實(shí)驗(yàn)MS培養(yǎng)基母液和常用試劑的配制

1、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1 胡蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)胡蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng) 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)內(nèi)容： 1-1 ms1-1 ms培養(yǎng)基母液和常用試劑的配制培養(yǎng)基母液和常用試劑的配制 1-2 1-2 胡蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制胡蘿卜愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制 1-3 1-3 胡蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo)胡蘿卜愈傷組織的誘導(dǎo) 1-4 1-4 胡蘿卜愈傷組織繼代培養(yǎng)基的配制胡蘿卜愈傷組織繼代培養(yǎng)基的配制 1-5 1-5 胡蘿卜愈傷組織的繼代培養(yǎng)胡蘿卜愈傷組織的繼代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)1-1 ms培養(yǎng)基母液培養(yǎng)基母液和常用試劑的配制和常用試劑的配制 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康?通過本次實(shí)驗(yàn)，使學(xué)生能熟練準(zhǔn)確配制ms培養(yǎng)基母液和組培室常用的化

2、學(xué)試劑，鞏固相關(guān)理論基礎(chǔ)知識。 2 實(shí)驗(yàn)原理實(shí)驗(yàn)原理 培養(yǎng)基是植物離體培養(yǎng)組織和細(xì)胞賴以生存的營養(yǎng)基質(zhì)。配制培養(yǎng)基時，為了減少試劑稱取時的工作量和少量稱取時出現(xiàn)的誤差，以及避免多種營養(yǎng)成分混合導(dǎo)致沉淀產(chǎn)生或相互反應(yīng)而失去培養(yǎng)效果，預(yù)先要將各種營養(yǎng)成分配制為一定倍數(shù)的培養(yǎng)基母液，待使用時稀釋到要求的濃度。母液的濃度為培養(yǎng)基濃度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。 3 主要實(shí)驗(yàn)用具和儀器主要實(shí)驗(yàn)用具和儀器 冰箱、普通天平、分析天平、各種型號的試劑瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、燒杯、容量瓶、搪瓷杯、藥勺、稱量紙、玻棒、標(biāo)簽紙、ph試紙（ph5.47.0），電磁爐等。4 藥品和試劑藥品和試劑

3、 硝酸銨、硝酸鉀、氯化鈣、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、碘化鉀、硫酸錳、硫酸鋅、鉬酸鈉、硫酸銅、氯化鈷、乙二胺四乙酸二鈉、硫酸亞鐵、甘氨酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆素、煙酸、肌醇、2,4-d(2,4-二氯苯氧乙酸)、naa（-萘乙酸）、 6-ba （ 6-芐基腺嘌呤）、 kt、濃鹽酸、氫氧化鈉、濃硫酸、重鉻酸鉀、95%酒精、蒸餾水等。5 ms培養(yǎng)基母液和培養(yǎng)基母液和常用試劑的配制流程常用試劑的配制流程 5.1培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基的成分 目前，不論液體培養(yǎng)還是固體培養(yǎng)，大多數(shù)植物組織培養(yǎng)中所用的培養(yǎng)基都是由無無機(jī)營養(yǎng)物、碳源、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)機(jī)營養(yǎng)物、碳源、維生素、生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和有機(jī)附加物和有機(jī)附加物等幾大

4、類物質(zhì)組成。 5.2 培養(yǎng)基的配制方法培養(yǎng)基的配制方法 配制培養(yǎng)基的最簡單的方法是用市售培養(yǎng)基干粉溶解在蒸餾水里，加上蔗糖、瓊脂和其他必要的補(bǔ)加物，再加入蒸餾水使之達(dá)到最終的容積。最后調(diào)節(jié)ph值，高壓滅菌，于是制成所需要的培養(yǎng)基。 如果沒有培養(yǎng)基干粉，則可采用以下兩種方法來配制： 一個是按照配方規(guī)定的數(shù)量分別稱量出各種成分，分別使它們?nèi)芙庥谒?，然后再將它們混合在一起?另一個是先配制一系列的濃縮貯備液（母液），貯存在24冰箱內(nèi)，待配培養(yǎng)基時取出，按比例稀釋配用。此法較為常用。5.3 ms 培養(yǎng)基母液的配制培養(yǎng)基母液的配制 母液的配制有兩種方法： 一種是配制成單一化合物母液。此法適合配制多種培養(yǎng)

5、基都需要的同一種母液。 另一種是配成幾種不同化合物的混合母液。此法在大量配制同種培養(yǎng)基時省時省力。由于ms 培養(yǎng)基較為常用，故配制ms 培養(yǎng)基母液。 配好的母液應(yīng)放在試劑瓶中貯存。 在配制ms培養(yǎng)基母液時，為減少工作量可以把幾種藥品（如培養(yǎng)基中的大量元素或微量元素）配在同一母液中，但應(yīng)注意各注意各種化合物的組合以及加入的先后順序，種化合物的組合以及加入的先后順序，以免發(fā)生沉淀。 通常把每種試劑單獨(dú)溶解后再與別的也已完全溶解的藥品混合，或者待前一種化合物完全溶解后再加入后一種化合物?；旌弦讶芙獾母鞣N礦質(zhì)鹽時還應(yīng)注意先后順序，力求把力求把ca2+與與so42- 和和po43-錯開，錯開，以免形成硫

