顯微鏡的基本知識

1、顯微鏡的基本知識顯微鏡的基本知識 核工業(yè)417醫(yī)院檢驗科王軍鋒王軍鋒一、顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)一、顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) l光學系統(tǒng) 主要包括：物鏡、目鏡、聚光鏡和光源系主要包括：物鏡、目鏡、聚光鏡和光源系統(tǒng)四個主要部件。其次還包括濾光片、載玻片統(tǒng)四個主要部件。其次還包括濾光片、載玻片和蓋玻片和蓋玻片。l機械裝置 主要包括：鏡座與鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換主要包括：鏡座與鏡臂、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器、載物臺與移動器、粗動調(diào)焦機構(gòu)、微動調(diào)器、載物臺與移動器、粗動調(diào)焦機構(gòu)、微動調(diào)焦機構(gòu)。焦機構(gòu)。 物物 鏡鏡 l 物鏡一般都是在物鏡轉(zhuǎn)換器上旋著。它是顯微鏡的最主要部件。顯微鏡的放大及分辯作用主要由它來擔當。其優(yōu)劣直接決定了

2、顯微鏡的主要光學性能。l 物鏡都由多塊透鏡組成，而且放大倍數(shù)越高，結(jié)構(gòu)越復雜。在有的高倍物鏡和油鏡內(nèi)還裝有彈簧，在物鏡前端受壓時，鏡頭可以退縮回來。這樣一方面可以保護鏡頭，另一方面也不會把載玻片和蓋玻片壓碎。這種物鏡稱為彈簧物鏡。 物鏡的分類物鏡的分類 l根據(jù)象差校正情況可分三類： 消色差物鏡、復消色差的物鏡、平場物鏡。 l根據(jù)物鏡的放大倍率不同可分為：低倍、中倍和高倍物鏡 。l根據(jù)使用方法的差異可分：干燥系、浸液系物鏡（據(jù)浸液的種類可分為油浸系和水浸系兩類 ）兩大類 物鏡上的數(shù)字和符號物鏡上的數(shù)字和符號 物鏡通常都標有表示物鏡光學性能和使用條件的一些數(shù)字和符號.如“40/0.65”“160/

3、0.17”。此處的40表示它的放大倍數(shù)（有的寫成40或40：1）；0.65表示它的數(shù)值孔徑（有的寫成N.A.1.65或A.0.65）；160表示使用該物鏡時，顯微鏡的機械筒長應為160mm；0.17表示使用該物鏡時，蓋玻片的厚度應為0.17mm。有些低倍物鏡，在有、無蓋玻片的情況下都可以使用，所以不標0.17而代之以橫線-。有些油鏡上標有油（oil）字 目目 鏡鏡 l 目鏡通常插在鏡筒上。其作用是把物鏡放大后的像作進一步的放大，使人眼睛能夠清楚地觀察標本。它有單目和雙目兩種工作方式。 l 現(xiàn)代目鏡均用復合透鏡，這樣便于將倍率色差、慧差和象差等缺點加以糾正。目鏡有兩個透鏡，近物的稱為場鏡 ，近目

4、的稱為目鏡。 聚聚 光光 器器 l聚光器大都通過手旋螺絲固定在鏡臺下面。 l由聚光鏡和可變光闌兩個部件組成。聚光鏡的作用是將光源來的光線會聚到標本上，以便觀察?？勺児怅@又叫光圈或虹彩光闌，裝在聚光鏡的下方，由十幾塊金屬薄片組成。中央通光孔為圓形，移動可變光闌的把手，可以任意調(diào)節(jié)通光孔的大小。 光源系統(tǒng)光源系統(tǒng) l 光源系統(tǒng)用來供給照明標本用的光線。顯微鏡所用的光源有自然光和電光源兩種。 l 使用電光源的顯微鏡，其光源系統(tǒng)由光源燈電路、光源燈、透鏡、反射鏡的等組成,系統(tǒng)通常安裝在燈座內(nèi)。 其其 它它l濾光片：使用濾光片后可以有選擇地濾除某些光線，使觀察效果更佳。l 載玻片和蓋玻片 ：載玻片是用來

