法莫替丁片藥代動力學(xué)研究綜述

1、綜述法莫替丁片的藥代動力學(xué)研究08藥劑一班 左艷敏 20080702031【摘要】采用隨機分組，以RP-HPLC的法測定血漿藥物濃度比較山西津華藥業(yè)有限公司與青島國風(fēng)集團金海制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)的法莫替丁片在人體內(nèi)生物利用度和生物等效性，及其在大鼠體內(nèi)的吸收動力學(xué)研究，充實完善法莫替丁體內(nèi)過程的研究。【關(guān)鍵詞】法莫替?。簧锢枚龋簧锏刃?；吸收動力學(xué)；HPLC前 言法莫替丁是繼西咪替丁和雷尼替丁之后出現(xiàn)的第三代組胺H2受體拮抗劑，對胃酸分泌有明顯的抑制作用。法莫替丁是第三代組胺H2受體拮抗劑，能拮抗胃粘膜壁細胞的組胺H2受體，進而抑制胃酸分泌，且其抑制作用比雷尼替丁強7.5倍。臨床上用于治

2、療消化性潰瘍Zolinger-E11ison綜合征。本品不良反應(yīng)低，少數(shù)患者可出現(xiàn)口干、頭暈、失眠、便秘、腹瀉、皮疹、面部潮紅，白細胞減少。偶有輕度轉(zhuǎn)氨酶增高等。目前，國內(nèi)已有其注射劑、片劑和膠囊劑等上市。有關(guān)法莫替丁片的生物利用度及其生物等效性評價亦有文獻報道【1-5】。本研究采用高效液相色譜法，以青島國風(fēng)集團金海制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)的法莫替丁片為參比，對山西津華藥業(yè)有限公司研制的法莫替丁進行了研究。采用自身交叉試驗方法。測定18名健康志愿者口服法莫替丁制劑后的經(jīng)時過程的血藥濃度，并計算血藥濃度-時間曲線下面積(AUC012、AUC0)、生物利用度以及有關(guān)藥代動力學(xué)參數(shù)，同時根據(jù)測定值A(chǔ)UC

3、012、AUC0、C max和t max的統(tǒng)計處理結(jié)果進行生物等效性評價。腸吸收動力學(xué)的研究是采用大鼠分離、在體腸吸收方法，對法莫替丁的吸收部位和吸收動力學(xué)進行研究，以期了解該藥在各腸段的吸收特征。主 體（一）法莫替丁片的相對生物利用度及生物等效性評價1、材料和方法11儀器與藥品 儀器：日本島津公司LC-10AT泵，KromailC18色譜柱(4.6 mm250 mm，5m)，SiL-10A全自動進樣器，SPD-l0A型紫外可見分光光度檢測器(190600 nm)，ND-2000型色譜工作站。TGL-16G高速臺式離心機，超聲波發(fā)生器。TKH-型液體快速混合器。試劑：乙腈色譜純。其他試劑均為分

4、析純，水為三重蒸餾水。標(biāo)準(zhǔn)溶液(2 000ngml)：精密稱取法莫替丁適量，加甲醇溶解并稀釋成2 000ngml，搖勻，置冰箱中冷藏備用。試驗藥品：法莫替丁片(每片含法莫替丁20 mg)，山西津華藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，記作T。參比制劑：法莫替丁片(每片含法莫替丁20 mg)，青島國風(fēng)集團金海制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)，記作R。試驗藥品和標(biāo)準(zhǔn)參比制劑經(jīng)山西省藥品檢驗所檢驗合格。12血漿中法莫替丁HPLC測定法121色譜條件 色譜柱：KromailCl8色譜柱(4.6 mm250 mm，5m)，流動相：0.2 molL醋酸銨(pH 4.5)乙腈(90：10)，流速：1.0 mlmin，檢測波長：266nm，

