USP29-61微生物限度檢查中文

1、usp29-61微生物限度檢查 中文usp29-<61>微生物限度檢杳<61>微生物限度檢杳本章所提供的檢測(cè)程序用于測(cè)定包括原料藥及制劑在內(nèi)的各種藥品中需氧菌數(shù)量以及不 含有指定的微生物。如果己有充分的證據(jù)證明某種自動(dòng)化的方法對(duì)以給出與本章所提供 的方法等效的或更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，町以用該方法替代本章所提供的方法。在實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備以及 實(shí)施的過(guò)程中，應(yīng)遵守?zé)o菌操作。除另有規(guī)定外，木檢杳法屮“孵育”是指將容器置于 溫度控制在30-35t的空氣中24-48小時(shí)。術(shù)語(yǔ)“生長(zhǎng)”在此處是專(zhuān)用于表示存活的微生 物的增殖。預(yù)試驗(yàn)（驗(yàn)證試驗(yàn)）應(yīng)有充分的證據(jù)證明在實(shí)驗(yàn)條件下檢品本身對(duì)可能存在微生物

2、的增殖無(wú)抑制作川，這在 很人程度上決定了下述所規(guī)定的檢查方法的結(jié)果有效性。因此，應(yīng)進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，測(cè)定金黃 色衙萄球菌、人腸埃希菌、銅綠假單胞菌以及沙門(mén)氏菌分別接種到稀釋的檢品屮共同培養(yǎng) 后的存活情況，以使檢查標(biāo)準(zhǔn)化并作為隨后試驗(yàn)的具體要求。方法如下：接種lml金黃色 葡萄球菌、人腸埃希菌、銅綠假單胞菌以及沙門(mén)氏菌的24小時(shí)肉湯培養(yǎng)物（稀釋度人于 等于10-3）至最低稀釋級(jí)樣品供試液中（樣品用pll 7. 2磷酸鹽緩沖液，大豆-酪蛋白水解 物瓊脂培養(yǎng)基或乳糖液體培養(yǎng)基稀釋?zhuān)粑⑸镌谙鄳?yīng)的培養(yǎng)基中不能工長(zhǎng)，則該部分 試驗(yàn)無(wú)效，有必要按下述步驟對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行調(diào)整：通過(guò)（1）,增加稀釋劑的體積，供試品

3、量保持不變，或（2）在稀釋劑中加入足夠量的滅活劑；或（3）適當(dāng)?shù)貙ⅲ?）和（2）結(jié) 合使接種物町以生長(zhǎng)。可在培養(yǎng)基中加入0. 5%的大豆卵磷脂和4. 0%的聚山梨酸酯-20以中和供試品中的所存在 的抑菌成分?；蛘哂美业鞍姿馕?大豆卵磷脂-聚山梨酸酯-20-培養(yǎng)基按前述方法重復(fù)試 驗(yàn)以確認(rèn)對(duì)供試品屮的保護(hù)劑或其他抗菌劑的屮和作用。若產(chǎn)品屮含有抑菌成分，而該產(chǎn) 品又是對(duì)溶的，對(duì)采用無(wú)菌檢查項(xiàng)下產(chǎn)品的無(wú)菌檢査法中的薄膜過(guò)濾法。如果在加入滅活劑或大大增加稀釋劑的體積后仍不能使上述培養(yǎng)物恢復(fù)存活，而且該產(chǎn) 品不適合采川薄膜過(guò)濾法，可以作如下推斷：所接種微生物的分離培養(yǎng)失敗是由于該產(chǎn)品 的抑菌活性。此信

