微生物與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)教案

1、現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（三） 微生物與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)教案課程名稱: 微生物與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)英文名稱: Microbiology and Immunology Laboratory課程編號(hào): 110026課程學(xué)時(shí)：108學(xué)時(shí)課程學(xué)分：3.0學(xué)分教師姓名: 鄭忠輝 張連茹 鄔小兵前導(dǎo)課程：微生物學(xué)（理論課）教學(xué)方式: 實(shí)驗(yàn)及技術(shù)理論講授考試方式: 平時(shí)考核筆試實(shí)驗(yàn)操作考試一、教學(xué)目標(biāo)和要求微生物學(xué)與免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)是生物學(xué)重要的基礎(chǔ)課之一。本課程的目的是使學(xué)生掌握和了解微生物學(xué)與免疫學(xué)的主要研究方法與技術(shù)，鞏固和加深基礎(chǔ)理論知識(shí)，提高分析、解決問(wèn)題的能力和開拓創(chuàng)新能力，培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)肅、嚴(yán)密、嚴(yán)格、求實(shí)的科學(xué)態(tài)度，為從事微

2、生物學(xué)與免疫學(xué)的研究和應(yīng)用打下基礎(chǔ)。要求學(xué)生要做好實(shí)驗(yàn)課前的預(yù)習(xí)，明確每次實(shí)驗(yàn)的目的與基本步驟。在實(shí)驗(yàn)中要有嚴(yán)緊的科學(xué)態(tài)度，對(duì)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的現(xiàn)象和問(wèn)題，要仔細(xì)思考和分析；認(rèn)真做好每次實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄及處理工作。二、主要實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1. 土壤細(xì)菌的分離及總數(shù)測(cè)定2. 微生物的形態(tài)觀察與鑒定3. 消毒與滅菌效果的測(cè)定4. 海洋放線菌抗菌活性菌株的篩選5. 酵母胞外多糖的發(fā)酵及其測(cè)定6. 經(jīng)典血清學(xué)反應(yīng)7. 巨噬細(xì)胞的收集和觀察8. 免疫標(biāo)記技術(shù)三、主要教學(xué)方法以學(xué)生動(dòng)手實(shí)驗(yàn)為主，結(jié)合課堂講授、示范操作及多媒體教學(xué)。四、使用教材及主要參考書使用教材：1、林加涵等主編. 現(xiàn)代生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（下冊(cè)）. 北京

3、：高等教育出版社，2001.2、編補(bǔ)充講義主要參考書：1、趙斌，何紹江主編. 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn). 北京：科學(xué)出版社，2002.2、沈萍等主編. 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn). 第三版. 北京：高等教育出版社，19993、柳忠輝等主編.免疫學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù).北京：科學(xué)出版社，2002年五、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目模 塊1：土壤細(xì)菌的分離及總數(shù)測(cè)定1、培養(yǎng)基的配制與滅菌2、土壤細(xì)菌的分離與純化3、土壤中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定模 塊2：微生物的形態(tài)觀察與鑒定1、細(xì)菌的革蘭氏染色2、細(xì)菌的芽孢染色3、大分子物質(zhì)的水解試驗(yàn)4、糖發(fā)酵試驗(yàn)5、甲基紅試驗(yàn)6、伏-普試驗(yàn)7、檸檬酸鹽試驗(yàn)8、細(xì)菌的快速鑒定（細(xì)菌自動(dòng)鑒定系統(tǒng) BBL CRYSTAL）9、霉菌

4、的形態(tài)觀察與鑒定模 塊3：消毒與滅菌效果的測(cè)定1、中和劑的選擇2、化學(xué)消毒劑殺菌效果的定量測(cè)定模 塊4：海洋放線菌的分離及抗菌活性菌株的篩選1、放線菌的選擇分離與計(jì)數(shù)2、放線菌形態(tài)的觀察3、雙層瓊脂擴(kuò)散法篩選抗菌活性菌株模 塊5：酵母胞外多糖的發(fā)酵及其測(cè)定1、酵母胞外多糖的液體發(fā)酵2、酵母子囊孢子的觀察3、酵母胞外多糖的提取與測(cè)定模 塊6：經(jīng)典血清學(xué)反應(yīng)1、單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)2、雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)3、免疫電泳4、間接凝集反應(yīng)測(cè)定人血清類風(fēng)濕因子模 塊7：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的收集和觀察1、小鼠的處死和固定2、巨噬細(xì)胞的收集，沉淀和制片3、巨噬細(xì)胞的形態(tài)觀察模 塊8：免疫標(biāo)記技術(shù)1、血清抗體的純化2、辣

