生物技術(shù)制品質(zhì)量異同探索

1、生物技術(shù)制品質(zhì)量異同探索 作者：任躍明 單位：國家藥典委員會 中國藥典（2010年版）三部收載的生物技術(shù)類制品包括：epo、ifn1b、ifn2a、ifn2b、ifn、白細(xì)胞介素-2、g-csf、gm-csf、牛堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bfgf）、人表皮生長因子（egf）、sk等3；生長激素，胰島素、阿替普酶等品種由中國藥典（2010年版）二部收載4。歐洲藥典與中國藥典的編制體例有所不同。針對生物技術(shù)類制品，歐洲藥典制定了“重組技術(shù)制品總論”，闡述了生物技術(shù)類制品的定義、特性，并對生產(chǎn)工藝、過程控制提出了明確要求，是建立品種標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)和技術(shù)依托。在品種各論中，對產(chǎn)品的原液或原料藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定

2、了具體要求。中國藥典則在“凡例”和“通則”中，對各類產(chǎn)品的共性技術(shù)要求進行統(tǒng)一規(guī)定，在產(chǎn)品各論中，分別從原液、中間品到成品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和檢定進行了具體規(guī)定。結(jié)合我國生物技術(shù)類制品現(xiàn)狀及研發(fā)趨勢，有必要參照歐洲藥典，制定“生物技術(shù)類制品總論”，并收載于2015年版中國藥典。 生物技術(shù)類制品質(zhì)量控制的主要因素 就生物技術(shù)類制品的質(zhì)量控制而言，生物學(xué)活性測定、理化特性分析和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究建立是十分重要的因素。生物學(xué)活性測定目前，生物技術(shù)類制品的生物學(xué)活性測定基本采用細(xì)胞增殖法。比較兩部藥典，最主要的差別在于檢測結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)分析，例如：可信限的設(shè)置。中國藥典對此方面的規(guī)定尚不完善。生物檢定是以藥物的藥理

3、作用為基礎(chǔ)，以生物統(tǒng)計為工具，運用特定的實驗設(shè)計，在一定條件下比較供試品和標(biāo)準(zhǔn)品所產(chǎn)生的特定反應(yīng)，通過等反應(yīng)劑量間比例的運算或限制劑量引起的生物反應(yīng)程度，從而測定供試品的效價、生物活性或雜質(zhì)引起的毒性4。由此可見，統(tǒng)計方法在生物學(xué)活性測定中的重要意義。中國藥典（2015年版）三部擬收錄“生物檢定統(tǒng)計法”，進一步完善制品生物檢定結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)分析。理化特性分析歐洲藥典對制品的理化特性分析得比較清晰明確，每個制品均標(biāo)注了蛋白質(zhì)一級序列、二硫鍵的具體位置以及化學(xué)結(jié)構(gòu)式。蛋白質(zhì)的理化特性分析一般包括含量測定、純度分析、鑒別分析等項目。含量測定中國藥典附錄中規(guī)定的總蛋白檢測的方法多采用lowry法，以人或

4、牛白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品。人或牛白蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為非同質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，其氨基酸組成、化學(xué)結(jié)構(gòu)均與供試品不同，測量中引入了系統(tǒng)誤差，無法與同類進口產(chǎn)品的質(zhì)量進行比對分析，不利于制品質(zhì)量與國際接軌。歐洲藥典一般采用紫外分光光度法和高效液相色譜法（hplc），并采用同質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品進行蛋白質(zhì)含量測定。純度分析純度分析即用限量標(biāo)準(zhǔn)控制制品中非藥效活性成分。中國藥典主要以十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠（sds-page）電泳法、hplc進行控制。純度分析應(yīng)盡量依據(jù)蛋白質(zhì)不同的理化特性，選擇分析原理不同的檢測方法，二者相互補充。g-csf、gm-csf、bfgf、egf、sk質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用分別基于蛋白質(zhì)分子大小和疏水特性的sds

5、-page電泳法、反相高效液相色譜法（rp-hplc）進行分析；其余質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均以sds-page電泳和分子篩這兩個基于一種分析原理的檢測方法對純度進行控制。中國藥典對主藥蛋白的含量作出了限值要求。歐洲藥典對于制品的純度分析較為詳細(xì)，針對不同的分子采用不同的分析方法和具體的判定標(biāo)準(zhǔn)。以ifn1b為例，純度分析包括了共價二聚體和低聚物、單體和多聚體、脫酰基和氧基化物、異質(zhì)二聚體、正亮氨酸及其他雜質(zhì)的限量要求；分別采用了分子排阻色譜法、離子交換色譜法、還原-非還原電泳法、高效液相氨基酸分析法。對于sds-page電泳等分辨率相對較低的方法，設(shè)立相應(yīng)控制帶以提高限量判定的準(zhǔn)確度。歐洲藥典純度分析大致分

