微波輔助提取-高效液相色譜法測定蔬果中的Vc含量

1、微波輔助提取-高效液相色譜法測定蔬果中的Vc含量微波輔助提取-高效液相色譜法測定蔬果中的維生素C含量化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院中心實驗室 中山大學(xué)分析科學(xué)研究所，廣東510275* 通訊作者，Email:Bgalang摘要 本實驗用微波輔助提取三種不同水果中的維生素C，采用高效液相色譜法通過標(biāo)準曲線定量法，借助紫外可見光分析，在265nm的波長下測定維生素C的吸光度，與標(biāo)準系列比較，以保留時間來定性、峰面積定量。實驗測得：在5-100mg/L范圍內(nèi)，維生素C濃度與峰面積具有很好的線性關(guān)系（A=32074c/（mg/L）-34595，R2=0.9999）本實驗測得每100g橘子、金桔、蘋果中的維生素C含

2、量分別為：29.73mg/100g、33.66mg/100g、2.24mg/100g。該操作方法簡單方便，靈敏迅速，準確度比較好。關(guān)鍵詞 維生素C 微波輔助提取 高效液相色譜 標(biāo)準曲線1引言維生素C，又叫L-抗壞血酸，化學(xué)式C6H8O6，是一種水溶性維生素。食物中的維生素C被人體小腸上段吸收，一旦吸收，就分布到體內(nèi)所有的水溶性結(jié)構(gòu)中。正常成人體內(nèi)的維生素C代謝活性池中約有1500mg維生素C，最高儲存峰值為3000mg。正常情況下，維生素C絕大部分在體內(nèi)經(jīng)代謝分解成草酸或與硫酸結(jié)合生成抗壞血酸-2-硫酸由尿排出；另一部分可直接由尿排出體外。（摘自維生素C的主要作用是提高免疫力，預(yù)防癌癥、心臟病

3、、中風(fēng)，保護牙齒和牙齦等。另外，堅持按時服用維生素C還可以使皮膚黑色素沉著減少，從而減少黑斑和雀斑，使皮膚白皙。富含維生素C的食物有花菜、青辣椒、橙子、葡萄汁、西紅柿等，可以說，在所有的蔬菜、水果中，維生素C含量都不少。美國專家認為，每人每天維生素C的最佳用量應(yīng)為200300毫克，最低不少于 60毫克，半杯（大約一百毫升）新鮮橙汁便可滿足這個最低量。而中國營養(yǎng)學(xué)會建議的膳食參考攝入量（RNI），成年人為100mg/日，可耐受最高攝入量（UL）為1000mg/日。維生素C在體內(nèi)參與多種反應(yīng)，如氧化還原過程，在生物氧化和還原作用以及細胞呼吸中起重要作用。人體內(nèi)缺乏維生素C時容易導(dǎo)致壞血病。同時，由

4、于維生素C是一種水溶性的抗氧化劑，可參與膠原蛋白的合成，它同時還具有防癌、預(yù)防動脈硬化、治療貧血、抗氧化和提高人體免疫力等功效。維生素C在蔬果中普遍存在，尤其是柑桔類水果中含量較高。櫻桃、番石榴、辣椒、獼猴桃等水果中Vc含量在50-300 mg/100 g。詳細含量如下：（摘自排名食物質(zhì)量(g)數(shù)量維生素C含量(mg)1櫻桃5012粒4502番石榴801個2163紅椒801/3個1364黃椒801/3個1205柿子1501個1056青花菜61/4株967草莓1006粒808橘子1301個789芥藍菜花601/3株7210獼猴桃1001個68維生素C含量的經(jīng)典測定方法有碘量法武漢大學(xué).分析化學(xué)實

