流式biolegend

1、流式抗體新選擇流式抗體新選擇 -Biolegend-Biolegend公司公司達(dá)科為公司技術(shù)達(dá)科為公司技術(shù) 賈曉俊賈曉俊主要內(nèi)容主要內(nèi)容流式細(xì)胞術(shù)的基本概念v 流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry, 簡稱FCM）是一種可以快速快速、準(zhǔn)確準(zhǔn)確、客觀客觀，并且同時(shí)檢測單個(gè)單個(gè)微粒（通常是細(xì)胞）的多項(xiàng)多項(xiàng)特性，并加以定量定量的技術(shù)，同時(shí)可以對特定群體加以分選分選v 研究對象為生物顆粒顆粒，如各種細(xì)胞細(xì)胞、微生物微生物及人工合成微球微球等v 研究的微粒特性包括多種物理物理及生物學(xué)特征特征，并加以定量定量液流系統(tǒng) 光學(xué)系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)流式細(xì)胞儀及其結(jié)構(gòu)前向散射光（FSC）：反映細(xì)胞相對大小側(cè)向角散射

2、光（SSC）：反映細(xì)胞粒度及細(xì)胞內(nèi)相對復(fù)雜性前向角檢測器前向角檢測器 FSCLaser光學(xué)系統(tǒng)-散射光信號測向角檢測器測向角檢測器 sSC激光光源SSCFSC外周血細(xì)胞散射光雙參數(shù)點(diǎn)圖全血溶紅后流式檢測圖全血溶紅后流式檢測圖不同的熒光染料標(biāo)記不同的細(xì)胞抗原。不同的熒光染料在受到激發(fā)光激發(fā)后發(fā)射出不同波長的熒光。根據(jù)熒光波長的不同可區(qū)不同的細(xì)胞抗原。根據(jù)熒光信號的強(qiáng)弱可反映細(xì)胞抗原的表達(dá)含量。FITCPE-Cy5PE光學(xué)系統(tǒng)-熒光素?zé)晒庑盘枂畏肿訜晒馑貑畏肿訜晒馑伛詈系膹?fù)合熒光素分子耦合的復(fù)合熒光素分子新型的熒光素樣熒光物質(zhì)新型的熒光素樣熒光物質(zhì)QdotsQdots熒光素種類熒光染料與流式儀器搭

3、配圖熒光染料與流式儀器搭配圖此圖為Biolegend公司提供，供流式多色配色參考使用CD3-FITCCD19-PEPI - Fluorescence# Evnts正常正常G0/G1G0/G1期細(xì)胞期細(xì)胞流式數(shù)據(jù)顯示直方圖直方圖 ( Histogram )( Histogram )二維點(diǎn)圖二維點(diǎn)圖(Dot Plot)(Dot Plot)三維圖（三維圖（3D Plot3D Plot）等）等直方圖直方圖 ( Histogram ) ( Histogram ) 二維點(diǎn)圖二維點(diǎn)圖(Dot Plot) (Dot Plot) 凋亡細(xì)胞峰凋亡細(xì)胞峰 等高線圖等高線圖(Contour Plot)(Contour

4、 Plot) 密度圖密度圖 (Density)(Density)主要內(nèi)容主要內(nèi)容 粘附分子CD分子及相關(guān)蛋白共刺激分子 先天免疫類MHC抗體細(xì)胞因子、趨化因子及其受體核轉(zhuǎn)錄因子T細(xì)胞受體T細(xì)胞（細(xì)胞（TCRs, Th, Treg等）等）B B 細(xì)胞（細(xì)胞（BregBreg等）等）樹突狀細(xì)胞粒細(xì)胞（嗜酸性、嗜中性、嗜堿性）單核/巨噬細(xì)胞NK細(xì)胞干細(xì)胞 .用于研究流式抗體應(yīng)用主要領(lǐng)域目前研究熱點(diǎn)NK.Th1/Th2細(xì)胞的鑒定細(xì)胞的鑒定Th1Th1類細(xì)胞特征性分子為類細(xì)胞特征性分子為IL-2IL-2、 IFN- IFN-，主要參與機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)。，主要參與機(jī)體的細(xì)胞免疫反應(yīng)。Th2Th2類細(xì)胞特

