血栓與止血相關檢查標準及質量控制

1、血栓與止血相關 檢查標準及質量控制血栓與止血相關檢查標準及質量控制一、標準化及質量控制的基本概念二、血栓與止血試驗的標準化及質量控制三、常規(guī)凝血試驗的質量控制 一一 標準化及質量控制的基本概念（一）（一）精密度精密度（precision）和準確度和準確度（accuracy） 1、精密度即實驗結果的可重復性。 （1）特別制備的標本進行重復試驗 （參考標準，質控血漿）。 （2）受檢標本的重復性試驗。 2、準確度指受檢標本與真值的接近程 度，室間質控標本的檢測。 （二）標準物、參考物、校準物和質控物1、標準物（reference standard malerial）：是一種化學物質或物理材料，具有唯

2、一指定值。多由who或icsh等國際組織決定的。主要用于國家參考物或校準物的控制。2、參考物（reference material）：是一種物質（血漿）或材料（濾光片），符合國家或國際參考標準，用于保證常規(guī)檢測工作的準確性。（二）標準物、參考物、校準物和質控物3、校準物（calibrator）：符合國家或國際參考標準的性能，適用于校準儀器或調整測量值以獲得準確結果。（二）標準物、參考物、校準物和質控物4、質控物：適用于核查常規(guī)檢驗的精密度（一般有正常、異常、嚴重異常三種質控物）。（二）標準物、參考物、校準物和質控物（三）、室間質量控制 對于血栓止血檢驗的室內質量控制計劃必須考慮下列4大因素：標

3、本、試劑、設備與儀器及技術，其中每一步影響試驗質量的因素都可能最終影響檢測結果。1、室內質控的內容 每次測定均同時檢查正常和異常質控物，是室內質控的主要方法。（三）、室間質量控制1室間質量控制是通過參加室間質量評價或稱為室間質量保證（external guality assurance, eqa）來實現的，eqa是另一種提供結果準確度的方法，能反映出實驗室的準確度和精密度。eqa原則是由專門機構以同一物質向各個實驗室發(fā)放，然后分析參加實驗室回報的數據，并與總體均值或組內均值比較，計算偏移百分比。2 、室間質量控制方式（三）室間質量控制2失控分析的基本原則（1）結果超過2s。（2）連續(xù)幾個數據呈

4、傾向性升高或減低。（3）20次數據中有2次或以上數據位于2s 或2s以外。2、 室間質量控制方式（三）、室間質量控制二、血栓與止血試驗的標準化及質量控制 血栓與止血試驗的標準化是指對檢測標本、試劑、儀器、技術和操作等制定統(tǒng)一標準，按照標準的要求對試驗進行科學管理，以減少誤差，提高試驗的精密度、準確性和可靠性。（一）（一） 現有標準 國際血液學標準化委員會（icsh）、國際血栓與止血委員（icth）或美國臨床生物化學標準化委員會（nccls）規(guī)定1、凝血酶原時間（pt）、對于pt試驗，規(guī)定：（1）用不同級別的凝血活酶國參考品（如原級凝血活酶參考品67/40，次級參考品68/434等），校正本土制

5、備或生產的組織凝血活酶參考物，本土生產的凝血活酶試劑必須標有國際敏感指數（isi）值；（2）結果的報告方式棄用“活動度”，采用“秒（s）”和“患者pt與正常pt比率（prt）”，在口服華法林類藥物監(jiān)控時，采用“國際標準化比值（inr）”。（一）（一） 現有標準2、aptt試驗，推薦的方法與儀器要求基本同pt試驗。但應該注意，不同的部分凝血活酶、不同的活化劑和不同的激活時間，對各種因子缺陷、對肝素和狼瘡抗凝物質的敏感性差異很大，應根據不同的檢測目的選擇相應敏感的凝血活酶或活化劑。（一）（一） 現有標準3、 纖維蛋白原試驗，世界衛(wèi)生組織的生物標準化委員會已將1992年問世的纖維蛋白原標準品89/6

6、44定為國際參考品（irp），并推薦采用改良jacobsson法和irp來標準化本地區(qū)的次級標準品。在常規(guī)纖維蛋白原含量測定時建議使用clauss法。需要注意的是，目前國內使用的某些儀器可以根據pt的變化換算出纖維蛋白原含量，這種方法只能對纖維蛋白原含量作出大致估計，當含量明顯異常特別是明顯減低時，不能準確判斷。（一）（一） 現有標準 根據手術前出血、凝血時間測定結果評估患者是否會術中出血，國家衛(wèi)生部已行文規(guī)定用 “aptt、凝血酶原時間試驗和血小板計數聯(lián)合檢測，如臨床有出血史時另加模板式（出血時間測定器）法進行出血時間檢測”。（二）（二） 關于出血、凝血時間測定關于出血、凝血時間測定 1、采

7、血時間：清晨空腹最佳，病人服藥情況。2、采血技術要點：止血帶壓力盡量小，束縛 時間盡量短。防止促纖溶物質釋放。以采 取肘靜脈血為主，嬰兒采血，頸靜脈為主， 但有嚴重血小板減少和自發(fā)性出血傾向者 應慎重處理。采血必須準確順利，前2ml血 液不宜且于檢查，盡量避免組織因子污染、 溶血、凝血，以及氣泡產生。(三) 血栓與止血試驗的分析前質量控制 采血采血采血采血3、標本放置時間：采血后15min30min分離處 理為宜，分離血漿后應在4h以內完成試驗 （25條件下）-20保存1周，-80保存一 年以上，一般不宜于4 （纖原、fvii)。4、樣本在室溫暫時放置，需用塞子塞上，否則 血漿ph有明顯改變，

