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1、藍(lán)莓花色苷的降血脂和抗氧化作用foodandfermentationindustr藍(lán)莓花色苷的降血脂和抗氧化作用李穎暢,孟憲軍,孫靖靖.,于娜1(渤海大學(xué)生物與食品科學(xué)學(xué)院,遼寧錦州,121000)2(沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,遼寧沈陽(yáng),110161)3(遼寧醫(yī)學(xué)院,遼寧錦州,121000)摘要研究藍(lán)莓花色苷(anthocyaninsfromblueberryfruits,abbf)對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥大鼠的血脂水平和抗氧化能力的影響.將sd大鼠分成正常對(duì)照組,高脂組,低,中,高劑量藍(lán)莓花色苷組,測(cè)定其血脂水平及血清和肝臟總抗氧化能力(t-aoc),谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(gshpx),超氧化物歧化酶(s

2、od)活性和mda含量.結(jié)果表明:攝入藍(lán)莓花色苷后高脂血癥大鼠血脂水平和動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(ai)均較高脂組顯著降低,而血清和肝臟ta0c,sod和gshpx活性明顯增強(qiáng),mda的生成量顯著減少.關(guān)鍵詞藍(lán)莓花色苷,高脂血癥,降血脂,抗氧化高血脂,動(dòng)脈硬化等心腦血管疾病的增加已成為當(dāng)今社會(huì)影響人類健康的一大難題,因此,具有降血脂,抗動(dòng)脈硬化的藥品和保健品一直受到人們的廣泛重視,黃酮類化合物在這方面具有較好的療效口,花色苷屬于黃酮類物質(zhì),李進(jìn)等人口研究表明,黑果枸杞色素具有降低高脂血癥小鼠血脂的作用.藍(lán)莓(blueberry),又稱越橘,藍(lán)漿果,屬杜鵑花科(ericaceae)越橘屬(vaccini

3、um.spp)多年生落葉或常綠灌木.藍(lán)莓果實(shí)呈深藍(lán)色,含有豐富的花色苷,具有促進(jìn)視紅素再合成,抗炎癥,提高免疫力,延緩衰老,抗癌等多種生理活性功能3.國(guó)內(nèi)外對(duì)藍(lán)莓花色苷生理功能的研究主要集中在清除自由基作用,抗癌等方面,而其對(duì)體內(nèi)生理活性影響的研究還很少.本文探討藍(lán)莓花色苷對(duì)高脂血癥大鼠血脂和抗氧化的影響,為藍(lán)莓花色苷功能食品的開發(fā)提供理論依據(jù).1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)材料1.1.1藍(lán)莓花色苷的制備取一定質(zhì)量藍(lán)莓果,破碎,用ph3.0的體積分?jǐn)?shù)6o乙醇溶液按1g:15ml的比例混合均勻,于4o下浸提2h后抽濾,收集濾液,40減壓濃縮得到紅色粘稠的粗提液,經(jīng)ab一8大孔樹脂純化,4o減壓濃縮得到純

4、化的藍(lán)莓花色苷濃縮液,真空干燥得到紫黑色粉末.純化后莓花色苷的色價(jià)為54.1o,水分含量為0.01%.第一作者:博士,副教授(孟憲軍為通訊作者).收稿日期:20080512,改回日期:2008053o44iqq曼旦!:曼皇q!1曼1.1.2大鼠飼料基礎(chǔ)飼料由遼寧省沈陽(yáng)市于洪區(qū)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)飼料廠提供,高脂飼料配方:基礎(chǔ)飼料86.5,蛋黃粉5.8,豬油7.0,膽固醇0.5%,0.2牛膽酸鈉,由遼寧省沈陽(yáng)市于洪區(qū)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)飼料廠軋制,低溫保存.1.1.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物清潔級(jí)雄性sd大鼠5o只,體重(18020)g,由遼寧省中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.1.1.4實(shí)驗(yàn)試劑總膽固醇(tc)測(cè)定試劑盒,甘油三脂(tg)測(cè)

