豬傳染性胸膜肺炎血清學診斷方法研究進展

1、豬傳染性胸膜肺炎血清學診斷方法研究進展2011第5期養(yǎng)豬SWINEPRODUCTION105豬傳染性胸膜肺炎血清學診斷方法研究進展王斌(四川省畜牧科學研究院獸藥研究所,四川成都610066)中圖分類號:$858.285.1文獻標志碼:A文章編號:10021957(2011)05010503摘要:豬傳染性胸膜肺炎是國際上公認的危害現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)的五大疾病之一.在我國,其血清陽性率呈上升趨勢,研究快速,科學,準確的診斷方法對于本病的監(jiān)測和控制具有很大的意義.本文就該病的血清學診斷技術研究進展作一綜述,重點介紹ELISA檢測方法的進展.關鍵詞:豬傳染性胸膜肺炎;診斷;ELISA豬傳染性胸膜肺炎(Porc

2、inecontagiouspleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放線桿菌ctinobacillusHeuropneumoniae,APP)引起的豬呼吸系統(tǒng)的一種嚴重接觸性傳染病.自Pattison1957年報道該病以來,英國,德國,瑞士,丹麥,澳大利亞,加拿大等國家均有發(fā)生,目前此病已呈世界性分布,給世界養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大損失【lJ.隨著我國養(yǎng)豬業(yè)集約化程度的提高,從國外引進豬種的增加,該病也隨之傳入我國,其發(fā)生和流行目趨嚴重嘲.因此對PCP進行快速,準確的診斷具有十分重大的意義,但是PCR,熒光抗體染色法等方法由于試驗條件,人員能力等原因還不可能在基層廣泛使用,血清學方法仍然是PC

3、P診斷的主要手段.本文就該病目前的血清學診斷技術研究進展作一綜述.1補體結合試驗(ComplementFixationTest,CFr)CFI是用來檢測APP的最早的血清學方法,它由Nicolet于1971年建立后很快成為APP分型的標準方法.Gunnarss0nr3q979年比較全細胞抗原,高壓處理抗原,混合抗原和酚水抗原在CFT上的效果發(fā)現(xiàn),全細胞抗原同時具有種和型的特異性,而酚水抗原型特異性最好.CFT的特異性比間接血凝試驗(IHA)高,能夠將副溶血性嗜血桿菌(Haemophilusparahaemoelyticus)與APP區(qū)別開;但敏感性低,而且有時會產生假陰性結果,加上操作復雜,只

4、適合實驗室應用,難以推廣.2間接血凝試驗(IndirectHemagg1ntinati0nAssay,IHA)1983年,Mittal等41用鹽浸,煮沸和高壓處理3種方法提取APP抗原,建立了APP的IHA用于檢測和分型,發(fā)現(xiàn)煮沸法獲取的抗原在APP1型,3型,5型的檢測中具有比鹽浸法提取抗原更高的特異收稿日期:201l-0829作者簡介:王斌(1981一),男,四川成都人,助理研究員,碩士,主要從事動物疾病的診斷和治療.Email:binwang_555163.corn性.APP2型與異源血清交叉反應嚴重,尤其是用高壓處理的抗原更明顯.不過它能將4型和7型分開,這是其它一些檢測方法難以達到的

5、.為克服交叉反應的問題,B1ackatl(1990)在應用本方法時,將待檢血清按倍比稀釋后,可消除大多數(shù)非特異性反應,但仍不能將APP一6和APP一8,APP一9和APP一11分開.我國逯忠新等同以APP超聲波處理抗原和鹽浸抗原致敏綿羊紅細胞,建立了IHA.超聲波處理抗原具有種特異性,能與APP110型的高免兔血清發(fā)生陽性反應,與豬瘟,豬肺疫等類似癥狀疾病呈陰性反應.鹽浸抗原具有型特異性,筆者用此法對我國4個省的APP血清型進行了調查,主要為2,3,7型.由于此方法操作簡便,耗時少,目前已成為我國主要的檢測和分型方法.3乳膠凝集試驗(LatexAgglutinationTest,LAT)Mit

