CD147和VEGF―C在肺鱗癌、腺癌中的表達(dá)與臨床意義.doc

1、CD147 和 VEGF C 在肺鱗癌、腺癌中的表達(dá)與臨床意義摘要 目的本研究旨在探討CDl47 和 VEGF-C在肺鱗癌、腺癌中的表達(dá)水平與臨床病理之間的聯(lián)系以及相互關(guān)系。方法運(yùn)用免疫組化的方法對(duì)57 例肺癌組織標(biāo)本進(jìn)行CDl47 和VEGF-C檢測(cè)。結(jié)果（1）57 例肺鱗癌、 腺癌中 CDl47 和 VEGF-C的陽性表達(dá)率分別為63.16%、66.67%。肺鱗癌組和腺癌組CDl47 和 VEGF-C表達(dá)無差異（ P0.05）。（ 2）肺鱗癌、腺癌中CDl47 和 VEGF-C表達(dá)與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P0.05）。（ 3）CDl47 與 VEGF C 的表達(dá)呈正相關(guān) （ x2=12.21

2、4，P400） 34 例。1.3 試劑兔抗人 CDl47 多克隆抗體， 兔抗人 VEGF-C多克隆抗體及PV-9000 二步法即用型試劑盒均從北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司購買。1.4 方法免疫組化染色采用PV-9000 二步法，按照說明書操作步驟如下：（ 1）石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化。（ 2）用 3%H2O2 去離子水孵育10min ，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。（ 3）根據(jù)一抗要求用微波加熱抗原修復(fù)。 （ 4）滴加一抗，濕盒中37兩小時(shí)，PBS沖洗，2min 3 次。（ 5）滴加試劑 1，室溫孵育 20min ，PBS沖洗 2min 3 次。（ 6）滴加試劑 2，室溫孵育 30min ，PBS沖洗

3、2min 3 次。（ 7）用 DAB 溶液顯色。（8）蘇木精復(fù)染后，脫水，透明，封片。用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照，用已知陽性對(duì)照片作陽性對(duì)照。1.5CD147 和 VEGF-C結(jié)果判定CDl47 以細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞質(zhì)呈黃色為陽性，VEGF-C陽性染色主要為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。每張切片隨機(jī)觀察 5 個(gè)高倍視野（400 倍），每個(gè)視野計(jì)數(shù)100 個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)。CDl47 綜合染色強(qiáng)度和陽性染色細(xì)胞占癌細(xì)胞總數(shù)的比例進(jìn)行判斷。 （ 1）按切片中細(xì)胞著色深淺評(píng)分：0 分細(xì)胞無著色；1 分為黃色； 2 分棕黃色； 3 分為棕褐色。（2）按陽性細(xì)胞數(shù)占癌細(xì)胞總數(shù)的比例評(píng)分：1

4、分為 50%且75%；4 分為 75%。?。?1）、（ 2）兩項(xiàng)的乘積為總積分： 0 3 分為陰性； 3 分且 6 分為（+）；6 分且 9 分為（ +）；9分為（ +）。VEGF-C陽性強(qiáng)度判斷標(biāo)準(zhǔn)：癌細(xì)胞，脈管內(nèi)皮細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色為染色陽性細(xì)胞。肺癌細(xì)胞VEGF-C表達(dá)強(qiáng)度：按癌細(xì)胞免疫組化染色著色深淺計(jì)分：0 分為無色， 1分為淡黃色， 2 分為棕黃色， 3 分為棕褐色。按陽性細(xì)胞所占百分比打分：陰性為0 分、陽性細(xì)胞51%為 3 分；染色強(qiáng)度與 -陽性細(xì)胞分比的乘積：02 分為， 3 4 分為 +、 5 7分+、 8 9 分+。染色結(jié)果有兩名病理醫(yī)師采用雙盲法評(píng)定，（ -/+ ）為低表達(dá)

5、，（ +/+）為高表達(dá)。1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用 SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料采用x2 檢驗(yàn)和相關(guān)分析，并計(jì)算Pearson 列聯(lián)系數(shù)， P0.05）。在不同的細(xì)胞分化程度之間CDl47 和 VEGF-C的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P0.05）。CDl47 和 VEGF-C在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性率分別為（24/29 ） 82.76%、 82.76%（24/29 ），顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組42.86%（12/28 ）、50.00%（ 14/28 ）（ P 2.2CD147 與 VEGF-C在肺鱗癌、腺癌中的表達(dá)與臨床特征的關(guān)系CD147 和 VEGF-C在肺癌中的陽性表達(dá)與患者的年齡

6、、 性別及有無吸煙（吸煙指數(shù) 400）均無明顯地相關(guān)性。在 I+期組 CDl47和 VEGF-C的陽性率分別為 48.72%（19/39 ）、53.85%（21/39 ）；在 +期組分別為 94.44%（ 17/18 ）、 94.44%（ 17/18 ）。CDl47 和 VEGF-C在肺鱗癌、腺癌中的表達(dá)與腫瘤的臨床分期有密切關(guān)系（ P0.01）。見表 2。2.3CD147 和 VEGF-C在肺鱗癌、腺癌中的表達(dá)的相互關(guān)系57 例患者中， 36 例 CDl47 陽性表達(dá)中同時(shí)有 VEGF-C陽性表達(dá) 30 例；21 例 CDl47 陰性患者中，有 8 例 VEGF-C陽性表達(dá)。CDl47與 V