5、定試劑盒,高密度脂蛋白膽固醇(hdlc)測(cè)定試劑盒,低密度脂蛋白膽固醇(ldl-c)測(cè)定試劑盒,購(gòu)自北京中生北控生物科技股份有限公司;總抗氧化能力(t-aoc)測(cè)定試劑盒,谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(gshpx)活力測(cè)定試劑盒,丙二醛(mda)測(cè)定試劑盒,超氧化物歧化酶(sod)測(cè)定試盒,考馬斯亮蘭蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒,購(gòu)自南京建成生物工程研究所;膽固醇,牛膽酸鈉,購(gòu)自北京奧博星生物科技有限公司;分析所用的其他化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純.1.1.5實(shí)驗(yàn)儀器電熱恒溫水浴鍋,國(guó)華儀器有限公司;漩渦混合器,上海精科實(shí)業(yè)有限公司;uv-1600型紫外可見分光光度計(jì),北京瑞利分析儀器公司;dzf-6050型真空干燥箱,

6、上海精宏儀器設(shè)備有限公司;電子天平,北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司.1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組將實(shí)驗(yàn)大鼠用普通飼料喂養(yǎng)5d,適應(yīng)環(huán)境后,按體重隨機(jī)分成5組:陰性對(duì)照,高脂模型,低,中,高3個(gè)藍(lán)莓花色苷劑量組,每組1o只,分別按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)飼以不同的飼料,開始進(jìn)入實(shí)驗(yàn)期.1.2.2動(dòng)物飼養(yǎng)及處理將各組大鼠按組分籠飼養(yǎng),除對(duì)照組飼以基礎(chǔ)飼料外,其他4組飼以高脂飼料.各組每天灌胃處理如下:低,中,高藍(lán)莓花色苷劑量組分別給予50mg花色苷/kg體重,100mg花色苷/kg體重,200mg花色苷/kg體重,對(duì)照組和高脂模型組給予同樣體積的生理鹽水.自由攝食飲水,飼養(yǎng)時(shí)間40d.40d后,禁食12h,

7、頸總動(dòng)脈采血,3000g離心15rain分離血清,測(cè)血脂水平和抗氧化指標(biāo).動(dòng)物飼養(yǎng)在沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)學(xué)院清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室完成.1.2.3檢測(cè)指標(biāo)及方法1.2.3.1血脂水平測(cè)定以大鼠血清為材料,分析tc,tg,hdl-c,ldlc等血脂4項(xiàng),同時(shí)計(jì)算動(dòng)脈硬化指數(shù)(atherosclerosisindex,ai),按照公式ai1一(tc_hdl-c)/hdl_c和ai一ldl-c/hdlc計(jì)算各組大鼠的ai,以反映機(jī)體發(fā)生as的危險(xiǎn)性的大小.1.2.3.2肝組織勻漿液的制備與蛋白質(zhì)含量測(cè)定肝組織勻漿液的制備與蛋白質(zhì)含量測(cè)定:取肝組織在冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,稱重,用滅菌生理鹽水做

8、勻漿介質(zhì),4c下制得100g/l肝勻漿,將肝勻漿液2500r/rain,4離心15rain,取上清液分裝,4保存?zhèn)溆?考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)含量.1.2.3.3血清和肝勻漿總抗氧化能力,sod活性,gsh-px,mda的測(cè)定總抗氧化能力,sod活性,gshpx活性,mda含量的測(cè)定方法按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行,用分光光度計(jì)測(cè)定.1.3實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理以spss10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用xs表示.2結(jié)果與分析2.1藍(lán)莓花色苷對(duì)高脂血癥大鼠血脂水平的影響由表1可以看出,模型組甘油三酯(tg),總膽固醇(tc),低密度脂蛋白膽固醇(ldl_c)含量顯著(p<0.05)高于陰性對(duì)照組

9、,高密度脂蛋白膽固醇(hdl_c)含量顯著(p<0.05)低于陰性對(duì)照組.3個(gè)藍(lán)莓花色苷劑量組tg,tc,ldl-c含量顯著(p<o.05)低于模型組,低,高藍(lán)莓花色苷劑量組之間差異達(dá)到顯著水平.3個(gè)藍(lán)莓花色苷劑量組hdl-c含量相對(duì)模型組顯著(p<0.05)升高,3個(gè)藍(lán)莓花色苷劑量組之間hdl-c含量差異顯著(p<o.05).由此說(shuō)明藍(lán)莓花色苷具有降低高脂大鼠血清中tg,tc,lddc的作用,提高h(yuǎn)dlc的作用,并存在一定的量效依賴性.表1灌胃不同劑量藍(lán)莓花色苷對(duì)實(shí)驗(yàn)大鼠血脂水平的影響注:新復(fù)極差法的多重比較,不同英文小寫孚母表不0.05水平的差異顯著,相同字母差異不