4、息表明該產(chǎn)品未被指定（上述給定）的微生物所污染（此信息表明該產(chǎn) 品大概不會(huì)被上述給定的微久物所污染）。應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行監(jiān)測(cè)以建立該產(chǎn)品的抑菌譜和殺菌 活性范圍。緩沖液和培養(yǎng)基培養(yǎng)基既可以按以下處方配制，也可以使用生產(chǎn)者或銷(xiāo)售商推薦的，與該配方和類(lèi)似 usp29-<61>微生物限度檢查14-2的脫水培養(yǎng)基。按以下程序配制培養(yǎng)基：將對(duì)溶性同體溶解在水中，必要時(shí)對(duì)加熱促使其完金溶解，ffl hc1或naoii溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的ph使其在使用時(shí)達(dá)到規(guī)定值。在25 土 2°c吋測(cè)定ph值。如果配方屮有瓊脂，則瓊脂的含水量不應(yīng)超過(guò)15%,配方屮的水均應(yīng)為純水。pii 7. 2磷酸鹽緩沖液儲(chǔ)備

5、液一在1000ml容量瓶中將磷酸二氫鉀kli2p0434g （monobasic potassium phosphate）溶于約 500ml 水中,naoh ts （約 175ml）調(diào)節(jié) ph 至 7.2±0. l0 加水至刻 度，混勻。分裝，滅菌。冷藏保存?zhèn)溆?。培養(yǎng)基除非另有規(guī)定，培養(yǎng)基均應(yīng)采用高壓蒸汽滅菌方式（見(jiàn)滅菌項(xiàng)1211下，蒸汽滅菌）， 滅菌時(shí)間取決于待滅菌的培養(yǎng)基的體積。pancreatic digest of casein酪蛋白胰酶消化物（胰酪腺）20 gsoy lecithin大豆卵磷脂5 g1polysorbate 20聚山梨醇酯2040 mlwater960 ml

6、將酪蛋門(mén)丿凍、人豆卵磷脂溶解在960ml水屮，在溫度為48-50° c水浴屮加熱約30分鐘 使其完全溶解。加40ml聚山梨醇酯20混合，按所需量分裝。ii.大豆-酪蛋門(mén)水解物瓊脂培養(yǎng)基pancreatic digest of casein酪蛋白胰酚水解物（胰酩腺）papaic digest of soybean meal大豆木瓜酶水解物sodium chloridenaciagar瓊脂water水滅菌后 ph7. 3 ± 0. 20tti.人豆-酪蛋白水解物培養(yǎng)基按無(wú)菌檢杳項(xiàng)71下人豆-酪蛋門(mén)水解物培養(yǎng)基的配制方法進(jìn)行。iv.甘露醇-鹽瓊脂培養(yǎng)基廣pancreatic di

7、gest of casein酪蛋白胰酶消化物（胰酪,11peptic digest of animal tissue動(dòng)物組織冒荊水解物beef extract牛肉浸取物d-mannitold-甘露醇sodium chloridenaci1agar瓊脂phenol reel酚紅water水pancreatic digest of casein酪蛋白胰酶消化物（胰酪腺）10.0 g1beef extract牛肉浸取物5.0 g1yeast extract酵母浸取物l.og1lithium chloride氯化鋰5.0 qagar瓊脂20.0 gglycine甘氨酸12.0 grsodium pyr

8、uvate丙酮酸鈉10.0 gwater水950 ml將上述成分混合后，加熱并不停不斷地?cái)噭?dòng)，煮沸1分鐘使之完全溶解。滅菌后pii7.4 土 0.2.v. baird - parker瓊脂培養(yǎng)基pancreatic digest of casein酪蛋白胰酶水解物（胰酪豚）10.0 gyeast extract酵母浸取物5.0 g1mannitol甘露醇10.0 g1dibasic potassium phosphate 礴酸氫二鉀5.0 glithium chloride氯化鋰5.0 glglycine甘氨酸10.0 g邊加熱邊攪拌,煮沸一分鐘。滅菌，冷卻至45c- 50c,加入10ml滅菌