5、根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體（過(guò)碘酸鹽法）3、雙抗體夾心法測(cè)定人血清中IgG抗體含量模 塊1：土壤細(xì)菌的分離及總數(shù)測(cè)定教學(xué)要求1. 掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。2. 了解各種滅菌方法的基本原理及應(yīng)用范圍，掌握實(shí)驗(yàn)室高壓蒸汽滅菌及干熱滅菌的操作方法。3. 了解微生物分離和純化方法，掌握純培養(yǎng)分離技術(shù)、無(wú)菌操作技術(shù)。4. 了解各種微生物數(shù)量測(cè)定方法的基本原理及應(yīng)用范圍，掌握平板菌落計(jì)數(shù)的操作方法。教學(xué)學(xué)時(shí)18學(xué)時(shí)講授的內(nèi)容1. 微生物培養(yǎng)基的分類、用途、配制方法。2. 各種滅菌方法的基本原理、應(yīng)用范圍、操作方法及注意事項(xiàng)。3. 純培養(yǎng)分離技術(shù)、無(wú)菌操作技術(shù)。4. 各種微生物數(shù)量測(cè)定方法的基本原理及應(yīng)用

6、范圍，平板菌落計(jì)數(shù)法的操作步驟和注意事項(xiàng)。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1、培養(yǎng)基的配制與滅菌2、土壤細(xì)菌的分離與純化3、土壤中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定應(yīng)學(xué)習(xí)的技術(shù)和方法培養(yǎng)基制作和滅菌技術(shù)、無(wú)菌操作技術(shù)、純培養(yǎng)分離技術(shù)、微生物的接種技術(shù)、微生物數(shù)量的測(cè)定方法。應(yīng)學(xué)習(xí)的儀器使用方法高壓蒸汽滅菌鍋，干燥箱，培養(yǎng)箱。教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)重點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)原理，相關(guān)方法、技術(shù)的介紹，分離微生物的關(guān)鍵技術(shù)，主要操作環(huán)節(jié)。難點(diǎn)：無(wú)菌操作、倒平板等不易掌握的實(shí)驗(yàn)操作技能技巧難點(diǎn)的解決辦法詳細(xì)深入講解，觀看錄像，示范操作，細(xì)心現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)。 模 塊2：微生物的形態(tài)觀察與鑒定教學(xué)要求1. 掌握細(xì)菌染色觀察技術(shù)及觀察霉菌形態(tài)的基本方法，進(jìn)一步鞏固顯微鏡的使用

7、方法。2. 了解有關(guān)的微生物常規(guī)與快速鑒定方法與技術(shù)，掌握常用的一些基于微生物生理生化反應(yīng)的鑒定方法及原理，初步掌握 BBL Crystal鑒定系統(tǒng)的操作方法。教學(xué)學(xué)時(shí)24學(xué)時(shí)講授的內(nèi)容1. 微生物的制片及各種染色技術(shù)，革蘭染色和芽孢染色的原理、操作步驟及注意事項(xiàng)。2. 常用的微生物常規(guī)鑒定方法，大分子物質(zhì)的水解試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)和IMViC試驗(yàn)的原理及操作方法3. 現(xiàn)代微生物快速鑒定技術(shù)，BBL Crystal鑒定系統(tǒng)的操作方法。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1、細(xì)菌的革蘭氏染色2、細(xì)菌的芽孢染色3、大分子物質(zhì)的水解試驗(yàn)4、糖發(fā)酵試驗(yàn)5、甲基紅試驗(yàn)6、伏-普試驗(yàn)7、檸檬酸鹽試驗(yàn)8、細(xì)菌的快速鑒定（細(xì)菌自動(dòng)鑒定系統(tǒng)