5、承載樣本的，蓋玻片是用來覆蓋樣本的。通常觀察標本時，標本夾在兩塊玻璃之間。下面的一塊叫載玻片，上面的叫蓋玻片。二者一般是用透明玻璃片制成，只是大小、薄厚有所區(qū)別。標準蓋玻片的厚度為0.17mm;載玻片的厚度則為1.1mm。 鏡座與鏡臂鏡座與鏡臂 l鏡座：是顯微鏡的基座，用以支撐整個鏡體。電光源顯微鏡的鏡座為多方形，其內(nèi)部裝有電光源系統(tǒng)。l鏡臂：呈弓形，立于鏡座的上端。主要用它來支撐鏡筒和與鏡筒相連接的光學元件?，F(xiàn)在的顯微鏡都和主體并在一起。 鏡鏡 筒筒 l鏡筒上端可插目鏡，下端連接物鏡，可分為單目、雙目和三目三種。l單目鏡筒：現(xiàn)在已經(jīng)很少用。l雙目鏡筒：為了適應兩眼距離不同的人使用，調(diào)節(jié)瞳距范

6、圍通常是在55-75mm。之間；伸縮調(diào)節(jié)方式，其目的是為了適應視力不同的人使用，調(diào)節(jié)范圍通常在500度近視和遠視之間。 l三目鏡筒：三目鏡筒是為顯微攝影需要配置的。 物鏡轉(zhuǎn)換器物鏡轉(zhuǎn)換器 l物鏡轉(zhuǎn)換器裝于鏡筒下端，用來安裝和轉(zhuǎn)換物鏡。按安裝物鏡的孔數(shù)不同，可分為四孔式、五孔式、六孔式、七孔式等幾種。以五、六孔居多。 載物臺與移動器載物臺與移動器 l載物臺用于承放標本。它與顯微鏡的光軸垂直，臺面中央有一個圓形的通光孔 。 l為了便于操作，常在固定式的載物臺上增加一個移動器。當 標本被夾入移動器后，使用移動器的橫向和縱向調(diào)節(jié)旋鈕，以便上下左右移動標本。粗動粗動調(diào)焦機構(gòu)和調(diào)焦機構(gòu)和微動微動調(diào)焦機構(gòu)調(diào)

7、焦機構(gòu) l粗動調(diào)焦機構(gòu)簡稱粗調(diào)，是用來快速調(diào)焦的裝置。由粗動手輪控制。旋轉(zhuǎn)手輪，可以使物、目鏡與載物臺快速相對移動。 l微動調(diào)焦機構(gòu)簡稱微調(diào)，是顯微鏡作精細調(diào)焦用的一種慢動裝置。它的總調(diào)節(jié)距離一般為1.83mm，由微動手輪控制。旋轉(zhuǎn)微動手輪時，光學系統(tǒng)的移動非常慢。 二、顯微鏡的使用二、顯微鏡的使用l使用環(huán)境與工作習慣 l使用前的準備 l反射鏡、聚光器的用法和對光方法 1 1、使用環(huán)境與工作習慣、使用環(huán)境與工作習慣 l顯微鏡的工作場所應當清潔、干燥、無震動、無腐蝕性氣體存在。 l臺面和凳子的高度要適當。l調(diào)節(jié)瞳距瞳距和伸縮調(diào)節(jié)伸縮調(diào)節(jié)使雙眼均可以清楚觀察到影像。2 2、使用前的準備、使用前的準

