高效液相色譜分類及工作原理

1、 第三章第三章 高效液相色譜法高效液相色譜法 high performance liquid chromatography，hplc 第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜法概述高效液相色譜法概述一、理論基礎(chǔ)：一、理論基礎(chǔ)：速率理論速率理論cuubaha為渦流擴(kuò)散項(xiàng)b/u分子擴(kuò)散項(xiàng)cu項(xiàng)即傳質(zhì)阻力項(xiàng)二、二、hplc技術(shù)技術(shù)三、三、hplc特點(diǎn)特點(diǎn) 高壓、高速、高效、高靈敏度、樣品回高壓、高速、高效、高靈敏度、樣品回收方便。收方便。經(jīng)典經(jīng)典lc與與hplc比較比較與氣相色譜法比較，與氣相色譜法比較，hplc的優(yōu)點(diǎn)的優(yōu)點(diǎn)1.分析對(duì)象廣分析對(duì)象廣氣相色譜只限于分析氣體和沸點(diǎn)較低的化氣相色譜只限于分析氣體和沸點(diǎn)較

2、低的化合物；合物；hplc不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，適用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、摩的限制，適用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、摩爾質(zhì)量大的物質(zhì)。原則上講，幾乎可以分爾質(zhì)量大的物質(zhì)。原則上講，幾乎可以分析除永久氣體外所有的有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物。析除永久氣體外所有的有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物。流動(dòng)相對(duì)分離起作用流動(dòng)相對(duì)分離起作用氣相色譜的流動(dòng)相僅起運(yùn)載作用，對(duì)氣相色譜的流動(dòng)相僅起運(yùn)載作用，對(duì)組分不產(chǎn)生相互作用力；組分不產(chǎn)生相互作用力；hplc的流動(dòng)相對(duì)的流動(dòng)相對(duì)組分產(chǎn)生相互作用力，相當(dāng)于增加了一個(gè)組分產(chǎn)生相互作用力，相當(dāng)于增加了一個(gè)控制和改進(jìn)分離條件的參數(shù)?？刂坪透倪M(jìn)分離條件的參數(shù)。經(jīng)常在室溫

3、條件下操作經(jīng)常在室溫條件下操作氣相色譜法一般在較高溫度下進(jìn)行氣相色譜法一般在較高溫度下進(jìn)行缺點(diǎn)缺點(diǎn)：儀器設(shè)備費(fèi)用昂貴，操作嚴(yán)格。儀器設(shè)備費(fèi)用昂貴，操作嚴(yán)格。第二節(jié)第二節(jié) hplc的主要類型的主要類型一、一、液一液分配色譜法（液一液分配色譜法（llpc） 在液在液-液色譜中液色譜中,流動(dòng)相和固定相都是流動(dòng)相和固定相都是液體液體,它能適用于各種樣品類型的分離和分它能適用于各種樣品類型的分離和分析，無(wú)論是極性的和非極性的，水溶性和析，無(wú)論是極性的和非極性的，水溶性和油溶性的，離子型的和非離子型的化合物。油溶性的，離子型的和非離子型的化合物。 1分離原理分離原理 液液分配色譜的分離原理基本與液液液液分

4、配色譜的分離原理基本與液液萃取相同，萃取相同，都是根據(jù)物質(zhì)在兩種互不相溶都是根據(jù)物質(zhì)在兩種互不相溶的液體中溶解度的不同，具有不同的分配的液體中溶解度的不同，具有不同的分配系數(shù)。系數(shù)。所不同的是液液色譜的分配是在柱所不同的是液液色譜的分配是在柱中進(jìn)行的，使這種分配平衡可反復(fù)多次進(jìn)中進(jìn)行的，使這種分配平衡可反復(fù)多次進(jìn)行，造成各組分的差速遷移，提高了分離行，造成各組分的差速遷移，提高了分離效率，從而能分離各種復(fù)雜組分。效率，從而能分離各種復(fù)雜組分。 2.固定相固定相 液液色譜的固定相由載體和固定液液液色譜的固定相由載體和固定液組成。常用的載體有下列幾類：組成。常用的載體有下列幾類：（1）全多孔型載體

