抗生素類藥物分析

1、第十一章第十一章第一節(jié)第一節(jié) 概述概述抗生素的定義抗生素的定義 抗生素是細(xì)菌、放線菌和真抗生素是細(xì)菌、放線菌和真菌等微生物的代謝產(chǎn)物，對各種菌等微生物的代謝產(chǎn)物，對各種病原微生物有強(qiáng)大的抑制或殺滅病原微生物有強(qiáng)大的抑制或殺滅作用。作用?？股氐膩碓纯股氐膩碓?. 1. 生物合成（發(fā)酵）生物合成（發(fā)酵） 2. 2. 化學(xué)合成或半合成化學(xué)合成或半合成抗生素質(zhì)量的復(fù)雜性抗生素質(zhì)量的復(fù)雜性 產(chǎn)品穩(wěn)定性差產(chǎn)品穩(wěn)定性差 分子結(jié)構(gòu)大多不穩(wěn)分子結(jié)構(gòu)大多不穩(wěn) 定，降解后療效下定，降解后療效下降、失效或增加毒降、失效或增加毒副作用副作用發(fā)酵過程不易控制發(fā)酵過程不易控制易受污染易受污染生產(chǎn)工藝復(fù)雜生產(chǎn)工藝復(fù)雜發(fā)酵

2、液中雜質(zhì)發(fā)酵液中雜質(zhì) 無機(jī)鹽、脂肪、各種蛋白質(zhì)、無機(jī)鹽、脂肪、各種蛋白質(zhì)、各種降解產(chǎn)物、色素、熱原、各種降解產(chǎn)物、色素、熱原、毒性物質(zhì)毒性物質(zhì) 增加增加 異常毒性、細(xì)菌內(nèi)毒素、異常毒性、細(xì)菌內(nèi)毒素、熱原、降壓物質(zhì)、無菌熱原、降壓物質(zhì)、無菌 檢查檢查含量測定方法含量測定方法（一）生物學(xué)方法（一）生物學(xué)方法測定抗生素抑菌或殺菌的能力測定抗生素抑菌或殺菌的能力優(yōu)點優(yōu)點1、與臨床效果一致、與臨床效果一致2、靈敏度高、靈敏度高3、干擾物質(zhì)少、干擾物質(zhì)少缺點缺點1、操作繁瑣、操作繁瑣2、培養(yǎng)時間長、培養(yǎng)時間長2、測定誤差大、測定誤差大（二）化學(xué)及物理化學(xué)方法（二）化學(xué)及物理化學(xué)方法以理化方法測定主藥含量以

3、理化方法測定主藥含量優(yōu)點優(yōu)點 1. 準(zhǔn)確度高準(zhǔn)確度高2. 簡單、快速簡單、快速1. 不一定代表生物效價不一定代表生物效價缺點缺點2. 易受雜質(zhì)干擾易受雜質(zhì)干擾分類分類（按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)）：（按結(jié)構(gòu)與性質(zhì)）： 內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、 四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、 氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類 林可霉素類、其他抗生素類林可霉素類、其他抗生素類nsch3ch3coohohn1234567rco母核（6-氨基青霉烷酸）第二節(jié)第二節(jié) 內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 青霉素類青霉素類頭孢菌素類頭孢菌素類7654321nonhsch2r1cooh母核（

4、7-氨基頭孢菌烷酸）rcoconsohncoohch3ch3ch2青霉素青霉素（青霉素（青霉素g、芐青霉素）、芐青霉素）nh2consohncoohch3ch3ch2氨芐西林氨芐西林（氨芐青霉素）（氨芐青霉素）阿莫西林阿莫西林（羥氨芐青霉素）（羥氨芐青霉素）nh2consohncoohch3ch3hoch2c2h52nch2ch2oocnsohncoohch3ch3occh2nh2普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素頭孢氨芐頭孢氨芐nonhsch3coohocnh2ch2頭孢拉定頭孢拉定ch2nh2cononhsch3cooh頭孢羥氨芐頭孢羥氨芐nonhsch3coohocnh2ch2ho頭孢噻吩鈉頭

5、孢噻吩鈉sch2cononhsch2ococh3coonansohncookch3ch3occh2酸性酸性結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、一、nana與堿金屬與堿金屬(na+、k+)成鹽成鹽 （一）羧基（一）羧基 易溶于水易溶于水 與有機(jī)堿與有機(jī)堿(普魯卡因普魯卡因)成鹽成鹽 難溶于水難溶于水普魯卡因普魯卡因青霉素青霉素c2h52nch2ch2oocnsohncoohch3ch3occh2nh2nso1234567（二）手性（二）手性c 87654321nos(5%頭孢唑啉鈉溶液頭孢唑啉鈉溶液 1824)20d 頭孢菌素類頭孢菌素類 c6 c7青霉素類青霉素類 c3 c5 c6 旋光性旋光性 （三）共

6、軛體系（三）共軛體系 nso頭孢菌素類頭孢菌素類 母核有共軛體系母核有共軛體系 青霉素類青霉素類 母核無明顯母核無明顯uv 多數(shù)有苯環(huán)取代基多數(shù)有苯環(huán)取代基 nos uv青霉素鈉青霉素鈉uv7-20（四）（四）內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán) 水溶液水溶液 不穩(wěn)定不穩(wěn)定 干燥純凈干燥純凈 穩(wěn)定穩(wěn)定 不穩(wěn)定不穩(wěn)定性因素性因素四元環(huán)張力大四元環(huán)張力大 酰胺鍵易水解酰胺鍵易水解 （某些金屬離子）（某些金屬離子）（溫度）（溫度）失失效效降降解解青青霉霉素素類類酸酸、堿堿、青青霉霉素素酶酶某些氧化劑某些氧化劑例例青霉素的降解反應(yīng)青霉素的降解反應(yīng)青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸h2o/oh青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸h2

7、oph2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羥胺酸?；u胺酸nh2oh青霉烯酸青霉烯酸ph4青霉胺青霉胺co2青霉醛青霉醛hgcl2失效失效降解降解頭孢菌素類頭孢菌素類酸、堿、胺類酸、堿、胺類內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶 二、二、k+、na+反應(yīng)反應(yīng)（一）（一）鑒別鑒別 焰色焰色鮮黃色鮮黃色 + 醋酸氧鈾鋅醋酸氧鈾鋅黃黃 na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼鈉四苯硼鈉 + ac白白 k+（二）呈色反應(yīng)（二）呈色反應(yīng)1. 羥肟酸鐵反應(yīng)羥肟酸鐵反應(yīng) -內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類naoh hclnohh內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺類類呈色呈色羥肟酸衍生物羥肟酸衍生物fe3+/3h+nsonscohnhohh2noh hclnschnhof

