臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室制度

1、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理制度1.0 目的目的 建立臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的工作規(guī)范, 確保分子診斷室正常工作。2.0 范圍范圍 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，包括試劑準(zhǔn)備 間、標(biāo)本制備間、擴(kuò)增間的使用及管理。3.0 職責(zé)職責(zé) 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的工作人員必須 遵守本文件的規(guī)定。4.0 內(nèi)容內(nèi)容4. 1在進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前，在隔離臺(tái)戴好頭套口罩，穿上鞋 套與實(shí)驗(yàn)服。4.2試劑準(zhǔn)備間4.2.1配電房先打開風(fēng)機(jī)（先開送風(fēng) 機(jī)，再開排風(fēng)機(jī)）,再把空調(diào)系統(tǒng)打開。關(guān)閉時(shí)的順序相 反。4.2.2其它室的用品不得帶入本室。4. 2.3從PCR實(shí)驗(yàn)室1號(hào)入口門進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，到達(dá)試劑準(zhǔn)備間的 緩沖間，脫下白色工作服，掛在

2、緩沖 間的左側(cè)，在緩沖 間的右側(cè)更換試劑準(zhǔn)備間的專用工作服（藍(lán)色），進(jìn)入 試劑準(zhǔn)備間，實(shí)驗(yàn)中須戴一次性手套，手套常更換。4.2.4打開已滅菌的超凈臺(tái)，通風(fēng)一段時(shí)間，排走臭 氧。取出當(dāng)次實(shí)驗(yàn)需配制和使用的試劑，其余試劑要 立即收好放回冰箱內(nèi)。4.2.5操作應(yīng)在冰上進(jìn)行。Taq酶盡量在配液的最后一步加入。應(yīng)減少dNTP反復(fù)凍融 的次數(shù)。每次實(shí) 驗(yàn)后將槍調(diào)至最大量程。加模板前打 開廢液缸蓋，加完模板后務(wù)必蓋上廢液缸的蓋子。4.2.6實(shí)驗(yàn)作業(yè)完成時(shí)，應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái)，做好實(shí)驗(yàn) 登記，應(yīng)使用本室專用的記錄本和筆，打開超 凈臺(tái)的 紫外燈旋鈕到20分鐘處。使用過的離心管、吸頭須置 于3%的HCI溶液中浸泡、

3、消毒后方可棄之。4.2.7打開傳遞窗門，墊上一次性手套,將配好的試劑放到傳 遞窗里，關(guān)上傳遞窗門。4.2.8在試劑緩沖間脫下工 作服，穿上白色工作服。4.3標(biāo)本制備間4.3. 1在標(biāo)本制備間的緩沖間，脫下 白色工作服，換上標(biāo)本制備間專用的工作服（粉紅色）, 進(jìn)入標(biāo) 本制備間。4. 3.2打開傳遞窗的門，取出配好 的試劑，使用本區(qū)專用的加樣器和帶濾芯槍頭。4. 3.3實(shí)驗(yàn)作業(yè)完成時(shí)，應(yīng)及時(shí)清理工作臺(tái)，使用過的離心 管、帶濾芯槍頭須置于3%的HCI溶液中浸泡、消毒 后方可棄之。4.3.4做好實(shí)驗(yàn)登記，應(yīng)使用本室專用 的記錄本和筆，打開超凈臺(tái)的紫外燈旋鈕到20分鐘 處。4.3.5打開傳遞窗門，墊上一

4、次性手套，將配好的 試劑放到傳遞窗里，關(guān)上傳遞窗門。4. 3.6提取基因 組模板，提取過程中丟棄的槍頭、離心管和廢液請(qǐng)丟棄 在此垃圾袋并于實(shí)驗(yàn)結(jié)束后立 即將垃圾袋扎口丟棄。 提取質(zhì)粒可先提取野生型質(zhì)粒再提取突變型質(zhì)粒。每 次提取工作完成后擦拭臺(tái)面。4.3.7在試劑緩沖間脫 下工作服，穿上白色工作服。4.4擴(kuò)增間4. 4. 1在擴(kuò)增間的緩沖間，脫下白色工作 服，換上擴(kuò)增間專用工作服（綠色）。4. 4.2打開傳遞 窗門，取出配好的試劑，關(guān)上傳遞窗門。4. 4.3打開PCR儀預(yù)熱20min。4. 4.4將反應(yīng)管放入PCR儀中， 關(guān)好門。4. 4.5脫掉手套，設(shè)定程序，并命名。4. 4.6結(jié)束后需待儀

5、器冷卻后方可取出PCR儀里的試劑，取 出時(shí)用鍛子將試劑條夾出，注意勿要使管蓋打開，用 三個(gè)PE手套包好方可棄之。機(jī)器上不允許存放PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，每次實(shí)驗(yàn)后請(qǐng)自行及時(shí)清理PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。4. 4.7結(jié)束實(shí)驗(yàn)后，到配電房先把空調(diào)系統(tǒng)關(guān)掉, 再關(guān)掉排風(fēng)機(jī)，之后關(guān)掉送風(fēng)機(jī)。4. 4.8文件的處理: 當(dāng)天所做的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，當(dāng)天拷到部門電腦上處理，復(fù)制 一份將文件名改為記錄本上的命名。可將試驗(yàn)結(jié)果導(dǎo) 到PPT上，并標(biāo)記。4.5傳遞窗的使用4.5.1傳遞窗每天早上滅菌20分 鐘一次。當(dāng)天使用可不用再次滅菌。將試劑放到傳遞 窗時(shí)，在底下墊上一層手套。4. 6壓力監(jiān)控4. 6. 1每天早上空調(diào)運(yùn)行半小時(shí)后，記 錄