5、：由硅膠、硅藻土等全多孔型載體：由硅膠、硅藻土等材料制成，直徑約材料制成，直徑約100 m的全多孔型顆的全多孔型顆粒。粒。 這類固定相由于顆粒很細(xì)，孔仍然這類固定相由于顆粒很細(xì)，孔仍然較淺，傳質(zhì)速率快，易實(shí)現(xiàn)高效、高速。較淺，傳質(zhì)速率快，易實(shí)現(xiàn)高效、高速。特別適合復(fù)雜混合物分離及痕量分析。特別適合復(fù)雜混合物分離及痕量分析。（2）表面多孔型載體（薄殼型微珠載表面多孔型載體（薄殼型微珠載體）：由直徑為體）：由直徑為30 40 m的實(shí)心玻璃球的實(shí)心玻璃球和厚度約為和厚度約為1 2 m的多孔性外層所組成。的多孔性外層所組成。目前，這種載體粒度為目前，這種載體粒度為5 10 m。 這類固定相的多孔層厚度

6、小、孔淺，相這類固定相的多孔層厚度小、孔淺，相對(duì)死體積小，出峰迅速、柱效亦高；顆粒較大，對(duì)死體積小，出峰迅速、柱效亦高；顆粒較大，滲透性好，裝柱容易，梯度淋洗時(shí)能迅速達(dá)平滲透性好，裝柱容易，梯度淋洗時(shí)能迅速達(dá)平衡，較適合做常規(guī)分析。由于多孔層厚度薄，衡，較適合做常規(guī)分析。由于多孔層厚度薄，最大允許量受限制。最大允許量受限制。化學(xué)鍵合固定相化學(xué)鍵合固定相：它是將各種不同有機(jī)基它是將各種不同有機(jī)基團(tuán)通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵合到載體表面的一種方法。團(tuán)通過(guò)化學(xué)反應(yīng)鍵合到載體表面的一種方法。 它代替了固定液的機(jī)械涂漬，因此它的產(chǎn)它代替了固定液的機(jī)械涂漬，因此它的產(chǎn)生對(duì)液相色譜法迅速發(fā)展起著重大作用，生對(duì)液相色譜法

7、迅速發(fā)展起著重大作用，可以可以認(rèn)為它的出現(xiàn)是液相色譜法的一個(gè)重大突破認(rèn)為它的出現(xiàn)是液相色譜法的一個(gè)重大突破。它是目前應(yīng)用最廣泛的一種固定相。它是目前應(yīng)用最廣泛的一種固定相。 據(jù)統(tǒng)計(jì)，約有據(jù)統(tǒng)計(jì)，約有3/43/4以上的分離問(wèn)題是在化學(xué)以上的分離問(wèn)題是在化學(xué)鍵合固定相上進(jìn)行的。鍵合固定相上進(jìn)行的。3流動(dòng)相流動(dòng)相 根據(jù)所使用的流動(dòng)相和固定相的極性程根據(jù)所使用的流動(dòng)相和固定相的極性程度，將其分為度，將其分為正相分配色譜正相分配色譜和和反相分配色譜反相分配色譜。 正相分配色譜：正相分配色譜：流動(dòng)相的極性小于固定相的極性流動(dòng)相的極性小于固定相的極性， 它適用于極性化合物的分離。其它適用于極性化合物的分離。

8、其 流出順序流出順序是極性小的先流出，極是極性小的先流出，極 性大的后流出性大的后流出。反相分配色譜：反相分配色譜：流動(dòng)相的極性大于固定相的極性流動(dòng)相的極性大于固定相的極性， 它適用于非極性化合物的分離，它適用于非極性化合物的分離， 其其流出順序與正相色譜恰好相反流出順序與正相色譜恰好相反二、液一固吸附色譜二、液一固吸附色譜法法(lsac)(lsac) 液一固吸附色譜是以固體吸附劑作液一固吸附色譜是以固體吸附劑作為固定相，吸附劑通常是些多孔的固體為固定相，吸附劑通常是些多孔的固體顆粒物質(zhì)，在它們的表面存在吸附中心。顆粒物質(zhì)，在它們的表面存在吸附中心。液固色譜實(shí)質(zhì)是根據(jù)物質(zhì)在固定相上的液固色譜實(shí)

