.7.21.血紅蛋白的提取和分離

1、課題課題3 血紅蛋白的提取和分離血紅蛋白的提取和分離主要內(nèi)容：主要內(nèi)容：一、基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識二、實驗操作二、實驗操作一、基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識- 凝膠色譜法（分配色譜法）凝膠色譜法（分配色譜法）1 1、凝膠：、凝膠：一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖）道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖）2 2、概念：、概念：根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法有效方法3 3、原理：、原理：分子量分子量大大小小直徑大小直徑大小大于大于凝膠顆?？漳z顆?？障吨睆?，被阻擋隙直徑，被阻擋在顆粒的外面在顆粒的外

2、面小于小于凝膠顆?？漳z顆粒空隙直徑，可以進隙直徑，可以進入顆粒內(nèi)部入顆粒內(nèi)部運動方式運動方式垂直向下移動垂直向下移動垂直向下移動，垂直向下移動，無規(guī)則擴散進入無規(guī)則擴散進入顆粒內(nèi)部顆粒內(nèi)部運動速度運動速度較快較快較慢較慢運動路徑運動路徑較短較短較長較長洗脫次序洗脫次序先從先從凝膠柱洗脫凝膠柱洗脫出來出來后從后從凝膠柱洗脫凝膠柱洗脫出來出來一、基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識- 用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，分子量用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，分子量大的蛋白質(zhì)大的蛋白質(zhì) a a路程較長，移動速度較慢路程較長，移動速度較慢 b b路程較長，移動速度較快路程較長，移動速度較快 c c路程較短，移動速度較慢路程較短，移

3、動速度較慢 d d路程較短，移動速度較快路程較短，移動速度較快d4 4、具體過程、具體過程一、基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識- 相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的進行過程可表示為圖中哪一個的進行過程可表示為圖中哪一個b1 1、概念：、概念：在一定的范圍內(nèi)，能對抗外來少在一定的范圍內(nèi)，能對抗外來少量強酸、強堿或稍加稀釋不引起溶液量強酸、強堿或稍加稀釋不引起溶液phph發(fā)發(fā)生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具有緩生明顯變化的作用叫做緩沖作用，具有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液。沖作用的溶液叫做緩沖溶液。 緩沖溶液：緩沖溶液：2 2、作用：、作用：能夠抵制（能夠抵制（ ）對溶）對溶液（

4、液（ ）的影響，維持）的影響，維持phph基本不基本不變。變。外界的酸或堿外界的酸或堿phph值值3 3、緩沖溶液的配制、緩沖溶液的配制通常由（通常由（ ）種緩沖劑溶解于水中）種緩沖劑溶解于水中配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的（配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的（ ）就可以制得（就可以制得（ ）使用的緩沖液。使用的緩沖液。1 12 2使用比例使用比例在不同在不同phph范圍內(nèi)范圍內(nèi)思考：說出人體血液中緩沖液。思考：說出人體血液中緩沖液。 nah2po4 / na2hpo4 h2co3 / nahco3磷酸緩沖液，磷酸緩沖液，保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察功能，便于觀察()和科學(xué)研究其

5、和科學(xué)研究其()4、在本課題中使用的緩沖液？、在本課題中使用的緩沖液？（三）（三） 電泳：電泳：帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程。帶電粒子在電場作用下發(fā)生遷移的過程。 許多重要的生物大分子，如多肽、許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解離的基團，在一定的核酸等都具有可解離的基團，在一定的phph下，下，這些基團會帶上正電或負(fù)電。這些基團會帶上正電或負(fù)電。在電場的作用在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動。電極移動。電泳利用了待分離樣品中各種分電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小，形狀子帶電性質(zhì)的差