8、BBL CRYSTAL）9、霉菌的形態(tài)觀察與鑒定應(yīng)學(xué)習(xí)的技術(shù)和方法微生物的制片及染色技術(shù)、觀察霉菌形態(tài)的方法、基于生理生化反應(yīng)的細(xì)菌鑒定方法。應(yīng)學(xué)習(xí)的儀器使用方法高壓蒸汽滅菌鍋，干燥箱，培養(yǎng)箱，顯微鏡。教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)重點(diǎn)：常規(guī)的微生物鑒定方法和現(xiàn)代微生物快速鑒定技術(shù)的介紹，根霉、青霉、曲霉等霉菌的形態(tài)特征難點(diǎn)：制片技術(shù)，革蘭染色脫色操作技術(shù)難點(diǎn)的解決辦法詳細(xì)深入講解關(guān)鍵的操作環(huán)節(jié)，示范操作，細(xì)心現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo) 模 塊3：消毒與滅菌效果的測(cè)定教學(xué)要求了解消毒劑殺菌效果的檢測(cè)方法，掌握化學(xué)消毒劑殺菌效果的測(cè)定技術(shù)。教學(xué)學(xué)時(shí)6學(xué)時(shí)講授的內(nèi)容1. 消毒方法及原理，消毒劑殺菌效果的檢測(cè)方法。2. 中和劑的選

9、擇，懸液定量法測(cè)定化學(xué)消毒劑殺菌效果的原理、操作步驟及注意事項(xiàng)。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1、中和劑的選擇2、化學(xué)消毒劑殺菌效果的定量測(cè)定應(yīng)學(xué)習(xí)的技術(shù)和方法中和劑的選擇方法，細(xì)菌芽孢懸液的制備方法，平板菌落計(jì)數(shù)技術(shù)。應(yīng)學(xué)習(xí)的儀器使用方法高壓蒸汽滅菌鍋，干燥箱，培養(yǎng)箱，顯微鏡，離心機(jī)。教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)重點(diǎn)：消毒劑殺菌效果的檢測(cè)方法介紹，中和劑的選擇方法，懸液定量法的原理、操作步驟.難點(diǎn)：中和劑的選擇方法難點(diǎn)的解決辦法詳細(xì)深入講解實(shí)驗(yàn)原理及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，細(xì)心現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)，提供相關(guān)的閱讀參考文獻(xiàn)。 模 塊4：海洋放線菌的分離及抗菌活性菌株的篩選教學(xué)要求1. 學(xué)習(xí)抗菌活性菌株的篩選方法。2. 學(xué)習(xí)海洋底泥中放線菌的分離及抗

10、菌活性菌株的篩選方法，掌握雙層瓊脂擴(kuò)散法篩選抗菌活性菌株的操作方法。3. 鞏固無(wú)菌操作技術(shù)、純培養(yǎng)技術(shù)。4. 了解發(fā)酵產(chǎn)物的分離純化及分析技術(shù)及其在藥物研發(fā)中的應(yīng)用。5. 使學(xué)生了解運(yùn)用微生物實(shí)驗(yàn)的基本技術(shù)與方法進(jìn)行科研工作的基本思路。教學(xué)學(xué)時(shí)12學(xué)時(shí)講授的內(nèi)容1 (海洋底泥)放線菌的分離及其抗菌活性物質(zhì)篩選的一般過(guò)程。講清楚為什么選擇海洋底泥中放線菌，為什么進(jìn)行相關(guān)的操作。2介紹實(shí)驗(yàn)所用的海洋底泥放線菌的分離方法及其相關(guān)的原理。3回顧放線菌的基本知識(shí)，講述放線菌形態(tài)觀察的基本方法及原理。4講述抗菌活性菌株篩選的常用方法及實(shí)驗(yàn)中所采用的雙層瓊脂擴(kuò)散方法。5主要操作步驟，培養(yǎng)基的配制及滅菌。實(shí)驗(yàn)