8、e3+3oh+fe3+/3 （紅、棕、褐）（紅、棕、褐）2、 與與h2so4 - hno3反應(yīng)反應(yīng)亮黃亮黃紅棕紅棕黃色黃色頭孢噻肟鈉頭孢噻肟鈉頭孢噻吩鈉頭孢噻吩鈉頭孢氨芐頭孢氨芐 hnosoh頭孢菌素類頭孢菌素類nh2consohncoohch3ch3ch23. 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng)藍(lán)藍(lán)紫紫色色氨氨基基茚茚三三酮酮 - -氨基氨基-氨基、伯胺氨基、伯胺某些羥基胺類某些羥基胺類酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮縮合縮合藍(lán)紫色藍(lán)紫色+h2ocnch2rc oh2rchh2ncooh2ohccococohnh2ccocococohcnccocococohchrnccococo4. 雙縮脲反

9、應(yīng)雙縮脲反應(yīng)-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類 conh紫紫內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類堿性酒石酸銅堿性酒石酸銅 （開環(huán)分解）（開環(huán)分解）2ohconh2cucohncch3coonach3snhnch3ch3coonacsnohohooch2nh2ch2hh藍(lán)紫色藍(lán)紫色5. 與變色酸與變色酸-硫酸反應(yīng)硫酸反應(yīng)活潑活潑“-ch2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨芐西林氨芐西林hchochsoh ”羰基側(cè)鏈含“羰基側(cè)鏈含“（分解）（分解）變色酸變色酸顯色顯色nh2consohncoohch3ch3hoch2 變色酸變色酸阿莫西林阿莫西林hchosoh150（縮合）（縮合）色色褐褐so3hso3hhohoso3hso3hho

10、hoohohho3sho3schhcho （縮合）（縮合）6. 與重氮苯磺酸反應(yīng)與重氮苯磺酸反應(yīng)橙橙黃黃色色重重氮氮苯苯磺磺酸酸 ohhc（偶合）（偶合）酚羥基酚羥基頭孢哌酮頭孢哌酮snohconhchconhh5c2oonnocoohch2snnnnch3nclnnao3s oh（偶合）（偶合）nnnnch3snohconhchconhh5c2oonnocoohch2snnnao3s7. 與銅鹽反應(yīng)與銅鹽反應(yīng) cusohac頭孢氨芐頭孢氨芐橄欖綠色橄欖綠色naoh專屬反應(yīng)專屬反應(yīng)（三）沉淀反應(yīng)（三）沉淀反應(yīng)1. 遇酸遇酸白白青青霉霉素素青青霉霉素素鈉鈉青青霉霉素素鉀鉀 h2. 有機(jī)胺鹽反應(yīng)有

11、機(jī)胺鹽反應(yīng)（1）重氮化）重氮化 - 偶合反應(yīng)偶合反應(yīng) 青霉素青霉素普魯卡因普魯卡因普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素 h重氮化重氮化-偶合反應(yīng)偶合反應(yīng)紅紅 芳伯氨基芳伯氨基c2h52nch2ch2oocnsohncoohch3ch3och+c2h52ch2nh2h2ncooch2ch2n普魯卡因普魯卡因普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素nch2ch2ooc2c2h5n+cl-n2c2h5cooch2ch2nnh2hclnano2 （2）與三硝基苯酚反應(yīng)）與三硝基苯酚反應(yīng) 三硝基苯酚三硝基苯酚二芐基乙二胺二芐基乙二胺芐星青霉素芐星青霉素naoh二芐基乙二胺二芐基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚h2ohoh-hco

12、nsohncoohch3ch3ch2ch2nch2ch2nhch2ohno2o2nno2ch2nch2ch2nhch2光譜法光譜法（四）（四）1、 uv法法a,emin,max,%1cm1 光光譜譜圖圖樣品、分解產(chǎn)物樣品、分解產(chǎn)物nm339ha 苯苯唑唑青青霉霉烯烯酸酸苯苯唑唑青青霉霉素素cu2+頭孢氨芐頭孢氨芐 max = 262nm青霉素青霉素v鈉鈉 a280nm/a264nm = 1.301.50noconhch3nosch3ch3coonanochch3ococnhnchhcch3ch3shchcoohcu2+ph3.8氯唑青霉素氯唑青霉素 341 0.682雙氯青霉素雙氯青霉素 34

13、2 0.653苯唑青霉素苯唑青霉素 339 1.328max %1cm1e(nm) ml/g50 2、 ir法法117401815 cmvoc116901710 cmvoc-內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán)酰胺酰胺3、 nmr法法 利用不同結(jié)構(gòu)的原子核在利用不同結(jié)構(gòu)的原子核在d2o中有中有不同的不同的nmr光譜進(jìn)行鑒別光譜進(jìn)行鑒別jp以吸收峰頻率對峰強(qiáng)度進(jìn)行作圖以吸收峰頻率對峰強(qiáng)度進(jìn)行作圖 主要研究原子核的磁化性質(zhì)及其在主要研究原子核的磁化性質(zhì)及其在外磁場中的運(yùn)動規(guī)律外磁場中的運(yùn)動規(guī)律硫酸慶大霉素硫酸慶大霉素nmr譜譜7-08硫酸慶大霉素硫酸慶大霉素nmr色譜法色譜法（五）（五）1、 tlc法法對照品對照法對

14、照品對照法和斑點顏色和斑點顏色比較比較供試品供試品對照品對照品相同條件相同條件fr2、 hplc法法rt比較比較供試品供試品對照品對照品相同條件相同條件 精密稱取樣品精密稱取樣品0.1009g，置，置250ml碘瓶中，碘瓶中，加水加水10ml，振搖使溶解，精密加溴滴定液，振搖使溶解，精密加溴滴定液(0.1mol/l)25.0ml，再加鹽酸，再加鹽酸5ml，立即密塞，立即密塞并振搖并振搖1分鐘，在暗處靜置分鐘，在暗處靜置15分鐘后，注意分鐘后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液微開瓶塞，加碘化鉀試液10ml，立即密塞，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.09863mol

