月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜中基質(zhì)金屬蛋白酶11及基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物1表達(dá)及意義

1、月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜中基質(zhì)金屬蛋白酶-11及基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物-1表達(dá)及意義一846一重慶醫(yī)科大學(xué)2007年第32卷第8期(journalofchongqingmedicaluniversity2oo7.vo1.32no-8)論著文章編號(hào):02533626(2007)08084605月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜中基質(zhì)金屬蛋白酶一11及基質(zhì)金屬蛋白酶抑制物一1表達(dá)及意義周曉曦,袁瑞,姚珍薇(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科,重慶400016)【摘要l目的:探討基質(zhì)金屬蛋白酶一l1(mmpl1)和基質(zhì)金屬蛋白抑制物一l(timp1)在月經(jīng)過少患者子宮內(nèi)膜中的表達(dá)與月經(jīng)過少發(fā)病機(jī)制的關(guān)系.方法:采用免疫組織化學(xué)s-

2、p法檢測(cè)mmp一11蛋白和timpl蛋白在月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá).結(jié)果:月經(jīng)過少組子宮內(nèi)膜mmpl1蛋白表達(dá)在增殖期腺上皮和間質(zhì)均顯著低于正常子宮內(nèi)膜(p<0.05,p<0.05);月經(jīng)過少組子宮內(nèi)膜腺上皮中timp一蛋白表達(dá),在增殖期和分泌期均顯著低于正常子宮內(nèi)膜(p<o.05,p<o.05).而間質(zhì)細(xì)胞timpl蛋白表達(dá)在增殖期和分泌期與正常子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞差異無(wú)顯著性(p>0.05,p>0.05o結(jié)論:mmp-il可能參與了子宮內(nèi)膜的重建,增生.mmp一11的調(diào)節(jié)為多因素調(diào)節(jié),timp一1僅是其中因素之一.【關(guān)鍵詞】子宮內(nèi)膜;月經(jīng)過少;

3、基質(zhì)金屬蛋白酶一l1;基質(zhì)金屬蛋白抑制物一l;免疫組化【中國(guó)圖書分類法分類號(hào)la711.51【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】a【收稿日期120061214expressionofmatrixmetaiioprotejnases一11andtissuejnhibitorofmatrixmetauoproteinases-1inendometriumofhypomenorrheazhouxiaoxi,etal(departmentofobstetricsandgynecology,efirstaffiliatedhospital,chongqingmedicaluniversity)【abstract】object

4、ive:tostudytheexpressionofmatrixmetalloproteinasesll(mmpl1)andtissueinhibitorofmatrixmetalloproteinases-1(timp-i)inendometriumofhypomenorrheapatientsanditsassiationwiththepathogenesisofhypomenorrhea.methods:immunohistochemieals-passaywasusedtodetecttheexpressionofmmp一11proteinandtimp一1proteininendom

5、etriumofhypomenorrheapatientsandinnormalendometrium.resu/ts:mmp-1lexpressioninendometrialglandularcellsandstromalcellsofhypomenorrheapatientswaslowerthanthatofnormalsubjects(p<o.05.p<o.05).timp-iexpressioninendometrialglandularcellswaslowerthanthatofnormalsubjectsduringtheproliferativeandsecre

6、toryphases(p<0.05,p<o.05).timp-iexpressioninstromalcellswasnotsignifieiantlyditterembetweenhypomenorrheapatientsandnormalsubjectsduringtheproliferativeandsecretoryphases(p>0.05,p>o.05).conclusions:mmpllmightparticipateinthere-establishmentandgenerationofendometrium.therearemuhiplefactors

7、inregulatoringtheexpressionofmmpli.mp-iisjustoneofthefactors.【keywords】endometrium;hypomenorrhea;matrixmetalloproteinasesl1;tissueinhibitorofmatrixmtalloproteinasesl;immunohistochemistry隨著官腔鏡技術(shù)的廣泛運(yùn)用,臨床發(fā)現(xiàn)一些月經(jīng)過少的患者性激素測(cè)定正常,宮腔鏡檢查并無(wú)粘連,瘢痕存在,而是子宮內(nèi)膜薄,色澤較白,表現(xiàn)為內(nèi)膜發(fā)育不良,用雌激素周期治療效果并不理想甚至無(wú)效.對(duì)于這類患者月經(jīng)過少的發(fā)病機(jī)理目前尚不清楚,國(guó)