5、檢測器靈敏度：0.5 AUV，進樣量：20L 。122血漿樣品處理方法 精密吸取血漿樣品1.0mL置具塞離心管中，加100L 7.5鹽酸羥胺，渦旋30 s，加入0.5 ml飽和碳酸鉀溶液，渦旋30 s，加入6 ml乙酸乙酯。渦旋10 min。離心10 min(4 000 rmin)，吸取上清液5 ml置于尖底試管中，于氮氣流下60吹干，殘渣以流動相100L溶解后，取20L進樣分析。123色譜行為按上述方法分離測定血漿所得色譜圖表明，空白樣品中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾，通過與空白樣品添加標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖比較，證明9.060 min色譜峰為法莫替丁色譜峰。如圖1所示13方法學(xué)驗證131血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取空白

6、血漿1.0ml 5份，分置具塞離心管中。分別加入上述法莫替丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，使法莫替丁濃度分別為160.0、3200、640.0、900.0和2 000.0ng/ml，按“122”項下方法處理后，經(jīng)HPLC測定，以法莫替丁峰面積為縱坐標(biāo)，法莫替丁濃度C(ng/ml)為橫坐標(biāo)，按加權(quán)最小二乘法6進行回歸，得血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=137.9232x+689.8672 r=0.9963(權(quán)重1/c2107)，線性范圍160.02 000.0ng/mL，最低定量限為160.0ng/mL。132回收率試驗按血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線項下方法配制低、中、高濃度分別為160.0、900.0和2 000.0ng/mL的法莫替丁血漿

7、模擬樣品，按“122”項下方法處理后經(jīng)HPLC測定，測得回收率結(jié)果分別為(95.933.70)、(86.581.99)、(96.411.87)，RSD分別為3.86、2.30、1.94 (n=5)。133精密度試驗按“131”項下方法配制低、中、高濃度(160.0、900.0和2 000.0ng/mL)法莫替丁血漿模擬樣品，按“122”項下方法處理，1 d內(nèi)測定5次。連續(xù)測定5 d，求得低、中、高3個濃度的日內(nèi)RSD分別為3.99、2.30和0.91(n=5)；日間RSD分別為3.56、3.33和0.69(n=5)。134穩(wěn)定性試驗(1)室溫穩(wěn)定性：于空白血漿中加入一定量的法莫替丁標(biāo)準(zhǔn)液，配制

8、成160.0、9000和2 000.0ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)血漿QC樣本各3份，于室溫分別放置不同時問后，按“122”項下處理并進樣分析，與0相比求得標(biāo)準(zhǔn)血漿樣本的偏差。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)血漿Q樣本在8 h內(nèi)可保持穩(wěn)定。(2)凍融穩(wěn)定性：同法制成160.0、900.0和2000.0ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)血漿QC樣本各3份于-20冷凍24 h，取出待完全融解后，按“122”項下處理并進樣分析，反復(fù)凍融3次，與未凍融相比，求得標(biāo)準(zhǔn)血漿樣本的偏差。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)血漿QC樣本在凍融條件下可保持穩(wěn)定。(3)長期穩(wěn)定性：同法制成160.0、900.0和2000ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)血漿QC樣本各3份，于-20分別冷

9、凍0、7、14、21 d，取出待完全融解后，按“122”項下處理并進樣分析，與0 h相比，求得標(biāo)準(zhǔn)血漿樣本的偏差。結(jié)果表明，標(biāo)準(zhǔn)血漿QC樣本在-20條件下21 d內(nèi)可保持穩(wěn)定。14試驗對象及方法141受試者的選擇 18名男性健康志愿受試者，體重(63.781.90)kg，年齡(22.501.58)歲，身高(171.003.51)cm。經(jīng)常規(guī)體檢證明肝、腎功能正常，心電圖正常，精神狀態(tài)良好。受試前2周至實驗期間不服用其他任何藥物，實驗期間禁煙、酒及含咖啡因的飲料，受試者均簽署知情同意書。自愿作為受試者參加法莫替丁片的相對生物利用度試驗。試驗經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)后實施。142試驗方案 18名男性健