8、備 ( (光學系統(tǒng)的安裝光學系統(tǒng)的安裝) )l對新購或已經(jīng)卸掉光學系統(tǒng)的顯微鏡，使用前必須安裝光學系統(tǒng)。安裝時，為了防止向下掉灰塵，應按照先上后下的順序，即按照目鏡、物鏡、聚光鏡、反射鏡的順序來安裝。2 2、使用前的準備、使用前的準備( (光學系統(tǒng)的安裝光學系統(tǒng)的安裝) )l安裝物鏡:先將鏡筒升高，使轉(zhuǎn)換器與載物臺之間保持一定的距離。然后，握住物鏡，把它放入轉(zhuǎn)換器的螺絲口處，先略向反時針方向旋轉(zhuǎn)，待物鏡配上絲紋后，在按順時針方向旋入，旋至中等程度松緊即可。安裝三個以上的物鏡時，應根據(jù)物鏡的放大倍數(shù)，從小到大順時針安裝，轉(zhuǎn)換物鏡時，不要用手推著物鏡旋轉(zhuǎn)，那樣會使物鏡的光軸歪斜。最好用手捏著轉(zhuǎn)換器

9、的轉(zhuǎn)動盤旋轉(zhuǎn)，或用手扶著與物鏡轉(zhuǎn)換器銜接處的滾花外圓旋轉(zhuǎn)。2 2、使用前的準備、使用前的準備( (光學系統(tǒng)的安裝光學系統(tǒng)的安裝) )l安裝聚光器:目鏡和物鏡裝好后，再將聚光器插入載物臺的下面的聚光器支架內(nèi)。插入的高度應使聚光器生至最高時，聚光鏡上透鏡的端面稍低于載物臺的平面，以免載玻片與聚光器的鏡頭相碰。然后，將聚光器的固定螺絲旋緊。2 2、使用前的準備、使用前的準備 ( (校正光軸校正光軸) )l校正光軸的意義在于使物鏡、目鏡、聚光鏡的主光軸和可變光欄的中心點重合在一條直線上。所以又叫做合軸調(diào)節(jié)或中心調(diào)節(jié)。如果光軸歪斜，會使象差增大，分辨率和清晰度都要下降。 l一般由專業(yè)工程師來完成。l顯微

10、鏡的光軸校正好后，如果沒有拆下聚光器或其它特殊原因，不必經(jīng)常校正。 3 3、反射鏡、聚光器的用法和對光方法反射鏡、聚光器的用法和對光方法 1）反射鏡的用法 一般都使用平面反射鏡，反射太陽的散射光。只有在光線不足或窗外有干擾時，才使用凹面反射鏡。 3 3、反射鏡、聚光器的用法和對光方法反射鏡、聚光器的用法和對光方法2）聚光器高度的調(diào)節(jié) l一般的聚光鏡，在平行光照射的情況下，其焦點落在它上端透鏡平面中心上方約1.25mm處。當使用高倍或油鏡時，由于放大率大，鏡像亮度小，需要較強的照明。因此，應把聚光器升至最高，以便使聚光鏡的焦點正好落在標本平面上。但在使用低倍鏡時，可將聚光器適當下降。3 3、反射

11、鏡、聚光器的用法和對光方法反射鏡、聚光器的用法和對光方法3）可變光欄的用法 l可變光欄起兩個作用。一是控制射向標本的光通量；二是改變聚 光器的數(shù)值孔徑。在這兩個作用中，后者是主要的。為了使物鏡的分辨率得到充分的利用，從原則上說，聚光器的數(shù)值孔徑應與物鏡的相同。否則，分辨率或清晰度就要下降。 4 4、物鏡的正確調(diào)焦、物鏡的正確調(diào)焦 l無論作何種檢查，均應從低倍鏡開始。調(diào)焦時，先用粗動手輪將鏡筒下降，使低倍鏡的前透鏡與蓋玻片之間的距離略縮小于該物鏡的工作距離（5mm以下）。為了避免物鏡壓在標本玻片上，可從側(cè)面窺視。然后，一邊從目鏡中觀察視野，一邊利用粗動手輪將鏡筒徐徐上升，待初見物像后，改用微動手