15、/l）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，消耗硫代硫酸鈉滴定液續(xù)滴定至藍(lán)色消失，消耗硫代硫酸鈉滴定液(0.09863mol/l)13.80ml，并將滴定結(jié)果用空，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正，空白試驗消耗硫代硫酸鈉滴定白試驗校正，空白試驗消耗硫代硫酸鈉滴定液（液（0.09863mol/l）21.64ml。每。每1ml溴滴定溴滴定液液(0.1mol/l)相當(dāng)于相當(dāng)于13.01mg的的c12h17n2nao3。nsohncookch3ch3occh2酸性酸性結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、一、nana與堿金屬與堿金屬(na+、k+)成鹽成鹽 （一）羧基（一

16、）羧基 易溶于水易溶于水 與有機(jī)堿與有機(jī)堿(普魯卡因普魯卡因)成鹽成鹽 難溶于水難溶于水普魯卡因普魯卡因青霉素青霉素c2h52nch2ch2oocnsohncoohch3ch3occh2nh2nso1234567（二）手性（二）手性c 87654321nos(5%頭孢唑啉鈉溶液頭孢唑啉鈉溶液 1824)20d 頭孢菌素類頭孢菌素類 c6 c7青霉素類青霉素類 c3 c5 c6 旋光性旋光性 （三）共軛體系（三）共軛體系 nso頭孢菌素類頭孢菌素類 母核有共軛體系母核有共軛體系 青霉素類青霉素類 母核無明顯母核無明顯uv 多數(shù)有苯環(huán)取代基多數(shù)有苯環(huán)取代基 nos uv青霉素鈉青霉素鈉uv7-20

17、（四）（四）內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán) 水溶液水溶液 不穩(wěn)定不穩(wěn)定 干燥純凈干燥純凈 穩(wěn)定穩(wěn)定 不穩(wěn)定不穩(wěn)定性因素性因素四元環(huán)張力大四元環(huán)張力大 酰胺鍵易水解酰胺鍵易水解 （某些金屬離子）（某些金屬離子）（溫度）（溫度）失失效效降降解解青青霉霉素素類類酸酸、堿堿、青青霉霉素素酶酶某些氧化劑某些氧化劑例例青霉素的降解反應(yīng)青霉素的降解反應(yīng)青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸h2o/oh青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸h2oph2100青霉噻唑青霉噻唑酰基羥胺酸?；u胺酸nh2oh青霉烯酸青霉烯酸ph4青霉胺青霉胺co2青霉醛青霉醛hgcl2失效失效降解降解頭孢菌素類頭孢菌素類酸、堿、胺類酸、堿、胺類內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶

18、 (頭孢噻吩鈉水溶液頭孢噻吩鈉水溶液2524h失活失活8%)二、二、k+、na+反應(yīng)反應(yīng)（一）（一）鑒別鑒別 焰色焰色鮮黃色鮮黃色 + 醋酸氧鈾鋅醋酸氧鈾鋅黃黃 na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼鈉四苯硼鈉 + ac白白 k+（二）呈色反應(yīng)（二）呈色反應(yīng)1. 羥肟酸鐵反應(yīng)羥肟酸鐵反應(yīng) -內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類naoh hclnohh內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺類類呈色呈色羥肟酸衍生物羥肟酸衍生物fe3+/3h+nsonscohnhohh2noh hclnschnhofe3+3oh+fe3+/3 （紅、棕、褐）（紅、棕、褐）例：例：chp(2000)頭孢哌酮頭孢哌酮鑒別鑒別 取本品取本品10mg，加水，加水

19、2ml與鹽與鹽酸羥胺溶液酸羥胺溶液取取34.8%鹽酸羥胺溶鹽酸羥胺溶液液1份，醋酸鈉份，醋酸鈉-氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液1份，份，乙醇乙醇4份份3ml，振搖溶解后，放置，振搖溶解后，放置5min，加酸性硫酸鐵銨試液，加酸性硫酸鐵銨試液1ml，搖勻，顯紅棕色。搖勻，顯紅棕色。2、 與與h2so4 - hno3反應(yīng)反應(yīng)藍(lán)綠色藍(lán)綠色紅棕紅棕黃色黃色頭孢噻啶頭孢噻啶頭孢噻吩鈉頭孢噻吩鈉頭孢氨芐頭孢氨芐 hnosoh頭孢菌素類頭孢菌素類nh2consohncoohch3ch3ch23. 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng)藍(lán)藍(lán)紫紫色色氨氨基基茚茚三三酮酮 -氨基、伯胺氨基、伯胺某些羥基胺類某些羥基胺類酮式酮式烯醇式烯醇

20、式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮縮合縮合藍(lán)紫色藍(lán)紫色+h2ocnch2rc oh2rchh2ncooh2ohccococohnh2ccocococohcnccocococohchrnccococo4. 雙縮脲反應(yīng)雙縮脲反應(yīng)-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類 conh紫紫內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類堿性酒石酸銅堿性酒石酸銅 （開環(huán)分解）（開環(huán)分解）2ohconh2cucohncch3coonach3snhnch3ch3coonacsnohohooch2nh2ch2hh藍(lán)紫色藍(lán)紫色5. 與變色酸與變色酸-硫酸反應(yīng)硫酸反應(yīng)活潑活潑“-ch2-”青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨芐西林氨芐西林hchochsoh ”羰基側(cè)鏈含“羰基側(cè)鏈含“

21、（分解）（分解）變色酸變色酸顯色顯色 變色酸變色酸阿莫西林阿莫西林hchosoh150（縮合）（縮合）nh2consohncoohch3ch3hoch2色色褐褐so3hso3hhohoso3hso3hhohoohohho3sho3schhcho （縮合）（縮合）6. 與重氮苯磺酸反應(yīng)與重氮苯磺酸反應(yīng)橙橙黃黃色色重重氮氮苯苯磺磺酸酸 ohhc（偶合）（偶合）酚羥基酚羥基頭孢哌酮頭孢哌酮snohconhchconhh5c2oonnocoohch2snnnnch3nclnnao3s oh（偶合）（偶合）nnnnch3snohconhchconhh5c2oonnocoohch2snnnao3s7. 與