5、驗室（第三版）北京:高等教育出版社，1997：167-175.、熒光法邵曉芬，張韻慧.譜學(xué)與光譜分析，1994.14(2)：125-130. ，隨著儀器分析方法的發(fā)展，有文獻采用鄰二氮菲分光光度法間接測定魏玲，呂曉琴，李學(xué)琴.鄰二氮菲分光光度法間接測定藥片中維生素C的含量. 昌吉學(xué)院學(xué)報，2008，2：110-112. ，也有通過與高錳酸鉀反應(yīng)的分光光度法測定的閏家偉， 黃運瑞.分光光度法測定藥片中維生素的含量. 南陽師范學(xué)院學(xué)報，2005，4(12)：54-55. 。之前課程也采用過庫侖滴定法對維生素C藥片進行維生素C含量，效果頗佳，快速簡便。不過對于庫侖滴定法利用的是氧化還原原理，所測結(jié)果

6、實際上是體系中的還原性物質(zhì)的維生素C當(dāng)量，對于復(fù)雜體系中存在的其他還原劑，并沒有很好的區(qū)分作用，例如在測定蘋果汁維生素C含量的時候，蘋果汁中存在的亞鐵離子會使庫侖滴定法結(jié)果過高。因此，在含有其他還原性物質(zhì)的復(fù)雜體系中，需要采用更精密的方法，本實驗采用的是微博提取高效液相色譜法。樣品的預(yù)處理是樣品分析最為關(guān)鍵的步驟之一，尤其是分析復(fù)雜的樣品時，樣品的預(yù)處理是必不可少的。所以，發(fā)展快速、高效的樣品前處理方法是分析家們一直追求的目標(biāo)。傳統(tǒng)的樣品前處理的方法如索氏抽提、超聲波萃取等不僅費時，而且溶劑的消耗量大。微波輔助萃取(Microwave Assisted Extraction ，MAE) 具有快

7、速、高效、省溶劑、環(huán)境友好等優(yōu)點。微波技術(shù)開始主要是用于無機分析的樣品預(yù)處理即微波消化，從1986 年起微波能開始應(yīng)用到有機分析中的樣品預(yù)處理李核，李攻科，張展霞.微波輔助萃取技術(shù)的進展.1995-2004 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co.，Ltd.即微波輔助萃取。十幾年來，MAE技術(shù)在有機分析中得到了廣泛的應(yīng)用。本實驗采用MAE技術(shù)來萃取水果中的維生素C。MAE是指利用微波能強化溶劑萃取效率，即利用微波加熱來加速溶劑對固體樣品中目標(biāo)萃取物(主要是有機化合物) 的萃取過程。微波具有波動性、高頻特性以及熱特性或非熱特性(生物效應(yīng)) 等特點 5。MAE具有以下優(yōu)

8、點：1、快速高效：樣品及溶劑中的偶極分子在高頻微波能的作用下，以109/s 圈的速度變換其正、負極，產(chǎn)生偶極渦流、離子傳導(dǎo)和高頻率摩擦，從而在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量的熱量。偶極分子旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致的弱氫鍵破裂、離子遷移等加速了溶劑分子對樣品基體的滲透，待分析成分很快溶劑化，使微波萃取時間顯著縮短。2、加熱均勻：微波加熱是透入物料內(nèi)部的能量被物料吸收轉(zhuǎn)換成熱能對物料加熱，形成獨特的物料受熱方式，整個物料被加熱，無溫度梯度，即微波加熱具有均勻性的優(yōu)點。3、微波加熱具有選擇性：微波對介電性質(zhì)不同的物料呈現(xiàn)出選擇性的加熱特點，介電常數(shù)及介質(zhì)損耗小的物料，對微波的入射可以說是“透明”的。溶質(zhì)和溶劑的極性越大，對微波能

9、的吸收越大，升溫越快，促進了萃取速度。而對于不吸收微波的非極性溶劑，微波幾乎不起加熱作用。所以，在選擇萃取劑時一定要考慮到溶劑的極性，以達到最佳效果。4、生物效應(yīng)（非熱效應(yīng))：由于大多數(shù)生物體內(nèi)含有極性水分子，在微波場的作用下引起強烈的極性震蕩，從而導(dǎo)致細胞分子間氫鍵松弛，細胞膜結(jié)構(gòu)電擊穿破裂，加速了溶劑分子對基體的滲透和待提取成分的溶劑化。因此，利用MAE 從生物基體萃取待分析的成分時，能提高萃取效率。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相

