血栓與止血檢測進(jìn)展ppt課件

1、血栓與止血檢測進(jìn)展王鴻利上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院，上海血液學(xué)研討所，200025 近年，隨著根底實(shí)際和實(shí)驗(yàn)技術(shù)的開展，血栓和止血檢驗(yàn)及其臨床運(yùn)用也有了很大的進(jìn)展，本文就此作一簡述。一血小板微顆粒檢測 血小板被激活后，以出芽方式構(gòu)成囊泡或以偽足斷裂方式構(gòu)成直徑為0.11.0m的血小板顆粒Platelet Microparticle,PMP)。PMP的體積較正常血小板小，但有完好的血小板膜構(gòu)造和功能。PMP膜上可表達(dá)多種血小板膜糖蛋白GPb/a GP b/a、 GPb/-、血小板活化因子PAF、-樣前體淀粉蛋白、Ca2+依賴性蛋白酶Calpainyi以及有促凝作用的磷脂等。因此檢測血循環(huán)中的

2、PMP可較完好地反映血小板參與血栓構(gòu)成和血液凝固的功能。 檢測方法流式細(xì)胞術(shù)。主要試劑為CD61 parcp:多甲藻素-葉綠素蛋白標(biāo)志抗血小板GPa的單克隆抗體 參考值6617個(gè)/104血小板山東大學(xué)齊魯醫(yī)院報(bào)道。 臨床意義PMP主要用于動脈血栓性疾病的檢測，它是動脈血栓構(gòu)成的敏感和特異的分子標(biāo)志物。 1.急性冠脈綜合征ACS：有證據(jù)顯示，PMP參與動脈粥樣硬化和血管再堵塞的病理過程。Cawaz等對急性心肌梗死AMI施行PTCA患者進(jìn)展系列血小板功能研討，發(fā)現(xiàn)PTCA術(shù)后患者的血小板數(shù)因耗費(fèi)添加而減少，PMP因大量構(gòu)成而增多，后者又參與冠脈血栓的構(gòu)成。Katopodis等對行冠脈血栓構(gòu)成術(shù)的A

3、CS患者進(jìn)展察看，他們將血小板激活形狀作為實(shí)驗(yàn)組近期發(fā)生AMI、不穩(wěn)定性心絞痛者，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組患者PMP程度較正常對照組明顯增高。 2.腦血栓構(gòu)成：對大血管血栓、小血管血栓、多發(fā)性腦梗死和阿爾茨海默病患者進(jìn)展PMP檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，阿爾茨海默病患者的PMP程度與正常對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別，而其他疾病組患者的PMP程度均顯著高于正常對照組，且治療后有明顯的降低，而且小血管血栓組患者的PMP程度高于大血管血栓組患者。闡明PMP程度的增高，主要反映小動脈的血栓構(gòu)成和血栓阻塞。二血小板-白細(xì)胞聚集體檢測 血小板被激活后，血小板釋放P-選擇素P-selectin或GMP-140。 P-選擇素與白細(xì)胞和或單

4、核細(xì)胞膜上的P-選擇素配體糖蛋白-1PSLG-1結(jié)合構(gòu)成血小板-白細(xì)胞聚集物Platelet-Leucocyte Aggre - gate,PLA)和或血小板-單核細(xì)胞聚集物 Platelet-Monocyte Aggregate。該聚集體是反映動脈血栓構(gòu)成的特異性標(biāo)志物之一。 檢測方法流式細(xì)胞術(shù)。主要試劑為FTTC標(biāo)志的鼠抗人GPIbCD42b單克隆抗體，藻紅蛋白標(biāo)志的抗人白細(xì)胞CD45單克隆抗體，F(xiàn)TTC標(biāo)志的鼠抗人P-selectin CD62b單克隆抗體。 參考值瑞典學(xué)者報(bào)道血小板-白細(xì)胞聚集物為15.38.5PLA/L。 臨床意義動物實(shí)驗(yàn)和臨床研討闡明，PLA是更敏感和更特異的血栓標(biāo)

