ImageLab中文操作手冊

1、Image Lab中文操作手冊JDFast an d ReliableImage Lab全自動圖像獲取和分析軟件用于Molecular Imager ChemiDoc? XRS+Molecular Imager Gel Doc? XR+ 和 Criterion Stain Free TM成像系統(tǒng)，可應用于凝膠電泳 和轉(zhuǎn)印膜的數(shù)字成像和分析，而自動化的工作流程能加速圖像獲取步驟及參數(shù)優(yōu)化，并針對 調(diào)整好的凝膠或轉(zhuǎn)印膜影像進行系統(tǒng)性分 析，進而得到所需的分析數(shù)據(jù)結(jié)果亠、軟件操作界面主窗口工具列分析工具列啟動精靈程序桌面狀態(tài)列 rhi iii_ji .f.43-(祜G am血陶rL 詁MMiAr引件

2、齊Totir 、目丹時祝Cur/1.主窗口工具列檔案管理/分析數(shù)據(jù)Results Data2.顯示工具列圖像信息轉(zhuǎn)換3D成模式像改變圖像色彩 亮度明暗度轉(zhuǎn)換 全窗口大小縮小放大圖像顯示設(shè)定3.分析工具列(1 )圖像工具(Image To ols )(2 )泳道及條帶工具(Lane and Ba nd Tools )(3 )分子量工具(MW Molecular W eight )(4 )自動定量工具(Quantity Tools )(5 )注釋工具(Annotation Tools )(6 )手動定量工具(Volume Tools )二、使用Image Lab軟件進行化學發(fā)光圖像獲取流程1. 建

3、立圖像獲取程序：(2)選擇 Highlight saturated pixelso在凝膠成像 (Gel Imagi ng ) 對話框中選擇Chemi (化學發(fā)光)應用程序1E r eS*tuprbMM母 Tt* tplhw titt 4M0mrtK*liv 対 timcxpAaOfirTXI Ml 4 -i ulej和石上I;吏 i* .nfl arr nTlTisif tfiuL. :Ort iniPzticw OlJrUIN甜Co1oF r,Fj*oQjh-l jI yuneT-CTJiC-TrfSignal A twT W Bet在這個例子中，我們已經(jīng)輸入了小于和大于我們原始的300秒曝

4、光估計時間，因為我們有理由相信準確的成像時間將會在這些時間之中。我們總共想要5個成像，推測其中一個將會與最佳成像極為接近。一個您的SAM設(shè)定的圖像顯示出現(xiàn)在對話框里。而SAM設(shè)定的影像顯示對話窗口，在您選擇按鈕后再點選按鈕，窗口會顯示相關(guān)進度圖標來說明整體圖像獲取的時間。在250秒獲取第一個圖像，同時一個小的縮略圖會出現(xiàn)在窗口的下方，以此類推整個過程將持續(xù)到獲取所有的圖像。就像前面做過的那樣，通過移動鼠標在圖像上，您能判定強度值。您也可以通過使用位于程序窗口左邊的圖像轉(zhuǎn)換窗口( Image Transform )中的調(diào)節(jié)劃片改變圖像的表觀。在SAM程序中的任何地方您都能通過點擊縮略圖查看圖像。

5、若確定調(diào)整到符合您要求的圖像時，點擊按鈕舍棄其它不適合的圖像來完成獲取圖像的程序。也可在SAM獲取圖像的過程中或之后來保存需要的所有圖像，直接點選右鍵單點縮圖窗口內(nèi)的圖像即可進行存盤保留下來。在決定獲取圖像的數(shù)量時，記住增加SAM圖像會導致背景信號的平均。當較多的圖像被獲得時，在背景強度水平附近的弱的信號將會變得難以識別。如果辨別最弱的信號很重要，我們推薦在合適的時間下獲得單一的成像1、建立全自動圖像獲取及分析程序（Cr eatingPr otocols )1.啟動分析精靈窗口- STEP 1. GEL IMAGING1 GbE Im讀伺if旳 EindRM心卜 石el皿 XRFt It Sc