9、的1%亞硏酸鉀溶 液、50ml蛋黃乳化液，輕輕混介均勻，傾注平皿。（卵黃乳化液制備：將蛋殼表而消 毒，無(wú)菌條件下打開(kāi)蛋殼，將完整的蛋黃分離至無(wú)菌量筒中。加入無(wú)菌鹽水ts,使蛋黃 與鹽水比為3 :7o轉(zhuǎn)移至一無(wú)菌攪拌杯中高速攪拌5秒鐘。）滅菌后pii6.8 ± 0. 2.vi. vogel - johnson 瓊脂培養(yǎng)基:agar瓊脂phenol reel酚紅water水將固溶體（固體溶液）煮沸1分鐘，滅菌，冷卻至45c o 滅菌后 pii7. 2 ± 0.2o-50c,加入滅菌的1%亞蹄酸鉀溶vii. cetrimide瓊脂培養(yǎng)基lpancreatic digest of

10、gelatin明膠胰卿水解物20.0 gimagnesium chloride氯化鎂1.4gpotassium suifate硫酸鉀10.0 g廠agar瓊脂13.6 g1cetyl trfmethylammonium bromide fcetrimide) 蟆化十六烷基三甲胺0.3 ©1glycerin甘油（丙三醇）10.0 mlwater水1000 mllpancreatic digest of casein酪蛋白胰酶消化物10.0 gpeptic digest of animal tissue 動(dòng)物好 1 紗胸消化物10.0 g1anhydrous dibasic potass

11、ium phosphate無(wú)水磷酸氫w(k2hpo4)1.5glmagnesium sulfate (mgso4)硫酸鎂1.5g1glycerin甘油10.0 ml1agar瓊脂15.0 g1water水1000 ml將所有的固態(tài)成分溶于水后，加入甘油，邊攪動(dòng)邊加熱，煮沸1分鐘使z完全溶解。 滅菌后 pii7. 2 ± 0. 2.將固態(tài)成分溶于水后，加入甘油，邊攪動(dòng)邊加熱，煮沸1分鐘使之完全溶解。滅菌后ph72 ± 0. 2oix.川于檢測(cè)綠膿菌素的假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基pancreatic digest of gelatin 明膠咦酶消化物2canhydrous magnes

12、ium chloride無(wú)水氯化鎂(mgci2)1.anhydrous potassium sulfate無(wú)水硫酸鉀(k2so4)1cagar瓊脂15glycerin甘抽1cwater水1cbeef extract牛肉浸提物3.0 gpancreatic digest ofgelatin明膠胰酶消化物5.0 glactose乳糖5.0 gwater水1000 ml將固態(tài)成分溶于水后，加入廿油，邊攪動(dòng)邊加熱，煮沸1分鐘使z完全溶解。滅菌后 ph7.2 ± 0. 2.x.乳糖培養(yǎng)基pancreatic digest of casein酪蛋白胰酶消化物5.0 glactose乳糖4.0 g

13、sodium phosphate磷酸鈉10.0 gsodium acid selenite亞硒酸鈉40 gl-cystinel-胱氨酸10.0 mgwater水1000 mlxi.業(yè)硒酸鹽-胱氨酸培養(yǎng)基1pancreatic digest of casein酪蛋白胰酶水解物25 gpeptic digest of animal tissue 動(dòng)i物組織tfm水解物25 gbile salts膽鹽l.og1calcium carbonate碳酸鈣10.0 g最終 ph: 7. 0 ± 0.2混合，加熱使z溶解用流動(dòng)蒸汽加熱15分鐘，不要高壓滅菌。xii.連四硫酸鹽培養(yǎng)基sodium t

14、hiosulfate硫代硫酸鈉water水將固溶體（固體溶液）加熱金沸騰。用時(shí)加山5g碘化鉀和6g碘溶丁 20ml水中配制而成 的溶液，之后加入10ml千分之一的亮綠溶液，混合，加入亮綠溶液后不要加熱。廠yeast extract酵母浸提物3.0 gpeptic digest of animal tissue動(dòng)物組織胃酶消化物5.0 gpancreatic digest of casein酪蛋白胰酶消化物50 glactose乳糖10.0 g1sodium chloride氯化鈉5 0 01sucrose蔗糖10.0 g1phenol red酚紅80 mgragar瓊脂20.0 gibrill