11、項(xiàng)目1、放線菌的選擇分離與計(jì)數(shù)2、放線菌形態(tài)的觀察3、雙層瓊脂擴(kuò)散法篩選抗菌活性菌株應(yīng)學(xué)習(xí)的技術(shù)和方法樣品的采集，預(yù)處理，常用的滅菌方法，土壤稀釋法，放線菌的選擇培養(yǎng)，傾注平板法，純培養(yǎng)技術(shù)，無(wú)菌操作技術(shù)，印片法，雙層瓊脂擴(kuò)散法。應(yīng)學(xué)習(xí)的儀器使用方法：高壓滅菌鍋，干燥箱，電子天平，顯微鏡，培養(yǎng)箱。教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)1在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基本操作技術(shù)與方法已掌握的基礎(chǔ)上，模擬科研過(guò)程所設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)?zāi)K，旨在讓學(xué)生實(shí)現(xiàn)由被動(dòng)的做實(shí)驗(yàn)到進(jìn)行科研工作的思路方面的轉(zhuǎn)變。講授部分的難點(diǎn)是如何讓學(xué)生了解整個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)K即是從放線菌中篩選抗菌素類藥物發(fā)現(xiàn)過(guò)程。另外，因?yàn)槲⑸锢碚撜n所學(xué)的關(guān)于放線菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)、繁殖方式等知識(shí)

12、時(shí)間較長(zhǎng)，因而學(xué)生在觀察放線菌的結(jié)構(gòu)形態(tài)時(shí)不容易分辨。2放線菌的分離及純培養(yǎng)，抗菌活性菌株的篩選方法。 3放線菌的氣生菌絲、孢子絲和分生孢子的印片法觀察。放線菌的氣生菌絲與分生孢子絲的區(qū)分。4放線菌菌落與細(xì)菌、霉菌等菌落的區(qū)分。難點(diǎn)的解決辦法聯(lián)系實(shí)際，并借鑒微生物實(shí)驗(yàn)前面所學(xué)的技術(shù)與方法，讓同學(xué)了解放線菌的分離抗菌活性物質(zhì)的篩選方法，雖然是模擬科研的過(guò)程但所用的技術(shù)與方法都是微生物實(shí)驗(yàn)的基本方法。引導(dǎo)學(xué)生借鑒土壤中細(xì)菌的分離方法，進(jìn)行放線菌的分離，手把手的現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)及講授時(shí)的示范。講清楚抗菌活性菌株的篩選的一般方法，重點(diǎn)講授雙層瓊脂擴(kuò)散法用于放線菌抗菌活性菌株的篩選及主要的操作要點(diǎn)。通過(guò)對(duì)分離到

13、的放線菌菌落的形態(tài)觀察，引導(dǎo)學(xué)生從菌落的干濕程度、隆起程度、邊緣及顏色尤其是是否易于從培養(yǎng)基上挑起等方面區(qū)分細(xì)菌和放線菌；而從菌落的大小及菌落表面來(lái)區(qū)分霉菌和放線菌。以清晰明了的課件展示主要的操作步驟及注意事項(xiàng)，并輔以黑板上的板畫的形式來(lái)引導(dǎo)學(xué)生區(qū)分氣生菌絲和分生孢子絲，加上現(xiàn)場(chǎng)觀察指導(dǎo)的方式來(lái)突破難點(diǎn)，突出重點(diǎn)。模 塊5：酵母菌胞外多糖的發(fā)酵教學(xué)要求1. 通過(guò)多糖的發(fā)酵掌握微生物的液體發(fā)酵方法。2. 學(xué)習(xí)并掌握微生物胞外多糖的分離及含量分析方法。3. 認(rèn)識(shí)酵母菌，并掌握酵母菌子囊孢子的觀察方法，了解產(chǎn)孢條件。了解酵母菌在科研及其食品工業(yè)上的廣泛用途。4. 鞏固無(wú)菌操作技術(shù)。5. 了解工業(yè)微生