5、志物。一組93例胸痛患者，其中9例為AMI患者，其血小板-單核細(xì)胞聚集物為34.210.3，84 例非AMI胸痛患者的血小板-單核細(xì)胞聚集體為19.31.4，二組差別顯著0.05； AMI胸痛組和非AMI胸痛組患者的血小板-單核細(xì)胞聚集物程度均較10例正常對照組的血小板-單核細(xì)胞聚集物程度為高0.001。三血管性血友病因子裂解蛋白酶活性檢測 生理情況下，由血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的血管性血友病因子von Willebrand Factor, vWF主要受vWF裂解蛋白酶 vWF C-leaving Proteinase, vWF -CP的調(diào)理。vWF CP作用于 vWF分子量為250000多聚體的Tr

6、y842-Met843之間的肽鍵，將它們水解成分子量為176000和140000的兩個(gè)小分子肽段。此時(shí)vWF不能過度地參與血小板的粘附和聚集，因此vWF CP是 限制血栓構(gòu)成的標(biāo)志物之一。 檢測方法ELISA。以型膠原包被酶標(biāo)板，2.5BSA封鎖，分別參與未透析的標(biāo)本和經(jīng)Slide-A-Lyzer透析過的標(biāo)本，一抗為兔抗人vWF多抗，二抗為辣根過氧化物酶標(biāo)志的羊抗兔IgG，參與底物OPD490nm顯色。結(jié)果以透析前后的OPD490比值作為該份標(biāo)本的剩余膠原結(jié)合活性 vWF:CBA或R- CBA 表示， R- CBA 越高， vWF-CP活性越低。 參考值83例正常人血漿n30 vWF:CBA

7、范圍為2.140.521.99.2；血清n53 vWF:CBA范圍為2.452.020.510.8蘇州大學(xué)附一院。 臨床意義 1.血栓性血小板減少性紫癜TTP：由于患者的vWF-CP基因缺陷或患者血漿中存在抗vWF-CP本身抗體，使vWF-CP血漿程度顯著降低，不能正常裂解超大分子量的vWF多聚體UL- vWF 。體內(nèi)聚集的UL- vWF 易于血小板結(jié)合，促使血小板粘附和聚集，引起TTP病理過程的發(fā)生和開展。一組5例TTP患者檢測vWF:CBA結(jié)果為48.196.578.220.2，較正常對照組明顯增高，反映患者vWF-CP明顯降低。 2.血管性血友病vWD：據(jù)報(bào)道，21例vWF患者血漿vWF

8、:CBA程度明顯降于30例正常人、15例血友病患者及30例其他出血性疾病患者0.001。在vWF中，型患者的vWF:Ag/ vWF:CBA比值1.0；型患者的vWF:Ag/ vWF:CBA比值2.0；型患者的vWF:Ag/ vWF:CBA都極低，其vWF:Ag/ vWF:CBA比值具有可變性。 3.惡性腫瘤：惡性腫瘤患者的vWF-CP活性程度顯著低于正常人，伴有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的vWF-CP活性程度更低，接受手術(shù)治療后患者的vWF-CP可升高，導(dǎo)致血漿大分子多聚體增多，促使vWF參與血小板粘附和聚集，加劇惡性腫瘤患者的高凝集形狀和血栓構(gòu)成，反映vWF是參與惡性腫瘤血栓構(gòu)成機(jī)制之一。(四)單克隆抗體

9、特異性俘獲血小板抗原檢測monoclonal antibody specific immobili- zation of platelet antigen,MAIPA 將待測抗體、單抗和血小板共同溫育，得到血小板膜GP、待測標(biāo)本和單抗三分子復(fù)合物，然后參與酶聯(lián)抗體并以微粒色被抗體固化于微孔中顯色，顯色深淺與待測抗體程度呈正比。 參考值抗GP b/a陽性，A值0.133；抗GPb陽性， A值0.209 臨床意義檢測血小板相關(guān)抗體，其敏感度和特異度高于雙抗體夾心ELISA法。用于檢測ITP和同種免疫血小板減少癥。 兩種方法對ITP診斷的比較 ELISA法 MAIPA法PAIgGPAIgAPAIgM