15、iant green亮綠12.5 mgwater水.1000 mlxylose木糖3.5 gl-lysinel-賴(lài)氨酸5.0 glactose乳糖7.5 gsucrose蔗糖7.5 gsodium chloride氯化鈉5.0 gyeast extract酵母浸提物3,0 gphenol red酚紅80 mgagar瓊脂13.5 gsodium desoxy cholate去氧膽酸鈉2.5 gsodium thiosulfate硫代硫酸鈉6.8 g將固溶體（固體溶液）煮沸1分鐘，使用前高壓滅菌，將培養(yǎng)基融化，倒入平皿中，令其 冷卻。滅菌后 ph 6.9 ± 0. 2.xiv.木糖-賴(lài)

16、氨酸-去氧膽酸鹽瓊脂培養(yǎng)基ferric ammonium citrate 枸h酸決胺 800 rwater水1000最終 ph: 7.4 ± 0.2邊攪拌便加熱固態(tài)物與水的混合物至沸點(diǎn)，勿過(guò)度加熱或高壓滅菌。立即轉(zhuǎn)移至約50°c水浴中，冷卻后立即倒入平川l中。beef extract 牛肉浸提物5.0 gpancreatic digest of casein 酪蛋i胰齣消化物5.0 gpeptic digest of animal tissue動(dòng)物組織胃酶消化物§.0 gdextrose右旋鈾萄糖5.0 gsodium phosphate 磷酸鈉4.0 gferr

17、ous sulfate硫酸亞鐵300 mgbismuth sulfite indicator 亞硫酸鋤指示劑8.0 gagar瓊脂20.0 gbrilliant green亮綠25 mgwater水1000 ml1pancreatic digest of casein酪蛋白胰酶水解物（.陳）10.0 glpancreatic digest of animal tissue 動(dòng)物組織胰悔水解物10.0 glactose 乳糖10.0 g1sucrose 蔗糖10.0 gdextrose：葡萄糖l.ogferrous ammonium sulfate 硫酸業(yè)鐵皴200 mglsodium chlo

18、ride 氮化鈉5.0 gsodium thiosulfate 硫代硫酸鈉200 mgagar瓊脂13.0 g最終 ph: 7.6 ± 0. 2.邊攪拌便加熱固態(tài)物與水的混合物至沸點(diǎn)，勿過(guò)度加熱或高壓滅菌。立即轉(zhuǎn)移至約 50°c水浴中，冷卻后立即倒入平皿中。xvi.三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基phenol red 酚紅water 水滅菌后 ph7.3 ± 0. 2.xvii.麥康凱瓊脂培養(yǎng)基pancreatic digest of gelatin 明膠胰酶水解物17.0 gpancreatic digest of casein幅蛋門(mén)胰酶水解物1.5 gpeptic diges

19、t of animal tissue動(dòng)物組織胃酶水解物1.5 glactose 乳糖10,0 gbile salts mixture 膽鹽混合物1.5 gsodium chloride 氯化鈉agar瓊脂13.5 gneutral red 中性紅30 mgcrystal violet 結(jié)晶紫1.0 mgwater 水1000 ml1pancreatic digest of gebti門(mén)明膠，胰酶水解物10.0 gdibasic potassium phosphate 憐酸魁】鉀2.0 g1""agar瓊脂15.0 glactose 乳糖|0.0 geosin y伊紅（曙紅）

20、400 mgmethylene blue亞甲蘭（美蘭65 mg嚴(yán)water 水looo mldextrose 糖mixture of equal parts of peptic digest of animal tissue and pancre<將固態(tài)物與水混合煮沸1分鐘令其充分溶解，滅菌后ph7. 1 ± 0. 2.xviii. levine eosin亞甲蘭瓊脂培養(yǎng)基(伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基)將明膠胰酶消化物、磷酸氫二鉀及瓊脂溶解在溫水中，冷卻。川時(shí)融化，按下述比例加 入其余組分并混介：每100ml瓊脂液中加入5ml 20%乳糖溶液加1 2%伊紅溶液以及加1 0. 3% (1