10、康志愿者禁食過夜后，于早上7：00單劑量口服法莫替丁試驗制劑或參比制劑40 mg，用200mL溫開水送服。試驗期間受試者避免劇烈運動，2周后交叉給藥。分別于給藥前及給藥后的0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0 h于肘靜脈取血5mL。所采血樣置于含肝素抗凝劑的離心試管中，4000 rmin離心3 min，分取血漿于-20冰箱保存至測定。服藥2 h后可飲水，4 h后進統(tǒng)一低脂膳食。用藥期間和用藥后，受試者均未出現(xiàn)任何不良反應(yīng)。15藥動學(xué)參數(shù)計算及統(tǒng)計學(xué)處理 以梯形法計算血藥濃度時間曲線下面積(AUC)，根據(jù)對數(shù)血藥濃度-時間曲線末端直線部分的斜

11、率求算消除半衰期(t1/2)，峰濃度(Cmax)和達峰時間(tmax)，用實測值表示7。采用交叉設(shè)計方差分析法，對被試制劑和參比制劑的主要藥物動力學(xué)參數(shù)進行方差分析，用雙單側(cè)檢驗法(Two one-side test)和(1-2)置信區(qū)間法進行生物等效性評價。2、結(jié)果21血藥濃度18名健康志愿者單劑量口服40 mg法莫替丁片后，平均血藥濃度-時間曲線見圖2：22藥動學(xué)參數(shù) 18名健康受試者單劑量口服40 mg法莫替丁試驗制劑或參比制劑后的藥動學(xué)參數(shù)見表1：23相對生物利用度 根據(jù)18名健康受試者口服法莫替丁試驗制劑或參比制劑的AUC012，估算法莫替丁試驗制劑的相對生物利用度為(96.5810

12、.39)。24生物等效性 分析方差分析表明，兩種制劑的Cmax、tmax、AUC012、AUC0劑型間、個體間和周期間均無顯著差異。雙單側(cè)檢驗法和(1-2)置信區(qū)間法計算結(jié)果表明，兩種制劑的單劑量交叉口服給藥的Cmax、tmax、AUC012、AUC0的tl、t2值均大于t(1-0.05)，并且x T在(1-2)置信區(qū)間內(nèi)，受試制劑參數(shù)AUC012、AUC0的90可信限在參比制劑80125范圍內(nèi)，C max在70143范圍內(nèi)，因此，可以認為試驗制劑T與參比制劑R兩種制劑生物等效，結(jié)果見表2。（二）（二）法莫替丁大鼠吸收動力學(xué)的研究11-151、材料與方法（1）材料：法莫替丁標(biāo)準(zhǔn)品；酚紅；蘭格B

13、T01-100蠕動泵；754紫外分光光度計；高效液相色譜儀（515泵，2487紫外檢測器）。（2）動物：SD大鼠，普通級，體重（25020）g，雄雌兼用。（3）離體小腸不同腸段吸收實驗。外翻腸囊制備：選取實驗前禁食1夜的大鼠，腹腔注射3%戊巴比妥鈉1ml/kg進行麻醉。沿腹白線剖開，選擇所需腸段：十二指腸自幽門1cm處開始，空場段離幽門15cm處開始，回腸20cm處開始，結(jié)腸段為緊鄰盲腸端至直腸；各段均取10cm。用鑷子夾住小腸一端的斷緣，將腸翻轉(zhuǎn)后結(jié)扎一游離端，另一端接上三通管，并向腸腔內(nèi)注入2ml Kreb-Ringer溶液，固定，將腸管置于盛有37恒溫的Kreb-Ringer溶液的錐形瓶

14、中，通入混合氧氣，待用。2）離體吸收實驗：按上述制備外翻腸囊，并置于盛有25ml 37恒溫的供試液的錐形瓶中，法莫替丁濃度為20mg/L，分別于0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0h各取樣0.1ml，離心，進樣。同時補充等量Kreb-Ringer溶液。（4）在體小腸不同腸段吸收實驗1)大鼠在體腸吸收實驗法：選取實驗前禁食的大鼠，腹腔注射3%戊巴比妥鈉1ml/kg，麻醉后固定。沿腹白線剖開，選擇所需腸段兩端插管，結(jié)扎。先用37生理鹽水將小腸內(nèi)容物沖洗干凈。再用空氣排除生理鹽水并將大鼠連接至灌流裝置。用100ml37供試液按2.5ml/min流速平衡10min，再以1ml/min流速灌流。分