5、征性分子為類細(xì)胞特征性分子為IL-4IL-4、IL-10IL-10，主要參與，主要參與 機(jī)體的體液免疫反應(yīng)。機(jī)體的體液免疫反應(yīng)。正常狀態(tài)下，正常狀態(tài)下，Th1Th1和和Th2Th2類細(xì)胞在機(jī)體處于一種平衡狀態(tài)，當(dāng)機(jī)體發(fā)生病變（腫瘤、自身免疫類細(xì)胞在機(jī)體處于一種平衡狀態(tài)，當(dāng)機(jī)體發(fā)生病變（腫瘤、自身免疫性疾病、微生物感染、移植排斥）時(shí)，其比例會發(fā)變化性疾病、微生物感染、移植排斥）時(shí)，其比例會發(fā)變化。Alexa Fluor 700 Anti-human IFN-PerCP/Cy5.5 Anti-human IL-2PE Anti-human CD3PMA+ionomycin刺激人外周血細(xì)胞6小時(shí)后I

6、FN-（克隆號：B27）和IL-2（克隆號：MQ1-17H12）染色流式分析圖Th1 Th1 細(xì)胞的鑒定細(xì)胞的鑒定-分泌人分泌人IL-2IL-2、 IFN-的細(xì)胞的細(xì)胞 IFN- Alexa Fluor 700 IL-2 PerCP/Cy5.5 Th1 Th1 細(xì)胞的鑒定細(xì)胞的鑒定-分泌分泌IL-2IL-2、 IFN IFN-的細(xì)的細(xì)胞胞PE Anti-mouse IL-4PE/Cy7 Anti-mouse CD4PE Anti-mouse IL-10PE/Cy5 Anti-mouse CD4 Th2 Th2 細(xì)胞的鑒定細(xì)胞的鑒定-分泌分泌IL-4IL-4、 IL-10IL-10的細(xì)胞的細(xì)胞I

7、L-4 PEIL-10 PEPMA+ionomycin刺激小鼠外周血細(xì)胞6小時(shí)后IL-10（克隆號：JESS-16E3）和IL-4（克隆號:11B11）染色流式分析圖 Th17 Th17 細(xì)胞的鑒定細(xì)胞的鑒定-分泌分泌IL-17IL-17的的T T細(xì)胞細(xì)胞Th17細(xì)胞主要一群與IL-23相關(guān)且能分泌IL-17的新的Th亞群。在介導(dǎo)機(jī)體的炎癥反應(yīng)方面有重要作用。Anti-human IL-17 Alexa Fuor 647/CD3 FITC/CD4 PE cocktail（Cat#339401）包含所需全部試劑：抗體、同型對包含所需全部試劑：抗體、同型對照、固定劑、破膜劑照、固定劑、破膜劑操作簡

8、單方便！操作簡單方便！CD3 FITCPMA+ionomycin刺激人外周血細(xì)胞6小時(shí)后Th17細(xì)胞染色流式分析圖一步法試劑盒 Th17 Th17 細(xì)胞的鑒定細(xì)胞的鑒定-分泌分泌IL-17IL-17的的T T細(xì)胞細(xì)胞TregTreg細(xì)胞是CD4+/CD25+/FOXP3+ 陽性的T細(xì)胞，來源于脾臟，占外周血CD4細(xì)胞的2-10%。這類細(xì)胞參與機(jī)體的免疫應(yīng)答與免疫耐受的調(diào)控，在腫瘤免疫及移植免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。目前，Treg細(xì)胞已越來越多的成為一項(xiàng)常規(guī)的臨床檢測指標(biāo)。 Treg Treg細(xì)胞的鑒定細(xì)胞的鑒定-表達(dá)表達(dá)FOXP3FOXP3核轉(zhuǎn)錄因子核轉(zhuǎn)錄因子Alexa Fluor 488 ant

9、i-human FOXP3/CD25 PE/CD4 PerCP antibody cocktail (FOXP3 ,Clone 206D)一步法Treg盒子檢測（ FOXP3 Alexa Flour 488/CD25 PE/CD4 PerCP ）人外周血PBMC流式結(jié)果分析圖一步法試劑盒 包含所有檢測試劑！省去麻煩的操作步驟！真正的省時(shí)、省力，省錢！ Treg Treg細(xì)胞的鑒定細(xì)胞的鑒定-表達(dá)表達(dá)FOXP3FOXP3核轉(zhuǎn)錄因子核轉(zhuǎn)錄因子Alexa Fluor 488 anti-human FOXP3/CD25 PE/CD4 PerCP antibody cocktail (FOXP3 ,Cl