10、色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)。高效液相色譜法有“三高一廣一快”的特點胡琴，黃慶華主編.分析化學(xué).第354頁.科學(xué)出版社，2009年.： 1、高壓：流動相為液體，流經(jīng)色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。 2、高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。 3

11、、高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在L數(shù)量級。 4、應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。 5、分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在1530分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時。 此外高效液相色譜還有色譜柱可反復(fù)使用、樣品不被破壞、易回收等優(yōu)點，但也有缺點，與氣相色譜相比各有所長，相互補充。高效液相色譜的缺點是有“柱外效應(yīng)”。在從進樣到檢測器之間，除了柱子以外的任何死空間（進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等）中，如果流動相的流型有變化，被分離物

12、質(zhì)的任何擴散和滯留都會顯著地導(dǎo)致色譜峰的加寬，柱效率降低。高效液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。定量測定時，可根據(jù)樣品的具體情況采用峰面積法或峰高法。但用歸一法或內(nèi)標(biāo)法測定雜質(zhì)總量時，須采用峰面積法。 測定供試品（或經(jīng)衍生化處理的供試品）中各雜質(zhì)及雜質(zhì)的總量限度采用不加校正因子的峰面積歸一法。計算各雜質(zhì)峰面積及其總和，并求出占總峰面積的百分率。但溶劑峰不計算在內(nèi)。色譜硅膠圖的記錄時間應(yīng)根據(jù)各品種所含雜質(zhì)的保留時間決定，除另有規(guī)定外可為該品種項下主成分保留時間的倍數(shù)。 當(dāng)雜質(zhì)峰面積與成分峰面積相差懸殊時，采用主成分自身對照法魏福祥主編.儀器分析及應(yīng)用.第194頁.中國石化出版社，2007年。在

13、測定前，先按各品種項下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品稀釋成一定濃度的溶液作為對照溶液，進樣，調(diào)節(jié)檢測器的靈敏度或進樣量，使對照溶液中的主成分色譜峰面積滿足準確測量要求。然后取供試品溶液，進樣，記錄時間，除另有規(guī)定外，應(yīng)為主成分保留時間的倍數(shù)。根據(jù)測得的供試品溶液的各雜質(zhì)峰面積及其總和并和對照溶液主成分的峰面積比較，計算雜質(zhì)限度。 測定供試品中雜質(zhì)的總量限度采用不加校正因子的峰面積法，即內(nèi)標(biāo)法劉立行主編.儀器分析（第二版）.第71頁. 中國石化出版社，2008年附錄：思考題（1）標(biāo)準曲線法有何優(yōu)缺點？液相色譜法中常用的定性定量方法有哪些？ 答：標(biāo)準曲線法的優(yōu)點是：繪制好標(biāo)準工作曲線后直接從標(biāo)準工作曲線

14、上讀出含量，適合于不同樣品的分析。標(biāo)準曲線法的缺點是：需要配制各濃度的標(biāo)準溶液并準確測定；每次樣品分析的色譜條件（檢測器的響應(yīng)性能，柱溫，流動相流速及組成，進樣量，柱效等）很難完全相同，因此容易出現(xiàn)較大誤差；標(biāo)準工作曲線繪制時，一般使用欲測組分的標(biāo)準樣品（或已知準確含量的樣品），而實際樣品的組成有差別，因此必將給測量帶來一定的誤差。液相色譜法中常用的定性方法有：直接利用標(biāo)準物質(zhì)對照定性(用已知物質(zhì)直接和未知樣品對照定性是液相色譜定性分析中最簡便、可行的定性方法。在一定的色譜條件下,各種物質(zhì)均有確定不變的保留時間,故保留時間可作為定性指標(biāo))、與其它儀器結(jié)合進行定性（液相色譜法對未知物直接進行定性