9、質(zhì)是根據(jù)物質(zhì)在固定相上的吸附作用不同來(lái)進(jìn)行分離的。吸附作用不同來(lái)進(jìn)行分離的。1分離原理分離原理 當(dāng)流動(dòng)相通過(guò)固定相（吸附劑）時(shí)，吸附劑當(dāng)流動(dòng)相通過(guò)固定相（吸附劑）時(shí)，吸附劑表面的活性中心就要吸附流動(dòng)相分子。同時(shí)，當(dāng)表面的活性中心就要吸附流動(dòng)相分子。同時(shí)，當(dāng)試樣分子（試樣分子（x）被流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，只要它們?cè)冢┍涣鲃?dòng)相帶入柱內(nèi)，只要它們?cè)诠潭ㄏ嘤幸欢ǔ潭鹊谋Ａ艟鸵〈鷶?shù)目相當(dāng)?shù)囊压潭ㄏ嘤幸欢ǔ潭鹊谋Ａ艟鸵〈鷶?shù)目相當(dāng)?shù)囊驯晃降牧鲃?dòng)相溶劑分用）于是，在固定相表面被吸附的流動(dòng)相溶劑分用）于是，在固定相表面發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)吸附發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)吸附: x + nsad = xad + ns達(dá)平衡時(shí)達(dá)平衡時(shí),有有 na

10、dnadadsxsxk其中其中kad為吸附平衡常數(shù)為吸附平衡常數(shù)，值大表示組分在吸附劑，值大表示組分在吸附劑上保留強(qiáng)，難于洗脫。上保留強(qiáng)，難于洗脫。kad值小值小,則保留值弱，易則保留值弱，易于洗脫。試樣中各組分據(jù)此得以分離。于洗脫。試樣中各組分據(jù)此得以分離。kad值可通值可通過(guò)吸附等溫線數(shù)據(jù)求出。過(guò)吸附等溫線數(shù)據(jù)求出。2固定相固定相 液固吸附色譜所用固定相多是一些液固吸附色譜所用固定相多是一些吸附活性強(qiáng)弱不等的吸附劑，如硅膠、氧吸附活性強(qiáng)弱不等的吸附劑，如硅膠、氧化鋁、聚酸膠等。由于硅膠的優(yōu)點(diǎn)較多，化鋁、聚酸膠等。由于硅膠的優(yōu)點(diǎn)較多，如線性容量較高，機(jī)械性能好，不溶脹，如線性容量較高，機(jī)械性

11、能好，不溶脹，與大多數(shù)試樣不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)等，因此，與大多數(shù)試樣不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)等，因此，以硅膠用得最多。以硅膠用得最多。 目前最廣泛使用的還是目前最廣泛使用的還是5 510 10 m的的全全多孔型微粒填料。多孔型微粒填料。3.流動(dòng)相流動(dòng)相 一般把吸附色譜中一般把吸附色譜中流動(dòng)相流動(dòng)相稱作稱作洗脫劑。洗脫劑。在吸附色譜中對(duì)極性大的試樣往往采用極在吸附色譜中對(duì)極性大的試樣往往采用極性強(qiáng)的洗脫劑；對(duì)極性弱的試樣宜用極性性強(qiáng)的洗脫劑；對(duì)極性弱的試樣宜用極性弱的洗脫劑。弱的洗脫劑。三、離子交換色譜法（三、離子交換色譜法（iec） 此法是利用此法是利用離子交換原理和液相色譜技離子交換原理和液相色譜技術(shù)的結(jié)合

12、來(lái)測(cè)定溶液中陽(yáng)離子和陰離子的一術(shù)的結(jié)合來(lái)測(cè)定溶液中陽(yáng)離子和陰離子的一種分離分析方法種分離分析方法。凡在溶液中能夠電離的物。凡在溶液中能夠電離的物質(zhì)，通常都可用離子交換色譜法進(jìn)行分離。質(zhì)，通常都可用離子交換色譜法進(jìn)行分離。它不僅適用無(wú)機(jī)離子混合物的分離，亦可用它不僅適用無(wú)機(jī)離子混合物的分離，亦可用于有機(jī)物的分離，例如氨基酸、核酸、蛋白于有機(jī)物的分離，例如氨基酸、核酸、蛋白質(zhì)等生物大分子。因此，應(yīng)用范圍較廣。質(zhì)等生物大分子。因此，應(yīng)用范圍較廣。1離子交換原理離子交換原理 離子交換色譜法是利用不同待測(cè)離子對(duì)離子交換色譜法是利用不同待測(cè)離子對(duì)固定相親和力的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的。固定相親和力的差別來(lái)實(shí)現(xiàn)分離

