脂肪干細(xì)胞614

1、動(dòng)物科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院 楊公社楊公社adipose-derived mesenchymal stem cells匯報(bào)提綱匯報(bào)提綱一、研究背景一、研究背景 動(dòng)物體內(nèi)，脂肪組織不僅是重要的能量貯存庫(kù)和動(dòng)物體內(nèi)，脂肪組織不僅是重要的能量貯存庫(kù)和賦形組織，還是保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定及具有分泌激素和細(xì)賦形組織，還是保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定及具有分泌激素和細(xì)胞因子的重要部位。脂肪細(xì)胞增殖與分化失常是導(dǎo)致胞因子的重要部位。脂肪細(xì)胞增殖與分化失常是導(dǎo)致肥胖及肥胖及型糖尿病的重要因素。因此，脂肪細(xì)胞分化型糖尿病的重要因素。因此，脂肪細(xì)胞分化的研究一直是國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)及生物學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之的研究一直是國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)及生物學(xué)領(lǐng)域的研究熱

2、點(diǎn)之一。一。 背景知識(shí)背景知識(shí) 背景知識(shí)背景知識(shí)二、脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)二、脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn) 首先，從人類(lèi)醫(yī)學(xué)角度說(shuō)，獲取脂肪間充質(zhì)干首先，從人類(lèi)醫(yī)學(xué)角度說(shuō)，獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞比骨髓源性干細(xì)胞容易的多。皮下脂肪切除術(shù)細(xì)胞比骨髓源性干細(xì)胞容易的多。皮下脂肪切除術(shù)是一種普通的外科手術(shù)，其安全性高、對(duì)患者帶來(lái)是一種普通的外科手術(shù)，其安全性高、對(duì)患者帶來(lái)的痛苦小。即的痛苦小。即amscs具有易獲得性、安全、可迅具有易獲得性、安全、可迅速擴(kuò)增及多向分化能力等特點(diǎn)，其將成為具有廣闊速擴(kuò)增及多向分化能力等特點(diǎn)，其將成為具有廣闊治療應(yīng)用前景的一類(lèi)成體干細(xì)胞。治療應(yīng)用前景的一類(lèi)成體干細(xì)胞。 其次，

3、脂肪組織比骨髓中所含干細(xì)胞比率大。其次，脂肪組織比骨髓中所含干細(xì)胞比率大。 通通過(guò)成纖維細(xì)胞集落形成單位比較脂肪組織顯示，成人過(guò)成纖維細(xì)胞集落形成單位比較脂肪組織顯示，成人骨髓來(lái)源細(xì)胞中成纖維細(xì)胞集落形成單位出現(xiàn)頻率為骨髓來(lái)源細(xì)胞中成纖維細(xì)胞集落形成單位出現(xiàn)頻率為1/500001/500001/10000001/1000000，而當(dāng)脂肪組織用膠原酶消化，而當(dāng)脂肪組織用膠原酶消化，除去上層漂浮的成熟脂肪細(xì)胞，下層細(xì)胞中成纖維細(xì)除去上層漂浮的成熟脂肪細(xì)胞，下層細(xì)胞中成纖維細(xì)胞集落形成單位的頻率為胞集落形成單位的頻率為1/1001/100，說(shuō)明脂肪組織中，說(shuō)明脂肪組織中干細(xì)干細(xì)胞數(shù)目至少是骨髓的胞數(shù)

4、目至少是骨髓的500500多倍多倍 。脂肪間充質(zhì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)干細(xì)胞優(yōu)點(diǎn) 最后，從經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益看，從脂肪組織中獲最后，從經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益看，從脂肪組織中獲取干細(xì)胞可將原本認(rèn)為是廢棄物的脂肪，如臨床上取干細(xì)胞可將原本認(rèn)為是廢棄物的脂肪，如臨床上脂肪抽吸術(shù)后的脂肪組織及動(dòng)物屠宰后不可實(shí)用的脂肪抽吸術(shù)后的脂肪組織及動(dòng)物屠宰后不可實(shí)用的內(nèi)臟脂肪等變?yōu)楦杉?xì)胞庫(kù)的重要來(lái)源，具有極大的內(nèi)臟脂肪等變?yōu)楦杉?xì)胞庫(kù)的重要來(lái)源，具有極大的經(jīng)濟(jì)與社會(huì)效益。經(jīng)濟(jì)與社會(huì)效益。脂肪間充質(zhì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)干細(xì)胞優(yōu)點(diǎn) 關(guān)于脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志，目前尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)關(guān)于脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)志，目前尚無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。一般認(rèn)為，脂肪間充

