實驗一顯微攝影技術(shù)

1、實驗一實驗一 光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡使用及顯微攝影技使用及顯微攝影技術(shù)術(shù)一、實驗?zāi)康囊?、實驗?zāi)康? 1、了解光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)原理并熟練掌握其操、了解光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)原理并熟練掌握其操作方法；作方法；2 2、掌握顯微攝影技術(shù)操作流程，了解傳統(tǒng)攝、掌握顯微攝影技術(shù)操作流程，了解傳統(tǒng)攝影技術(shù)中照片洗印操作流程；影技術(shù)中照片洗印操作流程；3 3、了解暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯、了解暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡、微分干涉差顯微鏡、倒置顯微鏡、微鏡、微分干涉差顯微鏡、倒置顯微鏡、等的構(gòu)造和使用方法。等的構(gòu)造和使用方法。二、實驗原理二、實驗原理 顯微鏡的放大效能是由其照明系統(tǒng)所使用光顯微鏡的放大效能

2、是由其照明系統(tǒng)所使用光的波長和透鏡系統(tǒng)的數(shù)值孔徑?jīng)Q定，縮短使用的的波長和透鏡系統(tǒng)的數(shù)值孔徑?jīng)Q定，縮短使用的光波長或增加數(shù)值孔徑可以提高分辨率。光波長或增加數(shù)值孔徑可以提高分辨率。 可見光的光波振幅較窄，因此使用較短波長可見光的光波振幅較窄，因此使用較短波長的紫外光作為光源系統(tǒng)，可以提高分辨率。而對的紫外光作為光源系統(tǒng)，可以提高分辨率。而對于一臺普通光學(xué)顯微鏡，一般來說，提高其分辨于一臺普通光學(xué)顯微鏡，一般來說，提高其分辨率主要通過提高數(shù)值孔徑（選用鏡口角大的透鏡，率主要通過提高數(shù)值孔徑（選用鏡口角大的透鏡，提高介質(zhì)折射率）。提高介質(zhì)折射率）?；A(chǔ)知識基礎(chǔ)知識顯微鏡概述：顯微鏡概述： 顯微鏡是觀

3、察細胞的主要工具。根據(jù)光源不同，可分為顯微鏡是觀察細胞的主要工具。根據(jù)光源不同，可分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見光（紫外線顯光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。前者以可見光（紫外線顯微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。微鏡以紫外光）為光源，后者則以電子束為光源。1.1.光學(xué)顯微鏡光學(xué)顯微鏡 普通生物顯微鏡由普通生物顯微鏡由3 3部分構(gòu)成：部分構(gòu)成：照明系統(tǒng)：包括光源和聚光器。照明系統(tǒng)：包括光源和聚光器。光學(xué)放大系統(tǒng)：由物鏡和目鏡組成，光學(xué)放大系統(tǒng)：由物鏡和目鏡組成， 是顯微鏡的主體。是顯微鏡的主體。機械裝置：用于固定材料和觀察方便，機械裝置：用于固定材料和觀察方便， 包括鏡臺包

4、括鏡臺( (載物臺載物臺) ) 、調(diào)節(jié)器和、調(diào)節(jié)器和、 物鏡轉(zhuǎn)換器物鏡轉(zhuǎn)換器( (旋轉(zhuǎn)器旋轉(zhuǎn)器) )等。等。 尼康E-600顯微鏡 光學(xué)顯微鏡基本結(jié)構(gòu)光學(xué)顯微鏡基本結(jié)構(gòu)：1. 照明燈照明燈(Lamp)2. 聚光器聚光器(Condenser)3. 載物臺和切片夾載物臺和切片夾(Mechanical stage and specimen retainer)4. 推進器推進器(Mechanical stage adjustment knob)5. 物鏡物鏡(Objectives)6. 粗細螺旋粗細螺旋(Course and fine focus knob)7. 目鏡目鏡(Oculars)8. 照相機

5、等接口照相機等接口(Connection to camera, etc.)2.熒光顯微鏡 尼康E800熒光DIC顯微鏡 熒光顯微鏡照片（微管呈綠色、微絲紅色、核藍色） 熒光顯微鏡熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) (Fluorescence microscope) ： 以以紫外線為光源紫外線為光源, ,用以照射被檢物體，使之用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。所在位置。 用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學(xué)用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。物質(zhì)的分布及定位等。 細胞中