22、銅鹽反應(yīng)與銅鹽反應(yīng) cusohac頭孢氨芐頭孢氨芐橄欖綠色橄欖綠色naoh專屬反應(yīng)專屬反應(yīng)（三）沉淀反應(yīng)（三）沉淀反應(yīng)1. 遇酸遇酸白白青青霉霉素素青青霉霉素素鈉鈉青青霉霉素素鉀鉀 h2. 有機(jī)胺鹽反應(yīng)有機(jī)胺鹽反應(yīng)（1）重氮化）重氮化 - 偶合反應(yīng)偶合反應(yīng) 青霉素青霉素普魯卡因普魯卡因普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素 h重氮化重氮化-偶合反應(yīng)偶合反應(yīng)紅紅 芳伯氨基芳伯氨基c2h52nch2ch2oocnsohncoohch3ch3och+c2h52ch2nh2h2ncooch2ch2n普魯卡因普魯卡因普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素nch2ch2ooc2c2h5n+cl-n2c2h5cooch2ch2

23、nnh2hclnano2 （2）與三硝基苯酚反應(yīng)）與三硝基苯酚反應(yīng) 三硝基苯酚三硝基苯酚二芐基乙二胺二芐基乙二胺芐星青霉素芐星青霉素naoh二芐基乙二胺二芐基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚h2ohoh-hconsohncoohch3ch3ch2ch2nch2ch2nhch2ohno2o2nno2ch2nch2ch2nhch2光譜法光譜法（四）（四）1、uv法法a,emin,max,%cm 光譜圖光譜圖樣品、分解產(chǎn)物樣品、分解產(chǎn)物頭孢氨芐頭孢氨芐 max = 262nm青霉素青霉素v鈉鈉 a280nm/a264nm = 1.301.50苯苯唑唑青青霉霉烯烯酸酸苯苯唑唑青青霉霉素素 hcu2+nman

24、oconhch3nosch3ch3coonanochch3ococnhnchhcch3ch3shchcoohcu2+ph3.8氯唑青霉素氯唑青霉素 341 0.682雙氯青霉素雙氯青霉素 342 0.653苯唑青霉素苯唑青霉素 339 1.328max %cme (nm) ml/g 2、 ir法法117401815 cmvoc116901710 cmvoc-內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán)酰胺酰胺3、 nmr法法 利用不同結(jié)構(gòu)的原子核在利用不同結(jié)構(gòu)的原子核在d2o中有中有不同的不同的nmr光譜進(jìn)行鑒別光譜進(jìn)行鑒別jp 主要研究原子核的磁化性質(zhì)及其在主要研究原子核的磁化性質(zhì)及其在外磁場中的運(yùn)動規(guī)律外磁場中的運(yùn)動

25、規(guī)律色譜法色譜法（五）（五）1、tlc法法對照品對照法對照品對照法和斑點顏色和斑點顏色比較比較供試品供試品對照品對照品相同條件相同條件fr2、hplc法法rt比較比較供試品供試品對照品對照品相同條件相同條件三、三、 含量測定含量測定 iinaoh頭孢菌素族頭孢菌素族青霉素族青霉素族（水解）（水解） h碘量法碘量法（一）（一）1. 原理原理水解產(chǎn)物水解產(chǎn)物 osnanaiosnai定量過量定量過量剩余剩余-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類chp反應(yīng)分兩步進(jìn)行：反應(yīng)分兩步進(jìn)行：1. 水解反應(yīng)水解反應(yīng) (按化學(xué)計算量進(jìn)行按化學(xué)計算量進(jìn)行)2. 氧化氧化-還原反應(yīng)還原反應(yīng) (無固定的量關(guān)無固定的量關(guān)系，受溫度、系，受

26、溫度、ph值和時間等因素值和時間等因素影響，應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)條件并采影響，應(yīng)嚴(yán)格控制反應(yīng)條件并采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對照測定用標(biāo)準(zhǔn)品平行對照測定)nsch3ch3coohohnrcorcohhncoonach3ch3sncoonai24+ 5h2o+ 2hclnaohcch3ch3so3hchnh2coohchnhcorcooh2+2nacl+8hi第一步第一步第二步第二步例例注射用普魯卡因青霉素注射用普魯卡因青霉素 含量測定含量測定 取裝量差異項下的內(nèi)容物，精密稱取裝量差異項下的內(nèi)容物，精密稱取約取約0.12g，置，置100ml量瓶中，加水使溶量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取解并稀釋至刻

27、度，搖勻，精密量取5ml，置碘瓶中，加置碘瓶中，加1mol/l氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液1ml放置放置20分鐘，再加分鐘，再加1mol/l鹽酸溶液鹽酸溶液1ml與醋酸與醋酸-醋酸鈉緩沖液醋酸鈉緩沖液(ph4.5)5ml，精密，精密加入碘滴定液加入碘滴定液(0.01mol/l)15ml，密塞，密塞，搖勻，在搖勻，在2025暗處放置暗處放置20分鐘，用分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液（硫代硫酸鈉滴定液（0.01mol/l）滴定，）滴定，至近終點時加淀粉指示液，繼續(xù)滴定并至近終點時加淀粉指示液，繼續(xù)滴定并強(qiáng)力振搖，至藍(lán)色消失；另精密量取供強(qiáng)力振搖，至藍(lán)色消失；另精密量取供試品溶液試品溶液5ml，置碘瓶中，加醋

28、酸，置碘瓶中，加醋酸-醋酸醋酸鈉緩沖液（鈉緩沖液（ph4.5）5ml，精密加入碘滴，精密加入碘滴定液（定液（0.01mol/l）15ml，密塞，搖勻，密塞，搖勻，在暗處放置在暗處放置20分鐘，用硫代硫酸鈉滴定分鐘，用硫代硫酸鈉滴定液（液（0.01mol/l）滴定，作為空白。同時）滴定，作為空白。同時用青霉素鈉對照品同法測定作對照，算用青霉素鈉對照品同法測定作對照，算出供試品的含量。出供試品的含量。v樣空樣空v樣樣對照液對照液+緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴+堿堿+酸酸+緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴 v對空對空v對對2. 方法方法供試液供試液+緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴+堿堿+酸酸+

