免疫標(biāo)準(zhǔn)操作程序SOP

1、72蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科標(biāo)準(zhǔn)操作文件標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng) 目甲型肝炎病毒IgM檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序方 法ELISA方法編寫(xiě)人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進(jìn)平日期2005/01/01批準(zhǔn)人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人免疫室，醫(yī)務(wù)科本規(guī)程自2005年01月01日起實(shí)施，每2年復(fù)審一次文件編號(hào)CHDEYY-JYK-MY-001文件版本號(hào)第1版醫(yī)務(wù)科保管者院長(zhǎng)辦公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室甲型肝炎病毒IgM檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDRYY-JYK-MY-001共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01目的保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可

2、靠。該SOP變動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)專業(yè)主管、科主任批準(zhǔn)簽字。標(biāo)本的采取和保存采靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本宜新鮮，無(wú)污染，避免溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐。測(cè)定原理采用兔抗-人IgMu鏈包被反應(yīng)被，加入待測(cè)標(biāo)本，同時(shí)加入HAVAg，抗HAV-HRP，如待測(cè)標(biāo)本中含有抗-HAV-IgM時(shí)，就能與包被兔抗-人IgMu鏈結(jié)合，并且與HAVAg,抗-HAV-HRP結(jié)合成復(fù)合物，加TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，反之則無(wú)顯色反應(yīng)。操作步驟1. 將待測(cè)標(biāo)本用生理鹽水作（1：1000）稀釋，每孔加入稀釋標(biāo)本100ul，設(shè)陰、

3、陽(yáng)性對(duì)照各2空，每孔加入陰性對(duì)照（或陽(yáng)性對(duì)照）100ul（或2滴），并設(shè)空白對(duì)照一孔，封板，置37度孵育20分鐘。2. 洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各空，靜置5秒，甩干，重復(fù)三次后拍干。3. 每孔加入HAVAg30ul（或一滴），酶結(jié)合物50ul（或一滴），（空白對(duì)照孔不加），充分混勻，封板，置37度孵育20分鐘。4. 洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各空，靜置5秒，甩干，重復(fù)三次后拍干。5. 每孔加顯色劑A液、B液各50ul（或一滴），充分混勻，封板，置37度孵育10分鐘。6. 每孔加入終止液50ul（或

4、一滴），混勻。7. 用酶標(biāo)儀讀數(shù)，取波長(zhǎng)450nm（建議使用雙波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀比色，參考波長(zhǎng)630nm），先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。結(jié)果判斷樣品OD值除以陰性對(duì)照平均OD值大于或等于2.1判斷為陽(yáng)性，否則為陰性陰性對(duì)照OD值低于0.05作0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算臨床意義血清中HAVIgM在亞臨床期即已出現(xiàn)，其滴度在感染后3個(gè)月維持在1000以上，早被公認(rèn)為早期診斷甲型肝炎的依據(jù)。注意事項(xiàng)1 試劑使用前應(yīng)搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存，置冰箱內(nèi)儲(chǔ)藏備用。3 洗板時(shí)所用的洗水紙請(qǐng)勿反復(fù)。

5、4 不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。5 結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室甲型肝炎病毒IgM檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-001共2頁(yè) 第2頁(yè)2005-01-016 封片不能重復(fù)使用。7 用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng) 目乙肝表面抗原檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序方 法ELISA方法編寫(xiě)人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進(jìn)平日期2005/01/01批準(zhǔn)人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人免疫室，醫(yī)務(wù)科本規(guī)程自2005年01月01日起實(shí)施，每2年復(fù)審一次文件編號(hào)WHDEYY-JYK-MY

6、-002文件版本號(hào)第1版醫(yī)務(wù)科保管者院長(zhǎng)辦公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙肝表面抗原檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01目的保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該SOP變動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。標(biāo)本的采取和保存隨機(jī)靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本宜新鮮，無(wú)污染，避免溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐。測(cè)定原理雙抗體夾心法測(cè)HBsAg：抗S包被反應(yīng)板，加入待測(cè)血清后，再加入酶標(biāo)抗S，加底物

7、顯色為陽(yáng)性，證明樣本中含被測(cè)物，含量與顯色程度成正比。操作步驟1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時(shí)將濃縮洗滌液作1：20稀釋。2 加待測(cè)標(biāo)本：加入待測(cè)標(biāo)本每孔0.05毫升，并設(shè)陽(yáng)性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照2孔，空白對(duì)照1孔。3 加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升，空白對(duì)照孔不加，充分混勻，置37孵育30分鐘。4 洗板：1） 手工洗板：棄去反應(yīng)板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置510秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復(fù)5次，拍干。2） 洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。5 加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升；再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37避

