基因工程原理第七章課件

1、基因工程原理第七章1第七章第七章 動(dòng)物細(xì)胞基因操作動(dòng)物細(xì)胞基因操作基因工程原理第七章2動(dòng)物細(xì)胞基因操作動(dòng)物細(xì)胞基因操作n動(dòng)物細(xì)胞基因操作的必須性動(dòng)物細(xì)胞基因操作的必須性: :可進(jìn)行細(xì)菌和真菌可進(jìn)行細(xì)菌和真菌細(xì)胞所無法進(jìn)行的真正的翻譯后修飾細(xì)胞所無法進(jìn)行的真正的翻譯后修飾n載體載體 1) 1) 非復(fù)制質(zhì)粒載體非復(fù)制質(zhì)粒載體 2) 2) 帶有病毒復(fù)制子的質(zhì)粒帶有病毒復(fù)制子的質(zhì)粒 3) 3) 病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)載體病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)載體n細(xì)胞：與細(xì)胞本身特性、載體、轉(zhuǎn)移、應(yīng)用相細(xì)胞：與細(xì)胞本身特性、載體、轉(zhuǎn)移、應(yīng)用相關(guān)關(guān)n轉(zhuǎn)移：轉(zhuǎn)移技術(shù)、瞬時(shí)與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染、共轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)移：轉(zhuǎn)移技術(shù)、瞬時(shí)與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染、共轉(zhuǎn)染n應(yīng)用：細(xì)胞研究、蛋白

2、表達(dá)、體內(nèi)基因治療、應(yīng)用：細(xì)胞研究、蛋白表達(dá)、體內(nèi)基因治療、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物轉(zhuǎn)基因動(dòng)物基因工程原理第七章3第一節(jié)第一節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞動(dòng)物細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)移技術(shù)轉(zhuǎn)移技術(shù)基因工程原理第七章4動(dòng)物細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移的途徑動(dòng)物細(xì)胞基因轉(zhuǎn)移的途徑=轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)基因技術(shù)基因技術(shù)n直接直接DNADNA轉(zhuǎn)移：外源轉(zhuǎn)移：外源DNADNA通過物理轉(zhuǎn)化直通過物理轉(zhuǎn)化直接進(jìn)入細(xì)胞接進(jìn)入細(xì)胞 如顯微注射、含如顯微注射、含DNADNA顆粒轟擊、顆粒轟擊、n轉(zhuǎn)染：化學(xué)轉(zhuǎn)染技術(shù)、脂質(zhì)體、電穿孔轉(zhuǎn)染：化學(xué)轉(zhuǎn)染技術(shù)、脂質(zhì)體、電穿孔n轉(zhuǎn)導(dǎo)：通過動(dòng)物病毒包裹，利用病毒可轉(zhuǎn)導(dǎo)：通過動(dòng)物病毒包裹，利用病毒可以自然感染細(xì)胞并將自身核酸分子轉(zhuǎn)入以自然感染細(xì)胞并將自身核

3、酸分子轉(zhuǎn)入細(xì)胞的能力。細(xì)胞的能力?；蚬こ淘淼谄哒?轉(zhuǎn)染技術(shù)轉(zhuǎn)染技術(shù)n化學(xué)轉(zhuǎn)染技術(shù)化學(xué)轉(zhuǎn)染技術(shù)( (利用胞吞作用利用胞吞作用) )1) DNA/1) DNA/磷酸鈣共沉淀法磷酸鈣共沉淀法 適用于單層生長細(xì)胞，不適用于懸浮或成團(tuán)生長的細(xì)胞適用于單層生長細(xì)胞，不適用于懸浮或成團(tuán)生長的細(xì)胞 對(duì)某些細(xì)胞有毒性，難以轉(zhuǎn)染對(duì)某些細(xì)胞有毒性，難以轉(zhuǎn)染2) 2) 二乙氨乙基葡聚糖二乙氨乙基葡聚糖(DEAE-dextran)(DEAE-dextran) 可溶性聚陽離子制劑，不能用于形成穩(wěn)定的細(xì)胞系可溶性聚陽離子制劑，不能用于形成穩(wěn)定的細(xì)胞系n脂質(zhì)體脂質(zhì)體( (利用胞吞作用利用胞吞作用) ) 低毒性，易操作，效

