生物選修1基礎(chǔ)知識填空

1、高中生物選修一生物技術(shù)實踐 知識點總結(jié)專題一 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應用課題一 果酒和果醋的制作1、發(fā)酵：通過微生物技術(shù)的培養(yǎng)來生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過程。2、有氧發(fā)酵：醋酸發(fā)酵 谷氨酸發(fā)酵 ·無氧發(fā)酵：酒精發(fā)酵 乳酸發(fā)酵 3、酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌 ·酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要) 分裂生殖 孢子生殖4、在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖。反應式： 5、在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發(fā)酵。 反應式： 6、 左右最適宜酵母菌繁殖 酒精發(fā)酵時一般將溫度控制在 7、在葡萄酒自然發(fā)酵的過程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的 .在發(fā)酵過程中,隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的

2、色素也進入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色.在 呈 性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應這一環(huán)境而受到制約。8、醋酸菌是單細胞細菌(原核生物),代謝類型是 型,生殖方式為二分裂9、當 、 都充足時，醋酸菌將 分解成醋酸；當缺少 時，醋酸菌將 變?yōu)?，再將 變?yōu)榇姿?。反應式?10、控制發(fā)酵條件的作用醋酸菌對 的含量特別敏感，當進行深層發(fā)酵時，即使只是短時間中斷通入氧氣，也會引起醋酸菌死亡。醋酸菌最適生長溫度為 ，控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時間縮短，又減少雜菌污染的機會。有兩條途徑生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物的氧化。11、實驗流程：挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵果酒（醋酸發(fā)酵果

3、醋）12、酒精檢驗：果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用 來檢驗。在酸性條件下， 與酒精反應呈現(xiàn) 色。先在試管中加入發(fā)酵液2L，再滴入物質(zhì)的量濃度為3mol/L的H2SO43滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的 溶液3滴，振蕩試管，觀察顏色13、充氣口是在醋酸發(fā)酵時連接充氣泵進行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時用來排出二氧化碳的；出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身相連接，其目的是防止 。開口向下的目的是有利于 的排出。使用該裝置制酒時，應該關(guān)閉充氣口；制 時，應該充氣口連接氣泵，輸入 。疑難解答（1）你認為應該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？應該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除

4、去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機會。（2）你認為應該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？如：要先沖洗葡萄，再除去枝梗；榨汁機、發(fā)酵裝置要清洗干凈，并進行酒精消毒；每次排氣時只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。（3）制葡萄酒時，為什么要將溫度控制在1825？制葡萄醋時，為什么要將溫度控制在3035？溫度是酵母菌生長和發(fā)酵的重要條件。20左右最適合酵母菌的繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長溫度為3035，因此要將溫度控制在3035。專題二 微生物的培養(yǎng)與應用課題一 微生物的實驗室培養(yǎng)·培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基

5、質(zhì)，是進行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。·培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂（是從紅藻中提取的一種多糖，在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑）后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。·培養(yǎng)基的化學成分包括 、 、 、 、生長因子等。·碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CO2、NaHCO3等無機碳源；糖類、石油、花生粉餅等有機碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。·氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如N2、NH3、NO3-、NH4+（無機氮源）蛋白質(zhì)、氨基

6、酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。·培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng) 時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至 ，培養(yǎng) 是需要將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供 的條件·無菌技術(shù)·獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止 的入侵，要注意以下幾個方面：對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行 。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、 和 等器具進行滅菌。為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在 附近進行。實驗操作時應避免 處理的材料用具與周圍的物品相接觸。無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培

7、養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。·消毒與滅菌的區(qū)別消毒指使用較為溫和的 方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的 微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用 ， （對于一些不耐高溫的液體）還有 （如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、 消毒。滅菌則是指使用強烈的 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有 滅菌、 滅菌、 滅菌。滅菌方法：接種環(huán)、接種針、試管口等使用 滅菌法；玻璃器皿、金屬用具等使用 滅菌法，所用器械是 滅菌箱 ； 培養(yǎng)基、無菌水等使用 滅菌法，所用器械是 滅菌鍋 。表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈 。