8、光孵育15分鐘。6 終止反應(yīng)：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。7 測(cè)定：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，可選擇波長(zhǎng)450nm（以空白孔校零）或雙波長(zhǎng)450/630nm，讀取各孔OD值。結(jié)果判斷Cutoff值計(jì)算：COV=陰性對(duì)照平均OD值*2.1標(biāo)本OD值大于COV為陽(yáng)性，標(biāo)本OD值小于COV為陰性注：陰性對(duì)照OD值低于0.05按0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。臨床意義HbsAg在感染早期出現(xiàn)于患者血循環(huán)中，可持續(xù)數(shù)月，數(shù)年乃至終生，是診斷HBV感染最常用的指標(biāo)。但所謂HBV感染的“窗口期”，HbsAg可以陰性，而抗HBc等其他HBV血清標(biāo)志物則可陽(yáng)性。注意事項(xiàng)1試劑使用前應(yīng)搖勻，并棄去12滴后垂

9、直滴加，注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存，置冰箱內(nèi)儲(chǔ)藏備用。3洗板時(shí)所用的洗水紙請(qǐng)勿反復(fù)。實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙肝表面抗原檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2頁(yè) 第2頁(yè)2005-01-014不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。5結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復(fù)使用。7用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng) 目乙肝表面抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序方 法ELISA方法編寫(xiě)人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進(jìn)平日期2005/01/01批準(zhǔn)人陳健康日期2005/0

10、1/01文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人免疫室，醫(yī)務(wù)科本規(guī)程自2005年01月01日起實(shí)施，每2年復(fù)審一次文件編號(hào)WHDEYY-JYK-MY-003文件版本號(hào)第1版醫(yī)務(wù)科保管者院長(zhǎng)辦公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙肝表面抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01目的保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該SOP變動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。標(biāo)本的采取和保存隨機(jī)靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本宜新鮮，無(wú)污染，避

11、免溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐。測(cè)定原理雙抗原夾心一步法測(cè)HbsAb：S抗原反應(yīng)包被板，加入待測(cè)血清后，再加入酶標(biāo)抗S，加底物顯色為陽(yáng)性，證明樣品中含被測(cè)物，含量與顯色程度成正比。操作步驟1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時(shí)將濃縮洗滌液作1：20稀釋。2 加待測(cè)標(biāo)本：加入待測(cè)標(biāo)本每孔0.05毫升，并設(shè)陽(yáng)性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照2孔，空白對(duì)照1孔。3 加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升，空白對(duì)照孔不加，充分混勻，置37孵育30分鐘。4 洗板：a) 手工洗板：棄去反應(yīng)板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置510秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復(fù)5次，拍干。b) 洗板機(jī)洗

12、板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。5 加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升；再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37避光孵育15分鐘。6 終止反應(yīng)：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。7 測(cè)定：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，可選擇波長(zhǎng)450nm（以空白孔校零）或雙波長(zhǎng)450/630nm，讀取各孔OD值。結(jié)果判斷Cutoff值計(jì)算：COV=陰性對(duì)照平均OD值*2.1標(biāo)本OD值大于COV為陽(yáng)性，標(biāo)本OD值小于COV為陰性注：陰性對(duì)照OD值低于0.05按0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。臨床意義抗HBs為HBV的中和抗體，有清除HBV，防止在感染的作用，抗HBs一般出現(xiàn)于乙肝患者恢復(fù)期，提

13、示感染已終止。此外，注射過(guò)乙肝疫苗的人，抗HBs陽(yáng)性。注意事項(xiàng)1試劑使用前應(yīng)搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存，置冰箱內(nèi)儲(chǔ)藏備用。3洗板時(shí)所用的洗水紙請(qǐng)勿反復(fù)。4不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙肝表面抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2頁(yè) 第2頁(yè)2005-01-015結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復(fù)使用。7用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng) 目乙肝E抗原檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序方 法ELISA方法編

14、寫(xiě)人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進(jìn)平日期2005/01/01批準(zhǔn)人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人免疫室，醫(yī)務(wù)科本規(guī)程自2005年01月01日起實(shí)施，每2年復(fù)審一次文件編號(hào)WHDEYY-JYK-MY-004文件版本號(hào)第1版醫(yī)務(wù)科保管者院長(zhǎng)辦公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙肝E抗原檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-004共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01目的保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該SOP變動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。標(biāo)本