6、異以及分子本身的大小，形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。而實現(xiàn)樣品中各種分子的分離。瓊脂糖瓊脂糖凝膠電泳、凝膠電泳、聚丙稀酰胺聚丙稀酰胺凝膠電泳。凝膠電泳。在電場的作用下，這些帶電分子會向著與在電場的作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極移動其所帶電荷相反的電極移動 4 4、聚丙稀酰胺凝膠電泳聚丙稀酰胺凝膠電泳（1 1）聚丙稀酰胺凝膠：）聚丙稀酰胺凝膠：是由單體丙烯酰是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑胺和交聯(lián)劑n,nn,n，亞甲基雙丙烯酰胺在引發(fā)劑亞甲基雙丙烯酰胺在引發(fā)劑和催化劑的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)和催化劑

7、的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。狀結(jié)構(gòu)的凝膠。蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率遷移率取取決于它所帶決于它所帶凈電荷凈電荷的多少以及的多少以及分子的大分子的大小小等因素。等因素。為了消除為了消除凈電荷對遷移率的影響，凈電荷對遷移率的影響，可以可以在凝膠中加入在凝膠中加入sdssds。（2 2）原理：）原理：sdssds能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。由幾條肽由幾條肽鏈組成的鏈組成的蛋白質(zhì)復(fù)合體蛋白質(zhì)復(fù)合體在在sdssds的作用下會的作用下會，因此測定的結(jié)果只是，因此測定的結(jié)果只是。sdssds能與各種蛋白質(zhì)能與各種蛋白質(zhì)形成形成，sdssds

8、所帶負(fù)電所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子。因而掩蓋了因而掩蓋了，使電泳遷移率完全取決于分子的，使電泳遷移率完全取決于分子的大小。大小。（3 3）sds-sds-聚丙稀酰胺凝膠電泳聚丙稀酰胺凝膠電泳作用機理作用機理: : 4 4、聚丙稀酰胺凝膠電泳聚丙稀酰胺凝膠電泳使用使用sds-sds-聚丙烯酰胺電泳過程中，不同蛋聚丙烯酰胺電泳過程中，不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于a a 電荷的多少電荷的多少 b b 分子的大小分子的大小c c 肽鏈的多少肽鏈的多少 d d 分子形狀的差異分子形狀的差異蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：蛋白質(zhì)的提取和分離一

9、般分為四步：（1）樣品處理：包括洗滌紅細(xì)胞；血）樣品處理：包括洗滌紅細(xì)胞；血紅蛋白稀釋；離心等操作收集到的血紅紅蛋白稀釋；離心等操作收集到的血紅蛋白溶液。蛋白溶液。（2）粗分離：透析除去分子較小的雜）粗分離：透析除去分子較小的雜質(zhì)。質(zhì)。（3）純化：通過凝膠色譜法將分子量）純化：通過凝膠色譜法將分子量較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。（4）純度鑒定：通過聚丙烯酰胺凝膠）純度鑒定：通過聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。電泳鑒定。二、實驗操作：二、實驗操作：樣品處理樣品處理粗分離粗分離純化純化純度鑒定純度鑒定二、實驗操作：二、實驗操作：樣品處理樣品處理粗分離粗分離純化純化純度鑒定純度鑒定知識回顧知識

10、回顧（一）樣品處理（一）樣品處理1 1、紅細(xì)胞的洗滌：、紅細(xì)胞的洗滌：2 2、血紅蛋白的釋放：、血紅蛋白的釋放：3 3、分離血紅蛋白溶液：、分離血紅蛋白溶液：4 4、透析、透析：（：（如何除無機鹽離子和小分子有機物質(zhì)呢？）如何除無機鹽離子和小分子有機物質(zhì)呢？） 血液檸檬酸鈉血液檸檬酸鈉低速短時離心低速短時離心吸出上層血漿吸出上層血漿紅細(xì)胞紅細(xì)胞5倍倍體積生理鹽水體積生理鹽水 緩慢攪拌緩慢攪拌10min低速短時離心低速短時離心吸出上清液吸出上清液反復(fù)洗滌直至上清液無黃色反復(fù)洗滌直至上清液無黃色在蒸餾水和甲苯（？）作用下，紅細(xì)胞破裂釋放在蒸餾水和甲苯（？）作用下，紅細(xì)胞破裂釋放紅細(xì)胞破碎混合液紅細(xì)