6、有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線細胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒照射后可發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一。質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一。3. 3. 激光共聚激光共聚焦掃描顯微鏡焦掃描顯微鏡 LCSM照片藍色為細胞核，綠色為微管 用用激光作掃描光源激光作掃描光源，逐點、逐行、逐面快速掃描，逐點、逐行、逐面快速掃描成像，掃描的激光與熒光收集共用一個物鏡，物

7、鏡的成像，掃描的激光與熒光收集共用一個物鏡，物鏡的焦點即掃描激光的聚焦點，也是瞬時成像的物點。由焦點即掃描激光的聚焦點，也是瞬時成像的物點。由于激光束的波長較短，光束很細，所以共焦激光掃描于激光束的波長較短，光束很細，所以共焦激光掃描顯微鏡顯微鏡有較高的分辨力有較高的分辨力，大約是普通光學(xué)顯微鏡的，大約是普通光學(xué)顯微鏡的3 3倍。倍。 系統(tǒng)經(jīng)一次調(diào)焦，掃描限制在樣品的一個平面內(nèi)。系統(tǒng)經(jīng)一次調(diào)焦，掃描限制在樣品的一個平面內(nèi)。調(diào)焦深度不一樣時，就可以獲得樣品不同深度層次的調(diào)焦深度不一樣時，就可以獲得樣品不同深度層次的圖像，這些圖像信息都儲于計算機內(nèi)，通過計算機分圖像，這些圖像信息都儲于計算機內(nèi)，通

8、過計算機分析和模擬，就能顯示細胞樣品的立體結(jié)構(gòu)。析和模擬，就能顯示細胞樣品的立體結(jié)構(gòu)。 激光共聚焦掃描顯微鏡既可以用于激光共聚焦掃描顯微鏡既可以用于觀察細胞形態(tài)，觀察細胞形態(tài)，也可以用于細胞內(nèi)生化成分的定量分析、光密度統(tǒng)計也可以用于細胞內(nèi)生化成分的定量分析、光密度統(tǒng)計以及細胞形態(tài)的測量。以及細胞形態(tài)的測量。 4.暗視野顯微鏡 暗視野顯微鏡（暗視野顯微鏡（dark field microscopedark field microscope）的聚光鏡中）的聚光鏡中央有當(dāng)光片，使照明光線不直接進人物鏡，只允許被標(biāo)本央有當(dāng)光片，使照明光線不直接進人物鏡，只允許被標(biāo)本反射和衍射的光線進入物鏡，因而視野的

9、背景是黑的，物反射和衍射的光線進入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見到小至體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見到小至 4-200nm4-200nm的的微粒子，分辨率可比普通顯微鏡高微粒子，分辨率可比普通顯微鏡高5050倍倍。5.相差顯微鏡 一種介殼蟲的染色體一種介殼蟲的染色體 相差顯微鏡相差顯微鏡最大的特點是可以觀察未經(jīng)染色的最大的特點是可以觀察未經(jīng)染色的標(biāo)本和活細胞。標(biāo)本和活細胞。 活細胞和未染色的生物標(biāo)本，因細胞各部細微活細胞和未染色的生物標(biāo)本，因細胞各部細微結(jié)構(gòu)的折射率和厚度的不同，光波通過時，波長和結(jié)構(gòu)的折射率和厚度的不同，光波通過時，波長和振幅并不發(fā)生變化

10、，僅相位發(fā)生變化振幅并不發(fā)生變化，僅相位發(fā)生變化( (振幅差振幅差) )，這，這種振幅差人眼無法觀察。而相差顯微鏡通過改變這種振幅差人眼無法觀察。而相差顯微鏡通過改變這種相位差，并種相位差，并利用光的衍射和干涉現(xiàn)象，利用光的衍射和干涉現(xiàn)象，把相差變把相差變?yōu)檎穹顏碛^察活細胞和未染色的標(biāo)本。為振幅差來觀察活細胞和未染色的標(biāo)本。 相差顯微鏡和普通顯微鏡的區(qū)別是相差顯微鏡和普通顯微鏡的區(qū)別是: :用環(huán)狀光用環(huán)狀光闌代替可變光闌，闌代替可變光闌， 用帶相板的物鏡代替普通物鏡，用帶相板的物鏡代替普通物鏡，并帶有一個合軸用的望遠鏡。并帶有一個合軸用的望遠鏡。6. 偏光顯微鏡偏光顯微鏡 將普通光改變?yōu)槠?/p>