15、的采取和保存隨機(jī)靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本宜新鮮，無(wú)污染，避免溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐。測(cè)定原理雙抗體夾心法測(cè)HbeAg：抗e包被反應(yīng)板，加入待測(cè)血清后，再加入酶標(biāo)抗e，加底物顯色為陽(yáng)性，證明樣本中含被測(cè)物，含量與顯色程度成正比。操作步驟1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時(shí)將濃縮洗滌液作1：20稀釋。2 加待測(cè)標(biāo)本：加入待測(cè)標(biāo)本每孔0.05毫升，并設(shè)陽(yáng)性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照2孔，空白對(duì)照1孔。3 加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升空白對(duì)照孔不加，充分混勻，置37孵育30分鐘。4 洗板：a) 手工洗板：棄去反應(yīng)板條孔內(nèi)液體拍干；

16、用洗滌液注滿每孔，靜置510秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復(fù)5次，拍干。b) 洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。5 加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升；再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37避光孵育15分鐘。6 終止反應(yīng)：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。7 測(cè)定：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，可選擇波長(zhǎng)450nm（以空白孔校零）或雙波長(zhǎng)450/630nm，讀取各孔OD值。結(jié)果判斷Cutoff值計(jì)算：COV=陰性對(duì)照平均OD值*2.1標(biāo)本OD值大于COV為陽(yáng)性，標(biāo)本OD值小于COV為陰性注：陰性對(duì)照OD值低于0.05按0.05計(jì)算，高于0.05按實(shí)際OD值計(jì)算。臨床意義HBeAg

17、是HBV的核心部分，故一般認(rèn)為HBeAg陽(yáng)性是具有傳染性的標(biāo)志，在乙肝潛伏期乃至整個(gè)病程中，HBeAg均可檢出。抗HBe是HBeAg的相應(yīng)抗體。一般認(rèn)為HbeAg消失和抗HBe出現(xiàn)是病情趨向好轉(zhuǎn)的征象。但并不意味著HBV DNA停止復(fù)制，或傳染性消失。注意事項(xiàng)1試劑使用前應(yīng)搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存，置冰箱內(nèi)儲(chǔ)藏備用。3洗板時(shí)所用的洗水紙請(qǐng)勿反復(fù)。實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙肝E抗原檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-004共2頁(yè) 第2頁(yè)2005-01-014不同批

18、號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。5結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復(fù)使用。7用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng) 目乙肝E抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序方 法ELISA方法編寫(xiě)人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進(jìn)平日期2005/01/01批準(zhǔn)人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人免疫室，醫(yī)務(wù)科本規(guī)程自2005年01月01日起實(shí)施，每2年復(fù)審一次文件編號(hào)WHDEYY-JYK-MY-005文件版本號(hào)第1版醫(yī)務(wù)科保管者院長(zhǎng)辦公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪湖市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙肝E抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WDYYY-JYK

19、-MY-005共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01目的保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該SOP變動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。標(biāo)本的采取和保存隨機(jī)靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本宜新鮮，無(wú)污染，避免溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐。測(cè)定原理競(jìng)爭(zhēng)抑制一步法測(cè)HBeAb：抗e包被反應(yīng)板，加入待測(cè)血清后，加入中和e抗原，再加入酶標(biāo)抗e，加底物不顯色的為陽(yáng)性，證明樣本含被測(cè)物，含量與顯色程度成反比。操作步驟1 驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時(shí)將濃縮洗滌液作1：20稀釋。2 加待測(cè)

20、標(biāo)本：加入待測(cè)標(biāo)本每孔0.05毫升，并設(shè)陽(yáng)性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照2孔，空白對(duì)照1孔。3 加中和試劑：每孔0.05毫升，空白對(duì)照孔不加。4 加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升空白對(duì)照孔不加，充分混勻，置37孵育30分鐘。5 洗板：a) 手工洗板：棄去反應(yīng)板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置510秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復(fù)5次，拍干。b) 洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。6 加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升；再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37避光孵育15分鐘。7 終止反應(yīng)：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。8 測(cè)定：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，可選擇波長(zhǎng)450nm（以空白

21、孔校零）或雙波長(zhǎng)450/630nm，讀取各孔OD值。結(jié)果判斷Cutoff值計(jì)算：COV=陰性對(duì)照平均OD值*0.3標(biāo)本OD值大于或等于COV為陰性，標(biāo)本OD值小于COV為陽(yáng)性注：非原倍血清樣品（稀釋血清、質(zhì)控血清）COV=陰性對(duì)照*0.5臨床意義抗HBe是HBeAg的相應(yīng)抗體。一般認(rèn)為HbeAg消失和抗HBe出現(xiàn)是病情趨向好轉(zhuǎn)的征象。但并不意味著HBV DNA停止復(fù)制，或傳染性消失。注意事項(xiàng)1試劑使用前應(yīng)搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存，置冰箱內(nèi)儲(chǔ)藏備用。3洗板時(shí)所用的洗水紙請(qǐng)勿反復(fù)。實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期