8、內(nèi)外尚無(wú)相關(guān)報(bào)道.近年來發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶(mmps)及其抑制物(timps)表達(dá)于子宮作者介紹:周曉曦(1975一),女,碩士,主治醫(yī)師,主要研究方向:婦科生殖與內(nèi)分泌.內(nèi)膜,并參與了月經(jīng)發(fā)生,內(nèi)膜重塑,內(nèi)膜血管形成等.研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶11(mmp一11)主要表達(dá)于增殖期子宮內(nèi)膜,認(rèn)為其參與了子宮內(nèi)膜的修復(fù)ilj.本研究采用免疫組化sp法檢測(cè)月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中mmp一11和timp一1蛋白的表達(dá),以探討mmp一11及其抑制物timp一1與月經(jīng)過少發(fā)病機(jī)制的關(guān)系.1資料與方法重慶醫(yī)科大學(xué)2007年第32卷第8期journalofcqingmedicalunivers2007

9、.vo1.32no.8l一8471.1研究對(duì)象2005年1月2006年5月因月經(jīng)過少就診于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科的患者38例.月經(jīng)過少的診斷標(biāo)準(zhǔn)為月經(jīng)量少于30ml,或行經(jīng)期少于2天.患者平均年齡為29歲(2040歲),性激素測(cè)定無(wú)異常,宮腔鏡檢查子宮內(nèi)膜較薄,官腔無(wú)粘連,之前患者未經(jīng)性激素治療.對(duì)照組為正常子宮內(nèi)膜30例,取材于其它原因行官腔鏡檢查,子宮內(nèi)膜無(wú)病變者.標(biāo)本取材后用10%中性福爾馬林固定,石蠟包埋,制成5m厚的石蠟切片.1.2方法mmp一11和1rimp一1多克隆抗體及sp試劑盒購(gòu)于北京中山生物技術(shù)有限公司.操作按sp試劑盒要求進(jìn)行,步驟如下:將制成石蠟切片的載玻片脫蠟

10、,3%過氧化氫滅活內(nèi)源性酶15min,檸檬酸緩沖液微波熱修復(fù)抗原,滴加非免疫性山羊血清以阻斷非特異性抗原,加一抗4過夜,后加生物素標(biāo)記的二抗置于濕盒中常溫15rain,鏈霉素抗生物素蛋白一過氧化物酶置于濕盒中常溫15rain,新鮮配置的dab顯色,蘇木素復(fù)染,中性樹膠封片.用已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照,用磷酸鹽緩沖液(pbs)代替一抗作為陰性對(duì)照.1-3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)mmp一11和1rimp一1的陽(yáng)性染色為棕褐色,分布于腺上皮細(xì)胞胞漿和胞膜及間質(zhì)細(xì)胞胞漿,胞核不著色.選染色均勻區(qū),按陽(yáng)性細(xì)胞百分比:0(0分),010%(1分),11%5o%(2分),51%100%(3分);(2)按染色強(qiáng)度分:無(wú)染

11、色為陰性(0分),黃色為弱陽(yáng)性(1分),棕黃色為中度陽(yáng)性(2分),褐黃色或深棕色為強(qiáng)陽(yáng)性(3分).將兩個(gè)得分相乘,0分為(一),13分為(+),46分為(+),79分為(+).腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞分別評(píng)分.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用ss12.0統(tǒng)計(jì)軟件,mannwhitneyu檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.2結(jié)果2.1子宮內(nèi)膜mmp一11蛋白的表達(dá)2.1.1正常子宮內(nèi)膜mmp一11蛋白的表達(dá)(見表1)mmp一11蛋白可表達(dá)于正常子宮內(nèi)膜的增殖期和分泌期.mannwhitnevu檢驗(yàn)顯示:增殖期腺上皮mmp一11蛋白表達(dá)高于分泌期,其差異有顯著性意義(z=一3.139,p<0.05).增殖期間質(zhì)mmp一1