11、光進行鏡檢的方法，以鑒別某一物質(zhì)將普通光改變?yōu)槠窆膺M行鏡檢的方法，以鑒別某一物質(zhì)是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異性）。是單折射（各向同行）或雙折射性（各向異性）。偏光顯微是鑒定物質(zhì)細微結(jié)構(gòu)光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡。凡偏光顯微是鑒定物質(zhì)細微結(jié)構(gòu)光學(xué)性質(zhì)的一種顯微鏡。凡具有雙折射性的物質(zhì)，在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚，當(dāng)然具有雙折射性的物質(zhì)，在偏光顯微鏡下就能分辨的清楚，當(dāng)然這些物質(zhì)也可用染色法來進行觀察，但有些則不可能，而必須這些物質(zhì)也可用染色法來進行觀察，但有些則不可能，而必須利用偏光顯微鏡。利用偏光顯微鏡。 雙折射性是晶體的基本特征。因此，偏光顯微鏡被廣泛地雙折射性是晶體的基本特征。因此

12、，偏光顯微鏡被廣泛地應(yīng)用在礦物、化學(xué)等領(lǐng)域。在生物學(xué)中，很多結(jié)構(gòu)也具有雙折應(yīng)用在礦物、化學(xué)等領(lǐng)域。在生物學(xué)中，很多結(jié)構(gòu)也具有雙折射性，這就需要利用偏光顯微鏡加以區(qū)分。在植物學(xué)方面，如射性，這就需要利用偏光顯微鏡加以區(qū)分。在植物學(xué)方面，如鑒別纖維、染色體、紡錘絲、淀粉粒、細胞壁以及細胞質(zhì)與組鑒別纖維、染色體、紡錘絲、淀粉粒、細胞壁以及細胞質(zhì)與組織中是否含有晶體等。在植物病理上，病菌的入侵，常引起組織中是否含有晶體等。在植物病理上，病菌的入侵，常引起組織內(nèi)化學(xué)性質(zhì)的改變，可以偏光顯微術(shù)進行鑒別。在人體及動織內(nèi)化學(xué)性質(zhì)的改變，可以偏光顯微術(shù)進行鑒別。在人體及動物學(xué)方面，常利用偏光顯微術(shù)來鑒別骨骷、牙

13、齒、膽固醇、神物學(xué)方面，常利用偏光顯微術(shù)來鑒別骨骷、牙齒、膽固醇、神經(jīng)纖維、腫瘤細胞、橫紋肌和毛發(fā)等。經(jīng)纖維、腫瘤細胞、橫紋肌和毛發(fā)等。 7.微分干涉差顯微鏡微分干涉差顯微鏡nDICDIC顯微鏡其優(yōu)點是能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體顯微鏡其優(yōu)點是能顯示結(jié)構(gòu)的三維立體投影影像。與相差顯微鏡相比，其標(biāo)本可投影影像。與相差顯微鏡相比，其標(biāo)本可略厚一點，折射率差別更大，故影像的立略厚一點，折射率差別更大，故影像的立體感更強。體感更強。DIC顯微鏡下的硅藻（偽彩色）8. 倒置顯微鏡 組成和普通顯微鏡一組成和普通顯微鏡一樣，只不過物鏡與照樣，只不過物鏡與照明系統(tǒng)顛倒，前者在明系統(tǒng)顛倒，前者在載物臺之下，后者在載物臺