22、蕪湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙肝E抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-005共2頁(yè) 第2頁(yè)2005-01-014不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。5結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復(fù)使用。7用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng) 目乙肝核心抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序方 法ELISA方法編寫(xiě)人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進(jìn)平日期2005/01/01批準(zhǔn)人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人免疫室，醫(yī)務(wù)科本規(guī)程自2005年01月01日起實(shí)施，每2年復(fù)審一次文件編號(hào)WHDEYY-JYK-MY-006文件版本號(hào)第1版醫(yī)務(wù)科保管者院長(zhǎng)辦

23、公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙肝核心抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-006共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01目的保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該SOP變動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。標(biāo)本的采取和保存隨機(jī)靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本宜新鮮，無(wú)污染，避免溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐。測(cè)定原理競(jìng)爭(zhēng)抑制一步法測(cè)HBcAb：抗c包被反應(yīng)板，加入待測(cè)血清后，加入中和c抗原，再加入酶標(biāo)抗抗c，加底物不顯色的為陽(yáng)性，證明樣本含

24、被測(cè)物，含量與顯色程度成反比。操作步驟1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，在室溫下平衡30分鐘，同時(shí)將濃縮洗滌液作1：20稀釋。2 加待測(cè)標(biāo)本：加入待測(cè)標(biāo)本每孔0.05毫升，并設(shè)陽(yáng)性對(duì)照2孔，陰性對(duì)照2孔，空白對(duì)照1孔。1）1：30稀釋血清（血漿）檢測(cè)結(jié)果代表臨床意義，待檢標(biāo)本可用稀釋后的洗滌液加以稀釋2）原倍血清（血漿）檢測(cè)結(jié)果代表流行病學(xué)意義。3 酶結(jié)合物：每孔0.05毫升（抗HBc1：30稀釋血清代表臨床意義，可用稀釋后的洗滌液加以稀釋；原倍血清代表流行病學(xué)意義），空白對(duì)照孔不加，充分混勻，置37孵育30分鐘。4 洗板：a) 手工洗板：棄去反應(yīng)板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置5

25、10秒，棄去孔內(nèi)洗滌液拍干，如此反復(fù)5次，拍干。b) 洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。5 加顯色劑：先加顯色劑A，每孔0.05毫升；再加顯色劑B，每孔0.05毫升；充分混勻，放置37避光孵育15分鐘。6 終止反應(yīng)：每孔加入終止液0.05毫升，混勻。7 測(cè)定：用酶標(biāo)儀讀數(shù)，可選擇波長(zhǎng)450nm（以空白孔校零）或雙波長(zhǎng)450/630nm，讀取各孔OD值。結(jié)果判斷Cutoff值計(jì)算：原倍血清COV=陰性對(duì)照平均OD值*0.31：30稀釋血清COV=陰性對(duì)照平均OD值*0.5標(biāo)本OD值大于或等于COV為陰性，標(biāo)本OD值小于COV為陽(yáng)性。臨床意義抗HBc是HBeAg的相應(yīng)抗體，也是HBV感

26、染后血清中最早出現(xiàn)的HBV的標(biāo)志性抗體。持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，甚至終生存在。幾乎所有個(gè)體在感染HBV后都能產(chǎn)生抗HBc，故它是乙肝流行病學(xué)調(diào)查的良好指標(biāo)。在HBV感染的“窗口期”抗HBc常是唯一可測(cè)出的HBV血清標(biāo)志物。注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙肝核心抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-006共2頁(yè) 第2頁(yè)2005-01-011試劑使用前應(yīng)搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存，置冰箱內(nèi)儲(chǔ)藏備用。3洗板時(shí)所用的洗水紙請(qǐng)勿反復(fù)。4不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。5結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成

27、。6封片不能重復(fù)使用。7用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng) 目乙肝病毒Pre-S1抗原檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序 方 法ELISA方法編寫(xiě)人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進(jìn)平日期2005/01/01批準(zhǔn)人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人免疫室，醫(yī)務(wù)科本規(guī)程自2005年01月01日起實(shí)施，每2年復(fù)審一次文件編號(hào)WHDEYY-JYK-MY-007文件版本號(hào)第1版醫(yī)務(wù)科保管者院長(zhǎng)辦公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室乙肝病毒Pre-S1抗原檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-007共

28、1頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01目的保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該SOP變動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。標(biāo)本的采取和保存隨機(jī)靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本宜新鮮，無(wú)污染，避免溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐。測(cè)定原理用乙肝病毒Pre S1蛋白抗體和抗HBS分別用作酶標(biāo)記抗體和包被抗體。采用ELISA雙抗體夾心一步法檢測(cè)標(biāo)本中的乙肝病毒Pre S1蛋白。操作步驟1 將包被條固定于支架并編上序號(hào)。2 設(shè)陽(yáng)性對(duì)照2孔，每孔加入陽(yáng)性對(duì)照50微升，陰性對(duì)照2孔，每孔加入陰性對(duì)照50微升，空白對(duì)照一孔

