肺炎病原學(xué)診斷

1、 軍團菌屬、結(jié)核桿菌等n病毒感染為25 % 35%，細菌感染為2154 % ,非典型病原如支原體、衣原體感染為7 % ,兩種以上病原混合11%。不同年齡組兒童的常見微生物病原年齡組病原體主要臨床表現(xiàn)出生至20 日b 族鏈球菌 早發(fā)型敗血癥的肺部表現(xiàn)。g- 腸道細菌 常為院內(nèi)感染,經(jīng)常在生后1 周才發(fā)現(xiàn)。巨細胞病毒 全身巨細胞病毒感染的肺部表現(xiàn),伴先天性感染的其他體征存在。3 周至3 月 沙眼衣原體 由母體生殖道感染,出現(xiàn)發(fā)熱及進展性、亞急性間質(zhì)性肺炎。rsv 發(fā)病的高峰在27 月齡,常以喘息為特點,在各季或早春多見。副流感病毒3 同rsv 感染非常相似,在嬰兒晚期影響很小,在冬季不流行。肺炎鏈

2、球菌 最常見的細菌性肺炎病原。嬰幼兒年齡組 百日咳桿菌 主要引起支氣管炎,但在嚴重病例也引起肺炎。不同年齡組兒童的常見微生物病原年齡組病原體主要臨床表現(xiàn)4 月至4歲rsv、腺病毒、副流感流感病毒、鼻病毒是引起年幼兒肺炎的最常見病因。 肺炎鏈球菌 最常引起大葉性肺炎,但也可引起其他形式的肺炎。流感嗜血桿菌其他血清型和不定型株在發(fā)展中國家可引起肺炎肺炎支原體 在這一年齡組中的年長兒中主要引起肺炎結(jié)核分枝桿菌 在此病原感染高度流行地區(qū)是肺炎的重要病因。不同年齡組兒童的常見微生物病原年齡組病原體主要臨床表現(xiàn)5 至15 歲 肺炎支原體 這一年齡組兒童肺炎的主要病因肺炎衣原體 可能是這一年齡組年長兒童肺炎

3、的一個重要病因肺炎鏈球菌 大葉性肺炎的最主要病原,但可能也引起其他形式肺炎。結(jié)核分枝桿菌 在此病原感染的高發(fā)地區(qū)是肺炎的常見病因,并可能在青春期和妊娠期病情惡化 兒童cap 病原學(xué)診斷方法n病原菌分離培養(yǎng)n免疫學(xué)方法檢測病原的特異性抗原抗體n分子生物學(xué)診斷方法病原培養(yǎng)分離n標本種類血液胸水支氣管肺泡灌洗痰液，咽、鼻分泌物血液培養(yǎng)血液培養(yǎng)n肺炎伴發(fā)菌血癥機會510，重癥和免疫抑制患者則較高。n血標本采集方便、安全，且污染機會少、特異性高，它們在病原學(xué)診斷上具有特殊意義。n重癥特別是免疫抑制宿主肺炎，應(yīng)盡早、多次采血作細菌和真菌培養(yǎng)。 血液培養(yǎng)n血培養(yǎng)標本要求采集必須在使用抗菌藥物之前采用全自動血

4、培養(yǎng)儀配備的兒童專用血培養(yǎng)瓶每次2瓶，在不同部位采血采血量，兒童3-5ml，嬰幼兒1-2ml。采集后的血培養(yǎng)瓶應(yīng)立即送往實驗室blood culture positivity rates91.699.399.6868890929496981001st2nd3rdculture setsblood cultures positive (% )weinstein et al., 1983采血量與陽性率的關(guān)系采血量與陽性率的關(guān)系胸水胸水 n對大多數(shù)伴有胸腔積液的肺炎，無論確診與否，應(yīng)該行胸腔穿刺術(shù)采集標本。胸腔積液或膿胸均應(yīng)做厭氧培養(yǎng)。n胸水是無污染標本，不論被檢測出的微生物數(shù)量多少，都被認為是病原

5、體。n細胞計數(shù)和ph測定，腺苷脫氨酶（ada）測定對鑒別結(jié)核胸膜炎具有較好價值。n胸水的抗原檢測用于疾病診斷，如流感嗜血桿菌b型、肺炎鏈球菌、軍團菌或新型隱球菌。 痰標本n痰培養(yǎng)結(jié)果應(yīng)結(jié)合臨床表現(xiàn)、直接鏡檢、細胞學(xué)篩選、定量或半定量培養(yǎng)以及所發(fā)現(xiàn)的微生物的致病力等加以解釋。n可用于普通細菌、分枝桿菌、真菌的檢測，但不適于檢測厭氧菌。n在無菌條件下，用負壓吸引法吸取患兒會咽部以下的下呼吸道的分泌物，置滅菌三通管內(nèi)。痰標本n痰涂片鏡檢每低倍鏡視野25個中性粒細胞。n痰標本也可以用直接免疫熒光法快速檢測出下呼吸道的病毒感染。支氣管肺泡灌洗液n對于不能咳出或誘導(dǎo)出足夠的痰液患者，支氣管肺泡灌洗液可作為