14、之下，后者在載物臺之上，用于觀載物臺之上，用于觀察培養(yǎng)的活細胞，具察培養(yǎng)的活細胞，具有相差物鏡。有相差物鏡。9. 透射電子顯微鏡 JEM-1011透射電子顯微鏡 萊卡超薄切片機 u用透過樣品的用透過樣品的電子束電子束使其成像的電子顯微鏡。使其成像的電子顯微鏡。u在光學(xué)顯微鏡下無法看清在光學(xué)顯微鏡下無法看清亞顯微結(jié)構(gòu)或超微亞顯微結(jié)構(gòu)或超微結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)。電子束的波長要比可見光和紫外光短電子束的波長要比可見光和紫外光短得多。目前得多。目前TEMTEM的分辨力可達的分辨力可達0.2nm0.2nm。u由于電子束的穿透力很弱，因此用于電鏡的由于電子束的穿透力很弱，因此用于電鏡的標(biāo)本須制成厚度約標(biāo)本須制成厚度

15、約50nm50nm左右的左右的超薄切片超薄切片。這。這種切片需要用超薄切片機（種切片需要用超薄切片機（ultramicrotomeultramicrotome）制作。電子顯微鏡的放大倍數(shù)最高可達近百制作。電子顯微鏡的放大倍數(shù)最高可達近百萬倍萬倍 要知道的幾個重要的分辨率要知道的幾個重要的分辨率n人眼：人眼：0.2mm0.2mmn光學(xué)顯微鏡：光學(xué)顯微鏡：0.2um0.2umn電子顯微鏡：電子顯微鏡：0.2nm0.2nm內(nèi)質(zhì)網(wǎng)透射電鏡圖（偽彩色）內(nèi)質(zhì)網(wǎng)透射電鏡圖（偽彩色） 冰凍蝕刻電鏡照片冰凍蝕刻電鏡照片 10. 掃描電子顯微鏡 JEOLJEOL掃描電子顯微鏡掃描電子顯微鏡 人類血細胞SEM照片

16、基礎(chǔ)知識基礎(chǔ)知識n顯微攝影裝置的安裝與調(diào)試顯微攝影裝置的安裝與調(diào)試nn顯微鏡的光路調(diào)整顯微鏡的光路調(diào)整nn裝入膠片裝入膠片nn取景聚焦取景聚焦nn暴光暴光: 1/15sec(應(yīng)先測光應(yīng)先測光:綠燈亮可以正確暴光綠燈亮可以正確暴光)nn黑白膠片的沖洗黑白膠片的沖洗:顯影顯影 3min停顯停顯 10sec定影定影 15min水洗水洗:流水流水沖洗沖洗30min 晾干晾干nn印相放大印相放大:取景聚焦取景聚焦暴光暴光顯影顯影 停顯停顯 10sec定影定影 15min水洗水洗:流水沖洗流水沖洗30min nn上光剪切上光剪切三、傳統(tǒng)膠片顯微攝影過程利用顯微攝影裝置拍攝顯微鏡利用顯微攝影裝置拍攝顯微鏡(

17、 (或解剖或解剖鏡鏡) )視野中物象的技術(shù)稱為視野中物象的技術(shù)稱為顯微攝影顯微攝影。 顯微攝影技術(shù)主要包括兩個方面：顯微攝影技術(shù)主要包括兩個方面： 拍攝：拍攝： 需要一套完備的顯微攝影裝置需要一套完備的顯微攝影裝置 洗印放大洗印放大：需要一個較好的暗室和成套的需要一個較好的暗室和成套的洗印放大設(shè)備。洗印放大設(shè)備。三、實驗用品三、實驗用品n雙目顯微鏡，生物標(biāo)本，擦鏡紙等雙目顯微鏡，生物標(biāo)本，擦鏡紙等四、實驗內(nèi)容四、實驗內(nèi)容1 1、雙目顯微鏡的操作規(guī)范：、雙目顯微鏡的操作規(guī)范：取送取送放置放置對光對光低倍物鏡使用低倍物鏡使用高倍物高倍物鏡使用鏡使用油鏡使用油鏡使用保養(yǎng)維護保養(yǎng)維護 顯微鏡使用及繪圖