8、比較項理化因素的作用強度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能滅菌強烈全部微生物能制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（1）方法步驟： 、稱量、溶化、 、 。（2）倒平板操作的步驟：將滅過菌的培養(yǎng)皿放在 旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約1020mL）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。等待平板冷卻凝固，大約需510min。然后，將平板倒過來放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。·倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50左右時，

9、才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平

10、板培養(yǎng)微生物。純化大腸桿菌（1）微生物接種的方法最常用的是 法和 法。（2） 法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將 的菌種 分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子 ，這就是 。（3） 法是將菌液進行一系列的 ，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。分為系列 操作和 操作兩步。（4）用 法和 法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，以便于 菌種。（5）平板劃線法操作步驟：將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。將試管口通過火焰。將已冷卻

11、的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。將試管通過火焰，并塞上棉塞。左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃 條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)皿。灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將 的劃線與 相連。將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。·平板劃線操作的討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使

12、下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。（6）涂布平板操作的步驟：將涂布器浸在盛有 的燒杯中。取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基

13、表面。將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻810s。用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？提示：應從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。菌種的保存（1）對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。臨時保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當菌落長成后，將試管放入 的冰箱中保藏。以后每36個月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。

14、缺點：這種方法保存的時間 ，菌種容易 。（2）對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在 的冷凍箱中保存。課題二 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)尿素 是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當土壤中的細菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為他們能合成脲酶尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的篩選菌株（1）實驗室中微生物的篩選應用的原理人為提供有利于 生長的條件（包括 、 、 等），同時 其他微生物生長。（2）選擇性培養(yǎng)基在微生物學中，將允許特定種類的

15、微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作 。（3）配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點加入某種物質(zhì)以達到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。統(tǒng)計菌落數(shù)目（1）測定微生物數(shù)量的常用方法有 和 。（2）稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目的原理當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活細菌。為了保證結(jié)果準確，一般設(shè)置35個平板，選擇菌落數(shù)在30300的平板進

16、行計數(shù)，并 。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。采用此方法的注意事項：1.一般選取菌落數(shù)在30300之間的平板進行計數(shù)2.為了防止菌落蔓延，影響計數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入TTC 3.本法僅限于形成菌落的微生物設(shè)置對照設(shè)置對照的主要目的是排除 對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。對照實驗是指除了被測試的條件以外，其他條件都相同的實驗，其作用是比照試驗組，排除任何其他可能原因的干擾，證明確實是所測試的條件引起相應的結(jié)果。實驗設(shè)計實驗設(shè)計包括實驗方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實施步驟以及時間安排等的綜合考慮和安排。（1）土壤取樣：同其他生物環(huán)

17、境相比，土壤中的微生物，數(shù)量最大，種類最多。在富含有機質(zhì)的土壤表層，有更多的微生物生長。從富含有機物、潮濕、pH7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約38cm的土壤層取樣。（2）樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。在實際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在 之間、適于計數(shù)的平板。測定土壤中細菌的數(shù)量，一般選用104 105 106測定放線菌的數(shù)量，一般選用103 104 105 測定真菌的數(shù)量，一般選用102 103 104（3）微生物的培養(yǎng)與觀察不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細菌3037 12天放線菌2528 57天 霉

18、菌2528 34天每隔24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目 的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足而導致一樓菌落的數(shù)目。一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、唯獨及培養(yǎng)時間），同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。形狀、大小、隆起程度、顏色疑難解答（1）如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值每克樣品中的菌落數(shù)=（C/V）*M 其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（ml），M代表稀釋倍數(shù)在細菌分解尿素的化學反應中，細菌合成的 將尿素分解成了 。使培養(yǎng)基的 增強，

19、PH 。在以尿素為唯一 的培養(yǎng)基中加入 指示劑，培養(yǎng)某種細菌后，如果PH ，指示劑將變 。專題三 植物的組織培養(yǎng)技術(shù) 課題一 菊花的組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)的基本過程細胞分化：在生物個體發(fā)育過程中，細胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程。離體的植物組織或細胞，在培養(yǎng)了一段時間以后，會通過細胞分裂，形成愈傷組織，愈傷組織的細胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞。由高度分化的植物組織或細胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細胞的 ，或者叫做去分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做 。再分化形成的試管苗，移栽到地里，可以發(fā)育成完整的