5、質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干準(zhǔn)。一般認(rèn)為，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均表達(dá)細(xì)胞均表達(dá)cd44、cd105、stro-1、cd166及及cd117。其中。其中cd117是一種干細(xì)胞因子受體，在全是一種干細(xì)胞因子受體，在全能或多能干細(xì)胞中表達(dá)，包括胚胎干細(xì)胞。能或多能干細(xì)胞中表達(dá)，包括胚胎干細(xì)胞。表面標(biāo)記表面標(biāo)記 除了上述幾種標(biāo)記外，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞也表達(dá)除了上述幾種標(biāo)記外，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞也表達(dá)其他多種分子標(biāo)記，包括其他多種分子標(biāo)記，包括cd29（1-整合素，在血管整合素，在血管發(fā)生治療中起重要作用）、發(fā)生治療中起重要作用）、cd44（透明質(zhì)酸鹽）和（透明質(zhì)酸鹽）和cd49e（5 -整合素，在

6、細(xì)胞粘附纖連蛋白中起重要整合素，在細(xì)胞粘附纖連蛋白中起重要作用）等。作用）等。表面標(biāo)記表面標(biāo)記 不同研究組對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記的鑒不同研究組對(duì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記的鑒定結(jié)果并不完全一致，如定結(jié)果并不完全一致，如gronthos等發(fā)現(xiàn)等發(fā)現(xiàn)amscs不不表達(dá)表達(dá)stro-1，但，但zuk等發(fā)現(xiàn)表達(dá)等發(fā)現(xiàn)表達(dá)stro-1。這些不一。這些不一致的結(jié)果可能與細(xì)胞所處狀態(tài)及純度有關(guān)。致的結(jié)果可能與細(xì)胞所處狀態(tài)及純度有關(guān)。 表面標(biāo)記表面標(biāo)記報(bào)道文獻(xiàn)報(bào)道文獻(xiàn)amscs表面標(biāo)記表面標(biāo)記陽(yáng)性陽(yáng)性陰性陰性gronthos，2001cd44、cd49d、cd49e、cd54、cd55、cd59、cd105

7、、cd106和和hla-abccd14、cd45、cd50、cd56、hla-dr和骨髓和骨髓基質(zhì)細(xì)胞表面分子基質(zhì)細(xì)胞表面分子stro-1zuk，2002cd13、cd29、cd44、cd105、cd71、stro-1cd14、cd16、cd31、cd34、cd45、cd106、cd56de ugarte，2003cd13、cd29、cd44、cd105、cd90、stro-1cd49d、cd54、cd34、cd106aust，2004cd10、cd13、cd29、cd44、cd90、和、和hla-abccd11b、cd45和和hla-dr表面標(biāo)記表面標(biāo)記 近幾年的研究結(jié)果表明，近幾年的研究結(jié)

8、果表明，在合適誘導(dǎo)劑下，脂在合適誘導(dǎo)劑下，脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓干細(xì)胞一樣，肪間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓干細(xì)胞一樣，可向脂肪、軟可向脂肪、軟骨、成骨、神經(jīng)元細(xì)胞、成肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞骨、成骨、神經(jīng)元細(xì)胞、成肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等方向分化。等方向分化。三、多向分化潛能三、多向分化潛能多向分化潛能多向分化潛能strem bm, 2005多向分化潛能多向分化潛能分化分化方向方向相關(guān)文獻(xiàn)相關(guān)文獻(xiàn)骨骼肌骨骼肌mizuno, 2002；bacou, 2004；陳希平陳希平, 2004心肌心肌rangappa, 2003；planat-benard, 2004；yamada, 2006(棕棕色脂肪組織色脂肪組織)