6、酸鈣或磷酸鈣的不溶物。同時，要慢慢地混合，邊混合邊攪拌。5.3.1 5.3.1 大量元素母液的配制大量元素母液的配制 ms培養(yǎng)基中的9種大量元素除c、h、o外，剩下的六種可由kno3、nh4no3、cacl2 2h20、mgso4 7h2o、kh2po4幾種無機(jī)鹽來供應(yīng)，它們可配在同一母液中（具體配制見下表）。配制的步驟為：確定母液的濃度和體積計(jì)算各種化合物用量稱量分別溶解混合定容裝瓶貼標(biāo)簽放入冰箱保存。 注意： cacl2 2h2o最后加入最后加入母母液液種種類類 成成 分分 規(guī)定規(guī)定用量用量/mg/mg l l-1-1 濃濃縮縮倍倍數(shù)數(shù)稱取量稱取量/mg/mg 母液母液定容定容體積體積/m

7、l/ml 配配1l 1l msms培培養(yǎng)基養(yǎng)基吸取吸取取量取量/ml/ml 大大量量元元素素 kno319002020 3800010001000 5050 nh4no3165033000cacl2 2h204408800mgso4 7h2o37074005.3.2 5.3.2 微量元素母液的配制微量元素母液的配制 ms培養(yǎng)基中的微量元素可由mnso4 4h2o、znso4 7h2o、h3bo3、ki、na2moo4 2h2o、cuso4 5h2o、cocl2 6h2o幾種無機(jī)鹽來供應(yīng)，它們也可配在同一母液中（具體配制見下表）。配制步驟同大量元素（混合時不要求先后順序）。母母液液種種類類 成成

8、 分分 規(guī)定規(guī)定用量用量/mg/mg l l-1-1 濃濃縮縮倍倍數(shù)數(shù)稱取稱取量量/mg/mg 母液母液定容定容體積體積/ml/ml 配配1l 1l 培養(yǎng)培養(yǎng)基吸基吸取量取量/ml/ml 微微量量元元素素 mnso4 h2o16.9200338010005znso4 7h2o8.61720h3bo36.212405.3.3 有機(jī)成分母液有機(jī)成分母液的配制的配制 ms培養(yǎng)基中所需的維生素和氨基酸等有機(jī)成分母液應(yīng)分別單獨(dú)配制（具體配制見下表）。配制的步驟為：確定母液的濃度和體積計(jì)算各種化合物用量稱量溶解定容裝瓶貼標(biāo)簽放入冰箱保存。 亦可配制成混合母液（不主張采用）。母母液液種種類類 成成 分分 規(guī)

9、定規(guī)定用量用量/mg/mg l l-1-1 濃濃縮縮倍倍數(shù)數(shù)稱稱取取量量/mg/mg 母液母液定容定容體積體積/ml/ml 配配1l 1l msms培培養(yǎng)基養(yǎng)基吸取吸取量量/ml/ml 有有機(jī)機(jī)成成分分 甘氨酸甘氨酸2.02001002505鹽酸硫胺素鹽酸硫胺素0.15鹽酸吡哆素鹽酸吡哆素0.525煙酸煙酸0.525肌醇肌醇10050005.3.4 鐵鹽鐵鹽母液母液的配制的配制 鐵鹽母液宜單獨(dú)配制，其配制步驟為： 確定母液的濃度和體積計(jì)算各種化合物用量稱量分別溶解混合煮沸數(shù)分鐘調(diào)節(jié)ph值至5.8 定容裝瓶（棕色）貼標(biāo)簽放入冰箱保存。 用時每配l l培養(yǎng)基取該溶液5ml。母母液液種種類類 成成

10、分分 規(guī)定規(guī)定用量用量/mg/mg l l-1-1 濃濃縮縮倍倍數(shù)數(shù)稱稱取取量量/mg/mg 母液母液定容定容體積體積/ml/ml 配配1l 1l msms培培養(yǎng)基養(yǎng)基吸取吸取量量/ml/ml 鐵鐵鹽鹽 na2edta 2h2o37.320037305005feso4 7h2o27.827805.3.5 5.3.5 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的配制植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的配制 對于植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，配制成母液時，通常用mgml-1或 ppm 較為方便，一般配制成0.1-1mgml-1的母液，這樣的濃度便于計(jì)算也可避免冷藏時形成結(jié)晶。 2,4-d/naa用少量95酒精溶解，再加水定容；6-ba/kt應(yīng)先

11、溶于少量1 moll-1的hcl中，再加水定容。 具體配制見下表：母液母液種類種類成成 分分稱取量稱取量(mg )母液定母液定容體積容體積(ml )母液濃母液濃度度(mg/ml)生長素生長素2,4-d501000.5naa501000.5細(xì)胞分細(xì)胞分裂素裂素6-ba101000.1kt101000.15.3.6 5.3.6 其它常用試劑的配制其它常用試劑的配制 鹽酸（鹽酸（lmoll-1 ）：）：用濃度36.5%、密度1.19g/cm3的濃鹽酸配制 氫氧化鈉（氫氧化鈉（lmoll-1 ）：）：用固體氫氧化鈉配制 75%酒精酒精(v/v) ：用95%的酒精來配制 稀鉻酸洗滌液：稀鉻酸洗滌液：重鉻酸鉀50 g溶于1000 ml蒸餾水中，冷卻后緩慢加入工業(yè)用硫酸90 ml。 配制好的各種母液應(yīng)分別貼上標(biāo)簽，寫明母液名稱、配制倍數(shù)、配制者、配制日期。 母液最好在24的冰箱中保存。尤其對生長調(diào)節(jié)物質(zhì)與有機(jī)