12、1蛋白表達(dá)高于分泌期間質(zhì),其差異有顯著性意義(z=一2.634,p<0.05).見圖1,2.圖1mmp一11正常子宮內(nèi)膜【增殖期)200圖2mmp_11正常子宮內(nèi)膜【分泌期)2002.1.2月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜mmp一11蛋白的表達(dá),見表1月經(jīng)過少組子宮內(nèi)膜mmp-11蛋白表達(dá)在增殖期和分泌期的腺上皮的差異無(wú)顯著性意義(z=一1.621,p>0.05);在間質(zhì)中增殖期mmp一11蛋白表達(dá)高于分泌期,其差異有顯著性意義(z=一3.074,p<0.05).見圖3,正常與月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜mmp一11蛋白的表達(dá)的比較mannwhitnevu檢驗(yàn)顯示:(1)正常子宮內(nèi)膜和月經(jīng)

13、過少子宮內(nèi)膜腺上皮增殖期mmp一11蛋白表達(dá),其差異有極顯著性意義,正常組要明顯高于月經(jīng)過少組(z=一3.127,p<0.05).正常組在增殖期間質(zhì)mmp一11蛋白表達(dá)要高于月經(jīng)過少組,其差異有顯著性意義(z一2.204,p<0.05).(2)正常子宮內(nèi)膜在分泌期腺上皮mmp一11蛋白的表達(dá)與月經(jīng)過少組無(wú)顯著性差異(z=-0.832,p>0.05).正常組在分泌期間質(zhì)mmp一11蛋白的表達(dá)高于月經(jīng)過少組,其差異有顯著性意義(z一2.388,p<0.05).2.2子宮內(nèi)膜timp_1蛋白的表達(dá)2.2.1正常子宮內(nèi)膜timp一1蛋白的表達(dá)rnmp一1蛋白在正常子宮內(nèi)膜增殖期

14、和分泌期腺上皮的表達(dá)都比較強(qiáng),其差異無(wú)顯著性意義(z一0.479,p>一84jb一重慶醫(yī)科大學(xué)2o07年第32卷第8期(joumalofchongqingmedicaluniversity20o7?vol?32no?8)圖3mmp一11月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜(增殖期)x2oo圖4mmp一11月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜(分泌期)x200表1月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜與正常子宮內(nèi)膜mmp一11的表達(dá)0.05),在間質(zhì)中的表達(dá)差異無(wú)顯著性意義(z=一0.868,p>o.05).見圖5,月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜timp一1蛋白的表達(dá)月經(jīng)過少組子宮內(nèi)膜timp一1蛋白表達(dá)在增殖期和分泌期的腺上皮,差異無(wú)顯著性意

15、義(z一1.412,p>o.05);在間質(zhì)中增殖期和分泌期timp一1蛋白表達(dá)其差異也無(wú)顯著性意義(一0.368,p>o.05)見圖7,正常與月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜timp一1蛋白的表達(dá)的比較mannwhitnevu檢驗(yàn)顯示:(1)正常子宮內(nèi)膜和月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜腺上皮增殖期timp一1蛋白表達(dá),正常組timp一1蛋白表達(dá)高于月經(jīng)過少組,其差異有顯著性意義(z=一2.890,p<0.05).而增殖期間質(zhì)中timp一1蛋白表達(dá),正常組和異常組差異無(wú)顯著性意義(z=一0.927,p>o.05).(2)正常子宮內(nèi)膜在分泌期腺上皮timp一1蛋白的表達(dá)與月經(jīng)過少組其差異有

16、顯著性意義(z=一3.119,p<0.05).正常組在分泌期間質(zhì)timp一1蛋白的表達(dá)與月經(jīng)過少組差異無(wú)顯著性意義(z_一0.268,p>o.05).3討論基質(zhì)金屬蛋白酶(mmps)是重要的蛋白水解酶之一,近年來發(fā)現(xiàn)mmps不僅通過對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)圖5timp-1正常子宮內(nèi)膜(增殖期)x200圖6timp-1正常子宮內(nèi)膜(分泌期)x200重慶醫(yī)科大學(xué)2007年第32卷第8期(joumajofchongqingmedicaluniversity2007.vo1.32no.8)一849一圖7timp-1月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜【增殖期)x200圖8timp一1月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜(分泌期)x200表2