15、有一定難度,而某些儀器,如質(zhì)譜、紅外光譜、核磁共振等是鑒定未知物結(jié)構(gòu)的有效工具。通過將色譜與質(zhì)譜等聯(lián)用,互相取長補短,使較復(fù)雜的混合物先經(jīng)色譜分離成單個組分后,再通過組分特定碎片離子組成的質(zhì)譜圖對其進行準確定性。常見的聯(lián)用儀器有色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀,色譜- 紅外聯(lián)用儀等）、組分保留時間結(jié)合光譜圖定性（配備有光電二極管陣列檢測器的液相色譜儀,可利用色譜保留時間規(guī)律及光譜特征吸收曲線綜合進行定性分析。配備紫外光度檢測器的液相色譜儀也可獲得分離組分的紫外吸收光譜。當(dāng)試樣組分通過流通池時,短時間中斷液流,進行快速掃描,以得到紫外吸收光譜特征吸收曲線,但是該光譜特征吸收曲線不能完整輸出,只能為定性分析提供信

16、息或據(jù)此選擇最佳檢測波長）；液相色譜法中常用的定量方法有：面積歸一化法、主成分自身對照法、內(nèi)標(biāo)法、外標(biāo)法。（2）如何快速建立未知物的液相色譜方法？一般應(yīng)考慮哪些主要因素？答：首先要知道這個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、pKa值、極性、溶解性、穩(wěn)定性（避光或低溫保存）等化學(xué)物理常數(shù)，然后選擇合適的樣品處理方法，使樣品有較好的萃取回收率和較少的干擾成分存在；而對于分離分析，如果使用紫外檢測器，在這之前應(yīng)先做個化合物的吸收波長掃描，以找出其最大吸收波長，然后依據(jù)峰形和化合物的pKa值進行水相的pH值調(diào)節(jié)，以找到最佳的流動相體系（保證了最大響應(yīng)、最少干擾、最好的分離），再進行反相色譜實驗，調(diào)整流動相中有機相的比例

17、，以求得足夠的分離度、合理的操作時間以及易于檢測的譜帶。然后改用不同的色譜柱，改變溫度和流動相pH值，優(yōu)化篩選溶劑的配比組成。（3）微波輔助萃取法為何能達到快速高效的萃取效果？ 答：樣品及溶劑中的偶極分子在高頻微波能的作用下,以109/s 圈的速度變換其正、負極,產(chǎn)生偶極渦流、離子傳導(dǎo)和高頻率摩擦,從而在短時間內(nèi)產(chǎn)生大量的熱量。偶極分子旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致的弱氫鍵破裂、離子遷移等加速了溶劑分子對樣品基體的滲透,待分析成分很快溶劑化,使微波萃取時間顯著縮短。（4）試比較液相色譜法和氣相色譜法的優(yōu)缺點。答：液相色譜的優(yōu)點有：1、氣相色譜不適用于不揮發(fā)物質(zhì)和對熱不穩(wěn)定物質(zhì)，而液相色譜卻不受樣品的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性

18、的限制。有些樣品因為難以汽化而不能通過柱子，熱不穩(wěn)定的物質(zhì)受熱會發(fā)生分解，也不適用于氣相色譜法。這使氣相色譜法的使用范圍受到了限制。另一方面，液相色譜卻不受樣品的揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制。所以液相色譜非常適合于分離生物、醫(yī)藥有關(guān)的大分子和離子型化合物，不穩(wěn)定的天然產(chǎn)物，種類繁多的其它高分子及不穩(wěn)定的化合物。2、對于很難分離的樣品，用液相色譜常比用氣相色譜容易完成分離，主要有以下三個方面的原因：液相色譜中，由于流動相也影響分離過程，這就對分離的控制和改善提供了額外的因素。而氣相色譜中的載氣一般不影響分配，也就是說，在液相色譜中，有兩個相與樣品分子發(fā)生選擇性的相互作用；液相色譜中具有獨特效能的柱填料

19、（固定相）的種類較多，這樣就使固定相的選擇余地更大，從而增加了分離的可能性；液相色譜使用較低的分離溫度，分子間的相互作用在低溫時更為有效，因此降低溫度一般會提高色譜分離效率。3、和氣相色譜相比，液相色譜對樣品的回收比較容易，而且是定量的，樣品的各個組分很容易被分離出來。因此，在很多場合，液相色譜不僅作為一種分析方法，而且可以作為一種分離手段，用以提純和制備具有中等純度的單一物質(zhì)。在氣相色譜中所分離出的各樣品組分雖也可以回收，但一般都不太方便，而且定量性差。氣相色譜法的優(yōu)點有：1、分離效率高，分離速度快，操作簡便。由于氣體粘度小，用其作為流動相時樣品組分在兩相之間可很快進行分配：氣體通過盛有固定