29、緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴 空白試驗空白試驗a、消除樣品已降解產(chǎn)物的干擾、消除樣品已降解產(chǎn)物的干擾b、消除樣品中其他消耗碘的雜、消除樣品中其他消耗碘的雜 質(zhì)的干擾質(zhì)的干擾c、消除碘揮發(fā)造成的誤差、消除碘揮發(fā)造成的誤差 以未經(jīng)水解的樣品作空白測定以未經(jīng)水解的樣品作空白測定空白空白樣品樣品i2na2s2o3i-i2 采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對照測定采用標(biāo)準(zhǔn)品平行對照測定a、可消除溫度、可消除溫度、ph、操作、環(huán)、操作、環(huán) 境等條件的影響境等條件的影響b、使本法測定結(jié)果與微生物檢定、使本法測定結(jié)果與微生物檢定 法一致法一致3. 條件條件（1）弱酸性）弱酸性 ph4.5堿堿 i2 io3- + i-酸酸

30、普魯卡因與碘在酸性條件普魯卡因與碘在酸性條件 下會產(chǎn)生復(fù)鹽沉淀下會產(chǎn)生復(fù)鹽沉淀（2）溫度）溫度 2426溫度溫度38 未水解的供試品亦消耗碘未水解的供試品亦消耗碘（3）水解時間）水解時間以水解以水解20分鐘后的耗碘量最大分鐘后的耗碘量最大（4）反應(yīng)時間）反應(yīng)時間反應(yīng)反應(yīng)20分鐘后，耗碘量隨時間的分鐘后，耗碘量隨時間的變化較小，可減小含量測定的誤變化較小，可減小含量測定的誤差。差。4. 特點特點（1）靈敏度高）靈敏度高樣品樣品 : 碘碘 = 1 : 8（2）反應(yīng)條件、實驗操作要求高）反應(yīng)條件、實驗操作要求高v對對、v對空對空v樣樣、v樣空樣空1份含量份含量加試劑次序、反應(yīng)時間、滴定速度相同加試劑

31、次序、反應(yīng)時間、滴定速度相同4i28i-5. 計算計算原料原料%wwvvvv對對照照品品）（）（含含量量樣樣對對對對對對空空樣樣樣樣空空 汞量法汞量法（二）（二）1. 原理原理shroh 青霉素族青霉素族（水解）（水解）hgrs ）（青霉素族青霉素族chp hg .ph2. 方法方法 總總樣樣vnohghnonaoh 醋酸鹽緩沖液醋酸鹽緩沖液ph4.6滴定滴定水解水解 降降空空醋醋酸酸鹽鹽緩緩沖沖液液vnohg ph4.6滴定滴定樣樣品品 以未經(jīng)水解的樣品作空白測定以未經(jīng)水解的樣品作空白測定例例青霉素鈉青霉素鈉 含量測定含量測定 取本品約取本品約50mg，精密稱定，加水，精密稱定，加水5ml溶

32、解后，加溶解后，加1mol/l氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液5ml，搖勻，放置，搖勻，放置15分鐘，加分鐘，加1mol/l硝酸溶硝酸溶液液5ml，醋酸鹽緩沖液，醋酸鹽緩沖液(ph4.6)20ml及水及水20ml，搖勻，照電位滴定法，搖勻，照電位滴定法(附錄附錄 a),用鉑電極為指示電極，汞用鉑電極為指示電極，汞-硫酸亞汞電極硫酸亞汞電極為參比電極，在為參比電極，在3540，用硝酸汞滴，用硝酸汞滴定液定液(0.02mol/l)緩慢滴定，緩慢滴定，（控制滴定過程約為（控制滴定過程約為15分鐘），不計第分鐘），不計第一個等當(dāng)點，計算第二個等當(dāng)點時消耗一個等當(dāng)點，計算第二個等當(dāng)點時消耗滴定液的量。每滴定液的

33、量。每1ml硝酸汞滴定液硝酸汞滴定液(0.02mol/l)相當(dāng)于相當(dāng)于7.128mg的總青霉素的總青霉素(按按c16h17n2nao4s計算計算)。 另取本品約另取本品約0.5g，精密稱定，加水，精密稱定，加水與上述醋酸鹽緩沖液各與上述醋酸鹽緩沖液各25ml，振搖使完，振搖使完全溶解，在室溫下，立即用硝酸汞滴定全溶解，在室溫下，立即用硝酸汞滴定液液(0.02mol/l)滴定，終點判斷方法同上滴定，終點判斷方法同上.每每1ml硝酸汞滴定液（硝酸汞滴定液（0.02mol/l）相當(dāng)）相當(dāng)于于7.128mg的降解物（按的降解物（按c16h17n2nao4s計算）。計算）。 總青霉素的百分含量與降解物的

34、百總青霉素的百分含量與降解物的百分含量之差值即為青霉素的含量。分含量之差值即為青霉素的含量。3、 討論討論（1）以第二次滴定突躍為終點以第二次滴定突躍為終點 電位法指示終點電位法指示終點 （2）反應(yīng)摩爾比反應(yīng)摩爾比 1 : 1（3）空白試驗空白試驗 消除已降解產(chǎn)物干擾消除已降解產(chǎn)物干擾（4）優(yōu)點優(yōu)點 不需標(biāo)準(zhǔn)品不需標(biāo)準(zhǔn)品%wftv%wftv% 空空空空樣樣樣樣含量含量4、 計算計算%ftwvwv% ）（含量含量空空空空樣樣樣樣 精密稱取含水量為精密稱取含水量為0.5%的青霉素的青霉素鈉鈉0.0502g，按藥典方法測定總青霉素含，按藥典方法測定總青霉素含量時，用去硝酸汞滴定液量時，用去硝酸汞滴定

35、液(0.02009mol/l)6.97ml。另精密稱取上述樣品。另精密稱取上述樣品0.5013g，按藥典方法測定降解物含量時，用去硝按藥典方法測定降解物含量時，用去硝酸汞滴定液酸汞滴定液(0.02009mol/l)1.33ml。以干。以干燥品計算，求樣品中青霉素的含量。燥品計算，求樣品中青霉素的含量。例例青霉素鈉青霉素鈉 含量測定含量測定 .t %. %. （三）（三）1、 原理原理青霉噻唑酸青霉噻唑酸青霉素類青霉素類naoh（鈉鹽）（鈉鹽）ohnaclhclnaoh （剩剩余余）-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類chpnsch3ch3coonaohnrconsch3ch3coonachnonaorco 定量