29、，加入生理鹽水100微升。然后，依次在反應(yīng)孔內(nèi)加入待測(cè)樣品50微升，除空白孔外，每孔再加酶結(jié)合物50微升，置微型震蕩器混勻5秒后，蓋好封片放37孵育60分鐘。3 棄去反應(yīng)孔內(nèi)液體并拍干，用工作洗滌液（濃縮洗滌液1毫升加19毫升蒸餾水稀釋后即為工作洗滌液）注滿各孔，靜置30秒，再拍干，重復(fù)洗滌5次。4 每孔加入TMB顯色劑A50微升，在加入TMB顯色劑B50微升，37中顯色1015分鐘。5 每孔加入終止液50微升。6 用酶標(biāo)儀波長(zhǎng)450nm讀數(shù)，先用空白孔調(diào)零，然后讀取各測(cè)定孔OD值。結(jié)果判斷陰性對(duì)照A值*2.5=臨界值陰性對(duì)照小于0.05時(shí)，按0.05計(jì)算，高于0.05時(shí)按實(shí)際OD值計(jì)算。待測(cè)

30、樣本大于臨界值即為陽(yáng)性，待測(cè)樣本小于臨界值即為陰性。臨床意義乙肝病毒PreS1抗原（前s1抗原）主要存在于病毒完整顆粒中，表示病毒具有復(fù)制功能和傳染性。其敏感性好于HBeAg，可彌補(bǔ)由于HBeAg變異等造成的HBeAg陰性的臨床“誤導(dǎo)”。在早期診斷上早于乙肝兩對(duì)半和ALT?？膳cHBvDNA取得幾乎同樣的敏感性。注意事項(xiàng)1 包被條需密封防潮，從冰箱取出后，在室溫中平衡不少于15分鐘。2 保存在28度，在有效期內(nèi)使用。3 終止液終止后，需在30分鐘內(nèi)測(cè)定結(jié)果。4 不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。5用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng) 目丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序

31、方 法ELISA方法編寫(xiě)人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進(jìn)平日期2005/01/01批準(zhǔn)人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人免疫室，醫(yī)務(wù)科本規(guī)程自2005年01月01日起實(shí)施，每2年復(fù)審一次文件編號(hào)WHDEYY-JYK-MY-008文件版本號(hào)第1版醫(yī)務(wù)科保管者院長(zhǎng)辦公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-008共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01目的保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該SOP變動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字

32、：專業(yè)主管、科主任。標(biāo)本的采取和保存隨機(jī)靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本宜新鮮，無(wú)污染，避免溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐。測(cè)定原理采用ELISA間接抗體兩步法測(cè)抗HCV，用HCV抗原包被反應(yīng)板加入待測(cè)標(biāo)本后再加入酶標(biāo)記第二抗體，加底物顯色為陽(yáng)性，證明樣本中含丙肝抗體，含量與顯色程度成正比。操作步驟1 每次試驗(yàn)設(shè)陰性、陽(yáng)性對(duì)照各兩孔，分別加入陰、陽(yáng)性對(duì)照血清100ul，再設(shè)一孔空白對(duì)照，加入樣品稀釋液100ul。其余孔加100ul樣品稀釋液，再加待測(cè)血清10ul。充分混勻后，置37溫育30分鐘。2 洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。3 每孔加酶結(jié)

33、合物100ul，（空白對(duì)照除外），置37溫育20分鐘。4 洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次的程序洗板，最后拍干。5 每孔加顯色劑A、B各50ul，輕輕震蕩后，37避光靜置10分鐘。6 每孔加入終止液50ul終止反應(yīng)，用酶標(biāo)儀讀數(shù)，可選擇波長(zhǎng)450nm（以空白調(diào)零），讀取各孔OD值。結(jié)果判斷1 陽(yáng)性對(duì)照平均值大于1.20，實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效。2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求陽(yáng)性、陰性對(duì)照OD值之差應(yīng)大于1.20，否則本次實(shí)驗(yàn)無(wú)效。3 若陰性對(duì)照值小于0.050時(shí)，按0.050計(jì)算。4 臨界值=陰性對(duì)照平均值+0.15 測(cè)試標(biāo)本的計(jì)算值小于臨界值則為HCV抗體陰性。6 測(cè)試標(biāo)本的計(jì)算值等于或大于臨界值則為HCV抗體陽(yáng)性。臨床意