20、相管柱的阻力小，因此分離速度快。一根長1-2m的色譜柱，一般可有幾千個理論塔板，對于長柱，甚至有一百多萬個理論塔板，這樣就可使一些分配系數(shù)很接近的、難以分離的物質(zhì)，經(jīng)過多次分配平衡，得到分離。2、樣品用量少，檢測靈敏度高。由于樣品是在氣態(tài)下分離和在氣體中進行檢測的，有許多高靈敏度的檢測器可供使用，雖樣品用量少也能檢測出來。氣相色譜可以檢測出10-11-10-13g的物質(zhì)。3、選擇性好?？蛇x擇對樣品組分有不同作用力的液體、固體作為固定相，在適當(dāng)操作溫度下，使組分的分配系數(shù)有較大差異，從而將物理、化學(xué)性質(zhì)相近的組分分離開。取供試品，按各品種項下規(guī)定的方法配制不含內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄

21、色譜圖I；再配制含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，在同樣的條件下注樣，記錄色譜圖。記錄的時間除另有規(guī)定外，應(yīng)為該品種項下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)峰保留時間的倍數(shù)，色譜圖上內(nèi)標(biāo)峰高應(yīng)為記錄儀滿標(biāo)度的30%以上，否則應(yīng)調(diào)整注樣量或檢測器靈敏度。 如果色譜圖中沒有與色譜圖上內(nèi)標(biāo)峰保留時間相同的雜質(zhì)峰，則色譜圖中各雜質(zhì)峰面積之和應(yīng)小于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積（溶劑峰不計在內(nèi)）。如果色譜圖中有與色譜圖上內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰保留時間相同的雜質(zhì)峰，應(yīng)將色譜圖上的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰面積減去色譜圖中此雜質(zhì)峰面積，即為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的校正面積；色譜圖中各雜質(zhì)峰總面積加色譜圖中此雜峰面積，即為各雜質(zhì)峰的校正總面積，各雜質(zhì)峰的校正總面積應(yīng)小于內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的校正面積。 按各

22、品種項下的規(guī)定，精密稱(量)取對照品和供試品，配制成溶液，分別精密取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和供試品待測成分的峰面積（或峰高），從而計算出含量。 由于微量注射器不易精確控制進樣量，當(dāng)采用外標(biāo)法測定供試品中某雜質(zhì)或主成分含量時，以定量環(huán)進樣為好。本實驗采用微波輔助萃取法快速萃取蔬果中的維生素C，采用高效液相色譜進行分析，以維生素C標(biāo)準系列溶液的色譜峰面積對其濃度做校準曲線，根據(jù)樣品中維生素C的峰面積，由標(biāo)準曲線計算其濃度。2 材料與方法2.1儀器與試劑高效液相色譜儀：LC-20AT；微波萃取儀（上海新儀微波化學(xué)科技有限公司）；色譜柱：依利特或DikmaC18柱 (250 mm&#

23、215;4.6 mm， I.D.5 m)；進樣柱：白云x進樣柱。氣相色譜條件：汽化溫度為200；檢測器溫度為250；載氣（N2）總量為40 mL.min-1，分流比為30：1；氫氣和空氣流量分別為30 mL.min-1和300mL.min-1；程序升溫：初始溫度40，保持2min，升溫速率為20min-1并升至150；進樣量0.51L。試劑：乙腈（色譜純），冰乙酸，維生素C，磷酸二氫鉀等均為分析純；橘子、金桔、蘋果等水果樣品。實驗用水為超純水。 維生素C標(biāo)準溶液：快速準確稱取0.025 g 維生素C，用1 mol/L乙酸溶液溶解，定量轉(zhuǎn)移至250 mL容量瓶中，用1 mol/L乙酸溶液定容，得