17、月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜與正常子宮內(nèi)膜timp-i的表達(dá)(extracellularmatrix,ecm)和基底膜(basementmembrane,bm)的降解作用和增強(qiáng)血管生成作用促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移,還在體內(nèi)基質(zhì)的合成和分解中起重要作用.mmps按底物不同可分為膠原酶(collagenases),間質(zhì)溶素(stromelysins),明膠酶(gelatinases),膜型基質(zhì)金屬蛋白酶(membranetypemmpmtmmp)及其他金屬?gòu)椓Φ鞍酌?近年來許多學(xué)者對(duì)mmps和mps在月經(jīng)周期中的表達(dá)研究甚多.總結(jié)graesslinot2j,goffin【lj和pilkart3?4】等學(xué)者發(fā)現(xiàn),m

18、mps在月經(jīng)周期中的表達(dá)可歸納為四種模式:主要在前月經(jīng)期和月經(jīng)期表達(dá),有mmp一1,一3,一8,一9,一10,一12;主要在增殖期表達(dá)的有mmp一7,一11,一2,mt3一mmp;主要在圍排卵期表達(dá)的有mmp一26;在整個(gè)周期都有表達(dá)變化不大的有mmp一13,一14,一16,一17,一19及mt1一mmp,mt2一mmp.1rimps的表達(dá)模式有三種:()timp一1,一2在整個(gè)月經(jīng)周期都有表達(dá),且較穩(wěn)定;timp一3在分泌晚期和月經(jīng)期有明顯增加;timp-4在增殖期增加,在分泌早期達(dá)到高峰,然后在以后階段降低.mmps在不同時(shí)期表達(dá)的復(fù)雜性.說明了mmps家族有著不同的功能,表達(dá)于月經(jīng)期的m

19、mps起著降解ecm成分,導(dǎo)致組織崩潰的作用;表達(dá)于增殖期的mmps和timps,主要作用在于促進(jìn)內(nèi)膜重塑,血管生成.mmp一11是間質(zhì)溶素類的一種,也稱為stromelysin3.最早在早期乳腺癌中發(fā)現(xiàn)有mmp一11過度表達(dá)51.大多數(shù)mmps以無(wú)活性的酶原形式分泌到細(xì)胞外,而其催化結(jié)構(gòu)域中zn一半胱氨酸開關(guān)的破壞和隨之發(fā)生的氨基(n)末端前肽水解,使mmps得激活.而mmp一11和多數(shù)mtmmps被細(xì)胞內(nèi)蛋白酶激活,以活性的形式分泌到細(xì)胞外,顯示了mmp一11在mmps家族中可能的獨(dú)特作用.goffinf等通過rtpcr對(duì)人正常子宮內(nèi)膜研究發(fā)現(xiàn):mmp一11主要在增殖期有強(qiáng)烈表達(dá).孕激素對(duì)

20、mmp一11有降調(diào)節(jié)作用,所以在分泌期mmp一11表達(dá)下降,而在月經(jīng)期mmp一11的表達(dá)又增lltj.月經(jīng)過少的子宮內(nèi)膜中mmp一11的表達(dá)國(guó)內(nèi)外還尚無(wú)報(bào)道,本研究中mmp一11蛋白表達(dá)在正常子宮內(nèi)膜增殖期和分泌期和goffinf等的研究是一致的.mmp一11蛋白表達(dá)于正常子宮內(nèi)膜的增殖期和分泌期.增殖期腺上皮和間質(zhì)mmp一11蛋白均分別顯著高于分泌期.增殖期腺上皮和間質(zhì)mmp一11蛋白表達(dá)都較強(qiáng),兩者沒有明顯差異.分泌期腺上皮和間質(zhì)mmp一11蛋白表達(dá)都較弱.研一850一重慶醫(yī)科大學(xué)2007年第32卷第8期(journalofchongqingmedicaluniversity2007.vo