10、GPb/aGPb陽性率（）8127225413敏感性（）8866607566特異性（）5075768394診斷效率（）7227227313 (五)凝血酶激活的纖溶抑制物TAFI檢測 凝血酶-凝血酶調(diào)理蛋白復(fù)合物T-TM將由肝臟合成的、分子量為55KD的凝血酶激活的纖溶抑制物Thrombin Activatable Fibrinolysis Inhibitor,TAFI的Arg92-Ala93之間的肽鍵水解后，脫去一個(gè)活化肽， TAFI變成活化型的TAFI a。 TAFI具有抑制纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶的生物活性，但是TAFI也受蛋白C抑制物PCI的抑制。 檢測方法 采用 ELISA測定TAFI：A

11、g。以鼠抗人TAFI單克隆抗體包被酶標(biāo)板，參與規(guī)范品或樣品后，再參與辣根過氧化物酶標(biāo)志的抗人TAFI抗體，充分作用后參與鄰苯二胺使之顯色，顯色深淺與樣本TAFI的含量成正比。 TAFI:A采用發(fā)色底物法測定。 參考值 TAFI:Ag n34為7728 21133； TAFI:A n34為24 5g/L1434g/L上海瑞金醫(yī)院 臨床意義 1.深靜脈血栓DVT：Tiburg等對腦74例初發(fā)DVT患者的TAFI:Ag 進(jìn)展檢測，發(fā)現(xiàn)其程度增高?？诜茉兴幍恼Ｉ趮D女，假設(shè)TAFI：Ag程度超越90，其程度的危險(xiǎn)性程度2倍，此時(shí)患者的纖溶活性減低。 2.動脈血栓冠心?。喝鸾疳t(yī)院對19例冠心病患者

12、檢測了TAFI:Ag和TAFI:A，發(fā)現(xiàn)冠心病患者的TAFI:Ag和TAFI:A的程度均高于正常對照組0.001，與Silveira報(bào)道11例冠心病的檢測結(jié)果一致，闡明患者的纖溶活性明顯降低。此外， TAFI程度增高也見于不穩(wěn)定性心絞痛。 3.微血栓DIC：瑞金醫(yī)院對15例DIC患者檢測了TAFI:Ag和TAFI:A，發(fā)現(xiàn)患者的程度明顯低于正常對照組0.001，闡明患者纖溶活性明顯升高。 4.其他：TAFI程度升高還見于感染、因子V Leiden突變； TAFI程度減低還見于某些凝血因子缺乏血友病、F缺乏癥、急性早幼粒細(xì)胞白血病 TAFI:A減低66，但TAFI:Ag正常。 六可溶性血管內(nèi)皮細(xì)

13、胞蛋白C受體檢測 可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體Soluble Endothelial Protein C Receptoe,sEPCR是由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，部分與內(nèi)皮細(xì)胞銜接稱膜連EPCR，一部分流離于血漿稱sEPCR?？寺〉哪みBEPCR cDNA全長1.3kb,是一種由221個(gè)氨基酸組成跨膜糖蛋白。膜連EPCR 經(jīng)過促進(jìn)T-TM復(fù)合物與蛋白CPC的結(jié)合，進(jìn)而放大PC的活性；此外， EPCR還對體內(nèi)急性炎癥反響河DIC的發(fā)生具有維護(hù)作用。然而，血漿中sEPCR與膜連的EPCR具有相反的作用。 sEPCR也可與PC和活化蛋白CAPC結(jié)合。抑制PC的活化和抑制APC的抗凝活性，減輕膜連EPCR的加

14、強(qiáng)PC活化和APC的抗凝作用，所以血漿sEPCR程度的增高市反映血管損傷和抗APC抗凝作用的特異性標(biāo)志物。 檢測方法采用 ELISA。以單克隆-抗包被酶標(biāo)板，分別參與血漿標(biāo)本和不同稀釋度的sEPCR規(guī)范品后，以生物素標(biāo)志的單克隆二抗作為檢測抗體，參與底物后顯色，繪制規(guī)范曲線。 參考值血漿sEPCR為115.220.7g/L臨床意義安徽省立醫(yī)院報(bào)道的結(jié)果見表1組別nsEPCR（g/L）值正常對照值20115.2020.70冠心病組30134.2069.60心絞痛17148.9087.90心肌梗死 8117.6033.80糖尿病組56177.0081.40 0.001敗血癥組30172.6043.