4、率高，適用細(xì)胞類型多，甚至可轉(zhuǎn)染低毒性，易操作，效率高，適用細(xì)胞類型多，甚至可轉(zhuǎn)染活體細(xì)胞活體細(xì)胞n電穿孔電穿孔( (利用電脈沖在細(xì)胞膜上形成瞬時(shí)的納米大小的孔）利用電脈沖在細(xì)胞膜上形成瞬時(shí)的納米大小的孔）基因工程原理第七章6轉(zhuǎn)移后轉(zhuǎn)移后DNADNA的命運(yùn)的命運(yùn)n具備在宿主細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮功能的復(fù)制起始子，具備在宿主細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮功能的復(fù)制起始子，可以穩(wěn)定復(fù)制可以穩(wěn)定復(fù)制( (穩(wěn)定轉(zhuǎn)染穩(wěn)定轉(zhuǎn)染) )n可以整合到基因組可以整合到基因組DNADNA上，穩(wěn)定復(fù)制上，穩(wěn)定復(fù)制( (穩(wěn)定穩(wěn)定轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染) )n不具備在宿主細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮功能，也沒有整不具備在宿主細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮功能，也沒有整合到基因組合到基因組DNADNA上，

5、瞬時(shí)保留上，瞬時(shí)保留( (瞬時(shí)轉(zhuǎn)染）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染）nDNADNA轉(zhuǎn)入細(xì)胞的效率遠(yuǎn)高于轉(zhuǎn)入細(xì)胞的效率遠(yuǎn)高于DNADNA整合的效率整合的效率n兩個(gè)物理上不相連的基因可以發(fā)生共轉(zhuǎn)染，兩個(gè)物理上不相連的基因可以發(fā)生共轉(zhuǎn)染，甚至可以都整合到基因組甚至可以都整合到基因組DNADNA上上基因工程原理第七章7第二節(jié)第二節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞載體動(dòng)物細(xì)胞載體基因工程原理第七章8動(dòng)物細(xì)胞載體動(dòng)物細(xì)胞載體n非復(fù)制型載體非復(fù)制型載體 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的載體( (啟動(dòng)子功能分析的載體啟動(dòng)子功能分析的載體) ) 選擇標(biāo)記選擇標(biāo)記DNADNAn帶有病毒復(fù)制子的質(zhì)粒帶有病毒復(fù)制子的質(zhì)粒 SV40SV40、BPVBPV、EBVEBVn

6、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)載體病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)載體 腺病毒、桿狀病毒、牛痘病毒、腺病毒、桿狀病毒、牛痘病毒、LentivirusLentivirus等等基因工程原理第七章9瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的非復(fù)制型載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的非復(fù)制型載體n載體無法復(fù)制，也不載體無法復(fù)制，也不整合于基因組上整合于基因組上n在宿主細(xì)胞中往往只在宿主細(xì)胞中往往只能保持能保持1-2d1-2d的穩(wěn)定的穩(wěn)定n可以進(jìn)行基因的表達(dá)可以進(jìn)行基因的表達(dá)n載體上往往具有報(bào)告載體上往往具有報(bào)告基因，能夠報(bào)告表達(dá)基因，能夠報(bào)告表達(dá)的發(fā)生的發(fā)生基因工程原理第七章10啟動(dòng)子功能分析與報(bào)告基因啟動(dòng)子功能分析與報(bào)告基因基因工程原理第七章11選擇標(biāo)記基因選擇標(biāo)記基因n未經(jīng)克隆的含未經(jīng)克隆的含