21、1.32no.8)究中發(fā)現(xiàn)月經(jīng)過少組子宮內(nèi)膜mmp一11蛋白表達(dá)在增殖期腺上皮和間質(zhì)均顯著低于正常子宮內(nèi)膜.而分泌期腺上皮月經(jīng)過少組和正常組兩者沒有差異,間質(zhì)中mmp一11蛋白表達(dá)正常組要高于月經(jīng)過少組.timps是mmps活性的特異性抑制劑,在正常情況下保持平衡,維持體內(nèi)基質(zhì)合成和分解代謝的穩(wěn)定.如前所述,timp一1在整個(gè)月經(jīng)周期都有表達(dá).timp一1蛋白表達(dá)在正常子宮內(nèi)膜增殖期和分泌期都較強(qiáng),腺上皮和問質(zhì)沒有差異.月經(jīng)過少組子宮內(nèi)膜腺上皮中timp一1蛋白表達(dá),在增殖期和分泌期均顯著低于正常子宮內(nèi)膜.而問質(zhì)中,在增殖期和分泌期與正常子宮內(nèi)膜沒有差異.不同之處體現(xiàn)在腺上皮上.timp一1蛋

22、白表達(dá)較正常組織弱,但mmp一11蛋白表達(dá)也表現(xiàn)為減弱,說明timp一1對(duì)mmp一11的調(diào)節(jié)不是唯一因素.本研究?jī)H僅揭示了在月經(jīng)過少子宮內(nèi)膜中mmp一11和timp一1的改變情況,證明了mmp一11可能參與了子宮內(nèi)膜的重建,增生,但mmp一11是怎樣參與子宮內(nèi)膜重建,以(上接第821頁(yè))一+一+-+一+-+-?控制轉(zhuǎn)基因kgf的表達(dá),從而控制其治療作用.本研究首次提出應(yīng)用真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染kgf基因進(jìn)入靶細(xì)胞,避免了上述缺點(diǎn),并通過真核表達(dá)載體研究kgf的作用機(jī)理.新型的治療載體在設(shè)計(jì)上可控制轉(zhuǎn)染基因的表達(dá),從而降低毒副作用,提高療效.克隆和構(gòu)建可在真核細(xì)胞中表達(dá)kgf的的真核表達(dá)載體,將為進(jìn)一

23、步開展肺部疾病的kgf基因治療的臨床研究奠定基礎(chǔ).參考文獻(xiàn)【1】frankl.protectiveeffectofkeratinocytegrowthfactoragainstlungabnormalitiesassociatedwithhyperoxiainprematurelybornratsj.biolneonate,2003:83(4):263272.及調(diào)節(jié)mmp一11蛋白表達(dá)的因素有哪些還需要進(jìn)一步研究.參考文獻(xiàn)【1】coffinf,munautc,frankennef,eta1.expressionpatternofmetalloproteinasincyclinghumanend

24、ometriumj.biolreprod,2003;69(3):976984.【2】graesslino,corteza,fauvetr,eta1.metalloproteinase一2,一7and-9andtissueinhibitorofmetalloproteinase-1and-2expres-sioninnormal,hyperplasticandneoplasticendometrium:aclinica一pathologicacorrelationstudyi31.annonco1.2006;17(4):637-645.【3】pilkar,kudelam,erikssonp.ca

25、sslenbmmp-26mrnaandestrogenreceptoralphaco-expressioninnormalandpathologicaendometriumijj.ceskagynekol,2005;70(1):56-62.【4】pilkar,kudelam,erikssonp.casslenbendometrialexpressionprofilesofmrnaforselectedmatrixmetallopmteinasesandtissueinhibitorofmetalloproteinasesl田.ceskagynekol,2004;69(6):472476.【5】bassetp,bellocqjp,wolfc,eta1.anovelmetalloproteinasegenespificallyexpressedinstromalcellsofbreastcarcinomasj.nature,199