11、胞破碎混合液中速長時離心（中速長時離心（2000c/min10min）濾紙過濾除去脂質(zhì)濾紙過濾除去脂質(zhì)分液漏斗分離出血紅蛋白，分液漏斗分離出血紅蛋白，得到紅色透明得到紅色透明液體。液體。裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中（裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中（ph為為7.0）透析。）透析。二、實驗操作：二、實驗操作：樣品處理樣品處理粗分離粗分離純化純化純度鑒定純度鑒定分離血紅蛋白溶液分離血紅蛋白溶液有機溶劑有機溶劑 無色透明的甲苯層無色透明的甲苯層脂類物質(zhì)脂類物質(zhì) 白色脂溶性物質(zhì)沉淀層白色脂溶性物質(zhì)沉淀層血紅蛋白溶液血紅蛋白溶液 紅色透明液體紅色透明液體紅細(xì)胞破碎物沉淀紅細(xì)胞破碎物沉淀 暗紅色沉淀物暗紅色沉

12、淀物練習(xí)鞏固1、隨著人類跨入蛋白質(zhì)組時代，對蛋、隨著人類跨入蛋白質(zhì)組時代，對蛋白質(zhì)的研究和應(yīng)用越來越深入，首先要白質(zhì)的研究和應(yīng)用越來越深入，首先要做的一步是做的一步是a 弄清各種蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)弄清各種蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)b 弄清各種蛋白質(zhì)的功能弄清各種蛋白質(zhì)的功能c 弄清各種蛋白質(zhì)的合成過程弄清各種蛋白質(zhì)的合成過程d 獲得高純度的蛋白質(zhì)獲得高純度的蛋白質(zhì)2、用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過程中，、用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過程中，關(guān)于蛋白質(zhì)的敘述，正確的是關(guān)于蛋白質(zhì)的敘述，正確的是a 相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程大于相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程大于相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)b 相對

13、分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程小于相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程小于相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)c 相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程等于相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程等于相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)d 二者根本無法比較二者根本無法比較3、使用、使用sds-聚丙烯酰胺電泳過程中，不聚丙烯酰胺電泳過程中，不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于a 電荷的多少電荷的多少 b 分子的大小分子的大小c 肽鏈的多少肽鏈的多少 d 分子形狀的差異分子形狀的差異4、在采血容器中加入檸檬酸鈉的目的是、在采血容器中加入檸檬酸鈉的目的是a 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)ph b 維持紅細(xì)胞

14、的能量供應(yīng)維持紅細(xì)胞的能量供應(yīng)c 防止微生物生長防止微生物生長 d 防止血液凝固防止血液凝固5、一分子血紅蛋白最多可攜帶的、一分子血紅蛋白最多可攜帶的 o2分子分子數(shù)和數(shù)和co2分子數(shù)分別是分子數(shù)分別是a 4、2 b 4、4 c 2、1 d、1、16、記住樣品處理中的血紅蛋白溶液離心后、記住樣品處理中的血紅蛋白溶液離心后分層順序分層順序自上而下自上而下是：是：有有機溶劑機溶劑-脂脂類物質(zhì)類物質(zhì)-血血紅蛋白溶液紅蛋白溶液-紅紅細(xì)胞破碎物沉淀細(xì)胞破碎物沉淀1 1、凝膠色譜柱的制作：、凝膠色譜柱的制作：二、實驗操作：二、實驗操作：樣品處理樣品處理粗分離粗分離純化純化純度鑒定純度鑒定色譜柱的制作過程：