36、過量定量過量naoh2、 方法方法 供供試試液液內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺類類ohnaoh定定量量過過量量 hcl回滴回滴中和中和中和中和例例苯唑西林鈉苯唑西林鈉 含量測定含量測定 取本品約取本品約0.5g，精密稱定，加新沸，精密稱定，加新沸過的并用過的并用0.01mol/l氫氧化鈉溶液中和至氫氧化鈉溶液中和至酚酞指示液剛顯紅色的水酚酞指示液剛顯紅色的水20ml，使溶解，使溶解,再用再用0.01mol/l氫氧化鈉溶液中和后，精氫氧化鈉溶液中和后，精密加氫氧化鈉滴定液密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/l)25ml，搖勻，置水浴中加熱搖勻，置水浴中加熱20分鐘，注意避免分鐘，注意避免吸收空氣中的二氧化碳，冷卻后

37、，加酚吸收空氣中的二氧化碳，冷卻后，加酚酞指示液酞指示液12滴，用鹽酸滴定液滴，用鹽酸滴定液（0.1mol/l）滴定，并將滴定結(jié)果用空）滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。每白試驗校正。每1ml的氫氧化鈉滴定液的氫氧化鈉滴定液(0.1mol/l)相當(dāng)于相當(dāng)于40.14mgc19h19n3o5s。 %wftvv% 樣樣空空含量含量3、討論討論（1）水解前先中和溶劑和樣品水解前先中和溶劑和樣品（2）加熱時避免吸收加熱時避免吸收co2 conanaohco不能使酚酞變紅不能使酚酞變紅（3）空白試驗校正空白試驗校正(消除消除na2co3干擾干擾)（4）特點特點 簡便快速簡便快速 不適用于有殘留酯的產(chǎn)品不

38、適用于有殘留酯的產(chǎn)品 %.%.799100101009009863001301080136421 nmcupha 青霉烯酸青霉烯酸青霉素族青霉素族（水解）（水解）可見可見-紫外分光光度法紫外分光光度法（四）（四）1、 酸水解法（銅鹽法）酸水解法（銅鹽法）（1）原理）原理穩(wěn)定劑穩(wěn)定劑jp青霉素族青霉素族ch2coconhhcch3ch3ccoohccnhshconsohncoohch3ch3ch2 phacu （2）方法）方法標(biāo)標(biāo)樣樣枸櫞酸枸櫞酸硫酸銅硫酸銅標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液供試液供試液aanma 320（3）特點）特點實驗條件隨各藥物穩(wěn)定性不同而定實驗條件隨各藥物穩(wěn)定性不同而定標(biāo)準(zhǔn)品對照法標(biāo)準(zhǔn)品對照

39、法%wwaa標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)品品含含量量樣樣標(biāo)標(biāo)標(biāo)標(biāo)樣樣 （4 4）計算）計算2、 硫醇汞鹽法硫醇汞鹽法（1）原理）原理青青霉霉烯烯酸酸硫硫醇醇汞汞鹽鹽青青霉霉素素族族 hgcl（咪唑）（咪唑）nmmax 青霉素族青霉素族chphgclch3ch3coonasnhconch2nhcoch3nsohncoonach3ch3occh2nhcoch3 hgcl咪唑咪唑nmmax （2）方法）方法對照品法對照品法%wwaa%對照品對照品樣樣標(biāo)標(biāo)標(biāo)標(biāo)樣樣 計算計算標(biāo)標(biāo)樣樣咪唑咪唑硼酸緩沖液硼酸緩沖液標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)準(zhǔn)液供試液供試液aahgcl 2ph 9例例氨芐西林鈉氨芐西林鈉 含量測定含量測定 取本品約取本品約60m

40、g 置置100ml量瓶中，加量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置另一，置另一100ml量瓶中，加水稀釋至量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，再精密量取刻度，搖勻，再精密量取5ml，置，置25ml量瓶中，加硼酸緩沖液量瓶中，加硼酸緩沖液2.5ml與醋酐的乙與醋酐的乙腈溶液（腈溶液（150）0.25ml，放置，放置5min后，后，加咪唑溶液至刻度，搖勻，置加咪唑溶液至刻度，搖勻，置60水浴水浴中，加熱中，加熱30min，取出冷卻，照分光光，取出冷卻，照分光光度法（附錄度法（附錄 a ），在），在325nm的波長的波長處測定吸收度；另取氨芐西林三水合處測

41、定吸收度；另取氨芐西林三水合物標(biāo)準(zhǔn)品，按同法測定，計算，即得。物標(biāo)準(zhǔn)品，按同法測定，計算，即得。 （3）討論）討論a. 咪唑催化的水解產(chǎn)率高，硫咪唑催化的水解產(chǎn)率高，硫 醇汞鹽穩(wěn)定（醇汞鹽穩(wěn)定（3h）b. 側(cè)鏈有側(cè)鏈有-nh2時，需加醋酐先時，需加醋酐先 將其乙?；蟛拍馨l(fā)生上述將其乙酰化后才能發(fā)生上述 反應(yīng)反應(yīng)nsohncooch3ch3occh2nh2nansohncoonach3ch3occh2nhcoch3 ochch ph9（4）特點）特點a、簡便快速、簡便快速b、用標(biāo)準(zhǔn)品對照，重現(xiàn)性良、用標(biāo)準(zhǔn)品對照，重現(xiàn)性良 好，好，rsd1%3、 羥肟酸比色法羥肟酸比色法usp jpfe3+/3

42、h+紅色紅色-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類naoh hclnohh內(nèi)內(nèi)酰酰胺胺類類羥肟酸衍生物羥肟酸衍生物hplc法法chp 頭孢菌素類頭孢菌素類內(nèi)標(biāo)法校正因子內(nèi)標(biāo)法校正因子外標(biāo)法外標(biāo)法特點特點 快速、高效、靈敏快速、高效、靈敏 專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好 一法多用（鑒別、檢查、含測）一法多用（鑒別、檢查、含測）哌拉西寧哌拉西寧 原料藥原料藥 含量測定含量測定色譜條件色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇劑；以甲醇0.2mol/l磷酸二氫鈉溶磷酸二氫鈉溶液液10氫氧化四乙基銨溶液氫氧化四乙基銨溶液水水（400503547）用磷酸調(diào)節(jié)）用磷酸調(diào)節(jié)ph值至值至5