7、TKTK基因的外源基因的外源DNADNA使一些攝使一些攝入細(xì)胞具有了入細(xì)胞具有了在選擇培養(yǎng)基在選擇培養(yǎng)基上生存的能力，上生存的能力，這樣的基因稱這樣的基因稱為選擇性標(biāo)記為選擇性標(biāo)記基因基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)TK 胸苷激酶胸苷激酶基因工程原理第七章12核苷酸從頭合成和補(bǔ)救途徑：編碼核苷酸從頭合成和補(bǔ)救途徑：編碼補(bǔ)救途徑的酶的基因補(bǔ)救途徑的酶的基因(Hprt,Tk)可以可以用作選擇標(biāo)記用作選擇標(biāo)記基因工程原理第七章13共轉(zhuǎn)化與選擇標(biāo)記共轉(zhuǎn)化與選擇標(biāo)記n兩個(gè)物理上不相連的基因通過共轉(zhuǎn)染，共同整兩個(gè)物理上不相連的基因通過共轉(zhuǎn)染，共同整合到基因組中的現(xiàn)象合到基因組中的現(xiàn)象n這是由于發(fā)生了整合之前的這是由于

8、發(fā)生了整合之前的DNADNA融合融合n只要能同時(shí)轉(zhuǎn)入一個(gè)選擇標(biāo)記基因，共轉(zhuǎn)化現(xiàn)只要能同時(shí)轉(zhuǎn)入一個(gè)選擇標(biāo)記基因，共轉(zhuǎn)化現(xiàn)象就可以使任何外源象就可以使任何外源DNADNA序列穩(wěn)定轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物序列穩(wěn)定轉(zhuǎn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞n根據(jù)標(biāo)記基因篩選方法，選擇標(biāo)記可以分為：根據(jù)標(biāo)記基因篩選方法，選擇標(biāo)記可以分為：內(nèi)源性選擇標(biāo)記、顯性選擇標(biāo)記、擴(kuò)增選擇標(biāo)內(nèi)源性選擇標(biāo)記、顯性選擇標(biāo)記、擴(kuò)增選擇標(biāo)記記基因工程原理第七章14內(nèi)源性選擇標(biāo)記內(nèi)源性選擇標(biāo)記n來自于動(dòng)物細(xì)胞來自于動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的標(biāo)記基因，內(nèi)的標(biāo)記基因，大多數(shù)涉及與冗大多數(shù)涉及與冗余內(nèi)源核苷酸生余內(nèi)源核苷酸生物合成途徑物合成途徑n內(nèi)源性選擇標(biāo)記內(nèi)源性選擇標(biāo)記的缺點(diǎn)

9、：只能用的缺點(diǎn)：只能用于那些對(duì)應(yīng)基因于那些對(duì)應(yīng)基因不具有功能的突不具有功能的突變細(xì)胞。變細(xì)胞?；蚬こ淘淼谄哒?5顯性選擇標(biāo)記顯性選擇標(biāo)記n顯性選擇標(biāo)記：往往顯性選擇標(biāo)記：往往來自于細(xì)菌來自于細(xì)菌( (外源外源) )，因此其所提供的表型因此其所提供的表型對(duì)于細(xì)胞來說是全新對(duì)于細(xì)胞來說是全新的，可用于任何細(xì)胞。的，可用于任何細(xì)胞。這些標(biāo)記通常是細(xì)菌這些標(biāo)記通常是細(xì)菌的抗藥基因，因此陽的抗藥基因，因此陽性細(xì)胞可以在適當(dāng)?shù)男约?xì)胞可以在適當(dāng)?shù)乃幬餄舛鹊呐囵B(yǎng)基上藥物濃度的培養(yǎng)基上進(jìn)行篩選。進(jìn)行篩選?；蚬こ淘淼谄哒?6擴(kuò)增選擇標(biāo)記擴(kuò)增選擇標(biāo)記n當(dāng)動(dòng)物細(xì)胞暴露在某當(dāng)動(dòng)物細(xì)胞暴露在某種藥物的有毒濃度中，