15、準(zhǔn)備材料色譜柱的制作過程：準(zhǔn)備材料加工橡皮塞加工橡皮塞安裝色譜柱安裝色譜柱凝膠色譜柱取長為凝膠色譜柱取長為40 cm，內(nèi)徑為，內(nèi)徑為16 cm，有關(guān)說法中，正確的是，有關(guān)說法中，正確的是 (多選多選)a一般凝膠色譜柱直徑的大小不影響一般凝膠色譜柱直徑的大小不影響分離的效果分離的效果b凝膠色譜柱過高超過凝膠色譜柱過高超過1 m，不影響，不影響分離的效果分離的效果c凝膠色譜柱過矮，則影響混合物的凝膠色譜柱過矮，則影響混合物的分離度分離度d凝膠色譜柱直徑過大會耗用過多洗凝膠色譜柱直徑過大會耗用過多洗脫液，樣品的稀釋度過大脫液，樣品的稀釋度過大步驟步驟操作要求操作要求操作要求操作要求色譜柱垂直固定在支

16、架上色譜柱垂直固定在支架上計算稱量凝計算稱量凝膠膠根據(jù)色譜柱體積計算凝膠用量根據(jù)色譜柱體積計算凝膠用量配制懸浮液配制懸浮液凝膠顆粒蒸餾水凝膠顆粒蒸餾水充分溶脹充分溶脹凝膠顆粒洗脫液凝膠顆粒洗脫液沸水浴沸水浴裝填懸浮液裝填懸浮液一次性緩慢倒入；輕輕敲打一次性緩慢倒入；輕輕敲打緩沖液洗滌緩沖液洗滌平衡平衡立刻用磷酸緩沖液洗滌平衡立刻用磷酸緩沖液洗滌平衡12h12h裝配好的凝膠柱打開下端出口，使柱內(nèi)緩沖液緩打開下端出口，使柱內(nèi)緩沖液緩慢下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口。慢下降到與凝膠面平齊，關(guān)閉出口。吸管吸吸管吸1ml1ml樣品加到色譜柱的頂樣品加到色譜柱的頂端，滴加樣品時，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動加樣

17、，同時注意端，滴加樣品時，吸管管口貼著管壁環(huán)繞移動加樣，同時注意不要破壞凝不要破壞凝膠面。膠面。加樣后打開下端出口，使樣品加樣后打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全進入凝膠層后，關(guān)閉下端出口。滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全進入凝膠層后，關(guān)閉下端出口。小心加入小心加入ph=7.0 ph=7.0 的的20mmol/l20mmol/l的磷酸緩沖液到的磷酸緩沖液到適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口進行洗脫適當(dāng)高度，連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口進行洗脫。待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時，用試管待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時，用試管收集流出液，每收集流出液，每5ml5ml收集一試管，連續(xù)收集。（在

18、分離過程中，收集一試管，連續(xù)收集。（在分離過程中，如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動，說明色譜柱制作成功）如果紅色區(qū)帶均勻一致的移動，說明色譜柱制作成功）正確的加樣操作：正確的加樣操作：1 1、不要觸及并破壞凝膠面。、不要觸及并破壞凝膠面。2 2、貼壁加樣。、貼壁加樣。3 3、使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。、使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。正確的加樣操作是正確的加樣操作是（1 1）不要觸及并破壞凝膠面。不要觸及并破壞凝膠面。（2 2）貼壁加樣。）貼壁加樣。（3 3）使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。）使吸管管口沿管壁環(huán)繞移動。讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的phph范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和功能。范圍內(nèi)，維持結(jié)構(gòu)和功能

19、。 血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判斷什么時候應(yīng)該收集洗脫液。這使血紅蛋白的分離過程顏色來判斷什么時候應(yīng)該收集洗脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡化了實驗操作。非常直觀，大大簡化了實驗操作。 血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：。首先通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋。首先通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液血紅蛋白溶液，即，即: :樣品的處理；樣品的處理；再經(jīng)過透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后再經(jīng)過透