12、輪作精細調(diào)焦，直至物像最清晰為止。4 4、物鏡的正確調(diào)焦、物鏡的正確調(diào)焦l低倍物鏡的視場大，有利于觀察標本的全貌。也可利用移動器尋覓觀察的目標，如有必要，可將尋得的目標移至視場的中心，為高倍鏡觀察作好準備。l從低倍鏡轉(zhuǎn)換為高倍鏡時，如果物鏡是顯微鏡的原配物鏡，所用的載玻片、蓋玻片有符合標準，一般都可以進行等高轉(zhuǎn)換。即轉(zhuǎn)換后，只要稍微調(diào)節(jié)一下微調(diào)旋鈕，即可看到清晰的圖象。 4 4、物鏡的正確調(diào)焦、物鏡的正確調(diào)焦l使用油鏡的方法：先將鏡筒升高，取下標本玻片，稍稍降低聚光器，并在聚光器的鏡頭上滴兩滴香柏油（油中不應有氣泡），再將標本蓋玻片放回原處，把聚光器升高，使載玻片的底面與香柏油接觸。這樣，就完

13、成了聚光鏡的油浸。接著，在蓋玻片上滴上一滴香柏油。然后從側(cè)面窺視，利用粗調(diào)使鏡筒盡量下降，直至油鏡的前透鏡浸沒在香柏油中（但尚未接觸玻片），這樣，又完成了物鏡的油浸。然后，一邊從目鏡中觀察，一邊利用微動手輪將鏡筒緩緩上升（注意不要擰錯了方向，壓碎蓋玻片） ，直至視野中出現(xiàn)最清晰的物像為止。 4 4、物鏡的正確調(diào)焦、物鏡的正確調(diào)焦l注意：在使用油鏡時，允許在聚光鏡與標本之間不加香柏油，即聚光鏡上仍以空氣為介質(zhì)，但這會犧牲物鏡的分辨率。 l注意：如果油鏡觀察后，有需要轉(zhuǎn)回高倍物鏡觀察，應將蓋玻片上的油擦去，以免沾污高倍物鏡。但聚光器上的油可以不擦，只要把光欄適當縮小一點即可。 4 4、物鏡的正確調(diào)

14、焦、物鏡的正確調(diào)焦l注意：油鏡使用完畢后，要及時將香柏油擦拭干凈。鏡頭上可先用干凈的擦鏡紙擦干凈即行。聚光鏡的擦拭方法與此相同。如標本需要保存，玻片上的香柏油可用拉紙法擦拭干凈。即將擦鏡紙覆蓋在玻片上，在紙上滴上一滴二甲苯，趁濕將紙條平拖著往外拉，連續(xù)幾次即可擦干凈。 l注意：最后指出：在整個調(diào)焦過程中（尤其是高倍物鏡和油鏡的調(diào)焦），每個動作都要緩慢進行。否則，物像會一閃而過，找不到觀察目標。 三、三、顯微鏡的維護顯微鏡的維護 l經(jīng)常性的維護 l使用中的維護 l光學系統(tǒng)的擦拭 l機械部分的擦拭 1 1、經(jīng)常性的維護、經(jīng)常性的維護 l防潮：如果室內(nèi)潮濕，光學鏡片容易生霉，生霧。一旦生霉，很難除去

15、。內(nèi)部的鏡片由于不便擦拭，潮濕對其危害性更大。機械零件受潮，容易生銹。為了防潮，除了選擇干燥的房間外，存放地點也應離墻、離地、遠離潮濕。l防塵：光學元件表面落入灰塵，不僅影響光線通過，而且經(jīng)光學系統(tǒng)放大后，會生成很大的污斑，影響觀察?；覊m、砂粒落入機械部分，還會增加磨損，引起運動受阻，危害同樣很大。因此，必須經(jīng)常保持顯微鏡的清潔。 1 1、經(jīng)常性的維護、經(jīng)常性的維護l防腐蝕：顯微鏡不能和具有腐蝕性的化學試劑放在一起，如硫酸、鹽酸、強堿等。 l防熱：防熱的目的主要是為了避免熱脹冷縮引起的開膠與脫落。 2 2、使用中的維護、使用中的維護 l微調(diào)是顯微鏡機械裝置中較精細而又容易損壞的元件，擰到了限位