21、/300)的亞甲蘭溶液。最終配好的培養(yǎng)基可能不是澄清透明的。滅菌后 ph7. 1 ± 0. 2.xix. sabouraud葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基of casein動(dòng)物組織胃酶水解物與酪蛋白胰酶水解物的等呈混合物agar瓊脂water 水cook 300 g of peeled and diced potatoes in 500 ml of water pre through cheesecloth, add water prepared by distillation to mak following:將300克去皮的馬鈴萼片加入500ml蒸謂水蒸煮,用cheesecloth （紗布 然

22、后加入下述成分agar瓊脂glucose衙萄糖xx.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基傾倒平i1il之前，在熔融后冷卻至45c的培養(yǎng)基中加入無(wú)菌10%酒石酸溶液調(diào)節(jié)ph3.5 ± 0. io勿將ph 3. 5的培養(yǎng)棊再次加熱。檢驗(yàn)量各專(zhuān)項(xiàng)試驗(yàn)一次試驗(yàn)所用的供試品量為10ml或10g.供試液的制備程序應(yīng)根據(jù)試樣的物理性狀選擇適宜的方法制備供試液，該制備方法還應(yīng)不影響原有的微 生物的種類(lèi)和數(shù)量。供試液町以是來(lái)源于供試品的全部或部分的溶液或混懸液，只要適 宜于將要進(jìn)行的檢測(cè)程序。對(duì)那些有著明顯的溶解，但不能完全溶解的固態(tài)供試品，可將其適當(dāng)?shù)胤鬯槌杉?xì)粉， 并將其懸浮在指定的賦形劑中，按需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)、金

23、黃色術(shù)萄球菌、銅綠假單 胞菌檢查以及沙門(mén)菌屬、大腸埃希菌檢查項(xiàng)卜的規(guī)定進(jìn)行。由真溶液紐成的液體供試甜，或出水或濃度小于3096乙醇作為賦形劑配成的混懸液供試 品以及那些幾乎完全溶解于90ml ph7. 2的磷酸鹽緩沖液中或指定的培養(yǎng)基中的固態(tài)供試 品，按需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌檢查以及沙門(mén)菌屬、 大腸埃希菌檢查項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行。對(duì)于與水不混溶的液體、軟膏（油膏）、乳劑、蠟制品，其混懸液制備可按下述方法進(jìn) 行：加入最小量的合適的無(wú)菌乳化劑（例如：一種聚山梨醇酯），機(jī)械攪拌，必要時(shí)溫?zé)?至溫度不超過(guò)45°c。按需氧菌總數(shù)計(jì)數(shù)、金黃色匍萄球菌、銅綠假單胞菌檢查以 及沙門(mén)菌

24、屬、大腸埃希菌檢查項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行。usp29-<61>微牛:物限度檢查14-10對(duì)丁氣霧劑供試品，將容器置丁乙醇一干冰混合物中冷卻約1小時(shí)，鉆開(kāi)容器，放置室 溫，使拋射劑釋出，如有可能，可加溫排出拋射劑。按檢測(cè)要求的量，依前述兩個(gè)程序z 一的要求將一定量的供試品以適當(dāng)?shù)姆绞睫D(zhuǎn)移。如果不能從10個(gè)氣霧劑形式的容器中獲 得10g或10ml供試品，則可將冷卻的容器中的內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基中，令拋射劑釋 出，用殘留物進(jìn)行檢測(cè)。若檢測(cè)結(jié)果不確定或町疑，可從20個(gè)或更多的容器中取樣重新 檢查。總需氧菌計(jì)數(shù)平皿法用于完全溶解的供試液或允許采川平htl法的半透明供試液，其他供試液采川多管 法進(jìn)行