14、物發(fā)酵的過(guò)程及其在工業(yè)生產(chǎn)的應(yīng)用。6. 通過(guò)多糖的發(fā)酵使學(xué)生了解運(yùn)用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)食品藥品的一般方論法。教學(xué)學(xué)時(shí)12學(xué)時(shí)講授的內(nèi)容1. 講述從菌種活化到酵母菌胞外多糖的液體發(fā)酵的一般過(guò)程。2. 介紹高碳氮比的發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行多糖發(fā)酵的原理，發(fā)酵液中多糖的分離方法。3. 多糖含量測(cè)定的常用方法及其用苯酚硫酸法測(cè)定酵母胞外多糖含量的具體方法。4. 回顧酵母菌的基本知識(shí)，通過(guò)對(duì)酵母菌的有性生殖過(guò)程的講述，引出酵母菌子囊孢子形態(tài)觀察的基本方法及原理。5. 通過(guò)對(duì)酵母菌多糖的液體發(fā)酵的講述，引出微生物下游技術(shù)-常用的分離技術(shù)與分析方法。6. 講述實(shí)驗(yàn)的主要操作步驟。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1、酵母胞外多糖的液體發(fā)酵2、

15、酵母子囊孢子的觀察3、酵母胞外多糖的提取與測(cè)定應(yīng)學(xué)習(xí)的技術(shù)和方法液體發(fā)酵法，菌種活化，產(chǎn)孢培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)，酵母菌的培養(yǎng)，無(wú)菌操作技術(shù)，染色法，苯酚硫酸法。離心操作、比色測(cè)定。應(yīng)學(xué)習(xí)的儀器使用方法高壓滅菌鍋，干燥箱，電子天平，顯微鏡，搖床，離心機(jī)，冰箱，分光光度計(jì)。教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)1這是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的最后一個(gè)模塊，也是學(xué)生第一次接觸液體發(fā)酵培養(yǎng)，旨在讓學(xué)生掌握實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的液體發(fā)酵技術(shù)，了解工業(yè)化液體發(fā)酵生產(chǎn)應(yīng)注意的問(wèn)題。同時(shí)這個(gè)模塊也是涉及的技術(shù)和方法最多，內(nèi)容最雜。實(shí)驗(yàn)課的設(shè)計(jì)管理也是應(yīng)該考慮的。2酵母菌胞外多糖的分離及提取方法和多糖的測(cè)定方法的原理及操作。3酵母菌的子囊孢子的產(chǎn)生及形態(tài)特征。

16、酵母菌子囊孢子的產(chǎn)生條件，子囊孢子與營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞的區(qū)別。4儀器如離心機(jī)、分光光度計(jì)等的正確使用和比色測(cè)定的正確操作。5使學(xué)生了解實(shí)驗(yàn)所用的方法及其相關(guān)的原理。微生物實(shí)驗(yàn)與化學(xué)實(shí)驗(yàn)不同。對(duì)玻璃儀器的要求不同，前者強(qiáng)調(diào)無(wú)菌，后者則要求無(wú)雜質(zhì)，因而需要通過(guò)講解使學(xué)生了解。難點(diǎn)的解決辦法1耐心講解，注意講臺(tái)前的示范與對(duì)學(xué)生個(gè)別指導(dǎo)相結(jié)合的方法。對(duì)容易出錯(cuò)的地方，反復(fù)強(qiáng)調(diào)。借鑒微生物實(shí)驗(yàn)前面所學(xué)的染色方法及生物化學(xué)中已接觸過(guò)的分光光度計(jì)的使用等，讓同學(xué)注意運(yùn)用所學(xué)的知識(shí)和技術(shù)解決實(shí)驗(yàn)中遇到的問(wèn)題。實(shí)驗(yàn)程序上先進(jìn)行多糖的分離提取、含量測(cè)定然后進(jìn)行2. 通過(guò)對(duì)酵母菌的有性生殖過(guò)程的講述，引出酵母菌子囊孢子形態(tài)觀