10、one 206D)一步法Treg盒子檢測（ FOXP3 Alexa Flour 488/CD25 PE/CD4 PerCP ）人外周血PBMC流式結(jié)果分析圖TregTreg細(xì)胞的鑒定細(xì)胞的鑒定-表達(dá)表達(dá)FOXP3FOXP3核轉(zhuǎn)錄因子核轉(zhuǎn)錄因子一步法試劑盒 包含所有檢測試劑！省去麻煩的操作步驟！真正的省時(shí)、省力，省錢！MDSCMDSC細(xì)胞的鑒定細(xì)胞的鑒定Purified Anti-mouse Ly-6G/Ly-6C (Gr-1) AntibodyAPC Anti-human CD11b Antibody PerCP/Cy5.5 Anti-human CD33 Antibody MDSCMDSC細(xì)

11、胞的鑒定細(xì)胞的鑒定CD11b APCCD33 PerCP/Cy5.5Gr-1 Alexa Fluor 647 樹突細(xì)胞樹突細(xì)胞（DC）的鑒定的鑒定 是機(jī)體主要的抗原遞呈細(xì)胞。是機(jī)體主要的抗原遞呈細(xì)胞。 可激活可激活CD8+CD8+、CTLCTL及及CD4+CD4+細(xì)胞，控細(xì)胞，控制體內(nèi)免疫反應(yīng)的過程，在免疫應(yīng)答制體內(nèi)免疫反應(yīng)的過程，在免疫應(yīng)答中處于中心地位。中處于中心地位。 人人DCDC的主要特征性表面標(biāo)記是的主要特征性表面標(biāo)記是CD1CD1， 小鼠小鼠DCDC的主要特征性表面標(biāo)記是的主要特征性表面標(biāo)記是CD11cCD11c。 CD83 CD83是成熟是成熟DCDC細(xì)胞的表面標(biāo)記細(xì)胞的表面標(biāo)記

12、 另外，比較常用的還有另外，比較常用的還有CD80CD80、CD86CD86、HLA-DRHLA-DR這些標(biāo)記隨著這些標(biāo)記隨著DCDC細(xì)胞細(xì)胞的成熟表達(dá)量增加的成熟表達(dá)量增加DCDC功能：功能：DCDC標(biāo)記標(biāo)記DCDC 流式多色搭配及產(chǎn)品圖流式多色搭配及產(chǎn)品圖樹突細(xì)胞樹突細(xì)胞（DC）的鑒定的鑒定熒光素?zé)晒馑乜贵w名稱抗體名稱FITCFITCAnti-human CD1a AntibodyAnti-human CD1a AntibodyPerCP PerCP Anti-human HLA-DR AntibodyAnti-human HLA-DR AntibodyAPC APC Anti-human

13、 CD86 AntibodyAnti-human CD86 AntibodyPEPEAnti-human CD80 AntibodyAnti-human CD80 AntibodyFITC CD1aPE CD80自然殺傷（自然殺傷（NKNK）細(xì)胞的鑒定）細(xì)胞的鑒定FITC CD56PE Perforin NK NK細(xì)胞細(xì)胞(natural kilIer ce11s ) (natural kilIer ce11s ) 是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，它能夠非特異地溶解各種病毒是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，它能夠非特異地溶解各種病毒感染的細(xì)胞和腫瘤，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生。感染的細(xì)胞和腫

14、瘤，而且在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生。 CD56 CD56 分子是分子是NKNK細(xì)胞表面特有的標(biāo)記，顆粒酶細(xì)胞表面特有的標(biāo)記，顆粒酶A A、穿孔素、穿孔素、NKG2DNKG2D在其殺傷功能發(fā)揮中起重在其殺傷功能發(fā)揮中起重要作用。要作用。主要內(nèi)容主要內(nèi)容帶來不可控因素，降低實(shí)驗(yàn)的帶來不可控因素，降低實(shí)驗(yàn)的特異性，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性特異性，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性 疊氮化物疊氮化物：可以阻斷線粒體的電轉(zhuǎn)運(yùn)：可以阻斷線粒體的電轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，對大多數(shù)的有機(jī)體有毒性。在系統(tǒng)，對大多數(shù)的有機(jī)體有毒性。在體內(nèi)，疊氮化物和氰化物相似，對細(xì)體內(nèi)，疊氮化物和氰化物相似，對細(xì)胞色素氧化酶和其它酶有抑制作用，胞色