6、為制品相關(guān)雜質(zhì)、工藝相關(guān)雜質(zhì)、相關(guān)物質(zhì)分析。制品相關(guān)雜質(zhì)產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)是在生產(chǎn)和/或貯存過程中產(chǎn)生的降解產(chǎn)物。其分子量、生物學(xué)活性、有效性和安全性均不同于主藥蛋白5。工藝相關(guān)雜質(zhì)工藝相關(guān)雜質(zhì)是生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的，可能源自工程菌/工程細(xì)胞（殘余蛋白質(zhì)、殘余dna）、培養(yǎng)基（誘導(dǎo)劑、抗生素、培養(yǎng)基成分）或者下游工藝（試劑、層析過程產(chǎn)生的雜質(zhì)）5。同一制品的不同生產(chǎn)單位，由于其工藝、表達系統(tǒng)的差異，殘余宿主細(xì)胞的dna、蛋白無論從結(jié)構(gòu)還是組成比例均會存在差異。因此，檢測方法在標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選擇、抗原、抗體的制備方式均具有特異性。根據(jù)“質(zhì)量源于設(shè)計”理念，采用生產(chǎn)單位根據(jù)工藝自行制備的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和檢測用試劑對工

7、藝相關(guān)雜質(zhì)進行控制，更為真實客觀，對于工程控制也更有意義。制品相關(guān)物質(zhì)制品相關(guān)物質(zhì)是在生產(chǎn)或貯存過程中，產(chǎn)生的不同于主藥蛋白的分子，其具有的生物學(xué)活性，對于制品的安全性和有效性沒有影響。它們的特性與主藥蛋白相似，不被認(rèn)為是雜質(zhì)5。鑒別分析在理化鑒別方面，中國藥典與歐洲藥典的差距主要是在理化對照品方面。中國藥典收載的生物技術(shù)類制品標(biāo)準(zhǔn)尚未提供理化對照品。以肽圖分析為例，肽圖分析是國內(nèi)外藥典用于評價產(chǎn)品一致性和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的技術(shù)手段。歐洲藥典采用全面結(jié)構(gòu)鑒定和理化分析的對照品作為鑒別判定依據(jù)，在儀器分析總體要求的基礎(chǔ)上，歐洲藥典對色譜柱粒徑、長度、柱溫，以及系統(tǒng)適用性中保留時間、分辨率等均有詳盡的

8、描述，并采用非線性色譜梯度分離。中國藥典（2010版）也采用了酶切后rp-hplc的方式，但尚未提供完成全面結(jié)構(gòu)鑒定和理化分析的對照品，其次在方法要求細(xì)節(jié)與系統(tǒng)適用性方面也存在一定差距。2.3標(biāo)準(zhǔn)品的建立標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究和建立是藥品質(zhì)量控制的重要組成部分。歐洲藥典收錄藥品標(biāo)準(zhǔn)的鑒別、理化特性分析、生物學(xué)活性測定中，絕大多數(shù)檢驗方法均有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為技術(shù)依托。然而，目前我國在相關(guān)生物技術(shù)類制品的質(zhì)量控制中，僅可以提供生物學(xué)活性標(biāo)準(zhǔn)品，但在理化分析、含量測定方面的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研發(fā)還有待加強，在體制和機制上確保實物標(biāo)準(zhǔn)和文本標(biāo)準(zhǔn)同步發(fā)展與實施，完善標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)國家數(shù)據(jù)庫。 藥典相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)比較 僅以epo、g-csf原液（原料藥）的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為例，對照分析中外藥典中相關(guān)檢定項目的技術(shù)要求。歐洲藥典收載的生物技術(shù)類制品原液按原料藥管理，有批準(zhǔn)文號。而在我國，原液是禁止在市場流通的。詳見表（表略） 總結(jié) 中國藥典（2010版三部）是目前國際上收錄生物技術(shù)類制品標(biāo)準(zhǔn)最多的藥典，但多為劑型不同的同一活性成分，與國外藥典相比，在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)細(xì)節(jié)方面還需要進一步完善。藥品質(zhì)量與公眾切身利益緊密相關(guān)，直接關(guān)系到人民群眾的健康和社會的和諧穩(wěn)定。藥品標(biāo)準(zhǔn)是藥品質(zhì)量控制的重要手段