20、植物體。·細胞分化是一種持久性的變化，它有什么生理意義？使多細胞生物體中細胞結(jié)構(gòu)和功能趨向?qū)ｉT化，有利于提高各種生理功能的效率。比較根尖分生組織和愈傷組織的異同組織類型細胞來源細胞形態(tài)細胞結(jié)構(gòu)細胞排列細胞去向根尖分生組織受精卵正方形無液泡緊密分化成多種細胞組織愈傷組織高度分化細胞無定形高度液泡化疏松再分化成新個體相同點都通過有絲分裂進行細胞增殖影響植物組織培養(yǎng)的條件材料：不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差別很大。植物材料的選擇直接關(guān)系到試驗的成敗。植物的種類、材料的 和 的長短等都會影響實驗結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇 的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。一般來說，容易進行無性繁殖的植物容易進行

21、組織培養(yǎng)。選取生長旺盛嫩枝進行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導脫分化和再分化。營養(yǎng)：離體的植物組織和細胞，對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對特殊，需要配制適宜的培養(yǎng)基。常用的培養(yǎng)基是 培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是 ，微量元素是 ，有機物有 、煙酸、肌醇、維生素、 等。激素：植物激素中 和 是啟動細胞分裂、 和 的關(guān)鍵性激素。在生長素存在的情況下，細胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強趨勢。在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細胞分裂素等植物激素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。使用順序?qū)嶒灲Y(jié)果先生長素，后細胞分裂素有利于分裂但不分化先細胞分裂素，后生長素細胞既分裂也分化同時使用 提高生長素 細胞分裂素比值與

22、結(jié)果比值高時促根分化，抑芽形成比值低時促芽分化，抑根形成比值適中促進 生長 環(huán)境條件：PH、溫度、光等環(huán)境條件。 不同的植物對各種條件的要求往往不同。進行菊花的組織培養(yǎng)，一般將pH控制在 左右，溫度控制在 ，并且每日用日光燈照射 h. 4、 操作流程配制MS固體培養(yǎng)基：配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成的濃縮液（培養(yǎng)基母液）。·使用時根據(jù)母液的濃縮倍數(shù)，計算用量，并加蒸餾水稀釋。·配制培養(yǎng)基：應加入的物質(zhì)有瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有機物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到1000毫升。·在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易

23、。·滅菌：采取的滅菌方法是 。·MS培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？與肉湯培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基有哪些特點？大量元素和微量元素提供植物細胞所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，維持細胞滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機營養(yǎng)。外植體的消毒 外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。選取菊花莖段時，要取 。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數(shù)為 的酒精中搖動23次，持

24、續(xù)67s，立即將外植體取出，在 中清洗。取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入質(zhì)量分數(shù)為0.1%的 溶液中12min。取出后，在無菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。注意：對外植體進行表面消毒時，就要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植物的耐受能力。接種：接種過程中插入外植體時形態(tài)學上端朝上，每個錐形瓶接種78個外植體。外植體接種與細菌接種相似，操作步驟相同，而且都要求 操作。培養(yǎng)：應該放在 中進行，并定期進行 ，保持適宜的溫度（ ）和光照（ h）移栽：栽前應先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后將幼苗移植到消過毒的 等環(huán)境中生活一段時間，進行壯苗。最后進行露天

25、栽培。栽培 將幼苗移栽后，每天觀察并記錄幼苗生長情況，適時澆水、施肥，直至開花。專題4 酶的研究與應用課題1 果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用一、果膠與果膠酶的作用1.果膠 是植物 及 的主要組成成分之一，由 聚合而成的一種高分子化合物，不溶于 。2果膠酶（1）果膠酶的作用是分解 變成可溶性的 。 （2）果膠酶不是特指某一種酶，而是分解 的一類酶的總稱，包括 酶、 酶和 酶等；果膠酶的化學本質(zhì)是蛋白質(zhì)，也能被蛋白酶水解掉； （3）膠酶具有酶的通性：只改變反應 ，不改變反應的平衡點。 二、酶的活性與影響酶活性的因素1酶的活性是指酶 一定化學反應的能力，其高低用一定條件下酶所催化的某一化學反應的 來表示。