7、EGF-C的表達(dá)呈正相關(guān) （ X2=12.214，P0.01）。見表 3。3.討論肺癌與其他實(shí)體腫瘤一樣具有侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的生物學(xué)特性，而惡性腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移是多因素參與的交聯(lián)式多步驟反應(yīng)的復(fù)雜過程。包括原發(fā)腫瘤浸潤(rùn)、 基底膜降解、腫瘤細(xì)胞進(jìn)出血管和腫瘤細(xì)胞對(duì)靶組織侵襲等環(huán)節(jié)。在這一復(fù)雜的過程中，細(xì)胞外基質(zhì)的降解、腫瘤血管及淋巴管的生成對(duì)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移起著至關(guān)重要的作用。近年來對(duì)CDl47 與腫瘤的關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)，CDl47 廣泛表達(dá)于人體多種細(xì)胞，在膀胱癌、肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、淋巴瘤，結(jié)直腸癌，子宮內(nèi)膜癌等多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)增加。CDl47 可調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子而對(duì)腫瘤的血管

8、生成有促進(jìn)作用，也可以刺激成纖維細(xì)胞產(chǎn)生金屬基質(zhì)蛋白酶（MMP2 、 MMP9等），其通過水解型膠原破壞腫瘤細(xì)胞周圍的基底膜和調(diào)節(jié) VEGF而影響腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、 浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。 Zheng 等在對(duì)胃癌的研究中發(fā)現(xiàn)， CD147 表達(dá)增強(qiáng)具有促進(jìn)血管生成及VEGF表達(dá)的作用。黎明等在對(duì)膀胱移行細(xì)胞癌的研究中發(fā)現(xiàn)，多數(shù)患者都存在CD147 和 VEGF共同表達(dá)，且兩者呈正相關(guān)（ r=0.406 ，P0.01）。Tang 等在共培養(yǎng)的乳腺癌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中， CD147 過表達(dá)時(shí) VEGF的表達(dá)上調(diào)；抑制 CD147的表達(dá)、中和CD147 蛋白的活性或抑制MMP 的活性，都會(huì)使 VEGF的表達(dá)受到

9、抑制。 Tang 等還對(duì) VEGF產(chǎn)生過程中可能的信號(hào)通路如 P13K-Akt、MAPK、JUN、p38 激酶進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)在 MDA-MB-231 乳腺癌細(xì)胞系中，過表達(dá)的CDl47 只能刺激 Akt 和 MAPK 的磷酸化，而不能刺激JUN 和 p38 激酶的磷酸化。而抑制 CDl47 的表達(dá)會(huì)抑制Akt 和 MAPK 的磷酸化。這些結(jié)果表明在腫瘤細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中，CDl47 是通過P13K-Akt 途徑調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)。VEGF-C是 VEGF家族成員之一，是特異的促淋巴管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和腫瘤血管生成標(biāo)志物，在促進(jìn)腫瘤淋巴管和血管生成以及腫瘤轉(zhuǎn)移起重要作用。其受體有VEGFR-2（

10、FLK-1）和 VGEFR-3（fit-4 ）。 VEGF-C對(duì) VEGFR-3（ fit-4 ）有更高的親和力，與之優(yōu)先結(jié)合， VEGF-C與 VEGFR-3結(jié)合后通過 MEK/ERK和 P13K-Akt 途徑引起淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞增生， VEGF-C蛋白水解后的成熟形式還可結(jié)合并激活 VEGFR-2，作用于血管、淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞。 近年來許多研究表明多種人類腫瘤表達(dá)VEGF-C，大部分中 VEGF-C表達(dá)上調(diào)，且與局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法對(duì)CDl47 在 57 例肺鱗癌、腺癌中的表達(dá)進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示 CDl47 和 VEGF-C在肺鱗癌和腺癌中高表達(dá)，陽性率分別為58.

11、70%（ 27/46 ）、81.82%（ 9/11 ）和 60.87%（28/46 ）、 90.91%（ 10/11 ），二者之間無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 CDl47 和 VEGF-C在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽性率分別為 82.76%（ 24/29 ）、82.76%（24/29 ），顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組 42.86%（ 12/28 ）、50.00%（ 14/28 ）（ P0.05）；TNM分期 +期組的陽性率分別為 94.44%（17/18 ）、 94.44% （17/18 ）顯著高于 I+期組的 48.72%（ 19/39 ）、 53.85%（ 21/39 ）。 CDl47 和 VEGF-C的高表達(dá)與

12、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM 分期密切相關(guān)，而與患者年齡、性別、吸煙等臨床因素及腫瘤組織類型、細(xì)胞分化程度無明顯的相關(guān)性。本研究結(jié)果顯示有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者和腫瘤后期的患者CDl47 和VEGF-C的陽性表達(dá)率明顯增高，說明CDl47 和 VEGF-C與肺鱗癌、腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移能力正相關(guān)。與王莉等對(duì)CDl47 的研究及陳蘇娟等對(duì)VEGF-C的研究結(jié)果一致。目前國(guó)內(nèi)對(duì)CDl47和 VEGF-C的相互作用尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。黎明等在對(duì)膀胱移行細(xì)胞癌的研究中發(fā)現(xiàn)，多數(shù)患者都存在CD147 和 VEGF共同表達(dá)，且兩者呈正相關(guān)。Tang 等試驗(yàn)表明， CDl47 通過 P13K-AKT途徑調(diào)節(jié) VEGF的表達(dá)，從而加速腫瘤血管的生成。 VEGF-C是 VEGF家族成員之一，可以調(diào)節(jié)腫瘤血管及淋巴管的生成，其主要作用是促進(jìn)腫瘤淋巴管的生成。在本研究中，筆者發(fā)現(xiàn)在肺鱗癌、腺癌中出現(xiàn)CDl47和 VEGF-C聯(lián)合表達(dá)的比例較高，在36 例 CDl47 陽性的病例中有 30 例 VEGF-C表達(dá)陽性，二者表現(xiàn)出明顯的正相關(guān)（ P0.01）