15、70 0.001SLE合并血栓組 14144.7033.90 0.005SLE血栓組49165.8045.30 0.001 七蛋白C Global實(shí)驗(yàn) 凝血酶T與血管內(nèi)皮細(xì)胞的凝血酶調(diào)理蛋白TM構(gòu)成復(fù)合物T-TM，后者使PC轉(zhuǎn)化為APC。 APC在蛋白SPS的輔助下，滅活因子Va和因子a，還抑制纖溶酶原激活抑制物-1PAI-1，使纖溶活性加強(qiáng)。然而，Agkistrodon contorix蛇毒可以取代T-TM復(fù)合物直接激活PC，使PC轉(zhuǎn)化為APC， APC也受PAI的抑制。 檢測方法在待測血漿中參與蛇毒溫育，蛇毒可直接激活PC，使PC轉(zhuǎn)化為AP- C。隨后在檢測系統(tǒng)中參與APTT試劑以檢測依賴

16、PC活性的血漿凝固時(shí)間Protein C Activ-Ity Dependent ClottingTime,PCAT假設(shè)待測血漿中的PC系統(tǒng)正常，那么參與Ca2+后血漿凝固時(shí)間顯著延伸。為了防止諸多要素的影響，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了對照組，即在實(shí)驗(yàn)過程中以緩沖液替代PC激活劑，血漿不依賴PC活性的血漿凝固時(shí)PCAT/O ，其結(jié)果應(yīng)短于60s。 參考值PCAT為85200s， PCAT/O為 3355s n234。 臨床意義本實(shí)驗(yàn)對PC活性低于參考值70的檢出率為90；對PS活性低于參考值的60的檢出率為89；對凝血因子Leiden突變的檢出率為100；對凝血酶原F20210 CA突變的檢出率為84。本實(shí)

17、驗(yàn)的檢出特異性為79。因此，本實(shí)驗(yàn)多用于PC、PS、F Leiden突變和F20210 CA突變的檢測，起到蛋白C系統(tǒng)挑選檢測作用。但是，本實(shí)驗(yàn)也有假陽性，見于凝血因子、活性升高、口服抗凝劑和狼瘡抗凝物質(zhì)等。 八蛋白Z抗原檢測 蛋白ZProtein Z,PZ是二十世紀(jì)90年代發(fā)現(xiàn)的一種血液凝固調(diào)理蛋白，為一種維生素K依賴的單鏈糖蛋白，由肝臟合成后分泌入血。人PZ的相對分子量為62KD，半壽期為2.5天，其基因位于13q34。在Ca2+和磷脂存在時(shí)，PZ可與蛋白Z依賴的蛋白酶抑制物 Protein Z-Pependent ProtaseInhibItor,ZPI結(jié)合，并進(jìn)一步與Fa構(gòu)成a-ZPI

18、-PZ復(fù)合物而使因子a在一分鐘內(nèi)便失去95以上的凝血活性。 檢測方法 目前多采用法國Stago公司的 ELISA試劑盒檢測。 參考值法國學(xué)者報(bào)道1.043.57mg/L；國內(nèi)潘學(xué)誼報(bào)道60例中青年人2258480g/L。妊娠期時(shí)PZ程度逐漸增高。 臨床意義目前PZ在臨床上的意義尚不非常清楚。Wasse等研討發(fā)現(xiàn)PZ缺乏1.0Mg/L在缺血性腦卒中和安康對照中分別為20和5，二者具有顯著性差別，PZ缺乏可使缺血性腦卒中的危險(xiǎn)性提高4倍。Soft等報(bào)道在急性冠脈綜合征病人當(dāng)中PZ程度明顯低于安康對照，闡明PZ缺乏是導(dǎo)致急性冠脈綜合征的獨(dú)立的危險(xiǎn)要素。此外，尚有報(bào)道以為PZ缺乏也會導(dǎo)致臨床出血病癥，

19、故以為PZ具有血栓和出血雙種作用，機(jī)制未明。此外，血透患者和口服避孕藥者PZ程度升高；口服抗凝劑、流產(chǎn)、早產(chǎn)、先兆子癇、胎兒宮內(nèi)發(fā)育緩慢等PZ血漿程度降低。蛋白Z依賴的蛋白酶抑制物檢測(proteinZ-dependent protease inhibitor,ZPI)原理用抗ZPI的多克隆抗體色被酶標(biāo)板，待測血漿中的ZPI與固相抗體結(jié)合，生物素化抗ZPI單抗與ZPI抗原結(jié)合構(gòu)成固相多抗-抗原-生物素單抗夾心物。后參與鏈霉素親和素-辣根過氧化物酶復(fù)合物，其中辣根過氧化物酶作用其特異性底物甲基聯(lián)苯胺TMB生成有色物質(zhì)，顯色程度與ZPI含量呈正比。參考范圍各室需自行建立臨床意義ZPI應(yīng)與PZ同時(shí)檢