20、析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離；然后將相對分子質(zhì)量較大的將相對分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)蛋白除去雜質(zhì)蛋白除去，即，即: :樣品樣品的純化；最后經(jīng)的純化；最后經(jīng)進行純度鑒定。進行純度鑒定。收集得到的純化后的蛋白 在裝填凝膠柱時，不能有氣泡存在的原因在裝填凝膠柱時，不能有氣泡存在的原因是是 a a、氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次、氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次 序，降低分離效果序，降低分離效果 b b、氣泡阻礙蛋白質(zhì)的運動、氣泡阻礙蛋白質(zhì)的運動 c c、氣泡與蛋白質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)、氣泡與蛋白質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng) d d、氣泡在裝填凝膠的時候，使凝膠不緊、氣泡在裝填凝膠的時候，使凝膠不緊密密a 樣品的加

21、入和洗脫的操作不正確的是樣品的加入和洗脫的操作不正確的是 a a 加樣前，打開色譜柱下端的流出口，使柱加樣前，打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到凝膠面的下面內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到凝膠面的下面 b b加樣后，打開下端出口，使樣品滲入凝膠加樣后，打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)床內(nèi) c c等樣品完全進入凝膠層后，關(guān)閉下端出口等樣品完全進入凝膠層后，關(guān)閉下端出口 d d用吸管小心的將用吸管小心的將1ml1ml透析后的樣品加到色譜透析后的樣品加到色譜柱的頂端，不要破壞凝膠面柱的頂端，不要破壞凝膠面a 下列是有關(guān)血紅蛋白提取和分離的相關(guān)操下列是有關(guān)血紅蛋白提取和分離的相關(guān)操作

22、，其中正確的是（作，其中正確的是（ ） a a可采集豬血作為實驗材料可采集豬血作為實驗材料 b b用蒸餾水重復(fù)洗滌紅細(xì)胞用蒸餾水重復(fù)洗滌紅細(xì)胞 c c血紅蛋白釋放后應(yīng)低速短時間離心血紅蛋白釋放后應(yīng)低速短時間離心 d d洗脫液接近色譜柱底端時開始收集流洗脫液接近色譜柱底端時開始收集流出液出液 a鑒定血紅蛋白純度。鑒定血紅蛋白純度。血紅蛋白的取和分離凝膠色譜法原理分離過程凝膠電泳法緩沖溶液組成作用蛋白質(zhì)的提取分離樣品處理粗分離純化純度鑒定血紅蛋白的提取和離蛋白質(zhì)分子的差異性蛋白質(zhì)分子的差異性凝膠色譜法原理分離過程凝膠電泳法凝膠色譜法原理分離過程凝膠電泳法緩沖溶液組成作用緩沖溶液組成作用蛋白質(zhì)的提取

23、分離樣品處理粗分離純化純度鑒定蛋白質(zhì)的提取分離樣品處理粗分離純化純度鑒定觀察你處理的血液樣品離心后觀察你處理的血液樣品離心后是否分層是否分層（見教科書圖（見教科書圖5-5-1818），），如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。白的原因。此外，離心速度過高和時間過長，會使白細(xì)胞和淋此外，離心速度過高和時間過長，會使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白巴細(xì)胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細(xì)胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。的提取純度。1 1、你是否完成了對血液樣品的處理？你能描述處、你是否完成了對血液樣品的處

24、理？你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎？理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎？2 2、你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產(chǎn)生？你的色譜、你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產(chǎn)生？你的色譜柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？柱裝填得成功嗎？你是如何判斷的？ 由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以加入大分子的有色物質(zhì)，以加入大分子的有色物質(zhì)，例如藍色葡聚糖例如藍色葡聚糖20002000或紅色葡聚糖，或紅色葡聚糖，觀察色帶移動的情況。如果色帶均勻、

25、狹窄、平整，說明凝膠色觀察色帶移動的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。譜柱的性能良好。如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。 如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的如果凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確的話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨話，能清楚地看到血紅蛋白的紅色區(qū)帶均勻、狹窄、平整，隨著洗脫液緩慢流出；著洗脫液緩慢流出；如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分如果紅色區(qū)帶歪曲、散亂、變寬，說明分離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。離的效果不好，這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。1.1.凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的的原理是怎樣的