菌落總數(shù)的誤操作及避免方法

1、菌落總數(shù)的誤操作及避免方法核心提示：菌落總數(shù)是評價食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標，其檢測工作在某種程度上具有相當?shù)牟豢杀刃裕@就要求檢測人員要嚴格執(zhí)行科學的操作程序。國家標準GB/T4789.2中只是簡要提到了檢測程序，對實際操作過程中容易出現(xiàn)的問題未作詳細說明。本文就檢測中容易出現(xiàn)的問題，作一闡述。1、樣品的制備和稀釋倍數(shù)的選擇對于冰凍的樣品，在接種前要放到04的冰箱中解凍。固體樣品要用滅菌刀或鑷子從不同部位采取試驗材料并混合，在無菌操作下充分研細，混勻，做成均勻稀釋液。樣品制備的整個過程都應在無菌狀態(tài)下進行，以防污染。任何樣品在打開包裝前，都要在取樣開口處的周圍表面進行消毒。以上過程的誤操作是：冰

2、凍樣品的解凍時間過長，導致細菌增殖，使實測結(jié)果偏高；固體樣品取樣不均衡，稀釋液未充分混勻，使所測結(jié)果準確度降低；取樣時未進行外包裝消毒，引起樣品污染。充氣飲料應在無菌條件下進行排氣；酸性樣品用經(jīng)過滅菌的2030%碳酸鈉溶液調(diào)整pH值到中性；含鹽量較高的樣品應用滅菌蒸餾水進行稀釋。誤操作是：充氣飲料未經(jīng)排氣，使樣品接種量偏低；酸性樣品未調(diào)pH值，使不適合酸性狀態(tài)下生長的細菌受抑制；高鹽樣品仍用生理鹽水進行稀釋，使不適于高鹽狀態(tài)下生長的細菌受抑制，結(jié)果均使實測值偏低。不同的食品其菌落總數(shù)的檢出限量也不一致。醬油、奶制品、熟肉制品等細菌含量一般偏高，稀釋度可相應選擇較大的，如1:100和1:1000

3、等，而飲料、糕點類樣品中細菌量偏低，稀釋度應選擇較小的，如液體樣品可選原樣，固體樣品選1:10等。誤操作是或者選擇的稀釋度過大，使得菌落生長稀少，或者稀釋度過小，菌落生長密度高，難以計數(shù)，導致實測結(jié)果或偏高或偏低。2、接種、培養(yǎng)過程中應注意的問題接種時，用移液管吸取稀釋液不應用吸球，而要用管口上部塞有脫脂棉球的經(jīng)過高溫烘烤的移液管，并且用嘴吸取，以防產(chǎn)生交叉污染。稀釋液加入平皿后，應在盡可能快的時間內(nèi)傾入瓊脂（傾倒瓊脂時，應保證瓊脂溫度在5060，溫度過高，易殺死細菌；溫度過低，則瓊脂提前凝固，導致檢測失?。?，并立即在桌面上推旋平皿，使樣液與瓊脂混合均勻，切忌推旋動作過大，將瓊脂濺到平皿蓋上，

4、影響測定結(jié)果。平皿內(nèi)瓊脂凝固后，不要長久放置后才翻轉(zhuǎn)平皿培養(yǎng)，而應在瓊脂凝固后立即將平皿翻轉(zhuǎn)予以培養(yǎng)，這樣可避免菌落蔓延生長，難以計數(shù)。配制、分裝稀釋液或傾注平板不能在日光直射下進行，以防強烈的日光將細菌殺死。在培養(yǎng)時，恒溫培養(yǎng)箱的溫度不能過高，以免出現(xiàn)蔓延生菌的趨勢，但也要防止因通風和空氣循環(huán)而造成的培養(yǎng)基太干，而影響細菌的正常生長。3、滅菌消毒過程中應注意的問題細菌檢測過程中所用到的一切用具和培養(yǎng)基都需經(jīng)過滅菌程序。接種室要經(jīng)常用消毒液進行地面、墻面和桌面的消毒處理。實驗進行前，還要經(jīng)紫外燈照射殺菌。檢測人員的實驗服也要經(jīng)常用消毒液浸泡消毒。凡是能在高溫下烘烤的玻璃器皿、金屬器械等都應用專

5、用紙包好并在170烘烤3小時以上，以徹底滅菌。培養(yǎng)基和液體試劑，則要在高壓鍋內(nèi)進行滅菌。高壓鍋使用時應注意在升壓前要放凈鍋內(nèi)殘存的空氣，以保證所需的壓力，達到滅菌效果。滅菌效果的好壞可通過空白試驗確定。空白試驗有空氣空白、稀釋用水空白、器皿空白等，完美的空白試驗平板上應該無細菌生長。4、菌落計數(shù)和檢測結(jié)果報告中應注意的問題菌落計數(shù)在完成培養(yǎng)后應立即進行，以防細菌繼續(xù)生長蔓延影響實測結(jié)果。由于不小心、視力疲勞或菌落沒有辨認好，均可導致錯誤的結(jié)果，因此，檢測人員在計數(shù)時應采取多人同時進行計數(shù)的方法，以避免這種情況造成的誤差。如果所有稀釋度的平板均無細菌生長，則檢測報告應以最低稀釋度報出，如最低稀釋度為1，則報為1；若最低稀釋度為1:10，則報為10，而不能報為未檢出。以上所述，均是在實際檢測菌落總數(shù)過