6、獲取標本進行病原菌培養(yǎng)的一種方法。n支氣管肺泡灌洗液在檢測需氧菌、真菌、軍團菌和分枝桿菌等感染時可提高陽性檢出率。有研究表明特異性高達89100%。 n支氣管肺泡灌洗液經(jīng)低速在玻片上制成細胞標本涂片，可以用直接免疫熒光法快速檢測出下呼吸道的病毒感染的8種病毒。n鱗狀上皮細胞1中性粒細胞80為合格標本。標本采集和送檢n痰和支氣管肺泡灌洗液必須在使用抗菌藥物之前或停藥停藥1天后留取標本。天后留取標本。標本采集后1h內(nèi)必須立即進行實驗室處理。室溫下延擱2h會降低肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌的分離率，銅綠假單胞菌等革蘭陰性桿菌則過度生長。我院呼吸道分離的主要細菌（2008-2009）n肺炎鏈球菌8

7、69株（14 % ）n金黃色葡萄球菌692株（11%）n流感嗜血桿菌662株（10%）n肺炎支原體878株（16.3%）細菌培養(yǎng)菌落形態(tài)n肺炎鏈球菌 、金黃色葡萄球菌 細菌培養(yǎng)菌落形態(tài)mp培養(yǎng)mp培養(yǎng)mfa檢測呼吸道病毒mfa法檢測呼吸道病毒病原微生物的抗體檢測 n血清學(xué)檢查通常用于檢測非典型病原體如肺炎支原體（mp）、肺炎衣原體（cp）、軍團菌。n常用方法有間接免疫熒光試驗（ifa）、酶聯(lián)免疫吸附試驗（elisa）、放射免疫法（ria）、顆粒凝集試驗（pa）等。 mp血清學(xué)檢查nelisa法檢測mp-igm、 mp-igg定性或定量n pa法檢測mp-igm確診mp急性感染則應(yīng)強調(diào)雙份血清(

8、間隔2周)恢復(fù)期抗體滴度上升4倍或下降至原來的1/4或抗體滴度持續(xù)1:160。 cp血清學(xué)檢查n微量免疫熒光法(mif)、酶聯(lián)免疫吸附實驗(elisa)n抗體檢測3種：igm,igg和igan初次感染(原發(fā)感染)時，igm于發(fā)病后3周出現(xiàn)，igg于發(fā)病后6一8周出現(xiàn)，而iga反應(yīng)較弱或不出現(xiàn)。n再次感染(重復(fù)感染)時，igg常在1一2周內(nèi)出現(xiàn)，且效價可以很高，但往往沒有igm出現(xiàn)或其效價很低。軍團菌血清抗體檢測n尿軍團菌抗原檢測：酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測病人尿軍團菌抗原檢測：酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測病人痰或尿液的嗜肺軍團菌抗原。痰或尿液的嗜肺軍團菌抗原。n血清學(xué)檢查血清學(xué)檢查: 間接免疫熒光法或酶聯(lián)免

9、疫吸附試驗間接免疫熒光法或酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測特異性檢測特異性igm抗體，如效價抗體，如效價1：128或雙份血清或雙份血清效價呈效價呈4倍以上升高可做出確定診斷。倍以上升高可做出確定診斷。軍團菌檢測軍團菌檢測分類分類檢材檢材方法方法注意事項注意事項細菌學(xué)基因?qū)W (pcr)血清學(xué)尿抗原檢測尿抗原檢測痰培養(yǎng)分泌物支氣管肺泡灌洗液陽性率低下陽性率低下同上leg基因mip 基因軍團菌特異性嗜肺軍團菌特異性血清微量凝集ifa, dfa雙份血清效價呈4倍增長單份血清效價 256尿液immunochlomatographyelisaria嗜肺軍團菌嗜肺軍團菌1型特異性型特異性發(fā)病60天內(nèi)，但免疫缺陷病人可延長ifa檢測呼吸道病原抗體分子生物學(xué)技術(shù)n優(yōu)點直接從臨床標本中快速、準確地檢測出包括苛養(yǎng)菌在內(nèi)的細菌.檢測耐藥基因?qū)δ退幘M行流行病學(xué)研究pcr方法n方法隨機擴增dna多態(tài)性分析限制性片段長度多態(tài)性分析pcr多重pcr pfgemp分子生物學(xué)檢測npcr檢測mpp1粘附蛋白：根據(jù)肺炎支原體p1粘附蛋白設(shè)計pcr引物：p1: 5-gccaccctcgggggcagtcag-3p2: 5-gagtcgggattccccgcggagg-3n擴增產(chǎn)物209bp雙重pcr簡便、快速檢測軍團菌n根據(jù)軍團菌16srrna基因和