18、顯微鏡使用及繪圖（1）取、放顯微鏡的正確做法）取、放顯微鏡的正確做法 一手握鏡臂，一手托鏡座，托在胸前。小心輕放，避免震一手握鏡臂，一手托鏡座，托在胸前。小心輕放，避免震動。放在動。放在距離桌邊距離桌邊5-10cm5-10cm左右為好。左右為好。（2）對光）對光 先將先將低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔低倍物鏡對準(zhǔn)通光孔，調(diào)整反光鏡（外光源顯微鏡），調(diào)整反光鏡（外光源顯微鏡）或電源電壓（內(nèi)光源顯微鏡），使視野中的光線或電源電壓（內(nèi)光源顯微鏡），使視野中的光線明亮而不明亮而不刺眼刺眼。也可以改變孔徑光圈或改變聚光器的位置達到改變。也可以改變孔徑光圈或改變聚光器的位置達到改變照明的目的，但反光鏡一定要調(diào)到最佳的

19、角度。照明的目的，但反光鏡一定要調(diào)到最佳的角度。（3）放置標(biāo)本）放置標(biāo)本 將標(biāo)本放在載物臺上，固定好。將將標(biāo)本放在載物臺上，固定好。將玻片中有標(biāo)本的地方移玻片中有標(biāo)本的地方移到通光孔的中央到通光孔的中央。如果位置不是在中央，因為物鏡的觀察。如果位置不是在中央，因為物鏡的觀察范圍有限，有可能觀察不到所要看到的內(nèi)容。范圍有限，有可能觀察不到所要看到的內(nèi)容。 顯微鏡的正確使用方法顯微鏡的正確使用方法（4）調(diào)整焦距）調(diào)整焦距 眼睛不要看目鏡，要從側(cè)面注視低倍鏡與標(biāo)本。慢慢轉(zhuǎn)動眼睛不要看目鏡，要從側(cè)面注視低倍鏡與標(biāo)本。慢慢轉(zhuǎn)動粗準(zhǔn)焦距螺旋，使物鏡與玻片標(biāo)本接近。待目測低倍鏡與粗準(zhǔn)焦距螺旋，使物鏡與玻片標(biāo)

20、本接近。待目測低倍鏡與標(biāo)本蓋玻片之間的距離比低倍物鏡的工作距離標(biāo)本蓋玻片之間的距離比低倍物鏡的工作距離（7.63mm7.63mm）小一些時，即可注視目鏡，并向相反的方向調(diào)節(jié)小一些時，即可注視目鏡，并向相反的方向調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺粗準(zhǔn)焦螺旋旋，使物鏡與標(biāo)本的距離增大，慢慢會看到視野中物像的，使物鏡與標(biāo)本的距離增大，慢慢會看到視野中物像的出現(xiàn)。出現(xiàn)。注意這一操作如果違章有可能會損壞儀器或標(biāo)本！注意這一操作如果違章有可能會損壞儀器或標(biāo)本?。?）使用低倍鏡觀察）使用低倍鏡觀察 移動標(biāo)本，找到要觀察的位置。用移動標(biāo)本，找到要觀察的位置。用細準(zhǔn)焦螺旋細準(zhǔn)焦螺旋調(diào)清物像。調(diào)清物像。（6）使用高倍鏡觀察）使用高倍鏡

21、觀察 將需觀察的位置移到顯微鏡視野的中央，將高倍鏡換入即可。將需觀察的位置移到顯微鏡視野的中央，將高倍鏡換入即可。使用高倍鏡前一定要用低倍鏡進行觀察。不可直接用高倍使用高倍鏡前一定要用低倍鏡進行觀察。不可直接用高倍鏡。鏡。顯微鏡的正確使用方法顯微鏡的正確使用方法（7）使用油鏡觀察）使用油鏡觀察 在觀察細小結(jié)構(gòu)時需要使用在觀察細小結(jié)構(gòu)時需要使用100100倍的物鏡。倍的物鏡。100100倍倍的物鏡需要在油的介質(zhì)中工作，故稱油鏡或油浸的物鏡需要在油的介質(zhì)中工作，故稱油鏡或油浸物鏡。油鏡需在物鏡與標(biāo)本之間充上一種折光率物鏡。油鏡需在物鏡與標(biāo)本之間充上一種折光率與玻璃一樣高的介質(zhì)，通常使用與玻璃一樣高