6、 iuH*uf d SLLtk! “丄丄暫如 11Pnolficol SetupWhit 1 *CiM些剛，H Z屮 n* Pdty ChiiFHUPucm 如:; W 笙ftM.-I UAYk&ftH rEFt 呼工 5u 血 iTtfMEjrafr 眄*PMliri剜*j Eh ira(jF ww-I HghMA -u/tu Mr j a(1 )按照應用(NucleicAcid/Protein/Blots）選擇相關(guān)的程序（Choose an applicati on).Nuddk Acid 詔合PlUltrfl 他hrJ1 .oMfrefsic HueFlbt 昨Copper 5tarv1

7、也11血京測AtatKfT:.-1-rtr q jzi dwOjQrti叔L FlLjrt ru nrrxSVPRC Ruby(2 )選擇成像區(qū)域(Choose th e Imaging Area )I寸厲丁廠口 Ar*n 1 5tect ad typr- tto RadlPRGTEAfil I! dtelO Enter mafle arej; T H1 1(3 )選擇成像曝光時間( Choose Image Exposure Time ).+, lewTf outnkally 4 茁小乂為tkw F陽 Mill：.代i豈工3亠 倉山iib注crrscBds lrtnrr；r H.indsa

8、i - r.irilbi-id5 PrkoM 匸切eIDmXMhJ泅(4 )選擇顯示設(shè)定(Choo se Display Optio ns , Highlight saturated pixels and ImageColor )5 ChwuiXK*RunW：J1 OJjTO3UP Aj： qLlB wdCcnbnj?bMOff2.圖像自動分析( An alyze Image ) - STEP 2. D ETECT LANES AND BANDS設(shè)定 DETECT LANES AND BANDS 的參數(shù)(Low Ba nd Detection Sen sitivity (Low sensiti

9、vity = 25)、High Band Detection Sensitivity ( High sensitivity = 75)或自行設(shè)定靈敏度。3. 分子量分析(Analyze Molecular Weight ) -STEP 3. ANALYZE MOLECULARWEIGHTP 亡曹.* j Hrft M Iigid敘騷Protocol 5fflup*陌叩.J- Sectfy ChitpuiPralocal Suainrwy設(shè)定 An alyze Molecular Weight Setti ngs的分子量標準品( Molecular WeightStandard )類型，所有Bi

10、o-Rad的各類標準品(包括核酸、蛋白)均已預存。當然，您也可以根據(jù)您的實驗設(shè)置您自定義的分子量標準品。并同時設(shè)定分子量標準品的泳道及回歸方4. 報告輸出設(shè)定( Report Setti ngs )- STEP 4. SPECIFY CONTENT OF R EPOR TS0KCpOrC5. 結(jié)果(Results Over view )及報告(Report )趣幣囲 WIN iBl iL If*薛犧L* ibehMfilenaui)arWsiglit iLabelsLane Framear 4Lone Bro Ad Rdngtt Dilution Rc-dd-OnlyPR - 5T耳(1 )數(shù)

11、據(jù)顯示信息(Display ing Data )A-35 lade.L(2 )分析表格設(shè)定( An alysis Table Optio ns )Lnsnr |Hdi葩口站.T” F -f也.Qixi.幅3、伽軋W祐宀-T：|_l一-飛網(wǎng)一墓r=rtJill 1BBSi srWI-IE2?瞬_3.1 I:-輛R眄亠學鬧i|LWf対麻皿f*wkpMoJ腫“（土FKzfw F.iti*Lf. Qw 撫L十Jj( J 搗gg1AL軀MEJt4275j9藥.M八-*星fUMj|ilTJl|1J_ptjfat.&yL 士電贈ty 4岬* _J4止(3) Lane 信息(Lane Profile ) Lm

12、迤(4 )標準曲線(Standar d Cur ve )Standard Ouj w*四、建立圖像分析程序(Cr eating Images AnalyzingPr otocols )1.圖像分析(Analyzing Images )(1 )分析工具 Analysis Tool Box(A )自動分析(Auto An alysis )點選進入 Detectio n Sett in gs 窗口設(shè)定 Detect lanes and bands的參數(shù)(Low Ba nd Detectio nSen sitivity( Lowsensitivity = 25 )、 High Band Detecti