8、影響結果。(三) 血栓與止血試驗的分析前質量控制 抗凝劑抗凝劑1、抗凝劑種類（1）100mmol/l枸椽酸鈉（2h2o，5h2o），用 于凝血，血小 板，纖溶功能檢查。（2）1%edtana2 用于血小板相關蛋白的 檢查。（3）0.1mol/l草酸酸鈉 用于baso4吸附用血 漿。（4）肝素（10u/ml）用于血液流變，細胞 表面 抗原測定。(三) 血栓與止血試驗的分析前質量控制 2、抗凝注意事項（1）血液與抗凝劑比例：多采用抗凝劑與血液 比為1：9。（2）充分混勻，避免氣泡產生以及自身污染。（3）血球壓積容積的影響：嚴重貧血者 （hcg 60%）。應適當調節(jié)抗凝劑與血液的比例，調節(jié)公式：抗凝

9、劑的體積（ml）=1.8510-3血量（100血細胞比容）?？鼓齽┛鼓齽?三)、 血栓與止血試驗的分析前質量控制 標本處理（1）溫度：4或20為常用。（2）轉速與時間：富含血小板血漿 9001200r/min， 10min或6min，乏血小板 血漿30004000r/min，1520min。 (3) 注意：離心時間長于30min，應嚴格控制 溫 度變化。(三) 血栓與止血試驗的分析前質量控制 三、常規(guī)凝血試驗的質量控制1、pt應用乏血小板血漿，離心條件20002500g30min或32004000r/min30min。2、不同廠家，不同批號組織凝血活酶都有不同的參考質控物。3、實驗溫度350.

10、5，實驗反應時ph7.27.3。（一）（一）凝血酶原時間凝血酶原時間（pt）isi4、關于國際標準化比率（inr）：inr是pt結果的一種報告方式，主要適用于口服抗凝劑（oat）的實驗室監(jiān)測，計算公式如下： 患者ptsinr=rpt isi = 平均正常pts公式中rpt為患者pt與平均正常人pt的比，isi是凝血酶的國際敏感指數，isi分高（0.981.5）、中（1.62.0）、低（2.0）敏感性三種，isi值越接近1.0敏感度越高，oat監(jiān)測常用高、中敏，一般用中、低敏凝血活酶。注意：所謂高敏是指對凝血因子缺乏的敏感性較高，并不指pt時間的長短，高敏者正常pt時間往往較長（1518秒）。（

11、一）凝血酶原時間（一）凝血酶原時間（pt）isi5、目前pt的報告方式多用pt秒，inr、百分活動度已被廢棄。主要目的是提高在不同實驗室儀器、試劑所做pt的可比性，向有利于oat患者的監(jiān)測。（一）凝血酶原時間（一）凝血酶原時間（pt）（二）活化部分凝血活酶時間（aptt） 1、每天測試至應在上、下午各做一次正常對照。2、aptt要嚴格用ppp測定，否則會因血小板磷脂量 的差異而影響結果。3、所用激活劑是試驗的關鍵，白陶土選擇激活能力 需選擇，商買品多用鞣花酸。4、激活所用時間在以3min為最佳，長短均受影響。5、血漿凝血、溶血、抗凝比例不準都會嚴重影響 aptt測定結果。6、標本時間放置過長（

12、4h），室溫過高均可導致 aptt明顯延長或縮短。（三）纖維蛋白原測定（三）纖維蛋白原測定（fbgfbg） 1、功能測定法（1）凝血酶原衍生法：該法又分為濁度含量與時間含量計算法。前法較好但如凝血活酶試劑濁度高則誤差大，后者受凝血因子、影響較大。（2）clauss法：是目前較為普遍采用的方法，但因凝血酶受血中肝素類物質，纖維蛋白（原）裂解產物（fdp）的影響，在一些特殊病例子如dic、原發(fā)性、繼發(fā)性纖溶亢進時結果往往不準。（3）動力學測定法：利用蘄蛇酶為凝固劑測定纖維蛋白原體聚合速率并通過米式酶反應方程計算纖維蛋白原含量。由于蘄蛇酶不受肝素和較少受fdp的干擾，結果優(yōu)于前兩法。（三）纖維蛋白原

13、測定（三）纖維蛋白原測定（fbgfbg） 2、物理學方法：又分鹽析法、熱變性法和電泳法，但都比較陳舊，特異性差，耗時，已不多采用。3、免疫學方法：準確特異，但耗時不適用急診，同時不能測定實際上的可凝固蛋白。（三）纖維蛋白原測定（三）纖維蛋白原測定（fbgfbg） 4、目前對纖維蛋白原測定還沒有一種準確適用的方法。因此特別要加強質量控制，如：正常、高含量異常、低含量異常質控樣本應經常測定。5、凝血酶活性是否穩(wěn)定是準確測定纖維蛋白原的關鍵，要避免反復凍融及室溫放置過長，合理分裝標準凝血酶可保證測定的準確性和試劑合理應用。（四）凝血因子測定（四）凝血因子測定1、 去因子血漿：凝血因子含量低于 1。2、 標準品及標準曲線：商賣標準物，標準曲線只適用于同一批號實驗試劑如標漿、去因子血漿、加入試劑等。3、 質控血漿：正常、異常、明顯異常血漿，參人每次實驗。(