蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反應(yīng)ppt課件

1、一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康? 1、了解蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反響原理、了解蛋白質(zhì)和氨基酸的呈色反響原理2 2、學(xué)習(xí)幾種常用的鑒定蛋白質(zhì)和氨基酸的方、學(xué)習(xí)幾種常用的鑒定蛋白質(zhì)和氨基酸的方 法。法。3 3、了解呈色反響在定性和定量分析中的運(yùn)用。、了解呈色反響在定性和定量分析中的運(yùn)用。一雙縮脲反響一雙縮脲反響1、原理、原理 一切蛋白質(zhì)或二肽以上的多肽都有雙縮脲反響，但有雙縮一切蛋白質(zhì)或二肽以上的多肽都有雙縮脲反響，但有雙縮脲反響的物質(zhì)不一定都是蛋白質(zhì)或多肽。脲反響的物質(zhì)不一定都是蛋白質(zhì)或多肽。2、試劑1尿素210%氫氧化鈉溶液31%硫酸銅溶液42%卵清蛋白溶液3、操作1 取少量尿素結(jié)晶，放在枯燥試管中。

2、用微火加熱使尿素熔化，尿素放出氨 。熔化的尿素開場硬化時(shí)，停頓加熱，構(gòu)成雙縮脲。冷后，加10%氫氧化鈉溶液約1ml，振蕩混勻，再加1%硫酸銅溶液1滴，再振蕩。察看出現(xiàn)的粉紅顏色。添加要防止過量硫酸銅，否那么，生成的藍(lán)色氫氧化銅能掩蓋粉紅色。 2向另一試管加卵清蛋白溶液約1ml和10%氫氧化鈉溶液約2ml，搖勻，再加1%硫酸銅溶液2滴，隨加隨搖。察看紫玫瑰色的出現(xiàn)。劑i二茚三酮反響二茚三酮反響 2 2、試劑、試劑1 1蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液 新穎蛋清：水新穎蛋清：水=1:9)100ml=1:9)100ml 2 20.5%0.5%甘氨酸溶液甘氨酸溶液3 30.1%0.1%茚三酮水溶液茚三酮水溶液4

3、40.1%0.1%茚三酮茚三酮- -乙醇溶液乙醇溶液3 3、操作、操作1 1取取2 2支試管分別參與蛋白質(zhì)溶液和甘氨酸溶支試管分別參與蛋白質(zhì)溶液和甘氨酸溶液液1ml1ml，再各加，再各加0.5ml 0.1%0.5ml 0.1%茚三酮水溶液，混勻，茚三酮水溶液，混勻，在沸水浴中加熱在沸水浴中加熱1212分鐘，察看顏色由粉色變紫分鐘，察看顏色由粉色變紫色再變藍(lán)。色再變藍(lán)。2 2在一小塊濾紙上滴一滴在一小塊濾紙上滴一滴0.5%0.5%甘氨酸溶液，甘氨酸溶液，風(fēng)干后，再在原處滴一滴風(fēng)干后，再在原處滴一滴0.1%0.1%茚三酮乙醇溶液，茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干顯色，察看紫紅色斑點(diǎn)的出現(xiàn)。在微火旁烘干

4、顯色，察看紫紅色斑點(diǎn)的出現(xiàn)。劑i劑i三黃色反響三黃色反響1、原理、原理2 2、試劑、試劑1 1雞蛋清溶液雞蛋清溶液2 2頭發(fā)頭發(fā) 3 3指甲指甲 4 40.5%0.5%苯酚溶液苯酚溶液 5 5濃硝酸濃硝酸 6 60.3%0.3%色氨酸溶液色氨酸溶液7 70.3%0.3%酪氨酸溶酪氨酸溶液液8 810%10%氫氧化鈉溶液氫氧化鈉溶液33、操作、操作 向向6 6個(gè)試管中分別按下表參與試劑，察看各管出個(gè)試管中分別按下表參與試劑，察看各管出現(xiàn)的景象，有的試管反響慢可略放置或用微火加現(xiàn)的景象，有的試管反響慢可略放置或用微火加熱。待各管出現(xiàn)黃色后，于室溫下逐滴參與熱。待各管出現(xiàn)黃色后，于室溫下逐滴參與10

5、%10%氫氧化鈉溶液至堿性，察看顏色變化。氫氧化鈉溶液至堿性，察看顏色變化。劑i管管 號(hào)號(hào)1 12 23 34 45 56 6材材 料料滴滴蛋白蛋白質(zhì)質(zhì)溶液溶液4 4指甲指甲 少許少許頭發(fā)頭發(fā) 少許少許0.5%0.5%苯酚苯酚4 40.3%0.3%色氨色氨酸酸4 40.3%0.3%酪氨酪氨酸酸4 4濃硝酸濃硝酸滴滴2 2404040404 44 44 4現(xiàn)現(xiàn) 象象 劑i四乙醛酸反響四乙醛酸反響 1、原理、原理紫紅色紫紅色劑i2 2、試劑：、試劑：(1) (1) 蛋白質(zhì)溶液蛋白質(zhì)溶液 雞蛋清：水雞蛋清：水1 1：2020(2 (2冰醋酸冰醋酸(3) (3) 濃硫酸濃硫酸( (分析純分析純) )

6、3 3、操作、操作 向試管中加數(shù)滴蛋白質(zhì)溶液，再加冰醋酸約向試管中加數(shù)滴蛋白質(zhì)溶液，再加冰醋酸約1ml,1ml,傾斜傾斜試管，謹(jǐn)慎地沿著管壁加濃硫酸試管，謹(jǐn)慎地沿著管壁加濃硫酸(A(AR R) )約約1ml1ml，使，使其重疊，勿使兩者混合。靜置后，察看在兩液界面其重疊，勿使兩者混合。靜置后，察看在兩液界面上出現(xiàn)的紅紫色環(huán)，于水浴中微熱，可協(xié)助顏色構(gòu)上出現(xiàn)的紅紫色環(huán)，于水浴中微熱，可協(xié)助顏色構(gòu)成。成。 用用20%20%白明膠作乙醛酸反響。白明膠分子中無色氨酸，白明膠作乙醛酸反響。白明膠分子中無色氨酸，所以不呈此反響。所以不呈此反響。劑i (五)考馬斯亮藍(lán)反響1、原理考馬斯亮藍(lán)G250具有紅色和藍(lán)色兩種顏色。在酸性溶液中，其以游離存在呈棕紅色；當(dāng)它與蛋白質(zhì)經(jīng)過疏水作用結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色。它染色靈敏度高，比氨基黑高3倍。反響速度快，約在2分鐘左右時(shí)間到達(dá)平衡，在室溫一小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。在0.011.0mg蛋白質(zhì)范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)濃度與A595nm值成正比。所以常用來測定蛋白質(zhì)含量。2、試劑 1蛋白質(zhì)溶液雞蛋清：水=1：20 5 ml 2考馬斯亮藍(lán)染液 300 ml考馬斯亮藍(lán)G250 100mg溶于50 ml 95%乙醇中，加100 ml 85%磷酸混勻，配成原液。臨用前取原液15 ml，加蒸餾水至100 ml，用粗濾紙過濾后，最終濃度