43、.5為流動相。檢測波長為為流動相。檢測波長為254nm。第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素苷苷苷苷元元糖糖縮縮合合 氨氨基基糖糖苷苷苷苷元元氨氨基基糖糖縮縮合合 鏈霉素鏈霉素 雙氫鏈霉素雙氫鏈霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素慶大霉素慶大霉素 巴龍霉素巴龍霉素鏈霉素鏈霉素鏈霉胍鏈霉胍 + 鏈霉糖鏈霉糖 + n-甲基甲基-l-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖鏈霉雙糖胺鏈霉雙糖胺nh cnhnh2hoohohnhch2nnhooch3ohchoooch2ohohohnhch3鏈霉胍鏈霉胍鏈霉糖鏈霉糖n-甲基甲基-l-葡萄糖胺葡萄糖胺nh cnhnh2hoohohnhch2nnhooch3

44、ohchoooch2ohohohnhch3鏈霉胍鏈霉胍鏈霉糖鏈霉糖n-甲基甲基-l-葡萄糖胺葡萄糖胺慶大霉素慶大霉素 糖糖 苷元苷元絳紅糖胺絳紅糖胺 + 脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 roc r1r2hnnh2oohh2nnh2ooohnhch3ohch3絳紅糖胺絳紅糖胺紫素胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺加洛糖胺加洛糖胺n-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺roc r1r2hnnh2oohh2nnh2ooohnhch3ohch3絳紅糖胺絳紅糖胺紫素胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺加洛糖胺加洛糖胺n-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺慶大霉素慶大

45、霉素c復(fù)合物復(fù)合物 慶大霉素慶大霉素c1 r=h r1、r2=ch3 慶大霉素慶大霉素c2 r=r2=h r1=ch3 慶大霉素慶大霉素c1a r、r1、r2=h 慶大霉素慶大霉素c2a r=ch3 r1= r2=h 慶大霉素慶大霉素c2b r=r1=h r2=ch3一、一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)多與硫酸成鹽多與硫酸成鹽鏈霉素鏈霉素 3個個慶大霉素慶大霉素 5個個堿性中心堿性中心堿性堿性（一）（一）水溶性水溶性溶解性溶解性（二）（二）鏈霉素鏈霉素 ph57.5慶大霉素慶大霉素 ph212 穩(wěn)定穩(wěn)定uv（三）（三）穩(wěn)定性穩(wěn)定性（四）（四）鏈霉素水解產(chǎn)物反應(yīng)鏈霉素水解產(chǎn)物反應(yīng)（五）（五）nh cnh

46、nh2hoohohnhch2nnhooch3ohchoooch2ohohohnhch3坂口反應(yīng)坂口反應(yīng)n-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反應(yīng)糖胺反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)二、二、 鑒別鑒別 茚三酮反應(yīng)茚三酮反應(yīng)（一）（一）藍(lán)紫色藍(lán)紫色慶大霉素慶大霉素鏈霉素鏈霉素茚三酮茚三酮羥基胺結(jié)構(gòu)羥基胺結(jié)構(gòu)n-甲基葡萄糖胺反應(yīng)甲基葡萄糖胺反應(yīng)（二）（二）甲甲基基葡葡萄萄糖糖胺胺慶慶大大霉霉素素鏈鏈霉霉素素水水解解 n乙酰丙酮乙酰丙酮 oh-吡咯衍生物吡咯衍生物對二甲氨基苯甲醛對二甲氨基苯甲醛h+紅色紅色（elson-morgan反應(yīng)）反應(yīng)）nhch3nhnhnh c nh2hoohohnhch2nooch3ohchoo

47、och2ohohohnch3coch3hhoch2choh3(縮合縮合)323cochcochch ohhhh3ch3cchnncoch3ch3coch3ch3n紅色紅色對二甲氨基苯甲醛對二甲氨基苯甲醛h+nch3coch3hhoch2choh3 麥芽酚反應(yīng)麥芽酚反應(yīng)（三）（三） 鏈霉糖特有反應(yīng)鏈霉糖特有反應(yīng)鏈鏈霉霉糖糖鏈鏈霉霉素素 oh麥麥芽芽酚酚紫紫紅紅色色 3feh+分子重排分子重排nh c nh2hoohohnhch2nooch3ohchoooch2ohohohnhnhnhch3h2o naohooohch3ooch3fe3+h+ofe33+/紫紅紫紅麥芽酚麥芽酚鏈霉胍特有反應(yīng)鏈霉胍特

48、有反應(yīng)橙紅橙紅羥基喹啉羥基喹啉鏈霉胍鏈霉胍鏈霉素鏈霉素次溴酸鈉次溴酸鈉 8oh（或或-萘酚萘酚）noh8-8-羥基喹啉羥基喹啉坂口反應(yīng)坂口反應(yīng)（四）（四） - -萘酚萘酚ohonbrrnhco nh（四）（四） 24so反應(yīng)反應(yīng)白白 basosobah+uv法法（五）（五）ir法法（六）（六）慶大霉素?zé)o慶大霉素?zé)ouv吸收吸收nmmax 鏈霉素鏈霉素tlc法法（七）（七）三、三、 檢查檢查鏈霉素雜質(zhì)鏈霉素雜質(zhì)（一）（一）鏈霉素鏈霉素b（甘露糖鏈霉素）（甘露糖鏈霉素）2. 方法方法 tlc中的對照品法中的對照品法 （bp）1. 來源來源 反應(yīng)中間體反應(yīng)中間體對微生物的活性無明顯差異對微生物的活性無

49、明顯差異毒副作用和耐藥性不同毒副作用和耐藥性不同發(fā)酵菌種不同發(fā)酵菌種不同工藝差別工藝差別c組分比例組分比例不一致不一致規(guī)定控制各組分的相對百分含量規(guī)定控制各組分的相對百分含量chpuspbpjp慶大霉素慶大霉素c組分的測定組分的測定（二）（二） .ph吲吲哚哚衍衍生生物物巰巰基基醋醋酸酸鄰鄰苯苯二二醛醛氨氨基基max = 330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.1-烷基硫代烷基硫代-2-烷基烷基異吲哚衍生物異吲哚衍生物rnh2+hsch2coohoh-chochonrsch2coohrphplc方法方法 2.規(guī)定規(guī)定 c1 2550% c1a 1540% c2a +c2 2050%計算計算 3

