HPLC法測(cè)定恩替卡韋的含量-4精選文檔

1、HPLC法測(cè)定恩替卡韋的含量恩替卡韋（ Entecavir ）為鳥嘌呤核苷類似物，是一種新型的核苷類抗病毒藥物對(duì)乙肝病毒（HBV多聚酶具有抑制作用。它能夠通過(guò)磷酸化 成為具有活性的三磷酸鹽， 三磷酸鹽在細(xì)胞內(nèi)的半衰期為15h。通過(guò)與HBV多聚酶的天然底物三磷酸脫氧鳥嘌呤核苷競(jìng)爭(zhēng)，恩替卡韋三磷酸鹽能抑制 病毒多聚酶（逆轉(zhuǎn)錄酶）的所有活性：（1）HBV多聚酶的啟動(dòng)；（2）前基因組mRNA逆轉(zhuǎn)錄負(fù)鏈的形成；（3）HBVDNA正鏈的合成。本品適用于病毒 復(fù)制活躍，血清轉(zhuǎn)氨酶ALT或AST持續(xù)升高或肝臟組織學(xué)顯示有活動(dòng)性病 變的慢性成人乙型肝炎的治療【 1】。經(jīng)查詢，該品種在國(guó)外藥典未見(jiàn)報(bào)道，參考在國(guó)家

2、食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn) YBH33292005 YBH14132008及文獻(xiàn)2，建立了恩替卡韋含量的檢測(cè)方法，選擇了高效液相色譜檢測(cè)手段，并通過(guò)線性、耐用性等實(shí)驗(yàn)對(duì)方 法進(jìn)行驗(yàn)證。充分證明了該方法能夠快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確地測(cè)定恩替卡韋的 含量。1 儀器與材料Agile nt高效液相色譜儀（包括G1311A泵，G1314BVW檢測(cè)器和G1315D DAD檢測(cè)器、ChemStation Rev. B.04.0298液相色譜工作站， Agile nt公司）恩替卡韋工作對(duì)照品（哈藥集團(tuán)制藥總廠，含量 93.53%），甲醇（色 譜純，TEDIA）,乙腈（色譜純，TEDIA）,水為純化水。2 方法與結(jié)果2.1

3、 含量檢查2.1.1 波長(zhǎng)選擇對(duì)供試品溶液進(jìn)行 DAD全波長(zhǎng)掃描，在254nm處有最大吸收，將波長(zhǎng) 設(shè)定為 254nm。2.1.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性色譜柱：Kromasil 100-5C C18 柱（250mm4.6mm 5口）；流動(dòng)相： 乙腈-水（5: 95 ）;流速：1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm 柱溫：25C； 進(jìn)樣量：10 口 L。在上述色譜條件下， 取恩替卡韋對(duì)照品適量， 用流動(dòng)相制成 0.2mg/mL 溶液，取10 uL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。恩替卡韋峰理論板數(shù)為： 16125。2.1.3 進(jìn)樣精密度取恩替卡韋對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成濃度為0.20mg/mL的溶液

4、，重復(fù)進(jìn)樣6次，峰面積的RSD為0.018%，本法測(cè)定樣品進(jìn)樣精密度良好。2.1.4 線性試驗(yàn)取恩替卡韋對(duì)照品適量，分別制成80.53、120.79、161.06、201.32、241.58、281.85、322.11 u g/ml的溶液，分別精密量取 101注入液相色 譜儀，記錄色譜圖。以濃度（C）為橫坐標(biāo)，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行 線性回歸，回歸方程為： A=26.481C-24989 r=1.0000恩替卡韋濃度在80.53322.11 u g/ml范圍內(nèi)線性相關(guān)性較好。2.1.5 中間精密度 分別于不同日期、由不同分析人員、用不同設(shè)備測(cè)定精密度，在含量測(cè)定范圍內(nèi)，取相當(dāng)于 100%濃

5、度水平的供試品溶液 6份，進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算供試品含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，日內(nèi)RSD(%分別為O.23%m020%；日間 RSD( %)為 0.21%，均小于 2.0%，說(shuō)明該方法的中間精密度較 好。2.1.6 回收率取恩替卡韋對(duì)照品適量，在含量測(cè)定范圍內(nèi)，設(shè)計(jì)80% 100%和120%三種濃度，每個(gè)濃度各分別制備 3 份溶液，進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，按照 標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下，進(jìn)行回收試驗(yàn)。結(jié)果平均回收率為99.9%，RSD為0.64%(n=9),表明本法測(cè)定恩替卡韋含量回收率良好。2.1.7 在流動(dòng)相中溶液穩(wěn)定性取恩替卡韋約25mg精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量，超聲 使溶解，用甲醇稀釋

6、至刻度，搖勻。再精密量取5ml，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，室溫下放置，分別于 0， 4， 8， 12， 18， 24h 進(jìn)樣，記錄色譜圖。其主峰面積 RSD為0.10%，說(shuō)明恩替卡韋溶液室溫放 置 24h 穩(wěn)定性良好。2.1.8 耐用性試驗(yàn)通過(guò)將如上色譜條件的柱溫改變土 5C、流速改變土 0.2 ml/min、檢 測(cè)波長(zhǎng)改變土 3nm更換兩個(gè)不同廠家同類型的色譜柱及有機(jī)相比例改變 10%，考察該色譜條件的耐用性。結(jié)果表明恩替卡韋含量測(cè)定項(xiàng)的高效 液相色譜條件在上述變化下，對(duì) 201205003批次供試品含量測(cè)定結(jié)果的 RSD為0.11% (n=11)，含量的方法在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，對(duì)測(cè)定結(jié)果 影響不大，說(shuō)明本方法的耐用性較好。2.1.9 含量測(cè)定方法取恩替卡韋約25mg精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇適量，超聲 使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。再精密量取5ml，置25ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，精密量取10 u l，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取恩替卡韋對(duì)照品適量， 同法測(cè)定， 按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算， 即得， 按無(wú)水物計(jì)算，含 C12H15N5O應(yīng)為98.0%102.0%。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)下表：含量測(cè)定結(jié)果結(jié)論：樣品按無(wú)水物計(jì)算，含恩替卡韋C12H15N5O為98.0%102.0%， 均符合規(guī)定。希望以上資料對(duì)你有所幫助，附勵(lì)志名言 3 條