6、ui等1981年建立乳膠凝集法檢測APP抗體,其特異性和敏感性與試管凝集試驗,補體結合試驗,瓊脂擴散試驗相當.不同血清型之間有較小的交叉反應,但異種血清無交叉反應.1995年,Inzana6對LAT進行改進,以莢膜缺陷株對同型血清進行吸附,除去非莢膜抗體,從而得到純度較高的莢膜抗體,包被乳膠顆粒,檢測APP莢膜多糖.此法具有很高的特異性,與豬放線桿菌,豬巴氏桿菌,副豬嗜血桿菌無交叉反應,只與APP同型的的菌株反應.4瓊脂擴散試驗(GelImmunodiffusion,GID)Gunnarss0nn1979年以酚水法提取5個APP血清型的抗原建立APP的瓊脂擴散試驗表明,酚水抗原具有型特異性,與

7、異種血清型無交叉反應.國內李開玉等閻報道用酚水抗原檢測血清,特異性最高,但仍不能區(qū)分血清型1和9,血清型3,6和8.不同血清型之間的交叉反應可通過菌體吸收法除去.該法耗時較長,但操作簡便,試劑易得,結果判定簡單,適宜基層應用.106養(yǎng)豬SWINEPRODUCTION(5)20115酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzymelinkedimmunosobentassay,ELISA)5.1種特異性ELISASehaller等911999年發(fā)現(xiàn)并報道了ApxIV毒素,任何APP血清型都能在感染豬體內分泌該毒素,但在體外不分泌.目前,國內外已成功實現(xiàn)了ApxIV毒素的體外表達.Dreyfus等n12004年以A

8、pxiv重組蛋白建立了ADXIVELISA,特異性和敏感性分別達到100%D93.8%.此外,Apx11也可作為一種很好的診斷抗原,除血清型10外,在生物I型的所有血清型中均可分泌,利用ADx作為診斷抗原,理論上可以對除10型外的其它生物I型的感染作出診斷.Leiner等【和徐曉娟等I先后利用克隆表達的Apx作為診斷抗原,建立ELISA診斷方法,與CFr和IHA比較,具有更高的特異性和敏感性.盡管ADx毒素具有很高的免疫原性,并產生很高的抗體滴度,但也存在缺陷,除Apxlgr,ApxI,Apx,ApxIlI在其它放線桿菌屬的細菌也可分泌,如林氏放線桿菌和豬放線桿菌等,因此,在利用ADxI,作抗

9、原進行血清學檢測時會出現(xiàn)假陽性結果.5-2型特異性ELISAAPP的血清分型是根據(jù)莢膜多糖(CPS)和脂多糖(LPS)抗原性的不同.對APP型的鑒定,需依靠型特異性的CPS和LPS.Nielsen等(1991)利用煮沸法抽提APP2型的LPS和CPS作為包被抗原,以兔抗APP2血清作為阻斷劑建立阻斷ELISA,對感染APP2型養(yǎng)殖場的96份血清樣品進行檢測,陽性率達到90%,與CFT相比具有更高的特異性和敏感性.Klausen等(2001)利用純化的APP6型LPS作包被抗原,以兔抗APP6血清作為阻斷劑建立阻斷ELISA,特異性和敏感性分別達到97%H100%.Andresen等用與K1au

10、sen相同的方法建立APP12型的阻斷ELISA,敏感性和特異性分別達到77%和100%.APP的LPS在血清型1,9,11,3,6,8,4,7之間有相似的抗原決定簇16,17,理論上利用LPS建立的ELISA檢測方法在對以上血清型進行鑒定時存在交叉反應,Nielsen(1993)_l7J提取APP8型的LPs建立阻斷ELISA,阻斷劑多克隆抗APP8的血清在使用前用3型和6型的全菌體吸附,目的在于除去3,6,8型LPS共有的抗原決定簇,避免交叉反應,試驗結果也表明,此方法具有型的特異性,與3型和6型無交叉.而Klausen用同樣方法建立的APP6型阻斷ELISA,結果仍發(fā)現(xiàn)與APP3型和AP