22、的介質(zhì)，通常使用香柏油香柏油，才能使，才能使物像清晰。方法是物像清晰。方法是先低倍，后高倍，再用油鏡先低倍，后高倍，再用油鏡。（8 8）顯微鏡用后）顯微鏡用后 應(yīng)先轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，將高倍物鏡或油鏡旋出通應(yīng)先轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，將高倍物鏡或油鏡旋出通光孔的上方，再光孔的上方，再取下玻片標(biāo)本取下玻片標(biāo)本。一定要及時清除。一定要及時清除油鏡上的油。將油鏡上的油。將反光鏡放在豎直的位置反光鏡放在豎直的位置，以減少，以減少落上灰塵。保持清潔，落上灰塵。保持清潔，罩好防塵罩罩好防塵罩。 生物繪圖方法生物繪圖方法（1）看清楚）看清楚 把正常的、一般的結(jié)構(gòu)與偶然的、人為的一些結(jié)構(gòu)區(qū)分開，把正常的、一般的結(jié)構(gòu)與偶然

23、的、人為的一些結(jié)構(gòu)區(qū)分開，然后選擇那些有代表性的典型的部位進行繪圖。然后選擇那些有代表性的典型的部位進行繪圖。（2 2）定位置）定位置 先確定要畫的圖在實驗報告紙上的位置和大小，力求布局先確定要畫的圖在實驗報告紙上的位置和大小，力求布局合理、美觀，不能任意的無計劃的畫圖，否則位置不適當(dāng)合理、美觀，不能任意的無計劃的畫圖，否則位置不適當(dāng)或偏在一角、或過大過小，影響注字和說明?？紤]在左側(cè)或偏在一角、或過大過小，影響注字和說明?？紤]在左側(cè)一邊留一定邊緣，以備裝訂之用。一邊留一定邊緣，以備裝訂之用。（3 3）定大?。┒ù笮?一般盡可能的把圖畫大些。如果是細胞圖，為了清楚表明一般盡可能的把圖畫大些。如果

24、是細胞圖，為了清楚表明細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，所畫細胞不宜過多，細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，所畫細胞不宜過多，1 12 2個即可，但每個個即可，但每個細胞的各個部分按同比例適當(dāng)放大，如畫輪廓圖或圖解圖，細胞的各個部分按同比例適當(dāng)放大，如畫輪廓圖或圖解圖，也不一定把全部切面（如根莖的橫切面圖）畫出，根據(jù)需也不一定把全部切面（如根莖的橫切面圖）畫出，根據(jù)需要畫出要畫出1/21/21/81/8即可。即可。（4）求真實）求真實 須注意其科學(xué)性，精確性，不能任意臆造，加以美化，繪圖須注意其科學(xué)性，精確性，不能任意臆造，加以美化，繪圖力求準(zhǔn)確。先用力求準(zhǔn)確。先用HBHB鉛筆起草，后用硬鉛筆畫出。鉛筆起草，后用硬鉛筆畫出。（5 5

25、）用點線）用點線 圖只用點和線表示。生物繪圖法中除了輪廓線以外，其余圖只用點和線表示。生物繪圖法中除了輪廓線以外，其余表現(xiàn)物體立體感、大小、厚度、形態(tài)的唯一形式是打點，表現(xiàn)物體立體感、大小、厚度、形態(tài)的唯一形式是打點，即使用即使用HB鉛筆打點來表現(xiàn)光線明暗。切不可涂黑，細胞壁鉛筆打點來表現(xiàn)光線明暗。切不可涂黑，細胞壁用平行的雙線表示，線條要細而圓滑，粗細均勻，原生質(zhì)用平行的雙線表示，線條要細而圓滑，粗細均勻，原生質(zhì)體內(nèi)的結(jié)構(gòu)（如細胞質(zhì)、細胞核等）要用疏密的點表示，體內(nèi)的結(jié)構(gòu)（如細胞質(zhì)、細胞核等）要用疏密的點表示，點要細圓，不拖尾巴。細胞與其他細胞相連接處要畫出一點要細圓，不拖尾巴。細胞與其他細胞相連接處要畫出一些來，以表示所畫的細胞不是孤立的。些來，以表示所畫