25、檢查。無(wú)論用那種方法，都必須首先準(zhǔn)確稱(chēng)量或量取供試品10 g （當(dāng)供試品為固態(tài) 時(shí)）或loinl （當(dāng)供試品為液態(tài)時(shí)），將其溶解或懸浮在ph 7.2磷酸鹽緩沖液，大豆一酪 蛋白水解物液體培養(yǎng)基，或酪蛋白水解物一大豆卵磷脂一聚山梨醇酯20液體培養(yǎng)基中， 使成loomlo如果稀釋級(jí)為1:10時(shí)供試液過(guò)丁-粘稠，不能用移液管移取，可將供試液稀釋 （1： 50,或1： 100）直至可以移取。在進(jìn)行總需氧菌檢查z前，應(yīng)按預(yù)試驗(yàn)preparatory testing項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行驗(yàn)證，確認(rèn)不存在抑菌活性。應(yīng)在適宜稀釋級(jí)的 供試液制備后1小時(shí)內(nèi)將其加入到培養(yǎng)基屮用于接種培養(yǎng)。平皿法必要時(shí)，將供試液繼續(xù)稀釋?zhuān)?/p>

26、使加入51供試液培養(yǎng)后的菌落數(shù)在30-300個(gè)。分別向 兩個(gè)無(wú)菌平皿屮加入lml終稀釋級(jí)供試液，每皿注入15-20ml融化后冷卻至45°c的大豆- 酪蛋白水解物瓊脂培養(yǎng)基，蓋上平皿，輕輕敲打或旋轉(zhuǎn)使樣品與瓊脂培養(yǎng)基混合，室溫 凝固。倒置培養(yǎng)48-72小時(shí)后，檢杳菌的生長(zhǎng)，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。取兩個(gè)平111l每克或每毫升 供試液的需氧菌數(shù)的平均值報(bào)告菌數(shù)。如果在稀釋級(jí)為1： 10的樣品平皿中未發(fā)現(xiàn)微生 物菌落，則將該結(jié)果表示為每克或每毫升樣品中菌數(shù)小于10個(gè)。多管培養(yǎng)法取14支規(guī)格類(lèi)似的試管，分別加入9ml大豆-酪蛋白水解物液體培養(yǎng)基。將其中12支 分成四組，每組3支。除對(duì)照組3支外，在第一組

27、（“100”）三支管中以及第四支管（管a）中加入51供試品溶液或混懸液，混勻。取51管a中的內(nèi)容物移入至另一個(gè)分組 后剩余的管中（管b）,混勻。管a和管b中分別含有供試液loomg （或100ul）和 10mg（或10ul）. o向第二組（“10”）的3支試管中分別加入管a的內(nèi)容物lml,向第 三組（“”）的3支試管中分別加入管b的內(nèi)容物lml,廢棄管a、管b中剩余的內(nèi)容 物。將各試管封嚴(yán)，培養(yǎng)。檢查各管中微生物的生長(zhǎng)情況，對(duì)照管應(yīng)澄清，含供試液的 樣品管參照表1整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，叮以給岀每克或每毫升供試液屮最叮能的微生物的數(shù)量。usp29-<61>微生物限度檢査14-11表1.多管培

28、養(yǎng)法最可能的微生物總數(shù)observed combinations of numbers oftubes showing growth in each set 每組中長(zhǎng)菌管總數(shù)most probable nun microorganisms per g 每克或每毫升供試液中最 物的數(shù)量no. of mg (or ml) of specimen per tube 每管中的供試品量100(100 ml)10(10 pl):1(i ml)333>11003321100331500330200323290322210321150320：9031316031212031170310403039530