50、.%aaaaa%acccciiaa 峰面積歸一化法峰面積歸一化法三、三、 含量測定含量測定鏈霉素、慶大霉素鏈霉素、慶大霉素微生物檢定法微生物檢定法 本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)本法系利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散作用量反應(yīng)平行線原理基內(nèi)的擴(kuò)散作用量反應(yīng)平行線原理的設(shè)計，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者的設(shè)計，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小對接種的試驗菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測定供試品效價的一種方法。，以測定供試品效價的一種方法。四、血清中慶大霉素的四、血清中慶大霉素的hplc法法 血漿樣品的預(yù)處理血漿樣品的預(yù)處理 離子對色譜法的目的：離子對色譜法的目的： 除去氨基酸、肽、胺的干擾除去氨

51、基酸、肽、胺的干擾 選用選用opa為熒光衍生化試劑為熒光衍生化試劑 采用柱后衍生化法采用柱后衍生化法 2ch3nrr3hohconh2oohohoohr2r1第四節(jié)第四節(jié) 四環(huán)素類抗生素四環(huán)素類抗生素abcd2ch3nrr3hohconh2oohohoohr2r11234567891011122ch3nhohconh2oohohoohch3ho四環(huán)素四環(huán)素（tc）tetracycline2ch3nhohconh2oohohoohch3hocl金霉素金霉素 (ctc) chlortetracycline氯四環(huán)素氯四環(huán)素2ch3nhohconh2oohohoohch3hooh土霉素土霉素 (otc

52、) oxytetracycline氧四環(huán)素氧四環(huán)素2ch3nhohconh2oohohoohch3oh多西環(huán)素多西環(huán)素 (dotc) doxycycline脫氧土霉素脫氧土霉素美他環(huán)素美他環(huán)素（metc） metacyclinehohconh2oohohoohn ch3 2ohch22ch3nrr3hohconh2oohohoohr2r1一、一、 結(jié)構(gòu)與性質(zhì)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)兩性兩性（一）（一）1. 與酸、堿均能成鹽與酸、堿均能成鹽2.強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中溶解度強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中溶解度 酚羥基、烯醇型羥基酚羥基、烯醇型羥基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱堿性弱堿性吸濕性吸濕性（二）（二）多含結(jié)晶水多含結(jié)晶水與金屬

53、離子生成有色配位化合物與金屬離子生成有色配位化合物ca2+ mg2+ fe3+ al3+ uv（三）（三）與金屬離子絡(luò)合與金屬離子絡(luò)合（四）（四）ph3 7.5 熒光熒光 hohocaoooohohoo不穩(wěn)定性不穩(wěn)定性（四）（四）1. 差向異構(gòu)化差向異構(gòu)化差差向向金金霉霉素素差差向向四四環(huán)環(huán)素素金金霉霉素素四四環(huán)環(huán)素素 ph淡黃淡黃黑黑藍(lán)色熒光藍(lán)色熒光ohconh2oohohoohch3hch32nho差向四環(huán)素差向四環(huán)素2ch3nhohconh2oohohoohch3ho2ch3nhohconh2oohohoohr2r1ho（土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化）（土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化）

54、2. 降解反應(yīng)降解反應(yīng)（1）酸性下降解酸性下降解脫水金霉素脫水金霉素脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素金霉素金霉素四環(huán)素四環(huán)素 phmax = 445nmmax = 435nm橙黃色橙黃色2ch3nhohconh2oohohoohch3hon ch3 2hohconh2oohoohch3oh脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素2ch3nhohconh2oohohoohch3hoph26ph26tcohconh2oohohoohch3hch32nhoetcn ch3 2hohconh2oohoohch3ohatcn2ch3ohconh2oohohohoch3heatcph2ph2（2）堿性下降解堿性下降解異四環(huán)素異四環(huán)素四環(huán)

55、素四環(huán)素 oh（熒光）（熒光）hohconh2oohohoohch3on ch3 2二、二、 鑒別試驗鑒別試驗h2so4反應(yīng)反應(yīng)（一）（一）黃色黃色朱紅色朱紅色綠綠藍(lán)藍(lán)深紫色深紫色鹽酸多西環(huán)素鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素 sohfecl3反應(yīng)反應(yīng)（二）（二）褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色紅棕色紅棕色鹽酸多西環(huán)素鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素 feclcl-反應(yīng)反應(yīng)（三）（三）白白 agclagclhnonmmax 1mol/l鹽酸鹽酸-甲醇（甲醇（1100）0.01mg/mluv法法（四）（四）熒光法熒光法

56、（五）（五）土霉素土霉素金霉素金霉素四環(huán)素四環(huán)素綠色熒光綠色熒光藍(lán)色熒光藍(lán)色熒光黃色熒光黃色熒光 ohuv綠色熒光綠色熒光h+uvtlc法法（六）（六）正相分配薄層正相分配薄層 色譜色譜ir法法（五）（五）edta 克服痕量金屬造成的克服痕量金屬造成的 拖尾現(xiàn)象拖尾現(xiàn)象三、三、 檢查檢查 4-差向四環(huán)素（差向四環(huán)素（etc） 脫水四環(huán)素（脫水四環(huán)素（atc） 差向脫水四環(huán)素（差向脫水四環(huán)素（eatc） 鹽酸金霉素（鹽酸金霉素（ctc） 有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)（一）（一）tlc法（法（1995版）版）hplc法（法（2000版）版）標(biāo)準(zhǔn)品對照法標(biāo)準(zhǔn)品對照法鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素四環(huán)素有關(guān)物質(zhì)四環(huán)素有關(guān)物質(zhì)tlc圖圖i. 供試液供試液( 5 mg/ml)ii. etc( 0.2 mg/ml)iii. atc( 0.025 mg/ml)iv. eatc ( 0.025 mg/ml)v. ctc ( 0.1 mg/ml)vi. 混合液混合液40.50.52吸收度吸收度（二）（二）nmmax 、鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素ctc).(anm 控控制制雜質(zhì)吸收度雜質(zhì)吸收度eatcatc.anm、控