9、；張端珍張端珍, 2005；王燕王燕, 2005成骨成骨zuk, 2001, 2002；halvorsen, 2000；hattori, 2004；陳希哲陳希哲, 2004軟骨軟骨huang, 2004；winter, 2003；嚴(yán)笠嚴(yán)笠, 2005脂肪脂肪zuk, 2001, 2002；sen, 2001；von heimburg d, 2001神經(jīng)神經(jīng)safford, 2004；ashjian, 2003；rchman, 2004；楊立業(yè)楊立業(yè), 2003, 2004 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向不同細(xì)胞分化是在特異性脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞向不同細(xì)胞分化是在特異性誘導(dǎo)因子作用下進(jìn)行的。誘導(dǎo)因子作用下進(jìn)行的

10、。 下面介紹常用的一些多向誘導(dǎo)分化因子及誘導(dǎo)下面介紹常用的一些多向誘導(dǎo)分化因子及誘導(dǎo)后的細(xì)胞特性。后的細(xì)胞特性。多向分化潛能多向分化潛能 細(xì)胞類(lèi)型細(xì)胞類(lèi)型 誘導(dǎo)物誘導(dǎo)物 細(xì)胞特性細(xì)胞特性 脂肪細(xì)胞脂肪細(xì)胞 地塞米松,異丁基甲基黃嘌，胰島素等 細(xì)胞中充滿脂滴，油紅o染色陽(yáng)性成骨細(xì)胞成骨細(xì)胞 2-磷酸抗壞血酸, -甘油磷酸 ，地塞米松等鈣化性基質(zhì)產(chǎn)物 ，茜素紅染色陽(yáng)性骨骼肌細(xì)胞骨骼肌細(xì)胞 地塞米松，氫化可的松，或5-氮雜胞苷 多核形態(tài)，骨骼肌肌性素重鏈/myod表達(dá) 心肌細(xì)胞心肌細(xì)胞 5-氮雜胞苷 細(xì)胞圓形，-肌動(dòng)蛋白和肌鈣蛋白-i表達(dá) 神經(jīng)元細(xì)胞神經(jīng)元細(xì)胞 -巰基乙醇或者異丁基甲基黃嘌, 消炎痛

11、等細(xì)胞縮小、周?chē)卸鄠€(gè)神經(jīng)突起 內(nèi)皮內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞 血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 細(xì)胞之間形成網(wǎng)格樣結(jié)構(gòu) ，表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性抗原 肝肝( (實(shí)質(zhì)實(shí)質(zhì)) )細(xì)細(xì)胞胞肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子， 抑瘤素m表達(dá)白蛋白和 -胎蛋白 肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞 在在20062006年年4 4月第月第1616卷卷4 4期的自然科學(xué)進(jìn)展上，裴雪濤期的自然科學(xué)進(jìn)展上，裴雪濤等人發(fā)表的文章等人發(fā)表的文章人脂肪來(lái)源的干細(xì)胞體外培養(yǎng)特性及人脂肪來(lái)源的干細(xì)胞體外培養(yǎng)特性及分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞的研究分化為肝細(xì)胞樣細(xì)胞的研究。 脂肪源性干細(xì)胞的分離因物種不同消化方法不同。脂肪源性干細(xì)胞的分離因物種不同消化方法不同。本實(shí)本實(shí)驗(yàn)

12、室采用型膠原酶消化法分離獲得豬脂肪源干細(xì)胞，表達(dá)脂驗(yàn)室采用型膠原酶消化法分離獲得豬脂肪源干細(xì)胞，表達(dá)脂肪干細(xì)胞表面標(biāo)記，在合適誘導(dǎo)劑下，這些細(xì)胞分化成了成肪干細(xì)胞表面標(biāo)記，在合適誘導(dǎo)劑下，這些細(xì)胞分化成了成骨細(xì)胞、成肌細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，在此作一簡(jiǎn)單介紹。骨細(xì)胞、成肌細(xì)胞和脂肪細(xì)胞，在此作一簡(jiǎn)單介紹。四、豬四、豬amscs的培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)7-8 天后，細(xì)胞生長(zhǎng)即可達(dá)天后，細(xì)胞生長(zhǎng)即可達(dá)80 %-90 %融合，貼壁細(xì)融合，貼壁細(xì)胞緊密排列成漩渦狀、網(wǎng)狀、輻射狀，有一定的方向性，集落大小胞緊密排列成漩渦狀、網(wǎng)狀、輻射狀，有一定的方向性，集落大小不一，含數(shù)個(gè)至數(shù)百個(gè)細(xì)胞