10、顯著,表2表6l司.2.2藍(lán)莓花色苷對(duì)高脂血癥大鼠動(dòng)脈硬化指數(shù)的影ai和ai均較模型組顯著降低(p<0.05),3個(gè)藍(lán)響莓花色苷劑量組之間ai差異達(dá)到顯著水平(p<由表2可知,大鼠經(jīng)高脂誘導(dǎo)后,其動(dòng)脈硬化指0.05),高劑量藍(lán)莓花色苷組ai已降到正常水平.數(shù)ai(tc-hdl_c)/hdl_c)和ai.(ldl-c/hdl一高劑量藍(lán)莓花色苷組與低劑量藍(lán)莓花色苷組ai差c)顯著(p<0.05)升高,3個(gè)藍(lán)莓花色苷劑量組的異顯著.表2灌胃不同劑量藍(lán)莓花色苷實(shí)驗(yàn)大鼠的動(dòng)脈硬化指數(shù)生蔓鲞筻塑(星篁塑i45dandfermentat10nindust2.3藍(lán)莓花色苷對(duì)高脂血癥大鼠總抗氧

11、化(t-aoc)能力的影響大鼠血清和肝臟t_aoc結(jié)果(表3)表明,經(jīng)高脂飼料誘導(dǎo)后,模型組大鼠血清和肝臟的taoc較陰性對(duì)照組均顯著(p<o.05)降低,灌胃藍(lán)莓花色苷后,3個(gè)劑量組大鼠血清和肝臟中的ta0c均較模型組顯著(p<o.05)升高.在大鼠血清中,中,高劑量藍(lán)莓花色苷組較陰性對(duì)照組顯著(p<o.05)升高,低劑量藍(lán)莓花色苷組與陰性對(duì)照組相比差異不顯著.在大鼠肝臟中,高劑量藍(lán)莓花色苷組較陰性對(duì)照組顯著(p<0.05)升高;低,中藍(lán)莓花色苷劑量組taoc與陰性對(duì)照組無(wú)顯著性差異.說(shuō)明藍(lán)莓花色苷具有提高大鼠血清和肝臟的taoc能力,并表現(xiàn)劑量依賴性.表3灌胃不同劑

12、量藍(lán)莓花色苷大鼠血清和肝臟的總抗氧化能力2.4藍(lán)莓花色苷對(duì)高脂血癥大鼠超氧化物歧化酶(sod)的影響高脂誘導(dǎo)后,模型組大鼠血清和肝臟s0d活性較陰性對(duì)照組顯著(p<0.05)降低;與模型組相比,3個(gè)藍(lán)莓花色苷劑量組血清和肝臟sod活性均顯著(p<o.05)提高;高劑量藍(lán)莓花色苷組的血清和肝臟sod活性相對(duì)陰性對(duì)照組顯著(p<o.05)升高,并且其與低劑量組之間sod活性差異達(dá)顯著水平(p<o.05),低,中劑量藍(lán)莓花色苷組和對(duì)照組sod活性無(wú)顯著差異(見表4).表4灌胃不同劑量藍(lán)莓花色苷大鼠血清和肝臟的sod活性2.5藍(lán)莓花色苷對(duì)高脂血癥大鼠谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(gsh-

13、px)的影響由表5可以看出,與模型組相比,3個(gè)藍(lán)莓花色模型組的gshpx較陰性對(duì)照組顯著(p<0.05)下降,3個(gè)藍(lán)莓花色昔劑量組的gshpx活性較模型組顯著(p<o.05)升高,且高藍(lán)莓花色苷劑量組與陰性苷劑量組的血清gshpx活性顯著(p<o.05)上升,對(duì)照組的差異達(dá)顯著水平(p<o.05),低,中劑量藍(lán)藍(lán)莓花色苷3個(gè)劑量組之間差異不顯著;在肝臟中,莓花色苷組gshpx活性差異不顯著.表5灌胃不同劑量藍(lán)莓花色苷大鼠血清和肝臟的gsh-px活力2.6藍(lán)莓花色苷對(duì)高脂血癥大鼠丙二醛(mda)的影響經(jīng)高脂誘導(dǎo)后,模型組大鼠血清和肝臟中的mda水平顯著(p<o.05