26、酶反應速度用 內(nèi)， 中反應物的 或產(chǎn)物的 表示。2影響酶活性的因素常提的是 、 和酶的抑制劑等。3. 探究溫度和pH對酶活性的影響及探究果膠酶用量的兩個實驗都要注意實驗的基本原則： 原則和 原則，理解實驗中溫度梯度或pH梯度的變化在分析問題時也要用 原則分析。三、果膠酶的用量生產(chǎn)果膠時為了使果膠酶得到充分利用，控制好酶的用量，用量多少常通過 手段探究。四、實驗設(shè)計1.探究溫度和PH對果膠酶活性的影響（1）實驗六成熱那個包括 、設(shè)置具有一系列梯度的 和 、加入果膠酶反應一段時間、 。（2）該實驗的自變量事 或 ，因變量是 ，檢測因變量是通過測定果汁的 或 來實現(xiàn)的。思考1：為什么在混合蘋果泥和果

27、膠酶之前，要將果泥和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫處理？提示：將果泥和果膠酶分裝在不同的試管中恒溫處理，可以保證底物和酶在混合時的溫度是相同的，避免了果泥和果膠酶混合時影響混合物的溫度，從而影響果膠酶活性的問題。思考2：為什么能夠通過測定濾出的蘋果汁的體積大小來判斷果膠酶活性的高低？提示：果膠酶將果膠分解為小分子物質(zhì)，小分子物質(zhì)可以通過濾紙，因此蘋果汁的體積大 小反應了果膠酶的催化分解果膠的能力。在不同的溫度和pH下，果膠酶的活性越大，蘋果汁的體積就越大。 2.探究果膠酶的用量（1）該實驗的自變量是 ，除此之外，影響果汁產(chǎn)生的因素還有 、PH、 、蘋果泥等無關(guān)變量。（2）判斷的思路是：如果隨著酶

28、的用量增加，過濾到果汁的體積也增加，說明 ，如果當酶的用量增加到某個值后，再增加酶的用量，過濾到的果汁的體積不再改變，說明 。專題五 和蛋白質(zhì)技術(shù)課題6 血紅蛋白的提取和分離一、實驗原理蛋白質(zhì)的物化理性質(zhì)：形狀、大小、 和多少、溶解度、 、親和力等千差萬別，由此 各種蛋白質(zhì)。1凝膠色譜法（ 法）：（1）原理：是根據(jù) 的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程 ，流動 ；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程 ，流動 。（原因是由于 作用進入凝膠顆粒內(nèi)部而被滯留。）（2）凝膠材料：多孔性，多糖類化合物，如葡聚糖、瓊脂糖。（3）分離過程： 混合物上柱 大分子流動 、小

29、分子流動 收集 分子收集 分子 ：從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質(zhì)分子的差速流動。（4）作用： 分離蛋白質(zhì)，測定生物大分子分子量，蛋白質(zhì)的脫鹽等。2緩沖溶液（1）原理：由弱酸和相應的強堿弱酸鹽組成（如H2CO3NaHCO3， NaH2PO4/Na2HPO4等），調(diào)節(jié)酸和鹽的用量，可配制不同pH的緩沖液。（2）緩沖液作用：抵制外界 對溶液 的干擾而保持 穩(wěn)定。3電泳法：（1）原理：不同蛋白質(zhì)的 以及分子本身的 不同，在電場中受到的作用力大小、方向、阻力不同，導致不同蛋白質(zhì)在電場中的運動 和運動 不同。（2）分離方法： 電泳、 電泳等。（3）分離過程：在一定pH下，使蛋白質(zhì)基團帶上正電或負電

