大白鼠骨髓細胞染色體的制備方法課件

1、大白鼠骨髓細胞染色體的制備 實驗目的 1、初步掌握大鼠骨髓細胞染色體標本制備方法，了解操作 步驟原理 2、了解常用實驗動物染色體的數(shù)目及特點 實驗原理 1、骨髓細胞的有絲分裂指數(shù)相當高，可以從活體動物細胞 骨髓中直接得到大量處于分裂中期的細胞 2、秋水仙素可使許多處于分裂的細胞停滯于中期，此時染 色體達到最大收縮，具有典型形態(tài) 3、此法不需體外培養(yǎng)和無菌操作，易于推廣 實驗用品 一、材料：大白鼠 二、器材：水平離心機、顯微鏡、刻度離心管（15ml）、紗 布、注射器、預冷的載玻片、培養(yǎng)皿、鑷子、剪刀、解剖 刀、解剖盤、吸管、酒精燈 三、試劑 1、0.1%秋水仙素（5ml）：5mg秋水仙素+5ml

2、生理鹽水， 4避光保存 2、生理鹽水（500ml）：4.5gNacl+500ml水 3、Giemsa原液（pH6.8）：1g Giemsa染粉+33mL 甘油 +45mL 甲醇 4、2%檸檬酸鈉溶液：2g+100ml水 5、0.4%KCL：0.4g+100ml水 6、Carnoy固定液（100ml）：3份95%酒精和1份冰醋酸 7、0.067mol/L磷酸緩沖液（pH6.8，500ml）：11.94g Na2HPO4.12H2O+4.536g KH2PO4 +500ml水 8、1:10 Giemsa磷酸緩沖液染液（pH6.8） 實驗方法 1、秋水仙素處理：實驗前3-4h，按動物每克（160g）

3、體重4g/g的劑量， 腹腔注射秋水仙素 2、取股骨：頸椎脫臼法處死大白鼠，剪開后腿上的皮毛，取出股骨和脛 骨，剔除上面的肌肉，洗凈 3、收集骨髓細胞：剪去兩端，將1ml 2%的檸檬酸鈉溶液注入骨髓腔， 將骨髓細胞先沖入小碟內(nèi)，反復吸打骨髓細胞，使細胞團塊分散，轉 入15ml離心管 4、低滲處理：視骨髓量的多少加入0.4%KCL溶液810ml，然后將離心 管置37水浴中低滲10min 5、固定：以1000r/min離心8min，棄上清液，沿離心管壁緩緩加入新配 的固定液，注意不要沖動細胞團塊。加完后用吸管將細胞輕輕吸打均 勻，靜置固定20min，反復23次，每次20min 6、制細胞懸液：固定的

4、細胞經(jīng)離心后，吸去上層固定液，視管底的細胞 多少加少量新配制的固定液，將細胞團塊輕輕吸打成懸液 7、滴片：在事先在冰水中預冷的載玻片，從高處向載玻片上滴12滴上 層細胞懸液（使細胞分散良好，以便觀察），酒精燈上文火烘干 8、染色：將玻片平放，細胞面朝上，每片滴加1:10 Giemsa磷酸緩沖液 染液34mL，染色10min 9、在自來水下細流沖洗數(shù)秒，去掉Giemsa磷酸緩沖液染液，擦干玻片 底面和四周，鏡檢（染色體為紫紅色）。 實驗結果 注意事項 1、低滲處理是實驗成敗的關鍵。目的是使細胞體積脹大，染色體松散， 時間過長會造成細胞破裂，染色體丟失；時間過短，細胞內(nèi)染色體則 易聚集一起，難以計數(shù) 2、滴片前保留的固定液不宜過多，否則細胞懸液過稀，滴到片子上的細 胞和染色體太少，不易在鏡下找到 3、滴片時使用的載玻片不要過早從冷蒸餾水中取出，以免載玻片升溫。 滴片時載玻片上的水不必擦去，直接將細胞懸液滴在濕載玻片上即可 4、收集細胞步驟，減去股骨兩端時，不要剪掉太多，以防骨髓細胞丟失 太多 5、在滴片步驟，讓細胞從高處墜落，可使細胞分散良好，以便于后期觀 察 作業(yè) 1、記錄所觀察大白鼠骨髓細胞染色體的數(shù)目和形態(tài)。 2、繪制染色體圖 思考題 1、你制備的大白鼠染色