13、的。其固定其固定相采用離子交換樹脂，樹脂上分布有固定的相采用離子交換樹脂，樹脂上分布有固定的帶電荷基團(tuán)和可游離的平衡離子。當(dāng)待分析帶電荷基團(tuán)和可游離的平衡離子。當(dāng)待分析物質(zhì)電離后產(chǎn)生的離子可與樹脂上可游離的物質(zhì)電離后產(chǎn)生的離子可與樹脂上可游離的平衡離子進(jìn)行可逆交換，其交換反應(yīng)通式如平衡離子進(jìn)行可逆交換，其交換反應(yīng)通式如下：下：陽(yáng)離子交換：陽(yáng)離子交換：rso3-h+m+rso3-m+ h+陰離子交換：rnr3+cl-+x-rnr3+x-+ cl-一般形式： r一ab rba達(dá)平衡時(shí)，以濃度表示的平衡常數(shù)（離子交換反應(yīng)達(dá)平衡時(shí)，以濃度表示的平衡常數(shù)（離子交換反應(yīng)的選擇系數(shù)）：的選擇系數(shù)）：rrab

14、ababk/式中式中ar，br 分別代表樹脂相中洗脫劑離子分別代表樹脂相中洗脫劑離子（a）和試樣離子（）和試樣離子（b）的濃度，）的濃度，a、b則代表則代表它們?cè)谌芤褐械臐舛?。它們?cè)谌芤褐械臐舛取?kb/a越大，說(shuō)明越大，說(shuō)明b離子交換能力越大，越易保離子交換能力越大，越易保留而難于洗脫。一般說(shuō)來(lái)，留而難于洗脫。一般說(shuō)來(lái)，b離子電荷越大，水離子電荷越大，水合離子半徑越小，合離子半徑越小， kb/a值就越大值就越大。2.固定相固定相（l l）多孔型離子交換樹脂）多孔型離子交換樹脂 它主要是聚苯乙烯和二乙烯苯基的交聯(lián)它主要是聚苯乙烯和二乙烯苯基的交聯(lián)聚合物，直徑約為聚合物，直徑約為5 520m20

15、m，有微孔型和大，有微孔型和大孔型之分。孔型之分。（2）薄膜型離子交換樹脂 它是在直徑約對(duì)30m的固體惰性核上，凝聚12m厚的樹脂層。（3）表面多孔型離子交換樹脂 它是在固體情性核上，覆蓋一層微球硅膠，再在上面涂一層很薄的離子交換樹脂。（4）離子交換鍵合固定相）離子交換鍵合固定相 它是用化學(xué)反應(yīng)將離子交換基團(tuán)鍵合它是用化學(xué)反應(yīng)將離子交換基團(tuán)鍵合到惰性載體表面。它也分為兩種類型。到惰性載體表面。它也分為兩種類型。一種是鍵合薄殼型，其載體是薄殼玻珠。一種是鍵合薄殼型，其載體是薄殼玻珠。另一種是鍵合微粒載體型，它的載體是另一種是鍵合微粒載體型，它的載體是多孔微粒硅膠。后者是一種優(yōu)良的離子多孔微粒硅膠

16、。后者是一種優(yōu)良的離子交換固定相，它的優(yōu)點(diǎn)是機(jī)械性能穩(wěn)定，交換固定相，它的優(yōu)點(diǎn)是機(jī)械性能穩(wěn)定，可使用小粒度固定相和高柱壓來(lái)實(shí)現(xiàn)快可使用小粒度固定相和高柱壓來(lái)實(shí)現(xiàn)快速分離。速分離。 3.流動(dòng)相流動(dòng)相 離子交換色譜法所用流動(dòng)相大都是離子交換色譜法所用流動(dòng)相大都是一定一定ph和鹽濃度和鹽濃度（或離子強(qiáng)度）的緩沖溶液。通（或離子強(qiáng)度）的緩沖溶液。通過(guò)改變流動(dòng)相中鹽離子的種類、濃度和過(guò)改變流動(dòng)相中鹽離子的種類、濃度和ph值值可控制可控制k值，改變選擇性。值，改變選擇性。 有時(shí)也使用有機(jī)溶劑如甲醇或乙醇同有時(shí)也使用有機(jī)溶劑如甲醇或乙醇同水緩沖溶液混合使用，以提高特殊的選擇水緩沖溶液混合使用，以提高特殊的選