34、義抗HCV陽(yáng)性僅提示已被HCV感染，不是獲得免疫力的標(biāo)志。急性期多為IgM型，慢性期多為IgG型，兩者均為非保護(hù)性抗體，是具有傳染性的標(biāo)志。注意事項(xiàng)1 試劑使用前應(yīng)搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存，置冰箱內(nèi)儲(chǔ)藏備用。3 洗板時(shí)所用的洗水紙請(qǐng)勿反復(fù)。4 不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。5 結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6 封片不能重復(fù)使用。實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室丙型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序WHDEYY-JYK-MY-008共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-017用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，

35、請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng) 目丁型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（IgG）方 法ELISA方法編寫(xiě)人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進(jìn)平日期2005/01/01批準(zhǔn)人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人免疫室，醫(yī)務(wù)科本規(guī)程自2005年01月01日起實(shí)施，每2年復(fù)審一次文件編號(hào)WHDEYY-JYK-MY-009文件版本號(hào)第1版醫(yī)務(wù)科保管者院長(zhǎng)辦公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（IgG）WHDEYY-JYK-MY-009共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01目的保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確

36、可靠。該SOP變動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。標(biāo)本的采取和保存隨機(jī)靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本宜新鮮，無(wú)污染，避免溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐。測(cè)定原理采用丁型肝炎病毒特異性抗原成分作為包被抗原，采用ELISA法檢測(cè)丁型肝炎病毒抗體。樣品加入已有樣品稀釋液的包被抗原反應(yīng)孔，在隨后的溫育過(guò)程中，若樣品中含特異性抗體，則該抗體與包被抗原形成抗原抗體復(fù)合物被吸附到固相上，再加上酶標(biāo)記的第二抗體，最終形成抗原抗體酶標(biāo)二抗復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的游離酶，加入顯色劑后顯色，反之若樣品中不含

37、特異性抗體，則加入顯色劑后不顯色。操作步驟1 配洗液：將洗滌液（20倍）與蒸餾水按1：19的比例稀釋，充分搖勻后備用。2 加樣品稀釋液：用加樣器在微孔反應(yīng)條孔中加入樣品稀釋液每孔100ul，空下四孔準(zhǔn)備加對(duì)照。3 加標(biāo)本和留空白：將每份待檢標(biāo)本10ul分別加入已有樣品稀釋液的各孔中，留下一孔不加標(biāo)本做空白對(duì)照，標(biāo)好位置。4 加對(duì)照：在預(yù)先空下的4孔分別加入陰性對(duì)照兩孔，陽(yáng)性對(duì)照兩孔每孔100ul，標(biāo)好位置，陰、陽(yáng)對(duì)照應(yīng)在所有待測(cè)標(biāo)本加完后再加，以保證閾值計(jì)算的準(zhǔn)確性。5 溫育（一）：充分混勻，37溫育20分鐘。6 洗板（一）：洗板機(jī)洗板：洗板次數(shù)為5次，每次洗液在孔中滯留時(shí)間為1530秒，洗液

38、應(yīng)注滿反應(yīng)孔，確保每次吸凈無(wú)殘留，全部洗完后在毛巾或洗水紙上用力拍干。7 加酶標(biāo)二抗：各孔中加入酶標(biāo)二抗100ul。8 溫育（二）：37溫育20分鐘。9 洗板（二）：方法同洗板（一）。10 加顯色劑：每孔加入顯色劑A50ul,全部加完后，再次每孔加入顯色劑B50ul，混勻。11 溫育（三）：37顯色10分鐘。12 終止：顯色完畢后立即于每孔加50ul終止液，混勻。13 判斷：終止后應(yīng)在10分鐘內(nèi)完成判讀，用空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值。結(jié)果判斷1 對(duì)空白對(duì)照調(diào)零后，兩孔陽(yáng)性對(duì)照OD平均值大于兩孔陰性對(duì)照OD平均值0.5以上，陰性對(duì)照OD平均值小于0.10時(shí)，方可認(rèn)為試劑盒

39、有效并且用戶操作無(wú)誤。2 閾值的計(jì)算：1）兩孔陰性對(duì)照平均值小于0.06按0.06計(jì)算 2）閾值=2.1乘以陰性對(duì)照OD平均值臨床意義實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（IgG）WHDEYY-JYK-MY-009共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01HDV是一種有缺陷的病毒，表面被HBV包膜蛋白包裹。HDV的致病性依賴于HBV，可與HBV重疊感染或共同感染，HDV感染與暴發(fā)型肝炎重癥肝炎及肝硬變密切相關(guān)。HDV感染的血清學(xué)檢測(cè)測(cè)定抗HDVIgG，一般認(rèn)為是即往感染。注意事項(xiàng)1 試劑使用前應(yīng)搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2 從冷藏環(huán)境