10、種藥物的有毒濃度中，少數(shù)個(gè)別細(xì)胞由于自少數(shù)個(gè)別細(xì)胞由于自發(fā)的、擴(kuò)增性的抗藥發(fā)的、擴(kuò)增性的抗藥突變而存活，這樣的突變而存活，這樣的DNADNA上的擴(kuò)增性標(biāo)記，上的擴(kuò)增性標(biāo)記，稱為擴(kuò)增選擇標(biāo)記稱為擴(kuò)增選擇標(biāo)記n出現(xiàn)擴(kuò)增選擇性標(biāo)記出現(xiàn)擴(kuò)增選擇性標(biāo)記的細(xì)胞栽種群中是隨的細(xì)胞栽種群中是隨機(jī)出現(xiàn)的，可進(jìn)行高機(jī)出現(xiàn)的，可進(jìn)行高濃度抗藥性的篩選濃度抗藥性的篩選n側(cè)翼側(cè)翼DNADNA序列可隨標(biāo)序列可隨標(biāo)記基因一起擴(kuò)增記基因一起擴(kuò)增氨基蝶呤氨基蝶呤DHFR葉酸葉酸基因工程原理第七章17擴(kuò)增選擇標(biāo)記擴(kuò)增選擇標(biāo)記n擴(kuò)增選擇擴(kuò)增選擇標(biāo)記也常標(biāo)記也?？捎糜趦?nèi)可用于內(nèi)源或顯性源或顯性選擇標(biāo)記，選擇標(biāo)記，但常常用但常常用于擴(kuò)

11、增選于擴(kuò)增選擇的藥物擇的藥物不同不同基因工程原理第七章18擴(kuò)增選擇標(biāo)記常用于外源基因擴(kuò)增選擇標(biāo)記常用于外源基因的高效表達(dá)的高效表達(dá)基因工程原理第七章19復(fù)制子載體：帶有病毒復(fù)制子復(fù)制子載體：帶有病毒復(fù)制子的載體的載體n病毒基因組具有在宿主細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立復(fù)制的能力病毒基因組具有在宿主細(xì)胞內(nèi)獨(dú)立復(fù)制的能力n可能造成溶解性感染，使宿主細(xì)胞裂解，如可能造成溶解性感染，使宿主細(xì)胞裂解，如SV40SV40，由于宿主細(xì)胞的裂解，實(shí)現(xiàn)的是一種高，由于宿主細(xì)胞的裂解，實(shí)現(xiàn)的是一種高水平瞬時(shí)表達(dá)水平瞬時(shí)表達(dá)n可能造成潛伏性感染，從而并不影響宿主細(xì)胞可能造成潛伏性感染，從而并不影響宿主細(xì)胞生長，實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，如生長，實(shí)

12、現(xiàn)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，如EBVEBV和和PBVPBV，其中，其中EBVEBV載體相對(duì)于載體相對(duì)于PBVPBV載體復(fù)制更加穩(wěn)定載體復(fù)制更加穩(wěn)定基因工程原理第七章20SV40SV40（猴多瘤病毒（猴多瘤病毒DNA）基因工程原理第七章21病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)載體病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)載體n外源外源DNADNA分子包入病毒粒子分子包入病毒粒子( (通過連接或同源重通過連接或同源重組的方式插入病毒載體），后者吸附到細(xì)胞表組的方式插入病毒載體），后者吸附到細(xì)胞表面從而進(jìn)入細(xì)胞面從而進(jìn)入細(xì)胞n效率很高，而且具有高效復(fù)制與高水平表達(dá)基效率很高，而且具有高效復(fù)制與高水平表達(dá)基因的潛能因的潛能n不僅可用于培養(yǎng)細(xì)胞，也可用于活體細(xì)胞不僅可用于培養(yǎng)細(xì)胞

13、，也可用于活體細(xì)胞n腺病毒、桿狀病毒、牛痘病毒、腺病毒、桿狀病毒、牛痘病毒、LentivirusLentivirus等等基因工程原理第七章22可復(fù)制病毒載體與復(fù)制缺陷型可復(fù)制病毒載體與復(fù)制缺陷型病毒載體病毒載體n當(dāng)轉(zhuǎn)移基因插入到基因組中或它所替換的基因當(dāng)轉(zhuǎn)移基因插入到基因組中或它所替換的基因?qū)τ谠谒拗骷?xì)胞中的感染周期不是必需時(shí)，載對(duì)于在宿主細(xì)胞中的感染周期不是必需時(shí)，載體可以獨(dú)立的增殖，稱為可復(fù)制的或不依賴輔體可以獨(dú)立的增殖，稱為可復(fù)制的或不依賴輔助病毒載體。助病毒載體。n當(dāng)轉(zhuǎn)入基因替換了病毒的必需基因時(shí)，這樣的當(dāng)轉(zhuǎn)入基因替換了病毒的必需基因時(shí)，這樣的載體則稱為復(fù)制缺陷型或輔助病毒依賴性載體。