17、擇性，并改善樣品的溶解度。性，并改善樣品的溶解度。鹽離子的濃度影響：鹽離子的濃度影響： 如果增加鹽離子的濃度，則可降低樣品如果增加鹽離子的濃度，則可降低樣品離子的競(jìng)爭(zhēng)吸附能力，從而降低其在固定相離子的競(jìng)爭(zhēng)吸附能力，從而降低其在固定相上的保留值。上的保留值。 要視不同情況而定。例如，分離有機(jī)酸要視不同情況而定。例如，分離有機(jī)酸和有機(jī)堿時(shí)，這些酸堿的離解程度可通過(guò)改和有機(jī)堿時(shí)，這些酸堿的離解程度可通過(guò)改變流動(dòng)相的變流動(dòng)相的ph值來(lái)控制。增大值來(lái)控制。增大ph值會(huì)使酸的值會(huì)使酸的電離度增加，使堿的電離度減少；降低電離度增加，使堿的電離度減少；降低ph值，值，其結(jié)果相反。但無(wú)論屬于哪種情況，其結(jié)果相反

18、。但無(wú)論屬于哪種情況，只要電只要電離度增大，就會(huì)使樣品的保留增大。離度增大，就會(huì)使樣品的保留增大。ph值的影響：四、離子對(duì)色譜法（四、離子對(duì)色譜法（ipc） 離子對(duì)色譜法是分離分析強(qiáng)極性有機(jī)酸離子對(duì)色譜法是分離分析強(qiáng)極性有機(jī)酸和有機(jī)堿的極好方法。和有機(jī)堿的極好方法。 離子對(duì)色譜法是將一種（或數(shù)種）與溶離子對(duì)色譜法是將一種（或數(shù)種）與溶質(zhì)離子電荷相反的離子（稱對(duì)離子或反離子）質(zhì)離子電荷相反的離子（稱對(duì)離子或反離子）加到流動(dòng)相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)加到流動(dòng)相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成離子對(duì)，從而控制溶質(zhì)離子保留行為合形成離子對(duì)，從而控制溶質(zhì)離子保留行為的一種色譜法。的一種色譜法。 由

19、于離子對(duì)化合物由于離子對(duì)化合物a-b+具有疏水性，具有疏水性，因而被非極性固定相（有機(jī)相）提取。組因而被非極性固定相（有機(jī)相）提取。組分離子的性質(zhì)不同，它與反離子形成離子分離子的性質(zhì)不同，它與反離子形成離子對(duì)的能力大小不同以及形成的離子對(duì)流水對(duì)的能力大小不同以及形成的離子對(duì)流水性質(zhì)不同，導(dǎo)致各組分離子在固定相中滯性質(zhì)不同，導(dǎo)致各組分離子在固定相中滯留時(shí)間不同，因而出峰先后不同。這就是留時(shí)間不同，因而出峰先后不同。這就是離子對(duì)色譜法分離的基本原理。離子對(duì)色譜法分離的基本原理。流動(dòng)相：流動(dòng)相：加有平衡離子（反離子）的極性加有平衡離子（反離子）的極性 溶液通過(guò)改變流動(dòng)相的溶液通過(guò)改變流動(dòng)相的ph、平

20、、平 衡離子的濃度和種類可改變分離衡離子的濃度和種類可改變分離 的選擇性。的選擇性。 固定相：固定相：非極性的疏水鍵合相非極性的疏水鍵合相五、離子色譜法（五、離子色譜法（ic）抑制型：抑制型：抑制柱型、連續(xù)抑制型抑制柱型、連續(xù)抑制型 分離柱中離子交換樹脂的交換容量通常在分離柱中離子交換樹脂的交換容量通常在 0.010.010.050.05毫摩爾毫摩爾/ /克干樹脂克干樹脂非抑制型非抑制型: : 當(dāng)進(jìn)一步降低分離柱中樹脂的交換容量(0.0070.07毫摩爾/克干樹脂),使用低濃度、低電離度的有機(jī)弱酸及弱酸鹽作淋洗液，如苯甲酸、苯甲酸鹽等。檢測(cè)器可直接與分離柱相連，不需抑制柱。 離子色譜連續(xù)抑制裝