15、別于0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0h取樣0.6ml,0.5ml用于酚紅含量測定，0.1ml用于法莫替丁濃度的測定，同時補加酚紅溶液0.6ml，分段考察 不同腸段法莫替丁腸吸收實驗。2）酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線：精密吸取Kreb-Ringer溶液配置的濃度分別為2.5、5.0、10、20、40、60mg/L酚紅標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.5ml，加入0.2mol/LNaoH溶液5ml顯色，在557nm處測定吸收度，以0.2mol/LNaoH溶液為空白，以吸收度A與酚紅濃度C進行線性回歸，得酚紅標(biāo)準(zhǔn)曲線A=0.0156C+0.0076 (r=0.9999，P0.001)。（5）腸循環(huán)液中法莫替丁濃度測定方法1）

16、高效液相色譜條件：采用HPLC外標(biāo)法定量。法莫替丁測定色譜條件SpherisorbC8柱。流動相：10%乙腈，三乙胺調(diào)pH為4.3。流速：0.8ml/min。檢測：紫外檢測器，267nm波長處，靈敏度：1AUFS。10l進樣。2）法莫替丁標(biāo)準(zhǔn)曲線：離體：用Kreb-Ringer溶液精密配置濃度分別為0.5、1.5、10、25mg/l系列濃度法莫替丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，同上色譜條件測定，用測得的峰面積A和弄得C進行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。在體：用空白回流液精密配置5、10、20、30、40mg/l系列濃度的法莫替丁標(biāo)準(zhǔn)溶液進行同上的過程，得出曲線方程。（6）進行統(tǒng)計學(xué)處理2、實驗結(jié)果離體實驗：在腸外翻模型中

17、，法莫替丁從粘膜面向漿膜面吸收的情況如圖1：在體實驗：以剩余藥量的對數(shù)值對取樣時間作圖如2：法莫替丁在腸各段的吸收速率常數(shù)如圖3： 圖1 法莫替丁在漿膜中的濃度變化圖2 法莫替丁在大鼠在體灌流腸液中的藥量變化組別 十 二 指 腸 空 腸 回 腸 結(jié) 腸1 0.0540 0.0498 0.0368 0.0280 2 0.0469 0.0424 0.0379 0.0190 3 0.0436 0.0402 0.0426 0.0308 4 0.0532 0.0436 0.0434 0.0236 5 0.0524 0.0414 0.443 0.0244 s 0.0500 0.0435 0.0410 0.

18、0252 x 0.0045 0.0038 0.0034 0.0045 圖3 法莫替丁在各腸段中的吸收速率常數(shù)總 結(jié)由藥-時曲線可見，受試制劑和參比制劑的體內(nèi)動力學(xué)過程基本一致。主要動力學(xué)參數(shù)Cmax、tmax、AUC012、AUC0在劑型間、個體間和周期間均無顯著差異。本研究采用雙單側(cè)檢驗法和置信區(qū)間法，評價兩種制劑生物等效，受試制劑的生物利用度為(96.5810.39)。離體實驗中腸管狀態(tài)與動物體內(nèi)情況不同，清洗步驟在去除腸內(nèi)容物同時很可能降低腸內(nèi)多種酶系的活力，外翻過程也可對腸管組織結(jié)構(gòu)有一定影響，因此離體實驗結(jié)果尚不能完全反映藥物在整體條件下的吸收情況。法莫替丁吸收屬于一級動力學(xué)過程，吸收機制為被動擴散。離體、在體實驗結(jié)果顯示法莫替丁在腸道各部位的吸收速率按十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸的順序下降，結(jié)腸段與其他腸段相比吸收速率顯著降低。因此若能采用適當(dāng)?shù)闹苿┘夹g(shù)延長法莫替丁在腸管上部的滯留時間，可望提高其生物利用度。參考文獻1杜小莉，付強，葉敏，等法莫替丁口腔崩解片生物等效性研究J中國藥學(xué)雜志，2007年2高小玲，陳鈞，胡凱莉，等法英替丁滴丸劑和片劑的人體生物等效性J中國I臨床藥學(xué)雜志2005年3王世萍，何海霞法莫替丁咀嚼片的人體生物等效性研究J中國藥房，2004年4杜智敏張波，王珍，等法漠替丁分散片的