14、載體則稱為復(fù)制缺陷型或輔助病毒依賴性載體。因?yàn)樗鼈兪サ墓δ苄枰ㄟ^共轉(zhuǎn)入攜帶有載因?yàn)樗鼈兪サ墓δ苄枰ㄟ^共轉(zhuǎn)入攜帶有載體所缺失基因的輔助病毒來提供。體所缺失基因的輔助病毒來提供?；蚬こ淘淼谄哒?3可復(fù)制病可復(fù)制病毒載體與毒載體與復(fù)制缺陷復(fù)制缺陷型病毒載型病毒載體體: :以桿以桿狀病毒為狀病毒為例例基因工程原理第七章24無內(nèi)含載體無內(nèi)含載體n不具有所有病毒編碼序列的載體，只含有包裝不具有所有病毒編碼序列的載體，只含有包裝和基因組擴(kuò)增所必需的順式作用元件。和基因組擴(kuò)增所必需的順式作用元件。n優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn): : 1) 1) 可容納高容量的外源可容納高容量的外源DNADNA 2) 2) 不產(chǎn)生病毒

15、基因產(chǎn)物，對(duì)細(xì)胞無毒性不產(chǎn)生病毒基因產(chǎn)物，對(duì)細(xì)胞無毒性基因工程原理第七章25第三節(jié)第三節(jié) 細(xì)胞與應(yīng)用細(xì)胞與應(yīng)用基因工程原理第七章26正常動(dòng)物細(xì)胞生長特性正常動(dòng)物細(xì)胞生長特性基因工程原理第七章27宿主動(dòng)物細(xì)胞所需特性宿主動(dòng)物細(xì)胞所需特性基因工程原理第七章28正常細(xì)胞生長特性和宿主細(xì)胞所需特性正常細(xì)胞生長特性和宿主細(xì)胞所需特性上的差異某種程度上造成了各種表達(dá)系上的差異某種程度上造成了各種表達(dá)系統(tǒng)對(duì)宿主細(xì)胞選擇和應(yīng)用的差異統(tǒng)對(duì)宿主細(xì)胞選擇和應(yīng)用的差異基因工程原理第七章29第四節(jié)第四節(jié) 動(dòng)物基因操作動(dòng)物基因操作基因工程原理第七章30動(dòng)物基因工程動(dòng)物基因工程動(dòng)物基因工程動(dòng)物基因工程動(dòng)物基因工程動(dòng)物基因工

16、程動(dòng)物細(xì)胞基因工程動(dòng)物細(xì)胞基因工程轉(zhuǎn)基因動(dòng)物個(gè)體轉(zhuǎn)基因動(dòng)物個(gè)體動(dòng)物工程細(xì)胞動(dòng)物工程細(xì)胞動(dòng)物遺傳性狀改良動(dòng)物遺傳性狀改良藥物篩選研究評(píng)價(jià)模型藥物篩選研究評(píng)價(jià)模型人體基因治療人體基因治療蛋白多肽物質(zhì)大規(guī)模生產(chǎn)蛋白多肽物質(zhì)大規(guī)模生產(chǎn)藥物篩選研究評(píng)價(jià)模型藥物篩選研究評(píng)價(jià)模型基因工程原理第七章31動(dòng)物基因工程動(dòng)物基因工程n哺乳動(dòng)物哺乳動(dòng)物 轉(zhuǎn)基因小鼠轉(zhuǎn)基因小鼠 胚胎干細(xì)胞胚胎干細(xì)胞 同源重組同源重組 基因?qū)ぐ谢驅(qū)ぐ?克隆羊克隆羊 核移植核移植n其他脊椎動(dòng)物其他脊椎動(dòng)物 爪蟾爪蟾n無脊椎動(dòng)物無脊椎動(dòng)物 果蠅果蠅基因工程原理第七章32產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物的方法產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物的方法n體細(xì)胞體細(xì)胞- -卵卵