13、on Sensitivity ( High sensitivity = 75) 或自行設(shè)定靈敏度)，接看再設(shè)定 Molecular Weight An alysis Setti ngs 的 Molecular W eight Sta ndard 、 Standard Lanes 及 Regr ession Met hod 參數(shù)。2.圖像工具(Image Tools )可進行水平或垂直翻轉(zhuǎn)、左右旋轉(zhuǎn)90 C或自由旋轉(zhuǎn)(Rotate )、裁剪(Crop )、反轉(zhuǎn)(In vert Data )及迭合 (Merge )。3. Lanes及 Bands 工具( Lane and BandTools )M

14、arLI.Al LafhK4U Adjustmi MweLarwBitio (land? EnaBe Subtraction19 C App kosalBdedLarisIl i E 口4(1) Lane Tab使用自動(Automati c )或手動(Manu al )搜尋Lane功能(A) 針對所有的 Lanes ( All Lanes )進行大小調(diào)整( Resize )、( Adjust)及刪除(Delete )等參數(shù)調(diào)整。(B) 針對單一 Lane ( Single Lane )進行增加(Add )、彎曲(Bend )、移動(Move )、寬度(Width)及刪除 (Delete )等

15、參數(shù)調(diào)整。(C) 利用La ne Backgrou nd Subtraction進行背景值的扣抵，并可點選(Apply to selected Lane )針對單一 Lane 進行調(diào)整。-可以藉由Ro lling Disk參數(shù)設(shè)定(1-99 mm )來去除背景值(2 ) Bands Tab通過Detect Ban ds進行自動搜尋 Bands功能或手動進行增加(Add )、刪除(Delete )及(Adjust )等參數(shù)調(diào)整。Sands極口4.分子量分析工具(Molecular W eight An alysisTools)此工具可由已知的標準品測算相對的分子量或堿基對(base pairs

16、).untjjrd LaresSehrt stridMd- by thtrl：” the-bcK below ths lanesMrtW:5.定量工具(Qua ntityTo ols )(1 )相對定量(Relative Quantity Tab )從圖像中選擇已知的 標準品(reference ban d )及其標準品濃度(以綠色R表示)，其分析結(jié)果可從 Analysi s table觀察*Qodnt.y T na 址Re同檢grl即SaP代占 refer ence bard mi thcfjriUIScckBends to add to pb 出竹.：Ljr時Unis：inknsqF*“4

17、 韓 onWeihod：已 en brid to.ftandard hand5心 LstelsA二 AlwwsoOI=*5=1J+ iHwWOJi 歸勺同 * 菊卿 M1 旳 X0K14 AnrwtatiOH IooIeg 也 Amofcner孤.i（2）絕對定量（Absolute Quantity Tab ）通過選擇已知標準品濃度的bands （至少兩個以上,以R表示），并設(shè)定合適的回歸參數(shù)計算所得之標準曲線來推算目標bands的絕對濃度（回歸參數(shù)設(shè)定如 Linear（較常用）、Point-to-Point 或 Cubic spline ）。Regressi on 1 MethodMinim

18、um nu mber of sta ndardMi nimum nu mber withForce ThroughOpti onLin earbands21Poin t-to-Po int21Cub ic Spline54% Art dimS3： P- cptrLSFS&. 5001,000lrSKi為 ODGBniutl Volume x 1000t ft*護sslori Netbod;FEMmLiIaiR-Sque- vau Rd, W啊ht 牝sntlatdfutva會bs, Ql前:icy WkndfifHQur /V 0AitnftSt F16.注釋工具（Anno tationTools)可以通過 Add Annotations 工具增加文字批注及箭頭批注，并可調(diào)整批注相對位置Alignment ）、文字屬性、顏色及旋轉(zhuǎn)方向等參數(shù)7.定量工具( V lume Tools )* Volume Tools按下 Round1 1Freeh jf id選擇較適合的Ba nd型態(tài),選取想要定量分析的Band位置,并在Band上點擊左鍵兩下可將樣品定義為標準品、未知樣品或背景空白,并分別定義其定WofunnesAlqnnAeritLLJ s esEac1： ground5itractlon Method:0 Localo Global量依據(jù)（如 kb，