17、察的基本方法及原理。結(jié)合講臺(tái)前的示范講解及現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)的方式引導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行正確的觀察和操作。引導(dǎo)學(xué)生對(duì)酵母菌的子囊孢子進(jìn)行觀察，區(qū)分營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞與子囊孢子。3. 以清晰明了的課件展示主要的操作步驟及注意事項(xiàng)，并反復(fù)強(qiáng)調(diào)。4多糖含量測(cè)定的常用方法及其用苯酚硫酸法測(cè)定酵母胞外多糖含量的具體方法。5通過(guò)濃硫酸的強(qiáng)腐蝕性以及苯酚硫酸反應(yīng)中的放熱，引導(dǎo)學(xué)生注意正確操作和對(duì)儀器設(shè)備的維護(hù)。模塊六 經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)要求1. 掌握免疫沉淀反應(yīng)及凝集反應(yīng)的進(jìn)展和相關(guān)技術(shù)、方法要求，2. 掌握免疫反應(yīng)和凝集反應(yīng)的基本原理。3. 掌握單向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)技術(shù)、雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)技術(shù)和免疫電泳技術(shù)的操作方法和在微量組分檢測(cè)分

18、析中的應(yīng)用。4. 掌握凝集反應(yīng)技術(shù)的操作方法及其應(yīng)用。教學(xué)學(xué)時(shí)9學(xué)時(shí)講授的內(nèi)容1單向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)原理、操作步驟及注意事項(xiàng)2雙向瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)基本原理，操作步驟和注意事項(xiàng)。3免疫電泳實(shí)驗(yàn)基本原理，操作步驟和注意事項(xiàng)。4間接凝集反應(yīng)測(cè)定人血清中內(nèi)風(fēng)濕因子的基本原理、步驟和注意事項(xiàng)。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1. 單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)2. 雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)3. 免疫電泳4. 間接凝集反應(yīng)測(cè)定人血清類風(fēng)濕因子應(yīng)學(xué)習(xí)的技術(shù)和方法學(xué)習(xí)瓊脂凝膠板制備技術(shù)，凝膠板打孔技術(shù)，血清抗體稀釋技術(shù)，抗原稀釋技術(shù)，瓊脂板開槽技術(shù)，電泳技術(shù)，抗原、抗體加樣技術(shù)。應(yīng)學(xué)習(xí)的儀器使用方法水浴箱，電泳儀，微量加樣器。教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)1免疫沉淀反應(yīng)和免疫

19、凝集反應(yīng)的區(qū)別2免疫電泳的原理和應(yīng)用3瓊脂凝膠板的制備和打孔操作4雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)結(jié)果分析難點(diǎn)的解決辦法1、重點(diǎn)講解免疫沉淀反應(yīng)和免疫凝集反應(yīng)的概念2、講解免疫電泳的原理和應(yīng)用3、對(duì)瓊脂凝膠板制備和打孔進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)4、指導(dǎo)學(xué)生對(duì)雙向和單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)結(jié)果的分析模塊七 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的收集和觀察教學(xué)要求 1掌握免疫細(xì)胞的分離方法2. 掌握腹腔巨噬細(xì)胞分離的原理和方法。3熟悉巨噬細(xì)胞形態(tài)，能在顯微鏡下辨別巨噬細(xì)胞。教學(xué)學(xué)時(shí)6學(xué)時(shí)講授的內(nèi)容1. 免疫細(xì)胞分離原理免疫細(xì)胞計(jì)數(shù)免疫細(xì)胞的功能檢測(cè)。2. 巨噬細(xì)胞發(fā)育：骨髓多能干細(xì)胞定向干細(xì)胞（髓樣干細(xì)胞）單核母細(xì)胞前體單核細(xì)胞單核細(xì)胞血液組織（分化為巨