14、)增加,灌胃藍(lán)莓花色苷后,3個(gè)劑量組血清和肝臟的mda含量較模型組顯著(p<0.05)下降,其中,低,中藍(lán)莓花色苷劑量組血清46l2008vo1.34no,10(total250)mda和陰性對(duì)照組無(wú)顯著差異,高劑量組血清mda相對(duì)陰性對(duì)照組顯著降低(p<0.05).中,高劑量組肝臟mda水平與陰性對(duì)照組相比亦顯著下降(p<o.05).表明藍(lán)莓花色苷可以有效降低大鼠體內(nèi)的氧化代謝產(chǎn)物丙二醛含量,并呈量效依賴性(見表6).表6灌胃不同劑量藍(lán)莓花色苷大鼠血清和肝臟的mda含量3討論動(dòng)物試驗(yàn)和臨床研究顯示高脂血癥與脂質(zhì)過(guò)氧化之間存在密切關(guān)系l7.研究發(fā)現(xiàn),高脂模型組大鼠在血脂升高的

15、同時(shí),血清和肝臟中的mda含量顯著增加,血清和肝臟中的抗氧化酶sod和gsh-px活性顯著下降,說(shuō)明了血脂升高的同時(shí)脂質(zhì)過(guò)氧化作用增強(qiáng),抗脂質(zhì)過(guò)氧化物酶活性降低.灌胃藍(lán)莓花色苷后,各劑量組大鼠血清和肝臟的mda含量較高脂模型組顯著下降,而sod和gshpx活性較高脂模型組明顯升高.提示藍(lán)莓花色苷可能通過(guò)提高機(jī)體抗氧化酶類活性降低體內(nèi)自由基水平,減少自由基的毒副作用,降低自由基造成的損傷,從而起到調(diào)節(jié)血脂和預(yù)防動(dòng)脈硬化的作用.研究表明,藍(lán)莓花色苷能顯著提高高脂血癥大鼠血清中hdlc含量,同時(shí)降低血清中tc,tg,ldl-c含量.血清tc,tg含量高是高血脂癥的主要指標(biāo),hdl-c能夠轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)脈壁膽

16、固醇到肝臟分解為膽酸,是有效的抗動(dòng)脈硬化(as)因子.kayamories給老鼠喂食含大量膽固醇的食物,同時(shí)飼喂一種從茄子中提取的?;w燕草花色苷,結(jié)果鼠血清中的總膽固醇含量下降,而糞便排泄物中的膽固醇和膽汁酸卻增加,藍(lán)莓花色苷使總膽固醇降低可能是由于其阻礙了小腸對(duì)膽固醇和膽汁酸的吸收.筆者試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),apoai濃度升高可激活lcat活性,但藍(lán)莓花色苷降血脂的機(jī)制還需進(jìn)一步研究.研究還表明,灌胃不同劑量的藍(lán)莓花色苷提取物后,相對(duì)高脂模型組動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)ai,ai均有下降趨勢(shì),提示藍(lán)莓花色苷對(duì)as有一定的預(yù)防作用.動(dòng)脈粥樣硬化是多因素所致的慢性疾病,其中血脂水平升高和高膽固醇血癥已經(jīng)被確認(rèn)為

17、動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生和發(fā)展的重要因素,降低血脂尤其是膽固醇水平可減少動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)性93.hdl能夠?qū)⑼庵芙M織和細(xì)胞的膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟代謝,生成膽酸,以降低血漿中的膽固醇,是有效的抗動(dòng)脈粥樣硬化(as)因子.ldl的功能之一是將膽固醇帶到外圍組織,充當(dāng)膽固醇的主要載體.由于ldl攜帶的膽固醇可能沉積在血管壁上,故血漿中l(wèi)dl濃度過(guò)高對(duì)機(jī)體是不利的,而且當(dāng)體內(nèi)氧化狀態(tài)升高時(shí),ldl易被氧化,氧化的ldl(ox-ldl)可能損傷內(nèi)皮細(xì)胞,且極易被單核巨噬細(xì)胞清道夫受體識(shí)別而進(jìn)入細(xì)胞,使細(xì)胞內(nèi)膽固醇堆積并轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞,形成as早期病變.sod和gshpx是機(jī)體重要的抗氧化酶,在清除過(guò)氧化物和保護(hù)