13、不等；集落中細(xì)胞形態(tài)為典型梭形細(xì)胞不一，含數(shù)個(gè)至數(shù)百個(gè)細(xì)胞不等；集落中細(xì)胞形態(tài)為典型梭形細(xì)胞(圖圖a)，這就是我們所要分離獲得的豬，這就是我們所要分離獲得的豬amscs。原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)14 d 左右左右即可形成致密單層即可形成致密單層(圖圖b)。 baamscs的培養(yǎng)特性的培養(yǎng)特性cd44+ (50) cd105+ (100) cd14 (50) cd34 (100) cd106 (100)hla-dr (50) 利用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)豬利用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)豬amscsamscs特異性表面標(biāo)記，結(jié)果：特異性表面標(biāo)記，結(jié)果：cd44cd44和和cd105cd105呈陽(yáng)性。呈陽(yáng)性。cd1

14、4cd14，cd34,cd106,hla-drcd34,cd106,hla-dr均為陰性。均為陰性。amscs的表面標(biāo)記的表面標(biāo)記 在地塞米松、抗壞血酸和在地塞米松、抗壞血酸和磷酸甘油鈉的誘導(dǎo)作用下，豬脂磷酸甘油鈉的誘導(dǎo)作用下，豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞逐漸由成纖維樣的長(zhǎng)梭形（對(duì)照組，圖肪間充質(zhì)干細(xì)胞逐漸由成纖維樣的長(zhǎng)梭形（對(duì)照組，圖a a）變?yōu)槌桑┳優(yōu)槌晒菢拥姆綁K形，細(xì)胞堆積呈卵圓形或方形（圖骨樣的方塊形，細(xì)胞堆積呈卵圓形或方形（圖b b） 。ab成骨誘導(dǎo)成骨誘導(dǎo)成骨誘導(dǎo)后的形態(tài)學(xué)觀察成骨誘導(dǎo)后的形態(tài)學(xué)觀察b 茜素紅染色茜素紅染色檢測(cè)誘導(dǎo)細(xì)胞的礦物質(zhì)沉積狀況，結(jié)果：豬脂肪間檢測(cè)誘導(dǎo)細(xì)胞的礦物質(zhì)沉積狀

15、況，結(jié)果：豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)第充質(zhì)干細(xì)胞在成骨誘導(dǎo)第7 7天開(kāi)始出現(xiàn)小的點(diǎn)狀鈣化斑（天開(kāi)始出現(xiàn)小的點(diǎn)狀鈣化斑（a a），誘導(dǎo)），誘導(dǎo)第第1414天形成廣泛的鈣化結(jié)節(jié)（天形成廣泛的鈣化結(jié)節(jié)（b b）。誘導(dǎo)）。誘導(dǎo)2121天鈣化結(jié)節(jié)更加明顯連天鈣化結(jié)節(jié)更加明顯連接成片（接成片（c c）。）。d d為對(duì)照組。為對(duì)照組。cb成骨誘導(dǎo)成骨誘導(dǎo) actinocn 165bpcol-1 539bp actinrt-pcr檢測(cè)成骨標(biāo)志基因檢測(cè)成骨標(biāo)志基因col- 1 （型骨膠原）及型骨膠原）及ocn（骨鈣素）表達(dá)（骨鈣素）表達(dá) m: marker; 1-4分別為第0天，7天，14天，21天ocn的表