24、到100 mg/L標(biāo)準溶液備用，現(xiàn)用現(xiàn)配。色譜條件：流動相：3%的乙腈0.05 mol/L KH2PO4水溶液（v/v）；流速1mL/min；柱溫30，紫外檢測波長265 nm；進樣量10L。2.2實驗過程1、按操作說明開啟液相色譜儀，設(shè)定方法參數(shù)。2、樣品準備：準確稱取切碎的水果樣品（質(zhì)量在5.0g附近，記錄準確質(zhì)量），以1 mol/L乙酸50 mL為萃取溶劑，微波功率設(shè)為600 W，萃取時間為10 min，萃取溫度設(shè)定為50，平行萃取兩次。萃取液過濾后用1 mol/L乙酸溶液定容至100 mL，制成供試品溶液。3、定性分析：分別取10L 50 mg/L的維生素C標(biāo)準溶液和供試品溶液，進HP

25、LC分析。根據(jù)保留時間定性分析水果中的維生素C。4、標(biāo)準曲線繪制：分別配制5，20，50，80，100 mg/L的維生素C樣品溶液，待液相色譜穩(wěn)定后進樣分析。以維生素C色譜峰面積對濃度作圖，繪制校準曲線。5、定量分析：供試品溶液經(jīng)0.45m微孔濾膜過濾后進行HPLC分析。記錄其維生素C的色譜峰面積，根據(jù)標(biāo)準曲線計算蔬果樣品中維生素C的含量，結(jié)果以mg/100 g表示。3 討論與結(jié)論3.1實驗結(jié)果標(biāo)準溶液的量記錄：表一 標(biāo)準溶液的HPLC色譜數(shù)據(jù)標(biāo)準溶液濃度c /( mg·L-1)5205080100峰面積A139341591488156810325309853175985保留時間/m

26、in2.7942.8352.7682.8002.7783.2標(biāo)準曲線的繪制根據(jù)峰面積對濃度作圖：Figure 1 濃度與峰面積直線圖由圖所得峰面積（A）對標(biāo)溶液濃度c的標(biāo)準曲線方程為：A=32074c/(mg·L-1)-34595；相關(guān)系數(shù)R2=0.9999。3.3 樣品提取液的測量結(jié)果記錄分別以橘子、金桔、蘋果三種水果的提取液為樣品進行HPLC色譜分析，所得HPLC的色譜數(shù)據(jù)和色譜圖如下：表二 樣品的質(zhì)量及HPLC色譜數(shù)據(jù)樣品橘子金桔蘋果樣品質(zhì)量m/g5.185.135.00保留時間t/min2.8322.8092.874峰高49345110501306峰面積A4592945193

27、531215Figure 2 橘子中維生素C的HPLC色譜圖Figure 3 金桔中維生素C的HPLC色譜圖Figure 4 蘋果中維生素C的HPLC色譜圖3.4水果中Vc含量的計算將測得的各種樣品中維生素C色譜峰的峰面積代入3.2所繪制的標(biāo)準曲線方程A=32074c/(mg·L-1)-34595，從而求出各種樣品中的維生素C濃度；再根據(jù)提取液的體積（100ml）和樣品質(zhì)量，求出所測水果中的維生素C含量，結(jié)果記錄如下表。表三.樣品的數(shù)據(jù)處理表樣品橘子金桔蘋果樣品質(zhì)量m/g5.185.135.00峰面積A4592945193531215提取液中的Vc濃度c/(mg·L-1)15.4017.271.12水果中的Vc含量mg/100g29.7333.662.243.5實驗誤差分析實驗過程中，可能出現(xiàn)的誤差分兩類：1、系統(tǒng)誤差：高效液相色譜儀，微波萃取儀，量筒等的儀器誤差；實驗操作個人因感官和運動器官的反應(yīng)或習(xí)慣不同而產(chǎn)生的誤差；2、偶然誤差：在定容量取和稱量過程中的讀數(shù)誤差。 3.6實驗結(jié)果分析標(biāo)準曲線分析：通過紫外可見范圍內(nèi)全波長的掃描，發(fā)現(xiàn)265nm處為維生素C最大吸收峰，實測維生素C標(biāo)準溶液響應(yīng)時間均在2.802±0.034s的范圍之內(nèi)，最大相對誤差僅為1.