郝老師課件單克隆抗體的制備

1、 單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備 應(yīng)急處置：洗、擠、消毒應(yīng)急處置：洗、擠、消毒 2424小時(shí)內(nèi)接種疫苗，小時(shí)內(nèi)接種疫苗，5 5針，針，2828天內(nèi)打完天內(nèi)打完 咬傷較嚴(yán)重者先注射狂犬病病毒抗毒血清咬傷較嚴(yán)重者先注射狂犬病病毒抗毒血清和破傷風(fēng)桿菌抗毒血清，后接種疫苗。和破傷風(fēng)桿菌抗毒血清，后接種疫苗。閱讀思考閱讀思考 常規(guī)抗體的缺點(diǎn)？常規(guī)抗體的缺點(diǎn)？ 為什么血清中分離的抗體純度低？為什么血清中分離的抗體純度低？B2B3B1漿漿1漿漿1漿漿1漿漿2漿漿2漿漿2漿漿3漿漿3漿漿3 常規(guī)抗體常規(guī)抗體 （多克隆抗體）（多克隆抗體）抗原抗原123純度低、特異性差、產(chǎn)量低純度低、特異性差、產(chǎn)量低 1 1、

2、單克隆抗體、單克隆抗體 由一個(gè)由一個(gè)B B淋巴細(xì)胞增殖分化形成的淋巴細(xì)胞增殖分化形成的漿細(xì)胞漿細(xì)胞群產(chǎn)群產(chǎn)生的抗體?；瘜W(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)。生的抗體。化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)。被免疫過(guò)被免疫過(guò)的的B細(xì)胞細(xì)胞（漿細(xì)胞）（漿細(xì)胞）設(shè)想：設(shè)想：骨髓瘤骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞B B細(xì)胞細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞：既能產(chǎn)生特異性抗雜交瘤細(xì)胞：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能無(wú)限增殖體，又能無(wú)限增殖科勒科勒米爾斯坦米爾斯坦細(xì)胞融合細(xì)胞融合技術(shù)技術(shù)細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng) 抗原抗原2、單克隆抗體制備過(guò)程單克隆抗體制備過(guò)程B1、B2、B3多種淋巴細(xì)胞多種淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞（設(shè)定為（設(shè)定為A）+PEG選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基

3、 BB AB1 AB2 AB3AA細(xì)胞合成細(xì)胞合成DNADNA有有D D和和S S兩條兩條途徑，其中途徑，其中D D途徑能被途徑能被氨氨基喋呤基喋呤阻斷。試驗(yàn)用骨阻斷。試驗(yàn)用骨髓瘤細(xì)胞（缺陷型）只髓瘤細(xì)胞（缺陷型）只有有D D途徑，沒(méi)有途徑，沒(méi)有S S途徑。途徑。雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞克隆化培養(yǎng)克隆化培養(yǎng)抗體檢測(cè)抗體檢測(cè)產(chǎn)生特定抗體產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞的雜交瘤細(xì)胞獲取獲取單克隆抗體單克隆抗體體內(nèi)制備體內(nèi)制備單克隆抗體單克隆抗體體外制備體外制備優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)、靈敏度高、可大量制備敏度高、可大量制備將以下單克隆抗體的制備步驟排序?qū)⒁韵聠慰寺】贵w的制備步驟排序3 3、單克隆抗體的

4、應(yīng)用、單克隆抗體的應(yīng)用用于治療疾病和運(yùn)載藥物，如生物導(dǎo)彈用于治療疾病和運(yùn)載藥物，如生物導(dǎo)彈131I制備制備甲胎蛋白的甲胎蛋白的單克隆單克隆抗體，與藥物結(jié)合，抗體，與藥物結(jié)合，定向運(yùn)輸?shù)桨┘?xì)胞位置。定向運(yùn)輸?shù)桨┘?xì)胞位置。癌細(xì)胞膜具特殊蛋白質(zhì)，甲胎蛋白、癌胚蛋白。癌細(xì)胞膜具特殊蛋白質(zhì)，甲胎蛋白、癌胚蛋白。“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈” ” 單克隆抗體藥物單克隆抗體藥物作為診斷試劑：作為診斷試劑：人絨毛膜促性腺激素的單抗人絨毛膜促性腺激素的單抗通用名通用名批準(zhǔn)時(shí)間批準(zhǔn)時(shí)間類型類型識(shí)別抗原識(shí)別抗原適應(yīng)癥適應(yīng)癥Muromonab-CD31986mouseCD3急性腎移植移植排斥急性腎移植移植排斥Daclizuma

5、b; Basiliximab1997;1998humanized/ chimericIL-2R(CD25) 急性腎移植移植排斥急性腎移植移植排斥Rituximab; Tositumomab; Ibritumomab1997;2002; 2003mouse/chimericCD20B細(xì)胞細(xì)胞-非何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎Alemtuzumab2001humanizedCD52慢性慢性B淋巴細(xì)胞性白血病淋巴細(xì)胞性白血病Gemtuzumab ozogamicin2000chimericCD33急性粒細(xì)胞性白血病急性粒細(xì)胞性白血病Edrecolomab*1995mo

6、useEP-CAM結(jié)、直腸癌結(jié)、直腸癌Trastuzumab1998humanizedHER-2HER-2過(guò)表達(dá)的轉(zhuǎn)移性乳腺癌過(guò)表達(dá)的轉(zhuǎn)移性乳腺癌Cetuximab2004humanizedEGFR轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌、頭頸部癌癥轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌、頭頸部癌癥Bevacizumab2004;2006humanizedVEGF轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌,年齡相關(guān)性黃斑病變年齡相關(guān)性黃斑病變Infliximab1998; 2002chimeric/ humanTNF-節(jié)段性回腸炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎節(jié)段性回腸炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎,銀屑病性關(guān)節(jié)炎銀屑病性關(guān)節(jié)炎;強(qiáng)直性脊柱炎強(qiáng)直性脊柱炎Efalizumab2003humani

7、zedCD11a銀屑病銀屑病Natalizumab2004human4整合素整合素多發(fā)性硬化癥多發(fā)性硬化癥Omalizumab2003humanizedIgE過(guò)敏性哮喘過(guò)敏性哮喘Abciximab 1994 chimeric GPb/a 冠心病血小板冠心病血小板Palivizumab 1998 humanized RSV 呼吸道合胞病毒感染呼吸道合胞病毒感染 科勒科勒米爾斯坦米爾斯坦 雜交瘤技術(shù)是上世紀(jì)方法雜交瘤技術(shù)是上世紀(jì)方法學(xué)上的一個(gè)重大突破，開創(chuàng)了學(xué)上的一個(gè)重大突破，開創(chuàng)了大量生產(chǎn)具有專一特異性的單大量生產(chǎn)具有專一特異性的單克隆抗體的新紀(jì)元?？寺】贵w的新紀(jì)元。1984年米爾斯坦和柯勒被授予年米爾斯坦和柯勒被授予諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。 骨髓瘤細(xì)胞（缺陷型）骨髓瘤細(xì)胞（缺陷型） 多種細(xì)胞多種細(xì)胞篩選篩選 雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞B B淋巴細(xì)胞（多種）淋巴細(xì)胞（多種）選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基特定抗原注射動(dòng)特定抗原注射動(dòng)物引起免疫反應(yīng)物引起免疫反應(yīng)加加PEG 克隆化培養(yǎng)，抗體檢測(cè)克隆化培養(yǎng)，抗體檢測(cè)篩選篩選產(chǎn)生特異性（所需）抗體的雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生特異性（所需）抗體的雜交瘤細(xì)胞