16、達(dá); 5-8為col- 1的表達(dá)。 結(jié)果：在成骨誘導(dǎo)分化的早期（第結(jié)果：在成骨誘導(dǎo)分化的早期（第7 7天），可檢測(cè)到成骨特天），可檢測(cè)到成骨特異性基因異性基因型骨膠原和骨鈣素的表達(dá)，隨著誘導(dǎo)時(shí)間的增加，型骨膠原和骨鈣素的表達(dá)，隨著誘導(dǎo)時(shí)間的增加，2 2個(gè)基因的表達(dá)量呈上升趨勢(shì)。個(gè)基因的表達(dá)量呈上升趨勢(shì)。成骨誘導(dǎo)成骨誘導(dǎo)rt-pcrrt-pcr檢測(cè)標(biāo)志基因檢測(cè)標(biāo)志基因mrnamrna的表達(dá)的表達(dá) 上述結(jié)果說(shuō)明：在合適誘導(dǎo)劑下，豬脂肪上述結(jié)果說(shuō)明：在合適誘導(dǎo)劑下，豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)和排列均發(fā)生變化，成纖維間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)和排列均發(fā)生變化，成纖維樣的長(zhǎng)梭形變?yōu)槌晒菢拥姆綁K形，細(xì)胞堆積呈樣的長(zhǎng)梭形

17、變?yōu)槌晒菢拥姆綁K形，細(xì)胞堆積呈卵圓形或方形，茜素紅染色和卵圓形或方形，茜素紅染色和 rt-pcr均表明均表明可以誘導(dǎo)分化成骨細(xì)胞?？梢哉T導(dǎo)分化成骨細(xì)胞。成骨誘導(dǎo)成骨誘導(dǎo) 成肌誘導(dǎo)第成肌誘導(dǎo)第7 7天出現(xiàn)細(xì)胞球形變化天出現(xiàn)細(xì)胞球形變化(a)(a)，誘導(dǎo)第，誘導(dǎo)第1414天開(kāi)始出現(xiàn)天開(kāi)始出現(xiàn)接觸、融合。部分出現(xiàn)偽足，形態(tài)變長(zhǎng)接觸、融合。部分出現(xiàn)偽足，形態(tài)變長(zhǎng)(b)(b)，誘導(dǎo)第，誘導(dǎo)第2121天周?chē)笮翁熘車(chē)笮渭?xì)胞明顯減少，形成巨大的球形細(xì)胞細(xì)胞明顯減少，形成巨大的球形細(xì)胞(c,d)(c,d)。上圖為。上圖為茜素紅染色。茜素紅染色。abdc成肌誘導(dǎo)成肌誘導(dǎo)成肌誘導(dǎo)后的形態(tài)學(xué)觀察成肌誘導(dǎo)后的形態(tài)學(xué)

18、觀察成肌誘導(dǎo)后肌紅蛋白成肌誘導(dǎo)后肌紅蛋白(myoglobin(myoglobin) )免疫熒光染色免疫熒光染色 成肌誘導(dǎo)第成肌誘導(dǎo)第1414天，可檢測(cè)到肌紅蛋白天，可檢測(cè)到肌紅蛋白(myoglobin(myoglobin) )的表的表達(dá)達(dá)( (圖圖a)a)，第，第2121天表達(dá)明顯增加（圖天表達(dá)明顯增加（圖b)b)。成肌誘導(dǎo)成肌誘導(dǎo)免疫熒光染色免疫熒光染色-actin 399 bpmyod 243 bp myf5 154bp 上圖是用上圖是用5-5-氮雜胞苷誘導(dǎo)氮雜胞苷誘導(dǎo)1 1周后的結(jié)果，由圖可以看出周后的結(jié)果，由圖可以看出, , 誘導(dǎo)一誘導(dǎo)一周后即可檢測(cè)到成肌細(xì)胞分化早期表達(dá)基因周后即可檢

19、測(cè)到成肌細(xì)胞分化早期表達(dá)基因myf5myf5和和myodmyod的表達(dá)。的表達(dá)。rt-pcr 檢測(cè)成肌標(biāo)志基因的表達(dá)檢測(cè)成肌標(biāo)志基因的表達(dá)1為對(duì)照，2為myf5(成肌調(diào)節(jié)因子)，3為myod(生肌決定因子) 成肌誘導(dǎo)成肌誘導(dǎo)肌細(xì)胞標(biāo)志基因肌細(xì)胞標(biāo)志基因mrnamrna的表達(dá)的表達(dá)成脂誘導(dǎo)后的形態(tài)學(xué)觀察成脂誘導(dǎo)后的形態(tài)學(xué)觀察誘導(dǎo)誘導(dǎo)48 h(100)誘導(dǎo)誘導(dǎo)21 d(100)對(duì)照對(duì)照21 d(100)脂滴融合脂滴融合(200) 豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成脂誘導(dǎo)豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成脂誘導(dǎo)48h48h后，細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)個(gè)別脂滴后，細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)個(gè)別脂滴( (圖圖a)a)，隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，隨著誘導(dǎo)時(shí)