40、中取出的試劑盒應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存，置冰箱內(nèi)儲(chǔ)藏備用。3 洗板時(shí)所用的洗水紙請(qǐng)勿反復(fù)。4 不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。5 結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6 封片不能重復(fù)使用。7 用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng) 目丁型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（IgM）方 法ELISA方法編寫(xiě)人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進(jìn)平日期2005/01/01批準(zhǔn)人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人免疫室，醫(yī)務(wù)科本規(guī)程自2005年01月01日起實(shí)施，每2年復(fù)審一次文件編號(hào)WHDEYY-JYK-MY-010文件版本號(hào)第1版醫(yī)務(wù)科保管

41、者院長(zhǎng)辦公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（IgM）WHDEYY-JYK-MY-010共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01目的保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該SOP變動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。標(biāo)本的采取和保存隨機(jī)靜脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本宜新鮮，無(wú)污染，避免溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐。測(cè)定原理采用丁型肝炎病毒特異性抗原成分作為包被抗原，采用ELISA法檢測(cè)丁型肝炎病毒抗體。樣品加入已有樣品稀釋液

42、的包被抗原反應(yīng)孔，在隨后的溫育過(guò)程中，若樣品中含特異性抗體，則該抗體與包被抗原形成抗原抗體復(fù)合物被吸附到固相上，再加上酶標(biāo)記的第二抗體，最終形成抗原抗體酶標(biāo)二抗復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的游離酶，加入顯色劑后顯色，反之若樣品中不含特異性抗體，則加入顯色劑后不顯色。操作步驟1 配洗液：將洗滌液（20倍）與蒸餾水按1：19的比例稀釋，充分搖勻后備用。2 加樣品稀釋液：用加樣器在微孔反應(yīng)條孔中加入樣品稀釋液每孔100ul，空下四孔準(zhǔn)備加對(duì)照。3 加標(biāo)本和留空白：將每份待檢標(biāo)本10ul分別加入已有樣品稀釋液的各孔中，留下一孔不加標(biāo)本做空白對(duì)照，標(biāo)好位置。4 加對(duì)照：在預(yù)先空下的4孔分別加入陰性對(duì)照兩孔，陽(yáng)

43、性對(duì)照兩孔每孔100ul，標(biāo)好位置，陰、陽(yáng)對(duì)照應(yīng)在所有待測(cè)標(biāo)本加完后再加，以保證閾值計(jì)算的準(zhǔn)確性。5 溫育（一）：充分混勻，37溫育20分鐘。6 洗板（一）：洗板機(jī)洗板：洗板次數(shù)為5次，每次洗液在孔中滯留時(shí)間為1530秒，洗液應(yīng)注滿反應(yīng)孔，確保每次吸凈無(wú)殘留，全部洗完后在毛巾或洗水紙上用力拍干。7 加酶標(biāo)二抗：各孔中加入酶標(biāo)二抗100ul。8 溫育（二）：37溫育20分鐘。9 洗板（二）：方法同洗板（一）。10 加顯色劑：每孔加入顯色劑A50ul,全部加完后，再次每孔加入顯色劑B50ul，混勻。11 溫育（三）：37顯色10分鐘。12 終止：顯色完畢后立即于每孔加50ul終止液，混勻。13 判

44、斷：終止后應(yīng)在10分鐘內(nèi)完成判讀，用空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光值。結(jié)果判斷1 對(duì)空白對(duì)照調(diào)零后，兩孔陽(yáng)性對(duì)照OD平均值大于兩孔陰性對(duì)照OD平均值0.5以上，陰性對(duì)照OD平均值小于0.10時(shí)，方可認(rèn)為試劑盒有效并且用戶操作無(wú)誤。2 閾值的計(jì)算：1）兩孔陰性對(duì)照平均值小于0.06按0.06計(jì)算 2）閾值=2.1乘以陰性對(duì)照OD平均值臨床意義實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（IgM）WHDEYY-JYK-MY-010共2頁(yè) 第2頁(yè)2005-01-01HDV是一種有缺陷的病毒，表面被HBV包膜蛋白包裹。HDV的致病性依賴于HB