29、2 |6011 -金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌檢杳在供試液中加入大豆-酪蛋白水解物培養(yǎng)基使成100ml ,混勻后培養(yǎng)。檢查培養(yǎng)基中菌 的生長(zhǎng)情況。如果有菌生長(zhǎng)，用接種環(huán)將培養(yǎng)物劃線接種于vogel-johnson瓊脂培養(yǎng)基 表而（或baird - parker瓊脂培養(yǎng)基，或廿露醇-鹽瓊脂培養(yǎng)基）以及cetrimide（化十 六烷基三甲錢(qián)）瓊脂培養(yǎng)基表而，倒置培養(yǎng)。如果每個(gè)平皿中均未發(fā)現(xiàn)具有表2、3所列 特性的菌落，則判該供試品未檢出金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌。表2、金黃色葡萄球菌在選擇培養(yǎng)基屮的形態(tài)特征usp29-<61>微生物限度檢杳菌落形態(tài)特伉vogel-johnson瓊脂培

30、養(yǎng)棊 黑色、外由有黃色環(huán)什踞醇-鹽瓊脂培養(yǎng)基黃色.有黃色環(huán)baird-parker瓊脂培養(yǎng)基黑色,有光澤，外圍有2-5mm透明壞表3、銅綠假單胞菌在選擇培養(yǎng)基小以及檢定瓊脂培養(yǎng)基屮的形態(tài)特征選擇性培養(yǎng)基菌落形態(tài)特征紫外燈下熒光氧化酶訥centrimicle 瓊脂 培養(yǎng)基通常為淺綠色淺綠色陽(yáng)性用于熒光檢測(cè)的假 單胞菌瓊脂培養(yǎng)慕通常為無(wú)色至淡黃色淡黃色陽(yáng)性用f綠膿菌素檢測(cè)的瓊脂培養(yǎng)基通常為淺綠色藍(lán)色陽(yáng)性血漿凝固酶試驗(yàn)（用于金黃色荷萄球菌）:用接種環(huán)從vogel - johnson瓊酯培養(yǎng)基 （or baird - parker瓊酯培養(yǎng)基，or mannitol - salt瓊酯培養(yǎng)基）表面挑取可疑

31、菌落轉(zhuǎn)移 至含0.5ml哺乳動(dòng)物血漿的試管中（最好是兔血漿或馬血漿，有添加劑保護(hù)劑或無(wú)添加 劑保護(hù)劑的血漿均可），37c水浴，3小吋后開(kāi)始觀察，隨后以適當(dāng)?shù)拈g隔觀察直至24 小時(shí)。陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照與未知樣品同時(shí)檢測(cè)。如果沒(méi)有觀察到任何凝集，判該供試品 未檢出金黃色葡萄球菌。氧化酶與色素試驗(yàn)（用于銅綠假單-胞菌）：用接種環(huán)從cetrimide（化十六烷基三甲餒） 瓊脂培養(yǎng)基表血挑取可疑菌落分別接種至含用于熒光檢測(cè)的假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基和用丁綠 膿菌素檢測(cè)的假單胞菌瓊脂培養(yǎng)基的平皿上，如果要轉(zhuǎn)移的菌落數(shù)量較多，可以將每個(gè)平 皿分成四個(gè)扇形部分，每部分接種-個(gè)單獨(dú)的菌落。蓋上平皿，于35 ± 2°c倒置培養(yǎng)至 少3天。在紫外燈下檢查劃線接種表而，并檢查菌落是否具有表3所列特征。通過(guò)氧化酶試驗(yàn)確證在銅綠假單胞菌培養(yǎng)基上生氏的任何可疑的菌落。在冇菌落工反的 平血上放置預(yù)先川二鹽酸n,n-二甲基對(duì)苯胺浸漬的濾紙條或関片，也町將菌落轉(zhuǎn)移到前 述濾紙條或圓片上。若顏色沒(méi)有從粉色變?yōu)樽霞t色，則判該供試品未檢出銅綠假單胞菌。 如有必要，可采用其它適宜的培養(yǎng)和生化試驗(yàn)確認(rèn)是否為銅綠假單胞菌。usp29-<61>微牛:物限度檢查14-13沙門(mén)菌屬及人腸埃希菌檢查取供試液加入到一適當(dāng)?shù)娜萜髦?，再加入乳糖液體培