20、間的延長(zhǎng), ,充脂細(xì)胞數(shù)量增加充脂細(xì)胞數(shù)量增加( (圖圖b) b) ，且小脂滴逐漸，且小脂滴逐漸融合成大脂滴融合成大脂滴( (圖圖c)c)。對(duì)照組細(xì)胞無(wú)充脂細(xì)胞出現(xiàn)（圖。對(duì)照組細(xì)胞無(wú)充脂細(xì)胞出現(xiàn)（圖c c）。）。acbd成脂誘導(dǎo)成脂誘導(dǎo)油紅油紅o o染色染色b b誘導(dǎo)后充脂細(xì)胞明顯增多誘導(dǎo)后充脂細(xì)胞明顯增多（100） 脂滴融合脂滴融合, 胞核位于細(xì)胞一側(cè)胞核位于細(xì)胞一側(cè)（200） 誘導(dǎo)后的脂肪細(xì)胞經(jīng)油紅誘導(dǎo)后的脂肪細(xì)胞經(jīng)油紅o o染色后染色后, ,脂滴呈紅色脂滴呈紅色成脂誘導(dǎo)成脂誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞標(biāo)志基因表達(dá)脂肪細(xì)胞標(biāo)志基因表達(dá)b b0260.00.20.40.60.8abcd14ppar- mrn

21、a表達(dá)豐度表達(dá)豐度誘導(dǎo)天數(shù)誘導(dǎo)天數(shù)ppar595 bp-actin 399 bp成脂誘導(dǎo)成脂誘導(dǎo) 由上述結(jié)果可以看出，豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在地塞由上述結(jié)果可以看出，豬脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在地塞米松、胰島素、吲哚美辛等的誘導(dǎo)作用下，細(xì)胞形態(tài)發(fā)米松、胰島素、吲哚美辛等的誘導(dǎo)作用下，細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，由長(zhǎng)梭形變?yōu)槌錆M脂滴的脂肪細(xì)胞。油紅生變化，由長(zhǎng)梭形變?yōu)槌錆M脂滴的脂肪細(xì)胞。油紅o o染色染色和和 rt-pcrrt-pcr均表明可以誘導(dǎo)分化脂肪細(xì)胞。均表明可以誘導(dǎo)分化脂肪細(xì)胞。成脂誘導(dǎo)成脂誘導(dǎo) 研究表明，脂肪細(xì)胞由中胚層間充質(zhì)干細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，研究表明，脂肪細(xì)胞由中胚層間充質(zhì)干細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，近近30多年來(lái)對(duì)

22、脂肪細(xì)胞的研究主要使用的是鼠源性前體脂肪多年來(lái)對(duì)脂肪細(xì)胞的研究主要使用的是鼠源性前體脂肪細(xì)胞系和原代前體脂肪細(xì)胞。但是這兩者都是已經(jīng)定向的單細(xì)胞系和原代前體脂肪細(xì)胞。但是這兩者都是已經(jīng)定向的單能細(xì)胞，只能分化為成熟的脂肪細(xì)胞，因此這兩個(gè)體外培養(yǎng)能細(xì)胞，只能分化為成熟的脂肪細(xì)胞，因此這兩個(gè)體外培養(yǎng)體系的研究只能局限于前體脂肪分化為成熟脂肪細(xì)胞這一階體系的研究只能局限于前體脂肪分化為成熟脂肪細(xì)胞這一階段的細(xì)胞和分子事件。段的細(xì)胞和分子事件。豬豬amsc細(xì)胞系建立的初步研究細(xì)胞系建立的初步研究 因此，因此，amscs細(xì)胞系的建立可為研究脂肪細(xì)胞分化細(xì)胞系的建立可為研究脂肪細(xì)胞分化全過(guò)程，探討脂肪細(xì)胞

