員先消毒再清洗。6.2 手套手套應符合舒服、合適、耐磨、耐撕的要求。在進行實驗室一般性工作，以及在處理感染性物質(zhì)、血液和體液標本時，應戴手套，并保證： 所戴手套無漏損； 戴好手套后應完全遮蓋手及腕部； 在撕破、損壞或受污染時應立即更換手套； 在完成工作后應摘除手套并徹底洗手。用過的一次性手套應丟棄在生物垃圾袋內(nèi)； 手套不得戴離實驗室區(qū)域。6.3 口罩、帽子 在無菌室從事無菌實驗時應戴口罩、帽子。在從事可能出現(xiàn)飛濺的工作時應戴口罩、

46、帽子。用過的口罩、帽子應丟棄在生物垃圾袋內(nèi)，口罩、帽子不得戴離實驗室區(qū)域。7實驗室設備 實驗室所用設施、設備和材料應符合國家相關標準和規(guī)定要求。一級病原微生物實驗室和二級病原微生物實驗室的設施設備要求。7.1 生物安全柜有生物安全柜的科室要有一個生物安全柜的操作規(guī)程。合適地使用生物安全柜能提供一個清潔的工作環(huán)境。生物安全柜能提供給人員、物品和環(huán)境的保護。生物安全柜隔離來自被限制的生物危害材料區(qū)域人員的生物危害。生物安全柜藉由經(jīng)過高效率微粒子空氣濾過器(HEPA)過濾空氣中煙霧狀生物危害性材料。吸入的空氣在進入生物安全柜工作區(qū)域之前經(jīng)一個 HEPA 濾過器過濾。排氣也通過 HEPA濾過器過濾。氣

47、溶膠在生物安全柜的工作區(qū)域中產(chǎn)生被包含在生物安全柜里面。二級生物安全柜操作程序:l 如果使用,把紫外燈關掉；打開熒光燈和排風機。l 用75%的乙醇或適當?shù)南緞┫舅械膬?nèi)部表面。l 將物品按程序放入生物安全柜內(nèi)的位置;不要阻塞進氣孔。等候 2-3 分鐘對工作區(qū)域清潔。l 在工作區(qū)域之內(nèi)，物品之間保持適當?shù)拈g距。l 工作應該從干凈的到污染的地方進行。l 工作完畢后,讓柜內(nèi)的物品在移出之前運行 2-3 分鐘。l 用75%乙醇或適當?shù)南緞┎潦盟械墓ぷ鞅砻?。需要注意的是：A. 生物安全柜運行正常時才能使用。B. 生物安全柜在使用中打開的玻璃觀察擋板不能超過規(guī)定高度。C. 安全柜內(nèi)應盡量少放器材或

48、標本，不能影響后部壓力排風系統(tǒng)的氣流循環(huán)。D. 安全柜內(nèi)不能使用明火，否則燃燒產(chǎn)生的熱量會干擾氣流并可能損壞過濾器。允許使用微型電加熱器。E. 所有工作必須在工作臺面的中后部進行，并能夠通過玻璃觀察擋板看到。F. 盡量減少操作者身后的人員活動。G. 操作者不應反復移出或伸進手臂以免干擾氣流。H. 不要使實驗記錄本、移液器以及其它物品阻擋空氣格柵，因為這將干擾氣體流動，引起物品的潛在污染和操作者的暴露。I. 在安全柜內(nèi)的工作開始前和結束后，安全柜的風機應至少運行23分鐘。J. 在生物安全柜內(nèi)操作時，不能進行文字工作。許多生物安全柜裝備有殺菌的紫外線燈。照射時間、距離、灰塵或碎片的出現(xiàn)和紫外燈強度

49、影響紫外燈的殺菌效果。紫外燈的可見蘭紫色光不指示有殺菌的效應。紫外燈需要定期地清潔排除灰塵。紫外燈可能損害眼睛、皮膚和實驗室設備。紫外燈應該在有人進入前被關閉。禁止使用到期的紫外燈。7.2 離心沉淀程序所有的離心沉淀將使用放入密封的離心轉子中的離心機保護桶或密封的離心管。如果使用的是無效的小離心機安全杯，則應該在生物安全柜中操作離心機。操作離心機的每個人應該熟悉相應的操作程序。在操作記錄簿上詳細記錄離心機和轉子使用情況以決定技術維修的需要。下列是被推薦的離心沉淀法程序:l 在使用離心管和瓶之前檢查它們有否壓力標記。l 在生物安全柜里面輕輕裝滿所有的離心機管和瓶。在放入安全杯或轉子前用消毒劑擦拭