45、V，可與HBV重疊感染或共同感染，HDV感染與暴發(fā)型肝炎重癥肝炎及肝硬變密切相關(guān)。HDV感染的血清學(xué)檢測(cè)測(cè)定抗HDVIgM。陽(yáng)性一般認(rèn)為是近期感染。注意事項(xiàng)1 試劑使用前應(yīng)搖勻，并棄去12滴后垂直滴加，注意均勻用力。2 從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)置室溫平衡30分鐘再進(jìn)行測(cè)試，余者應(yīng)及時(shí)封存，置冰箱內(nèi)儲(chǔ)藏備用。3 洗板時(shí)所用的洗水紙請(qǐng)勿反復(fù)。4 不同批號(hào)試劑請(qǐng)勿通用。5 結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6 封片不能重復(fù)使用。7 用本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請(qǐng)按傳染病實(shí)驗(yàn)室檢查規(guī)程操作。標(biāo)準(zhǔn)操作程序項(xiàng) 目戊型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（IgG）方 法ELISA方法編寫(xiě)人馮嵐日期2005/01/0

46、1審核人曹進(jìn)平日期2005/01/01批準(zhǔn)人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門(mén)和/或個(gè)人免疫室，醫(yī)務(wù)科本規(guī)程自2005年01月01日起實(shí)施，每2年復(fù)審一次文件編號(hào)WHDEYY-JYK-MY-011文件版本號(hào)第1版醫(yī)務(wù)科保管者院長(zhǎng)辦公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室戊型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（IgG）WHDEYY-JYK-MY-011共2頁(yè) 第1頁(yè)2005-01-01目的保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。該SOP變動(dòng)程序本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。標(biāo)本的采取和保存隨機(jī)靜

47、脈血2ml，分離血清備用。也可以使用血漿標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)。標(biāo)本宜新鮮，無(wú)污染，避免溶血，避免反復(fù)凍融，不可用NaN3防腐。測(cè)定原理采用戊型肝炎病毒（HEV）特異性抗原成分作為包被抗原，采用ELISA法檢測(cè)戊型肝炎病毒抗體。樣品加入已有樣品稀釋液的包被抗原反應(yīng)孔，在隨后的溫育過(guò)程中，若樣品中含特異性抗體，則該抗體與包被抗原形成抗原抗體復(fù)合物被吸附到固相上，再加上酶標(biāo)記的第二抗體，最終形成抗原抗體酶標(biāo)二抗復(fù)合物，洗滌除去未結(jié)合的游離酶，加入顯色劑后顯色，反之若樣品中不含特異性抗體，則加入顯色劑后不顯色。操作步驟1 配洗液：將洗滌液（20倍）與蒸餾水按1：19的比例稀釋，充分搖勻后備用。2 加樣品稀釋液

48、：用加樣器在微孔反應(yīng)條孔中加入樣品稀釋液每孔100ul，空下四孔準(zhǔn)備加對(duì)照。3 加標(biāo)本和留空白：將每份待檢標(biāo)本10ul分別加入已有樣品稀釋液的各孔中，留下一孔不加標(biāo)本做空白對(duì)照，標(biāo)好位置。4 加對(duì)照：在預(yù)先空下的4孔分別加入陰性對(duì)照兩孔，陽(yáng)性對(duì)照兩孔每孔100ul，標(biāo)好位置，陰、陽(yáng)對(duì)照應(yīng)在所有待測(cè)標(biāo)本加完后再加，以保證閾值計(jì)算的準(zhǔn)確性。5 溫育（一）：充分混勻，37溫育20分鐘。6 洗板（一）：洗板機(jī)洗板：洗板次數(shù)為5次，每次洗液在孔中滯留時(shí)間為1530秒，洗液應(yīng)注滿反應(yīng)孔，確保每次吸凈無(wú)殘留，全部洗完后在毛巾或洗水紙上用力拍干。7 加酶標(biāo)二抗：各孔中加入酶標(biāo)二抗100ul。8 溫育（二）：3

49、7溫育20分鐘。9 洗板（二）：方法同洗板（一）。10 加顯色劑：每孔加入顯色劑A50ul,全部加完后，再次每孔加入顯色劑B50ul，混勻。11 溫育（三）：37顯色10分鐘。12 終止：顯色完畢后立即于每孔加50ul終止液，混勻。13 判斷：終止后應(yīng)在10分鐘內(nèi)完成判讀，用空白對(duì)照調(diào)零，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng) 處測(cè)定吸光值。結(jié)果判斷1 對(duì)空白對(duì)照調(diào)零后，兩孔陽(yáng)性對(duì)照OD平均值大于兩孔陰性對(duì)照OD平均值0.5以上，陰性對(duì)照OD平均值小于0.10時(shí)，方可認(rèn)為試劑盒有效并且用戶操作無(wú)誤。2 閾值的計(jì)算：1）兩孔陰性對(duì)照平均值小于0.06按0.06計(jì)算 2）閾值=2.1乘以陰性對(duì)照OD平均值臨床意義實(shí)驗(yàn)室名稱項(xiàng)目編號(hào)制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室戊型肝炎病毒抗體檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（IgG）WHDEYY-JYK-MY-011共2頁(yè) 第2