20、測。PZ缺乏時(shí)，勢必使ZPI抑制FXa和FXIa的作用明顯減低，易構(gòu)成血栓。 九組織因子途徑抑制物-因子Xa復(fù)合物檢測tissue factor pathway inhibitor-factor-factorXa complex,TFPI-FXa 利用雙抗體夾心法檢測血漿中TFPI/FXa二元和TF/Fa/ TFPI/FXa四元復(fù)合物。將稀釋的血漿樣品加至預(yù)先用特異性抗TFPI抗體色被的酶標(biāo)板中溫育，抗原-抗體結(jié)合后用生物素標(biāo)志的純化雞IgY來檢測，后者可識別TFPI/FXa復(fù)合物外表的新抗原決議簇。加辣根過氧化物酶標(biāo)志的鏈霉素親和素，構(gòu)成雙抗體夾心酶聯(lián)免疫復(fù)合物。加底物TMB，與過氧化物酶反

21、響生成藍(lán)色溶液，最后加0.5mol/LH2SO4終止反響，溶液變成黃色。在波長450nm處測得吸光度值。根據(jù)規(guī)范曲線，計(jì)算待測血漿中TFPI/FXa復(fù)合物的含量。參考值待建立臨床意義有助于DIC早期和血栓前形狀的檢測和診斷。十抗體芯片技術(shù) 抗體芯片Antibody Microarray是 蛋白芯片的一種，是將能識別特異性抗原的抗體制成微陣列，檢測生物樣品中抗原蛋白表達(dá)方式的方法。這種抗體微陣列可以在一次簡單實(shí)驗(yàn)中同時(shí)檢測樣品中的數(shù)百甚至數(shù)千種蛋白質(zhì)的表達(dá)情況，并且可以在一張芯片上對兩種樣品的表達(dá)方式進(jìn)展比較分析。這使抗體芯片在毒性實(shí)驗(yàn)、疾病研討和藥物開發(fā)上有著廣泛的運(yùn)用前景。 抗體芯片的檢測操

22、作并不要求特殊的技藝，普通常規(guī)的操作就可以完成以往極為復(fù)雜耗時(shí)的任務(wù)。整個(gè)檢測操作流程包括：從組織或細(xì)胞、體液中提取蛋白質(zhì)，并用Cy5和Cy3兩種不同顏色的熒光分子分別標(biāo)志被檢測樣品和對照樣品，去除多余的標(biāo)志分子后與芯片雜交孵育，最后掃描分析結(jié)果。整個(gè)過程從樣品制備到結(jié)果分析只需一天即可完成。在抗體芯片制造方面，如何獲得高質(zhì)量的抗體、提高特異性、減少交叉反響是制造高質(zhì)量抗體芯片的主要思索要素。 抗體芯片技術(shù)在血栓與止血檢驗(yàn)領(lǐng)域 有著很好的運(yùn)用前景。目前正在研發(fā)過程中的凝血疾病診斷抗體芯片，是將針對各種凝血因子和抗凝血因子的單克隆抗體分別固定在適宜的片基上，來檢測血清標(biāo)本中各種凝血因子和抗凝血因

23、子的抗原，從而可以迅速診斷遺傳性易栓癥和出血性疾病。十一血栓彈力圖 Thrombelastograph hemostasis system,TEG 的檢測及其臨床運(yùn)用凝血凝血-血小板血小板-纖溶的挑選作用纖溶的挑選作用參數(shù)定義參數(shù)定義參數(shù)定義參數(shù)定義-3+3485472高凝高凝-3+34854724774-3+3EPL 015Ly30 084774纖溶亢進(jìn)纖溶亢進(jìn)十二旋轉(zhuǎn)血栓彈力圖ROTEM 是在傳統(tǒng)的TEG根底上，減少振動的干擾，添加了流動性和電腦分析系統(tǒng)，使丈量間的動搖減少，更為準(zhǔn)確、明了。常用參數(shù)及其意義/運(yùn)用 EXTEM是參與重組的TF(rTF)激活外源凝血系統(tǒng)，很快構(gòu)成血凝塊(相當(dāng)于