50、離心管。l 離心管決不要裝得太多,當離心管裝得太滿可能發(fā)生泄漏。最大為離心管的3/4。l 離心前離心管的蓋子處于蓋著狀態(tài)。l 所有的管子放入保護桶或密封轉子中。檢驗保護桶的“O”型密封圈和保護桶或轉子的內(nèi)部。l 在放入轉子或保護桶之前用消毒劑擦拭管子或瓶子的外面。l 不要超過安全的轉子速度。l 如果一個異常的情況發(fā)生(噪音或振動) 立即停止離心機。l 離心完畢后在打開離心機之前等候五分鐘。這將會使氣溶膠沉淀下來以防止事故的發(fā)生。l 在每次使用后清潔和防護輸送器或轉子和離心機內(nèi)部。7.3 注射器和針頭注射器和皮下注射器的針頭是一種危險的器械。為了減少偶爾的意外注射、氣溶膠的產(chǎn)生或溢出，當有替代的

51、方法可以利用的時候，應避免使用注射器。例如，在注射器上為口腔或鼻腔的注射使用鈍針或套管。當使用腸外注射的時候，推薦下列使用皮下注射器針頭和注射器的注意點：l 在生物安全柜里使用注射器和針頭時，最好和避免拿注射器的手作快速和不必要的移動。l 檢查針頭是否有倒鉤和堵塞。這些檢查應該在使用和消毒前完成。只使用針頭鎖閉為了確信針頭被安全鎖定放入桶內(nèi)。無論什么時候只要有可能就用塑料的可任意處理的注射器替換玻璃制的注射器。l 只要可能就使用更安全的針。l 使用操作針和注射器的時候戴乳膠手套。l 裝滿注射器時盡量減少注射器內(nèi)泡沫和氣泡的產(chǎn)生。l 排除掉注射器內(nèi)多余的氣體、液體和泡沫，垂直打入濕的含合適的消毒

52、劑的脫脂棉花內(nèi)或打入含有消毒棉花的小瓶內(nèi)。l 不要為了混勻而用注射器將有傳染性物質(zhì)的液體強力地注射進開口的小瓶里。如果注射器的針頭在試管里液面下則用注射器混合僅僅是用來補液。l 注射器從試管中被裝滿時，注意不要污染注射器的中部，這可能導致傳染性物質(zhì)轉移至手指頭。l 在從橡皮塞中拔除注射器和針頭時，用含適當?shù)南緞┑拿撝藁ò腿♂橆^。如果有涉及消毒劑污染到敏感的實驗材料，可以使用消毒的脫脂棉，并立即丟棄至生物危害袋內(nèi)。l 將注射器丟入專用的容器內(nèi)。別折彎、別剪、別重復或以別的方式處理針。如果重復使用不可避免，使用相同的手法。別將注射器扔進非專用的容器內(nèi)。7.5移液管l 決不要用嘴吸移液管；

53、在吸取傳染性材料的時候總是使用一些移液管輔助器具。所有危險的東西更適宜在生物安全柜里操作。l 傳染性的或有毒的材料不應該從移液管中強力地排出。l 傳染性的或有毒的液體要防止因用空氣吹打液體而導致泡沫的產(chǎn)生。l 決不應該為了混合而用移液管反復地吹吸含有傳染性或者有毒物質(zhì)的液體。l 移液管的排出除應該與液體或瓊脂水平盡可能地近，并且，只要可能內(nèi)容物應該沿著管壁或瓶壁排出，不要從高處排出。l 用于吸取傳染性或者有毒材料移液管尾部應該用棉花塞住，甚至在操作AIDS時用安全移液管。l 避免從移液管中偶然落下的傳染性或者有毒的材料到工作面。在拋棄或再次使用前放含濕的消毒劑的毛巾或其他的能吸收的材料到工作面和高壓鍋上。l 污染的移液管應該放入類似次氯酸鹽消毒劑的容器內(nèi)。裝移液管的圓筒不要垂直地放置由于其高度，必須放在生物安全柜外的地面上。從生物安全柜中拿出污染的移液管，將它們垂直