20、噬細(xì)胞）。3. 巨噬細(xì)胞的形態(tài)，功能和分布。4. 巨噬細(xì)胞的分離和純化方法。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1. 小鼠的處死和固定2. 腹腔注射生理鹽水，巨噬細(xì)胞的收集，沉淀和制片3. 巨噬細(xì)胞的形態(tài)觀察應(yīng)學(xué)習(xí)的技術(shù)和方法學(xué)習(xí)小鼠腹腔注射技術(shù)，腹腔解剖技術(shù)，腹腔液稀釋技術(shù)，巨噬細(xì)胞制片技術(shù)。應(yīng)學(xué)習(xí)的儀器使用方法顯微鏡教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)1動(dòng)物腹腔注射技術(shù)2腹腔解剖技術(shù)3巨噬細(xì)胞制片技術(shù)4腹腔巨噬細(xì)胞的形態(tài)觀察難點(diǎn)的解決辦法1、重點(diǎn)講解巨噬細(xì)胞制片技術(shù)2、對(duì)動(dòng)物腹腔注射技術(shù)和腹腔解剖技術(shù)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)模塊三 血清抗體純化及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)教學(xué)要求 1. 掌握血清抗體純化的原理、方法和要求2. 掌握酶標(biāo)記抗體的基本原理3. 掌

21、握直接法、間接法、雙抗體夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法等酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)原理4. 掌握血清抗體純化技術(shù)、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體技術(shù)以及酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)技術(shù)教學(xué)學(xué)時(shí)9學(xué)時(shí)講授的內(nèi)容1血清抗體的制備方法，鹽析法分離血清抗體原理、步驟和注意事項(xiàng) 2抗體的標(biāo)記技術(shù)，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)的原理和方法，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體方法、步驟和注意事項(xiàng)。3雙抗體夾心法測(cè)定人血清中IgG抗體含量的基本原理、步驟和注意事項(xiàng)。實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目1血清抗體的純化2辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體（過(guò)碘酸鹽法）3雙抗體夾心法測(cè)定人血清中IgG抗體含量應(yīng)學(xué)習(xí)的技術(shù)和方法學(xué)習(xí)血清抗體純化技術(shù)（鹽析法），辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體方法（過(guò)碘酸鹽法），抗體包被、洗滌和封閉技

22、術(shù)，酶標(biāo)抗體的加樣、孵育及顯色方法。應(yīng)學(xué)習(xí)的儀器使用方法水浴箱，酶標(biāo)板。教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)1鹽析法分離血清抗體原理和操作方法2辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體方法3抗體包被、洗滌和封閉操作方法4酶標(biāo)儀的使用難點(diǎn)的解決辦法1、重點(diǎn)講解鹽析法分離血清抗體原理和操作方法2、講解辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗體方法3、對(duì)抗體包被、洗滌和封閉操作和酶標(biāo)儀的使用進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)4、引導(dǎo)學(xué)生酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析WEB上，并且開發(fā)出了HotJava的第一個(gè)版本。當(dāng)SUN公司1995年正式以Java這個(gè)名字推出的時(shí)候，幾乎所有的WEB開發(fā)人員都心生感嘆：噢，這正是我想要的！于是Java成了一顆耀眼的明星，丑小鴨一下子變成了白天鵝。異

23、常表示程序運(yùn)行過(guò)程中可能出現(xiàn)的非正常狀態(tài)，運(yùn)行時(shí)異常表示虛擬機(jī)的通常操作中可能遇到的異常，是一種常見運(yùn)行錯(cuò)誤。java編譯器要求方法必須聲明拋出可能發(fā)生的非運(yùn)行時(shí)異常，但是并不要求必須聲明拋出未被捕獲的運(yùn)行時(shí)異常。6、說(shuō)出Servlet的生命周期，并說(shuō)出Servlet和CGI的區(qū)別。Servlet被服務(wù)器實(shí)例化后，容器運(yùn)行其init方法，請(qǐng)求到達(dá)時(shí)運(yùn)行其service方法，service方法自動(dòng)派遣運(yùn)行與請(qǐng)求對(duì)應(yīng)的doXXX方法（doGet，doPost）等，當(dāng)服務(wù)器決定將實(shí)例銷毀的時(shí)候調(diào)用其destroy方法。與cgi的區(qū)別在于servlet處于服務(wù)器進(jìn)程中，它通過(guò)多線程方式運(yùn)行其servi