18、細(xì)胞免于損傷中起重要作用.thoms等人1.報(bào)道,gshpx對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞防御氧化ldl損傷起到重要作用.藍(lán)莓花色苷可能通過(guò)升高h(yuǎn)d卜c含量,提高機(jī)體抗氧化能力,從而降低脂質(zhì)過(guò)氧化物對(duì)動(dòng)脈壁細(xì)胞及其成分(如ldl)的損傷,達(dá)到預(yù)防as的作用.4結(jié)論藍(lán)莓花色苷使高脂血癥大鼠血脂水平和動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)(ai)顯著降低,血清和肝臟taoc,sod和gshpx活性明顯增強(qiáng),mda的生成量顯著減少.藍(lán)莓花色苷具有降血脂和抗氧化生物活性,降低動(dòng)脈硬化發(fā)生的危險(xiǎn)性.參考文獻(xiàn)1張妍,李厚偉,張永春.山楂中總黃酮幾種提取方法的考察及含量測(cè)定j.哈爾濱醫(yī)科大學(xué),2001,(7):1832李進(jìn),瞿偉菁,劉叢,等.黑果枸

19、杞色素對(duì)高脂血癥小鼠血脂及脂質(zhì)過(guò)氧化的影響口.食品科學(xué),2007,28(9):5145183凌關(guān)庭.可供開發(fā)食品添加劑(ix):蘭莓提取物及其抗氧化作用j.糧食與油脂,2003,(6):45484孫志健,張燕,陳芳,等.對(duì)藍(lán)莓產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的思考ej3.食品工業(yè)科技,2005,26(12):1831845mazzag,kayd,tonycotterll,eta1.absorptionofanthocyaninsfromblueberiesandserumantioxidantstatusinhumansubjeetsj.jagricfoodchem,2002,50(10):773177376wei

20、guangy,casimircakoh,joanfischer,eta1.effectsofphenoliccompoundsinblueberriesandmuscadinegrapesonhepg2cellviabilityandapoptosisj.foodresearchinternational,2006,39(5):6286387郭紅,陳在嘉,徐義樞.血清脂質(zhì)與脂質(zhì)過(guò)氧化關(guān)系的l2008年第34卷第10期(總第250期)i4/.if00dandfermentat10nindu臨床研究u1.中國(guó)循環(huán)雜志,1991,6(5):3733758kayamorif,igarashik.eff

21、ectsofdietarynasunioontheserumcholesterollevelinratsej.biosci.biotechnolbio-chem,1994,58:5075719王克勤.脂蛋白與動(dòng)脈粥樣硬化m.北京:人民衛(wèi)生出版社,1995,417?lotomasjp,geigerpg,girottiam.lethaldamagetoendothelialcellbyoxidizedlowdensitylipoprotein:roleofse1enoper0xidaseincyctopr0tectionagainslipidhydroperoperoxide-andiron-me

22、diatedreactionsej.lipidres,1993,479490effectsofanth0cyanionsfromblueberryonlowingthecholesterolandantioxidationliyingchang,mengxianjun,sunjingjing.,yuna1(collegeofbidogyandfoodscience,bohaiuniversity,jinzhou121000,china)2(collegeoffoodscience,shenyangagriculturaluniversity,shenyang110161,china)3(lia

23、oningmedicalcollege,jinzhou121000,china)abstracttheeffectsofblueberryanthocyaninsonthelevelofserumlipidsandantioxidativeabilityinhyperlipidemicratswerestudied.thesdratsweredividedinto5groups,includingnormalgroup,modelgroups,low-,medium-andhighdosesblueberryanthocyaninsgroups.thelevelsofserumlipids,t

24、aoc,thecontentofmdaandactivityofsod,gsh-pxinserumandliverweremeasured.theresultsshowedthatthelevelsofserumlipidsandather0sclerosisindexinhyperlipidemicratsfedwithblueberryanthocyaninonweresignificantlylowerthanthoseofthemodelgroup.thecapabilityoftaocandactivitiesofsod,gshpxwerealsoincreasedwhilethecontentsofmdainserumandliverweredecreased.keywordsblueberryanthocyaninons,hyperlipidemia,decreasingbloodlipid,antioxidation累酵飲料將葡國(guó)標(biāo)作為健康飲料的重要一員,

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