16、以后，就擰不動了。此時決不能強擰。否則，必然損壞。調(diào)焦時，遇到這樣情況，應將微調(diào)退回35圈，重用粗調(diào)調(diào)焦，待初見物像后，在改用微調(diào)。 l使用高倍鏡觀察液體標本時，一定要加蓋玻片。否則，不僅清晰度下降，而且試液容易浸入高倍鏡的鏡頭內(nèi)，使鏡片遭受污染和腐蝕。 2 2、使用中的維護、使用中的維護l油鏡使用后，一定要擦拭干凈。香柏油在空氣中暴露時間過長，就會變稠和干涸，到這時再去擦拭就比較困難了。鏡片上留有油漬，清晰度必然下降。 l儀器出了故障，不要勉強使用。否則，可能引起更大的故障和不良后果。例如，在粗動手輪不靈活時，如果強行旋動，會使齒輪、赤條變形或損壞。 3 3、光學系統(tǒng)的擦拭、光學系統(tǒng)的擦拭

17、l平時對顯微鏡的各光學部分的表面，用干凈的毛筆清掃或用擦鏡紙擦拭干凈即行。在鏡片上有摸不掉的污物、油漬或手??；鏡片生霉、生霧；長期挺用后復用時，需要進行比較認真的擦拭。l擦拭范圍：目鏡和聚光鏡允許拆開。物鏡因結(jié)構(gòu)復雜，裝配時又要專門的儀器來校正才能恢復原有的精度，故嚴禁拆開。 3 3、光學系統(tǒng)的擦拭、光學系統(tǒng)的擦拭l拆卸目鏡和聚光鏡時，要注意以下幾點： （1）小心謹慎 （2）拆卸時要標記各元件的相對位置（可在外殼上劃線作標記）、相對順序和鏡片的正反面，以防重裝時弄錯。 （3） 操作環(huán)境保持清潔、干燥。拆卸目鏡時，只要從兩端旋出上下兩塊透鏡即可。目鏡內(nèi)的視場光欄不能移動，否則會使視場界線模糊。3

18、 3、光學系統(tǒng)的擦拭、光學系統(tǒng)的擦拭l擦拭方法：先用干凈的毛筆或吹風球除去鏡片表面的灰塵。然后用干凈的絨布在 鏡片中心開始向邊緣作螺旋形單向運動。擦完一次把絨布換個地方，直至擦干凈為止。如果鏡片上有油漬、污物或指印等擦不掉時，可用柳枝條裹上脫脂棉，蘸少量酒精和乙醚 合液（酒精80%，乙醚20%）擦拭。如果有較重的霉點或霉斑無法除去，可用棉簽 濕后粘上碳酸鈣粉（含量為99%以上）進行擦拭。擦拭后，應將粉末清除干凈。3 3、光學系統(tǒng)的擦拭、光學系統(tǒng)的擦拭l鏡片是否干凈可用可用鏡片上的反射光線進行檢查。要注意的是，擦拭前一定要將灰塵除凈，否則灰塵中的砂粒會將鏡面劃起溝紋。不準用毛巾、手帕、衣服等去擦拭。酒精乙醚混合不可用的太多，以免脫膠。鏡片表面有一層紫藍色的透光膜，不要誤作污物來擦拭。 4 4、機械部分的擦拭、機械部分的擦拭 l表面涂漆部分，可用布擦拭。但不能使用酒精、乙醚等有機溶劑，以免脫漆 。l載物臺可用布擦拭。也可使用酒精、乙醚等有機溶劑擦拭，以除去油污。四、四、其他顯微鏡簡介其他顯微鏡簡介 1、暗視場顯微鏡 暗視場顯微鏡又叫暗視野顯微鏡。它與普通的顯微鏡的主要區(qū)別是照明方式不同。它用強而窄的斜射光束照射標本，而又不讓光束進入物鏡。在沒有光進入物鏡時，視場是黑暗的，故叫暗視場顯微鏡。但由于標本中的微粒受光照射后能夠散射光線，當散射光線進入物鏡時，在顯微鏡中能夠看到微粒的散射光點