17、細(xì)胞核替細(xì)胞核替換換n顯微注射顯微注射受精卵受精卵n反病毒侵反病毒侵染胚胎干染胚胎干細(xì)胞或早細(xì)胞或早期胚期胚基因工程原理第七章33轉(zhuǎn)基因小鼠轉(zhuǎn)基因小鼠n大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞在發(fā)育能力上受到限制，不能大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞在發(fā)育能力上受到限制，不能產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：分化的細(xì)胞無法完全去分化產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：分化的細(xì)胞無法完全去分化和重復(fù)發(fā)育和重復(fù)發(fā)育n動(dòng)物中實(shí)現(xiàn)生殖細(xì)胞系轉(zhuǎn)化的唯一途徑就是在動(dòng)物中實(shí)現(xiàn)生殖細(xì)胞系轉(zhuǎn)化的唯一途徑就是在形成生殖細(xì)胞系的發(fā)育階段之前把形成生殖細(xì)胞系的發(fā)育階段之前把DNADNA導(dǎo)入全導(dǎo)入全能細(xì)胞能細(xì)胞n胚胎干細(xì)胞胚胎干細(xì)胞(Es Cells)(Es Cells)是這樣一個(gè)動(dòng)物體特殊是這樣一

18、個(gè)動(dòng)物體特殊的全能細(xì)胞的全能細(xì)胞基因工程原理第七章34轉(zhuǎn)基因小鼠中的轉(zhuǎn)基因小鼠中的DNADNA轉(zhuǎn)移方法轉(zhuǎn)移方法n直接顯微注射：注入剛受精卵細(xì)胞的直接顯微注射：注入剛受精卵細(xì)胞的雄或雌性原核中雄或雌性原核中n重組反轉(zhuǎn)錄病毒：不適宜產(chǎn)生完全的重組反轉(zhuǎn)錄病毒：不適宜產(chǎn)生完全的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，可用于形成胚轉(zhuǎn)基因部轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，可用于形成胚轉(zhuǎn)基因部分分nEsEs細(xì)胞轉(zhuǎn)染：可利用標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記進(jìn)行篩細(xì)胞轉(zhuǎn)染：可利用標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)記進(jìn)行篩選選 基因工程原理第七章35胚胎干細(xì)胞胚胎干細(xì)胞(Es Cells)(Es Cells)n取自生殖細(xì)胞發(fā)育前的早期胚取自生殖細(xì)胞發(fā)育前的早期胚n具有發(fā)育成動(dòng)物的所有組織的能力具有發(fā)育成動(dòng)物的所

19、有組織的能力n受同源重組影響顯著，可以用于基因?qū)な芡粗亟M影響顯著，可以用于基因?qū)ぐ校纯捎猛庠窗?，即可用外源DNA的同源片段精確地的同源片段精確地替換內(nèi)源基因組的片段。替換內(nèi)源基因組的片段。基因工程原理第七章36EsEs細(xì)胞的基因?qū)ぐ屑?xì)胞的基因?qū)ぐ衝外源外源DNADNA的同源片段精確替換內(nèi)源基因組片的同源片段精確替換內(nèi)源基因組片段的過程段的過程n由于同源重組的幾率遠(yuǎn)低于隨機(jī)整合，進(jìn)行由于同源重組的幾率遠(yuǎn)低于隨機(jī)整合，進(jìn)行尋靶的細(xì)胞需要有較高的同源重組能力尋靶的細(xì)胞需要有較高的同源重組能力n體外操作的多能性、可操作性以及同源重組體外操作的多能性、可操作性以及同源重組的能力使的能力使EsEs細(xì)胞成為唯一適合于產(chǎn)生定向突細(xì)胞成為唯一適合于產(chǎn)生定向突變小鼠的細(xì)胞，即在每個(gè)細(xì)胞中攜帶有相同變小鼠的細(xì)胞，即在每個(gè)細(xì)胞中攜帶有相同突變并能將