15、素氧化酶和其它酶有抑制作用，并能使體內(nèi)氧合血紅蛋白的形成受阻，并能使體內(nèi)氧合血紅蛋白的形成受阻，有顯著的降壓作用；同時(shí)對眼和皮膚有顯著的降壓作用；同時(shí)對眼和皮膚有刺激性。有刺激性。 內(nèi)毒素內(nèi)毒素在體內(nèi)：可引起一系列反應(yīng)，包括在體內(nèi)：可引起一系列反應(yīng)，包括各種炎癥反應(yīng)，低血壓，白細(xì)胞數(shù)異常，各種炎癥反應(yīng)，低血壓，白細(xì)胞數(shù)異常，血管內(nèi)血凝結(jié)，休克甚至致死。血管內(nèi)血凝結(jié)，休克甚至致死。在體外：內(nèi)毒素可以與在體外：內(nèi)毒素可以與CD14CD14以及其他一些以及其他一些受體反應(yīng)，誘導(dǎo)單核細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞釋受體反應(yīng)，誘導(dǎo)單核細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子放細(xì)胞因子，觸發(fā)補(bǔ)體系統(tǒng)，促進(jìn)，觸發(fā)補(bǔ)體系統(tǒng)，促進(jìn)B B

16、細(xì)細(xì)胞分裂。胞分裂。 內(nèi)毒素內(nèi)毒素0.01ng/u0.01ng/ul lLEAF系列抗體-功能學(xué)實(shí)驗(yàn)首選功能學(xué)實(shí)驗(yàn)首選LEAF系列抗體的應(yīng)用人CD3抗體（UCHT1）活化T細(xì)胞。人外周血獲得的T細(xì)胞分別與U.CHT1（）、CD28抗體（）、UCHT1+CD28抗體（）孵育，然后測上清液中TNF-的分泌量。A，TNF-的分泌量隨孵育時(shí)間的變化；B， TNF-的分泌量隨抗體用量的變化。 Lafont, V., et al., 2000. J. Biol. Chem. 275:19282. PubMedLEAF系列抗體應(yīng)用-活化細(xì)胞小鼠VEGF抗體可以中和VEGF，從而阻斷了VEGF誘導(dǎo)的小鼠內(nèi)皮細(xì)

17、胞增殖 LEAF系列抗體應(yīng)用阻斷抗體小鼠CD25抗體（clonePC61）用于清除E16小鼠體內(nèi)CD4+CD25+細(xì)胞。清除結(jié)果用小鼠外周血流式進(jìn)行了比較。Blood. 2005 June 15; 105(12): 48654870 LEAF系列抗體應(yīng)用細(xì)胞清除Biolegend為您提供為您提供主要內(nèi)容主要內(nèi)容ELISAELISA系列規(guī)格系列規(guī)格( (以以IL-8IL-8為例）為例） Recombinant Human IL-8 (ELISA Std.) ：標(biāo)準(zhǔn)品 Human IL-8 ELISA MAX Standard ： 包被抗體、 檢測抗體、Avidin-HRP、 標(biāo)準(zhǔn)品。 Human

18、 IL-8 ELISA MAX Deluxe ：未包被板子、包被抗體、 包被液、 檢測抗體、Avidin-HRP、 稀釋液、 標(biāo)準(zhǔn)品 、TMB底物。 LEGEND MAX Human IL-8 ELISA Kit ：預(yù)包被IL-8可拆卸板子、檢測抗體、標(biāo)準(zhǔn)品、 Avidin-HRP、稀釋液、低物、終止液、封板膜。主要內(nèi)容主要內(nèi)容 液相芯片多因子檢測技術(shù) 檢測原理-微球加工 檢測原理檢測標(biāo)本與應(yīng)用 檢測原理檢測優(yōu)勢 液相芯片多因子檢測技術(shù) Biolegend相關(guān)檢測指標(biāo) Biolegend相關(guān)檢測指標(biāo) 液相芯片多因子檢測技術(shù) 向廠家定購產(chǎn)品步驟主要內(nèi)容主要內(nèi)容 達(dá)科為2009年Biolegend銷售量分析 技術(shù)電話mail: jia_同型對照 同型對照（Isotype Control） ： 與實(shí)驗(yàn)染色的單克隆抗體特異性無關(guān)的免疫球蛋白亞型 與染色的單克隆抗體 相同種屬來源 相同免疫球蛋白及亞型 相同熒光素標(biāo)記 相同劑量和濃度 用于消除由于抗體非特異性結(jié)合到細(xì)胞表面的Fc受體而產(chǎn)生的背景染色 例如，標(biāo)記FITC的單克隆抗體為小鼠IgG1亞類抗體，標(biāo)記PE的單克隆抗體為小鼠IgG2a亞類抗體，同型對照應(yīng)選用相同濃