24、PT)，即為EXTEM-CT。EXTEM-CT的截?cái)嚅撝党鋈缃駥?shí)驗(yàn)開場后的80s，提示需輸注PCC或FFP； EXTEM-MCF：提供血凝塊最大強(qiáng)度和穩(wěn)定的信息，與血小板計(jì)數(shù)和Fg程度有關(guān)。 FIBTEM-MCF：實(shí)驗(yàn)中參與一種血小板抑制劑細(xì)胞松弛素D即代表Fg對血凝塊的強(qiáng)度；MCF截?cái)嚅撝党霈F(xiàn)于實(shí)驗(yàn)開場后的1015分鐘，其降低提示須輸注Fg制品； FIBTEM-MCF值正常而EXTEM-MCF值減低提示須輸注血小板，因此二者須同時(shí)檢測。 INTEM是實(shí)驗(yàn)中參與鞣花酸活化物，激活內(nèi)源凝血系統(tǒng)類似APTT；參與肝素酶HEPTM用肝素樣抗凝物檢查。比較INTEM-CT和HEPTEM-CT，可用于對

25、肝素化和魚精蛋白糾正的定量，二者需同時(shí)檢測。 針對圍手術(shù)期大出血患者床旁ROTEM檢查，應(yīng)包括EXTEM、FIBTEM、APTEM以及必要時(shí)用INTEM、HEPTEM等。 對于心臟手術(shù)體外循環(huán)被肝素化的患者，引薦將INTEM-CT和HEPTEM-CT作為首選的ROTEM檢查。引薦檢查的時(shí)間點(diǎn)手術(shù)之前有明顯出血，但尚未作糾正治療時(shí)置換一個(gè)血容之后術(shù)后檢測有無高凝形狀 血制品的輸注和止血藥的運(yùn)用 1、Fg/冷沉淀輸注：Fg1.0g/L，或ROTEM檢測EXTEM-MCF50mm及FIBTEM-MCF12mm。應(yīng)輸注Fg/冷沉淀。 EXTEM-MCF和FIBTEM-MCF的目的值參考值分別為5060

26、mm和1620mm。假設(shè)行施肝移植和心臟手術(shù)患者，其EXTEM-MCF可為45mm，F(xiàn)IBTEM-MCF可為8mm；假設(shè)無出血EXTEM-MCF的臨界值可35mm。2、血小板輸注：BPC 50109/L或EXTEM-MCF45mm + FIBTEM-MCF12mm，應(yīng)輸血小板制品。3、PPC/FFP輸注：APTT/PT 正常對照值的1.5倍或EXTEM-MCF 100mm。提示F、F、F、F的血漿程度減低，應(yīng)給予PPC或FFP。FFP應(yīng)輸注2030ml/kg國內(nèi)1015ml/kg，且可以補(bǔ)充F。4、rFa制品：在Fg 1.0 1.0g/L， BPC 50109/L和APTT/PT接近正常情況下

27、，其療效最正確?？梢赃x用TEG/ROTEM檢查中的R/CT、K/CFT縮短以及MA/MCF升高最能反映rFa的效果，但APTT/PT的縮短不能反映rFa的效果。十三血小板功能分析儀platelet function analyzer-100,PFA-100) 體外挑選血小板黏附和聚集的儀器。以標(biāo)有膠原/腺上腺素CEPI和膠原/ADPCADP兩種纖維膜為誘導(dǎo)劑，以察看膜孔閉合時(shí)間closure time，CT為結(jié)果。參考范圍 CEPI為61203s；CADP：48 187sIn Vivo HaemostasisPFA100.avi capillary 200maperture150mepinep

28、hrine or ADPplateletvWFerythrocyteFLOW- 40 mbarcollagen membranePFA-100 Test Principlelumenfibrinogenplateletcollagen fibrilserythrocyteendothelial cellvWF 臨床運(yùn)用 一期止血缺陷的挑選實(shí)驗(yàn)。 敏感性：CEPI/CADP為82.5%/66.9% 特異性： CEPI/CADP為88.7%/85.5% 陰性預(yù)測值： CEPI/CADP為83%/75% 陽性預(yù)測值： CEPI/CADP為88%/79% vWD：CEPI/CADP的敏感性為88%/8