11、P8型有交叉反應現(xiàn)象.在生物I型的12個血清型中,只有2,5,10,12血清型LPS具有唯一的重復寡糖結構和組成成分,理論上針對這些型的LPS建立的ELISA具有型的特異性.此外,LPS與其他非致病性的放線桿菌也存在交叉反應,因此,利用LPS建立的ELISA并不能對所有血清型進行鑒定.Boss6等(1990)191提取APP1型,5型,7型,2型的CPS建立ELISA血清學診斷方法,臨床檢驗發(fā)現(xiàn)1,5,7型只與相應APP的抗血清呈陽性反應,而2型則與5型血清有很大的交叉反應,且與豬放線桿菌(A刪is)感染的血清交叉反應也大,1型和5型與A舢is只有輕微的交叉反應,7型與A.suis無交叉反應.

12、因此,1型,5型,7型的CPSELISA可有效用于抗體監(jiān)測,而2型的CPSELISA因交叉反應太大,結果不確實.Inzana等(2001)將生物素與CPS偶聯(lián)后作為包被抗原建立ELISA檢測方法,1型和5型的特異性達到100%,7型為94.5%,1型和7型的敏感性達到100%,5型為94.5%.國內外已有許多關于型特異性ELISA診斷方法的報道,但臨床上APP的感染并非單一的血清型,甚至存在一頭豬感染多種血清型的報道,如果選取的型特異性診斷方法與豬感染的血清型不符合,那么則會出現(xiàn)假陰性結果,造成誤診,若用多種血清型的血清學診斷方法對樣品逐個進行排除診斷,既費時又增加檢測成本.國外的Boss6等

13、(1993)211以APP1,5,7型的型特異性多糖作包被抗原建立混合ELISA,敏感性和特異性分別達到96%*I199.5%.Hansen等(2003)以純化的APP2,6,12血清型的長鏈LPS建立混合ELISA,臨床檢測只與APP3型和8型出現(xiàn)交叉反應,具有很高的特異性和敏感性,并成功用于豬場的免疫監(jiān)控.6展望臨床APP感染情況的監(jiān)測,對控制APP發(fā)生具有重要意義.ApxIV被認為是種特異性最好的抗原,表達純化ApxlV建立ELISA是檢測APP并區(qū)別于其它病原的最好方法.APP血清型眾多,各型問交叉反應嚴重,這給血清型的診斷帶來很大困難.借鑒國外診斷試劑盒研發(fā)經(jīng)驗,根據(jù)我國APP主要流

14、行的血清型,研制型特異性ELISA試劑盒或MIXELISA試劑盒,可解決臨床上大多數(shù)的APP血清型的鑒定,將有力推動我國豬傳染性胸膜肺炎的診斷和防控水平.參考文獻:1】宣長和.豬病學M】.第2版.北京:中國農業(yè)科學技術出版社,2003:119122.2】許如蘇,沈燁,蔡雄丹,等.中國獸醫(yī)雜志J】,2003,39(2):23.3GunnarssonAAmJVetRest,1979,40(11):15641567.41MittalKR,HigginsR,LariviereS.JClinMicrobiolJ,1983,17f51:787790.5逯忠新,魯炳義,趙萍,等.中國獸醫(yī)科技【JJ,1999

15、,290)i30-31.2011第5期養(yǎng)豬SWINEPRODUCTION107幾種抗茵藥物對豬傳染性胸膜肺炎的臨床療效試驗陸江寧,張秀英,許貴新,齊幫若(1.黑龍江農業(yè)職業(yè)技術學院動物科學系,黑龍江佳木斯154007;2.東北農業(yè)大學動物醫(yī)學學院,哈爾濱150030:3.黑龍江省嫩江縣九三局紅五月農場,黑河161446)中圖分類號:$858.285.1文獻標志碼:A文章編號:10021957(2011)05一-010702摘要:本試驗分別以佳木斯市周邊地區(qū)10個規(guī)?；i養(yǎng)殖場內經(jīng)確診為豬傳染性胸膜肺炎的病豬為給藥對象,進行抗菌藥物單獨使用與聯(lián)合使用療效比較試驗.每場選擇(80+6)頭豬,隨機