23、分化早期細(xì)胞與分子事件提供新的全過(guò)程，探討脂肪細(xì)胞分化早期細(xì)胞與分子事件提供新的研究模型。研究模型。 本實(shí)驗(yàn)室在成功分離豬原代本實(shí)驗(yàn)室在成功分離豬原代amsc細(xì)胞后，細(xì)胞單克細(xì)胞后，細(xì)胞單克隆擴(kuò)增方法獲得單一來(lái)源的隆擴(kuò)增方法獲得單一來(lái)源的amsc細(xì)胞，傳細(xì)胞，傳20代后細(xì)胞形代后細(xì)胞形態(tài)一致，經(jīng)鑒定仍然具有態(tài)一致，經(jīng)鑒定仍然具有amsc表面標(biāo)志。表面標(biāo)志。細(xì)胞單克隆擴(kuò)增培養(yǎng)所有細(xì)胞均來(lái)源于同一祖細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)一致cd105cd4424代細(xì)胞表面代細(xì)胞表面marker鑒定鑒定 目前我們正在對(duì)保存的細(xì)胞進(jìn)行染色體核目前我們正在對(duì)保存的細(xì)胞進(jìn)行染色體核型分析，支元體檢測(cè)等工作。型分析，支元體檢測(cè)等工

24、作。 現(xiàn)有的研究表明，脂肪組織是一個(gè)易獲取和儲(chǔ)量豐富的成體現(xiàn)有的研究表明，脂肪組織是一個(gè)易獲取和儲(chǔ)量豐富的成體干細(xì)胞庫(kù)。干細(xì)胞庫(kù)。amscs取材容易，創(chuàng)傷小，具有可控制的多向分化能取材容易，創(chuàng)傷小，具有可控制的多向分化能力，對(duì)于組織工程來(lái)說(shuō)，幾乎是個(gè)力，對(duì)于組織工程來(lái)說(shuō)，幾乎是個(gè)“完美完美”的細(xì)胞；且細(xì)胞培養(yǎng)、的細(xì)胞；且細(xì)胞培養(yǎng)、擴(kuò)增較容易，易獲得大量可供自體或異體移植使用的干細(xì)胞；在擴(kuò)增較容易，易獲得大量可供自體或異體移植使用的干細(xì)胞；在急、慢性骨、軟骨組織損傷，肌組織缺損、矯形手術(shù)、中樞神經(jīng)急、慢性骨、軟骨組織損傷，肌組織缺損、矯形手術(shù)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷及其它領(lǐng)域有潛在應(yīng)用價(jià)值。系統(tǒng)損傷及

25、其它領(lǐng)域有潛在應(yīng)用價(jià)值。 五、五、amsc應(yīng)用前景及待解決的問(wèn)題應(yīng)用前景及待解決的問(wèn)題 但若將該細(xì)胞應(yīng)用于臨床，仍需在動(dòng)物模型上進(jìn)行但若將該細(xì)胞應(yīng)用于臨床，仍需在動(dòng)物模型上進(jìn)行大量安全性和有效性的實(shí)驗(yàn)。盡管大量安全性和有效性的實(shí)驗(yàn)。盡管amscs實(shí)際應(yīng)用過(guò)程實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中仍存在一些需要解決的問(wèn)題，如體外培養(yǎng)是一種優(yōu)化中仍存在一些需要解決的問(wèn)題，如體外培養(yǎng)是一種優(yōu)化過(guò)的環(huán)境，而體外培養(yǎng)后的過(guò)的環(huán)境，而體外培養(yǎng)后的amscs能否適應(yīng)體內(nèi)環(huán)境而能否適應(yīng)體內(nèi)環(huán)境而繼續(xù)生長(zhǎng)分化；在體內(nèi)繼續(xù)生長(zhǎng)分化；在體內(nèi)amscs分化控制過(guò)程中能否排除分化控制過(guò)程中能否排除致瘤性風(fēng)險(xiǎn)及是否發(fā)生免疫紊亂等。致瘤性風(fēng)險(xiǎn)及是