21、置圖：離子色譜連續(xù)抑制裝置圖： 通過(guò)通過(guò)分離柱分離柱后的樣品再經(jīng)過(guò)后的樣品再經(jīng)過(guò)抑制柱抑制柱，使具有，使具有高背景電導(dǎo)的流動(dòng)相轉(zhuǎn)變成低背景電導(dǎo)的流動(dòng)相，高背景電導(dǎo)的流動(dòng)相轉(zhuǎn)變成低背景電導(dǎo)的流動(dòng)相，從而用電導(dǎo)檢測(cè)器可直接檢測(cè)各種離子的含量。從而用電導(dǎo)檢測(cè)器可直接檢測(cè)各種離子的含量。 若樣品為陽(yáng)離子，用無(wú)機(jī)酸作流動(dòng)相，抑制若樣品為陽(yáng)離子，用無(wú)機(jī)酸作流動(dòng)相，抑制柱為高容量的強(qiáng)堿性陰離子交換劑。當(dāng)試樣經(jīng)陽(yáng)柱為高容量的強(qiáng)堿性陰離子交換劑。當(dāng)試樣經(jīng)陽(yáng)離子交換劑的分離往后，隨流動(dòng)相進(jìn)入抑制柱，離子交換劑的分離往后，隨流動(dòng)相進(jìn)入抑制柱，在抑制柱中發(fā)生兩個(gè)重要反應(yīng)：在抑制柱中發(fā)生兩個(gè)重要反應(yīng)：r r+ +oho

22、hh h+ +clcl- - -r-r+ +clcl十十h h2 2o or r+ +一一ohoh- -m m+ +clcl- -m m+ +ohohr r+ +clcl- - 由反應(yīng)可見：經(jīng)抑制柱后，一方面將大量酸轉(zhuǎn)變?yōu)殡妼?dǎo)很小的水，消除了流動(dòng)相本底電導(dǎo)的影響。同時(shí)，又將樣品陽(yáng)離子m+轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的堿，由于oh-離子的濃度為cl-離子的26倍，提高了所測(cè)陽(yáng)離子電導(dǎo)的檢測(cè)靈敏度。對(duì)于陰離子樣品也有相似的作用機(jī)理。離子色譜的應(yīng)用：離子色譜的應(yīng)用：陰離子分析陰離子分析: : 雙柱：薄殼型陰離子交換樹脂分離柱雙柱：薄殼型陰離子交換樹脂分離柱(3250mm),流動(dòng)相：流動(dòng)相：0.003moll-1 na

23、hco3 / 0.0024 moll-1 na2co3，流量，流量138 ml/hr。七種陰離子在七種陰離子在20分鐘內(nèi)基本上得到完全分離，各組分鐘內(nèi)基本上得到完全分離，各組分含量在分含量在350 ppm。 六、空間排阻色譜法（六、空間排阻色譜法（sec） 主要用于較大分子的分離。與其他液相色譜主要用于較大分子的分離。與其他液相色譜方法原理不同，它不具有吸附、分配和離子交換方法原理不同，它不具有吸附、分配和離子交換作用機(jī)理，而是作用機(jī)理，而是基于試樣分子的尺寸和形狀不同基于試樣分子的尺寸和形狀不同來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的。來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的。 1.固定相固定相 排阻色譜固定相種類很多，一般可分為排阻色譜固定相種

24、類很多，一般可分為軟性、半剛性和剛性凝膠三類。軟性、半剛性和剛性凝膠三類。 所謂凝膠，指含有大量液體（一般是水）所謂凝膠，指含有大量液體（一般是水）的柔軟而富于彈性的物質(zhì)，它是一種經(jīng)過(guò)交的柔軟而富于彈性的物質(zhì)，它是一種經(jīng)過(guò)交聯(lián)而具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多聚體。聯(lián)而具有立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多聚體。（1）軟性凝膠）軟性凝膠 如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠都如葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠都具有較小的交聯(lián)結(jié)構(gòu)，其微孔能吸入大量的溶劑，具有較小的交聯(lián)結(jié)構(gòu)，其微孔能吸入大量的溶劑，并能溶脹到它們干體的許多倍。它們適用以水溶并能溶脹到它們干體的許多倍。它們適用以水溶性溶劑作流動(dòng)相，一般用于性溶劑作流動(dòng)相，一般用于小分子質(zhì)量小分子質(zhì)量物質(zhì)的分物質(zhì)的分析，不適宜用在高效液相色譜中。析，不適宜用在高效液相色譜中。（2）半剛性凝膠 如高交聯(lián)度的聚苯乙烯（styragel）比軟性凝膠稍耐壓，溶脹性不如軟性凝膠。常以有機(jī)溶劑作流動(dòng)相。用于高效液相色譜時(shí)，流速不宜大。（3）剛性凝膠 如多孔硅膠、多孔玻璃等它們既可用水溶性溶劑，又可用有