16、分為4組,3個試驗組每組20頭,其余為對照組,進行藥敏試驗并根據(jù)試驗結果選取敏感藥物進行治療試驗.藥敏試驗結果表明,試驗動物對氟苯尼考和鹽酸多西環(huán)素敏感.臨床治療試驗結果表明,在給藥方案中氟苯尼考和鹽酸多西環(huán)素聯(lián)合用藥組對豬傳染性胸膜肺炎治愈率顯著高于其單獨用藥組(P<O.05),治療效果好.關鍵詞:豬傳染性胸膜肺炎;敏感藥物;臨床療效豬傳染性胸膜肺炎是一種嚴重的呼吸道傳染病,是當今大型養(yǎng)豬場的三大呼吸道傳染病之一.近年來隨著我國規(guī)?；B(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,豬傳染性胸膜肺炎在我國多省流行蔓延開來,呈現(xiàn)暴發(fā)式流行,嚴重威脅著我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展,已成為危害我國養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病之一11.商品豬免疫預防

17、由于血清型較多,各血清型交叉保護性不強以及成本較高在臨床中不易實現(xiàn),因而及時有效的藥物防治對豬傳染性胸膜肺炎有著極為重要的臨床意義團.本試驗以體外抑菌試驗篩選的敏感藥物氟苯尼考和鹽酸多西環(huán)素為試驗藥物,研究藥物單獨使用及聯(lián)合使用對豬傳染性胸膜肺炎的治療效果.收稿日期:2011-0830作者簡介:陸江寧(1972一),女,吉林梨樹人,副教授,研究方向為基礎獸醫(yī)學.Email:hnzylujiangning126mm通訊作者:張秀英,博士生導師,教授.E一-maf1.zxy51hotmaflJ2om1材料與方法1.1試驗材料病料于2010年3月采集佳木斯市周邊地區(qū)10個規(guī)?；i場內,經(jīng)臨床診斷為豬

18、傳染性胸膜肺炎病死豬的氣管分泌物,肺臟,肝臟,.腎臟等組織.試驗藥品使用浙江伊科拜克動物保健品有限公司生產的氟苯尼考,商品名伊克立康(成分為1C%氟甲砜霉素預混劑,批號2009X035365)和齊魯動物保健品有限公司生產的鹽酸多西環(huán)素(成分為10%鹽酸多西環(huán)素預混劑,批號2007150256011),以上藥物均購于哈爾濱獸藥大市場.1.2試驗方法1.2.1試驗動物的選擇與分組分別對佳木斯市周邊地區(qū)10個規(guī)?；i養(yǎng)殖場內疑似發(fā)生豬傳染性胸膜肺炎的病豬進行篩選,經(jīng)臨床檢查,病理剖檢,實驗室檢驗確診為豬傳染性胸膜肺炎的病豬為6】InzanaTJ-JClinMicrobiolJ,1995,33(9)

19、:22972303.【7】GunnarssonAAmJVetResJl,1979,40(4):469一-472.【8李開玉,朱士盛,杜華宏,等.中國獸醫(yī)科技J】,1991,21(1):3739.9SehallerA,KuhnR,KuhnertP,.eta/.MicrobiologyJ,1999,145(8):2105-2116.10】DreyfusA,challerA,NivolletSet.VetMicrobiolJ.,2004.,99(3-4).227-.238.11LeinerG,.FFanzB,StrutzbergK,et.CJinDiagnLabImmunolJ,1999.,6(4):630-632.1ZI徐曉娟,何啟蓋,徐高原,等.中國獸醫(yī)J】,2004,24(4):335-337.13SehallerA,KuhnertP,delaPuen