30、；加入帶負電荷多的SDS，形成“蛋白質(zhì)SDS復合物”，使蛋白質(zhì)遷移速率僅取決于分子大小。二、實驗步驟1樣品處理5、 紅細胞的洗滌洗滌紅細胞的目的是 ，采集的血樣要及時采用 離心分離紅細胞，然后用膠頭吸管吸出上層透明的 ，將下層暗紅色的 倒入燒杯，再加入 體積的生理鹽水，緩慢攪拌 min， 離心，如此重復洗滌三次，直至 ，表明紅細胞已洗滌干凈。血紅蛋白的釋放 在 和 作用下，紅細胞破裂釋放出血紅蛋白。注：加入蒸餾水后紅細胞液體積與原血液體積要相同。加入甲苯的目的是溶解 ，有利于血紅蛋白的釋放和分離。2粗分離分離血紅蛋白溶液 將攪拌好的混合溶液離心后，試管中的溶液分為 層。第一層為無色透明的 ，第

31、2層為白色薄層固體，是 ，第3層是紅色透明液體，這是 的水溶液，第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。透析 取1mL的血紅蛋白溶液裝入 中，將 放入盛有300mL的物質(zhì)的量的濃度為20mmol/L的 ，透析12h。透析可以去除樣品中 的雜質(zhì)，或用于更換樣品的 。3純化調(diào)節(jié)緩沖液面：打開色譜柱下端的流出口，使柱內(nèi)凝膠面上的緩沖液緩慢下降到與凝 膠面平齊，關(guān)閉出口。加入蛋白質(zhì)樣品：用吸管將透析后的樣品沿管壁環(huán)繞移動加到色譜柱的頂端。加樣后， 打開下端出口，使樣品滲入凝膠床內(nèi)，等樣品完全滲入凝膠層后， 關(guān)閉出口。調(diào)

32、節(jié)緩沖液面：加入20mmol/L的磷酸緩沖液到適當高度洗脫：連接緩沖液洗脫瓶，打開下端出口，進行洗脫。收集分裝蛋白質(zhì)：待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時，用試管收集。4.純度鑒定-SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳（選做）三、注意事項1. 電泳技術(shù)電泳技術(shù)就是在電場的作用下，利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而達到對樣品進行分離、鑒定或提純的目的。2. 紅細胞的洗滌如果分層不明顯，可能是洗滌次數(shù)少、未能除去血漿蛋白的原因。此外，離心速度過高和時間過長，會使白細胞和淋巴細胞一同沉淀，也得不到純凈的紅細胞，影響后續(xù)血紅蛋白的提取純度。3如何檢測凝

33、膠色譜柱的裝填是否成功由于凝膠是一種半透明的介質(zhì)，因此可以在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈，檢查凝膠是否裝填得均勻。此外，還可以加入大分子的有色物質(zhì)，觀察色帶移動的情況。如果色帶均勻、狹窄、平整，說明凝膠色譜柱的性能良好。如果色譜柱出現(xiàn)紋路或是氣泡，輕輕敲打柱體以消除氣泡，消除不了時要重新裝柱。4為什么凝膠的裝填要緊密、均勻？如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會在色譜柱內(nèi)形成無效的空隙，使本該進入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙中通過，攪亂洗脫液的流動次序，影響分離的效果。5沸水浴處理加入洗脫液的濕凝膠的目的不但節(jié)約時間，還能除去凝膠中可能帶有的微生物和排除凝膠內(nèi)的空氣。6G-75“G”代表凝膠的交聯(lián)程度，膨脹程度及分離范圍，75表示凝膠得水值，即每克凝膠膨脹時吸水7.5g。7裝填完后，立即用洗脫液洗脫的目的：使凝膠裝填緊密8加入檸檬酸鈉有何目的？為什么要低速、短時離心？為什么要緩慢攪拌？防止血液凝固；防止白細胞沉淀；防止紅細胞破裂釋放出血紅蛋白。9與其他真核細胞相比，紅細胞的特點及這一特點對進行蛋白質(zhì)的分離的意義哺乳動物及人的成熟的紅細胞是雙面凹圓餅狀，