29、7%；特異性為95%/95%。 血小板無力癥：CT延伸，可替代BT，準(zhǔn)確、可靠。 服用ASA時(shí)：CEPI的CT延伸，CADP可正常；與其他疾病與藥物誘導(dǎo)血小板功能異常鑒別的敏感性和特異性分別為100%和50%。 方法學(xué)評價(jià) PFA-100操作簡便、快速、結(jié)果準(zhǔn)確。CEPI/CADP的變異系數(shù)為12%/8%，與PAgT有良好相關(guān)性。 受PLT、貧血Hct30%、O型血型、3.8%枸櫞酸鹽和富含核黃素食物等的影響；Fg的裂解肽可影響 Fg-vWF/GPb-a的結(jié)合十四凝血酶生成十四凝血酶生成(Thrombin generation，TGT)的檢測及其臨床運(yùn)用的檢測及其臨床運(yùn)用 乏血小板血漿(PPP

30、)試劑(含TF和磷脂)作用于待測血漿，激活凝血系統(tǒng)，最終生成凝血酶。后者將熒光底物ZGGR-AMC*轉(zhuǎn)化為熒光基團(tuán)AMC，AMC在390nm激發(fā)光的作用下發(fā)出460nm波長的熒光。熒光讀數(shù)儀實(shí)時(shí)檢測產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度，經(jīng)過電腦自動繪制凝血酶生成曲線。 * ZGGR-AMC: Z-Gly-Gly-Arg-AminoMethyl coumarin凝血酶生成實(shí)驗(yàn)的原理CAT檢測法主要有5個(gè)目的： 延遲時(shí)間(lagtime):即從反響開場到凝血酶開場生成所閱歷的時(shí)間(min為單位)。 峰值(peak):即生成凝血酶的最大量(nM為單位)。 達(dá)峰時(shí)間(ttpeak):即從反響開場到凝血酶到達(dá)最大值所閱歷的時(shí)

31、間(為單位)。 凝血酶生成潛力(Endogenous thrombin potential,ETP): 即凝血酶生成曲線下的微積分面積，反映凝血酶的生成量(nMmin為單位)。 ETP比值：即患者ETP與正常人ETP的比值(%為單位)。凝血酶生成實(shí)驗(yàn)的臨床運(yùn)用在低分子量肝素(LMWH)治療中的凝血酶生成檢測抗凝藥物治療：例如華法林治療(n=78)。 隨著PT-INR值的遞增，TGT的峰值下降，延伸時(shí)間和達(dá)峰時(shí)間隨之延伸。 目前以為，華法林治療要求PT-INR為2.03.0， PT-INR1.5，華法林無效； PT-INR 2.0仍有血栓能夠； PT-INR 3.0出血事件添加， PT-INR

32、5.0出血危險(xiǎn)度劇增。 Dieri等報(bào)道，ETP30%時(shí)可致出血傾向，要求抗凝治療時(shí)ETP維持在50%為宜。假設(shè)以PT-INR與ETP同時(shí)用于華法林察看，能更全面反映凝血形狀。附：血管性血友病vWD的實(shí)驗(yàn)診斷 血管性血友病von Willebrand dise- ase,vWD是由于血管性血友病因子von Willebrand factor,vWF合成的量或質(zhì)異常所致的以皮膚、粘膜出血為特征的遺傳性或獲得性出血病。診斷vWD的常用檢測挑選實(shí)驗(yàn)：BT，APTT，BPC診斷實(shí)驗(yàn)：F:C，vWF:Ag，vWF:Rcof分型實(shí)驗(yàn)：vWF多聚體， vWF-膠原結(jié)合實(shí)驗(yàn) vWF:CB， vWF-因子結(jié)合 實(shí)驗(yàn)vWF- F:BT vWF-膠原結(jié)合實(shí)驗(yàn)vWF-Collagen binding assay, vWF:CB 原理ELISA法。以膠原為色被抗原，以抗vWF抗體為檢測抗體，主要檢測可與膠原結(jié)合的中、中分子量的vWF。 參考范圍62165。