6、各PCR實(shí)驗(yàn)室的壓力差： 試劑準(zhǔn)備間： 50;標(biāo)本制 備間：-5-10;擴(kuò)增間:-10o各緩沖間的壓力為+5.4.7超凈臺(tái)的擺放 移液槍架 常用的實(shí)驗(yàn)試劑 消毒 液廢液缸放置標(biāo)本的離心管槍頭盒槍頭盒4.8實(shí)驗(yàn)室衛(wèi)生管理4.8. 1禁止非工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn) 室；參觀實(shí)驗(yàn)室等特殊情況須在實(shí)驗(yàn)室管理員協(xié)助下 進(jìn)行。4.8.2實(shí)驗(yàn)室內(nèi)各工作人員應(yīng)有個(gè)人防護(hù)意識(shí), 進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)應(yīng)更換工作服和鞋子，穿著整潔，不留長 指甲，不佩戴首飾，長發(fā)應(yīng)束于腦后；禁止在工作區(qū)飲 食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲(chǔ)存食物；禁止將個(gè) 人物品帶入實(shí)驗(yàn)室；實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)避免手 T 口，手 T 眼， 手 T 鼻接觸，以防止間接感染。4.

7、8.3實(shí)驗(yàn)結(jié)束后仍 需保留使用的物質(zhì)，應(yīng)移入具塞的容器中，并做好標(biāo)識(shí) 標(biāo)簽，并寫清楚名稱、濃度、配制日期、儲(chǔ)存溫度、有效期和配制人，并放置于相應(yīng)保存條件下；勿置室溫 過夜。4. 8.4每天配制使用濃度的消毒液，放于固定 地點(diǎn)，用于污染時(shí)消毒用，應(yīng)定期更換消毒液品種。4. 8. 5每天上班8點(diǎn)45分先關(guān)實(shí)驗(yàn)室紫外燈，然后開 啟風(fēng)扇，打開實(shí)驗(yàn)室走廊窗戶。每天9點(diǎn)前每間負(fù)責(zé) 人填寫冰箱溫濕度記錄表。4. 8. 6下午4點(diǎn)45分每 間負(fù)責(zé)人填寫實(shí)驗(yàn)室及冰箱溫濕度記錄表，清理實(shí)驗(yàn) 室衛(wèi)生，檢查實(shí)驗(yàn)室垃圾及廢液缸槍尖，生物垃圾放 置于生物安全垃圾桶內(nèi)，通知專門的垃圾轉(zhuǎn)運(yùn)車進(jìn)行 清除。在生物 安全垃圾桶周邊

8、噴灑84消毒液（按1:9或者1:10比例配制）。4.8.7每日衛(wèi)生打掃完后，在 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)噴灑84消毒液，噴灑完，待20分鐘過后,對(duì)實(shí) 驗(yàn)室儀器表面 及實(shí)驗(yàn)臺(tái)面要用干布擦拭一遍， 再用清 水清洗一遍，防止儀器被腐蝕。MX3000P儀器反應(yīng)孔用75%酒精棉球擦拭，擦拭完后用清水擦拭。4.8.8關(guān)閉 風(fēng)扇，開啟紫外燈，過夜。關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室走廊窗戶，噴灑84消毒液。4.8.9第一、二間實(shí)驗(yàn)室的3%鹽酸在實(shí) 驗(yàn)室內(nèi)配制，由當(dāng)周值日人員負(fù)責(zé)。4. 8. 10實(shí)驗(yàn)服的 清洗時(shí)間為每月的1、2、3、15、16. 17日，1、15 E洗第一間實(shí)驗(yàn)服,2、16日洗第 二間實(shí)驗(yàn)服,3、17日 洗第三間實(shí)驗(yàn)服，遇節(jié)假日順延。4. 8. 11每周對(duì)回風(fēng) 口過濾網(wǎng)進(jìn)行清洗，由當(dāng)周值日人員負(fù)責(zé)。4. 8.12如 遇加班，以上由加班人員負(fù)責(zé)；若有請(qǐng)假，請(qǐng)假人員需與其他人員協(xié)商調(diào)整，否則視為未執(zhí)行。4.8. 13以 上執(zhí)行情況每天都應(yīng)填寫記錄表，并由專人檢查確認(rèn) 簽字。5.0 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)5. 1. 1PCR實(shí)驗(yàn)室各室使用、進(jìn)入及單一流向制度，請(qǐng) 各位技術(shù)員不要貪方便，嚴(yán)格按照規(guī)程操作，以 免造 成嚴(yán)重后果。5.