26、否發(fā)生免疫紊亂等。 另外，種子細(xì)胞最終移入體內(nèi)還需有合適的生物另外，種子細(xì)胞最終移入體內(nèi)還需有合適的生物材料作載體，這種載體必須具有生物相容性，并可生材料作載體，這種載體必須具有生物相容性，并可生物降解，易于生長(zhǎng)因子等促細(xì)胞分化和組織形成的分物降解，易于生長(zhǎng)因子等促細(xì)胞分化和組織形成的分子物質(zhì)的連接和輸送，易于生產(chǎn)和使用。目前關(guān)于生子物質(zhì)的連接和輸送，易于生產(chǎn)和使用。目前關(guān)于生物載體的研究相對(duì)較少，因此，特異性組織生物材料物載體的研究相對(duì)較少，因此，特異性組織生物材料也將是一個(gè)重要而廣闊的研究領(lǐng)域。也將是一個(gè)重要而廣闊的研究領(lǐng)域。 但相信有關(guān)但相信有關(guān)amscs的研究仍然前景廣闊，脂肪組織的研

27、究仍然前景廣闊，脂肪組織來(lái)源的來(lái)源的amscs未來(lái)極有可能會(huì)取代目前的干細(xì)胞源而成未來(lái)極有可能會(huì)取代目前的干細(xì)胞源而成為組織工程、基因治療的一個(gè)新的熱點(diǎn)，并能解決一系為組織工程、基因治療的一個(gè)新的熱點(diǎn)，并能解決一系列臨床難題而具有良好的應(yīng)用前景。列臨床難題而具有良好的應(yīng)用前景。 鑒于脂肪源性干細(xì)胞強(qiáng)大的鑒于脂肪源性干細(xì)胞強(qiáng)大的“可塑性可塑性”、容、容易獲得、免疫排斥小等優(yōu)點(diǎn)，國(guó)外一些公司和研易獲得、免疫排斥小等優(yōu)點(diǎn)，國(guó)外一些公司和研究機(jī)構(gòu)等紛紛謀求究機(jī)構(gòu)等紛紛謀求脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成為組織工成為組織工程或細(xì)胞治療新的同種異體種子細(xì)胞來(lái)源，并申程或細(xì)胞治療新的同種異體種子細(xì)胞來(lái)源，

28、并申請(qǐng)了相關(guān)專利。請(qǐng)了相關(guān)專利。 2004年年12月月16日日macropore biosurgery公司（法公司（法蘭克福）與蘭克福）與giessen大學(xué)聯(lián)合對(duì)外公布使用大學(xué)聯(lián)合對(duì)外公布使用脂肪間充質(zhì)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞干細(xì)胞治療一名七歲女孩顱骨缺損的臨床報(bào)告，為該治療一名七歲女孩顱骨缺損的臨床報(bào)告，為該領(lǐng)域今后的工作奠定了基石。通過(guò)對(duì)歐洲專利局世界領(lǐng)域今后的工作奠定了基石。通過(guò)對(duì)歐洲專利局世界專利數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，專利數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，2005年年1月月5日前已經(jīng)公開(kāi)的關(guān)于日前已經(jīng)公開(kāi)的關(guān)于脂脂肪源性干細(xì)胞肪源性干細(xì)胞的基本專利共有的基本專利共有14項(xiàng)，顯示出項(xiàng)，顯示出脂肪間充脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞質(zhì)干細(xì)胞潛在的市場(chǎng)價(jià)值。潛在的市場(chǎng)價(jià)值。 專利號(hào)及相關(guān)專利專利號(hào)及相關(guān)專利 專利名稱專利名稱 ep1453954 us2003124721，wo03039489 脂肪干細(xì)胞分化成內(nèi)分泌胰腺及其用途us2003166278 us6555374、ca2316400 脂肪干細(xì)胞的多重中胚層細(xì)胞系分化 潛能及其應(yīng)用 wo03080801 分離的脂肪干細(xì)胞用于治療心功能衰竭、帕金森疾 病、糖尿病、貧血癥和地中海貧血us2004092011 脂肪基質(zhì)分化成成人脂肪干細(xì)胞及其用途 wo03