24、ce方法，一個(gè)實(shí)例可以服務(wù)于多個(gè)請(qǐng)求，并且其實(shí)例一般不會(huì)銷毀，而CGI對(duì)每個(gè)請(qǐng)求都產(chǎn)生新的進(jìn)程，服務(wù)完成后就銷毀，所以效率上低于servlet。7、說(shuō)出ArrayList,Vector, LinkedList的存儲(chǔ)性能和特性ArrayList和Vector都是使用數(shù)組方式存儲(chǔ)數(shù)據(jù)，此數(shù)組元素?cái)?shù)大于實(shí)際存儲(chǔ)的數(shù)據(jù)以便增加和插入元素，它們都允許直接按序號(hào)索引元素，但是插入元素要涉及數(shù)組元素移動(dòng)等內(nèi)存操作，所以索引數(shù)據(jù)快而插入數(shù)據(jù)慢，Vector由于使用了synchronized方法（線程安全），通常性能上較ArrayList差，而LinkedList使用雙向鏈表實(shí)現(xiàn)存儲(chǔ)，按序號(hào)索引數(shù)據(jù)需要進(jìn)行前向

25、或后向遍歷，但是插入數(shù)據(jù)時(shí)只需要記錄本項(xiàng)的前后項(xiàng)即可，所以插入速度較快。8、EJB是基于哪些技術(shù)實(shí)現(xiàn)的？并說(shuō)出SessionBean和EntityBean的區(qū)別，StatefulBean和StatelessBean的區(qū)別。EJB包括Session Bean、Entity Bean、Message Driven Bean，基于JNDI、RMI、JAT等技術(shù)實(shí)現(xiàn)。SessionBean在J2EE應(yīng)用程序中被用來(lái)完成一些服務(wù)器端的業(yè)務(wù)操作，例如訪問(wèn)數(shù)據(jù)庫(kù)、調(diào)用其他EJB組件。EntityBean被用來(lái)代表應(yīng)用系統(tǒng)中用到的數(shù)據(jù)。對(duì)于客戶機(jī)，SessionBean是一種非持久性對(duì)象，它實(shí)現(xiàn)某些在服務(wù)器上

26、運(yùn)行的業(yè)務(wù)邏輯。對(duì)于客戶機(jī)，EntityBean是一種持久性對(duì)象，它代表一個(gè)存儲(chǔ)在持久性存儲(chǔ)器中的實(shí)體的對(duì)象視圖，或是一個(gè)由現(xiàn)有企業(yè)應(yīng)用程序?qū)崿F(xiàn)的實(shí)體。Session Bean 還可以再細(xì)分為 Stateful Session Bean 與 Stateless Session Bean ，這兩種的 Session Bean都可以將系統(tǒng)邏輯放在 method之中執(zhí)行，不同的是 Stateful Session Bean 可以記錄呼叫者的狀態(tài)，因此通常來(lái)說(shuō)，一個(gè)使用者會(huì)有一個(gè)相對(duì)應(yīng)的 Stateful Session Bean 的實(shí)體。Stateless Session Bean 雖然也是邏輯組件

27、，但是他卻不負(fù)責(zé)記錄使用者狀態(tài)，也就是說(shuō)當(dāng)使用者呼叫 Stateless Session Bean 的時(shí)候，EJB Container 并不會(huì)找尋特定的 Stateless Session Bean 的實(shí)體來(lái)執(zhí)行這個(gè) method。換言之，很可能數(shù)個(gè)使用者在執(zhí)行某個(gè) Stateless Session Bean 的 methods 時(shí)，會(huì)是同一個(gè) Bean 的 Instance 在執(zhí)行。從內(nèi)存方面來(lái)看， Stateful Session Bean 與 Stateless Session Bean 比較， Stateful Session Bean 會(huì)消耗 J2EE Server 較多的內(nèi)存，然而 Stateful Session Bean 的優(yōu)勢(shì)卻在于他可以維持使用者的狀態(tài)。The Internets rise has been nothing short of meteoric. We may take it for granted today, using it for all manne