工廠(chǎng)化生產(chǎn)金針菇液體菌種配方開(kāi)發(fā)及應(yīng)用

1、    工廠(chǎng)化生產(chǎn)金針菇液體菌種配方開(kāi)發(fā)及應(yīng)用    姚強(qiáng) 宮志遠(yuǎn) 司洪宇 黃春燕 韓建東 梁曉輝 張?jiān)?李瑾 謝紅艷摘要：針對(duì)山東地區(qū)金針菇工廠(chǎng)化、規(guī)?；a(chǎn)實(shí)際，以當(dāng)?shù)刂髟园咨疳樄狡贩N為供試菌株，以菌絲球直徑、密度及菌絲體干重為檢測(cè)指標(biāo)，以不同材料的碳源、氮源、維生素為影響因素，研究篩選適合本地生產(chǎn)的金針菇液體菌種培養(yǎng)基配方。結(jié)果表明：適宜金針菇栽培的最佳液體菌種培養(yǎng)基配方為：可溶性淀粉3%、豆奶寶0.33%、磷酸二氫鉀（kh2po4）0.080%、硫酸鎂（mgso4）0.075%和vb2  50 mg/l。關(guān)鍵詞：白色金針菇;液體菌種

2、;培養(yǎng)基中圖分類(lèi)號(hào)：s646.1+5  文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：a  文章編號(hào)：1001-4942（2020）11-0134-04formula development and application of liquid strain ofwthxflammulina velutipes in factory productionyao qiang1，gong zhiyuan1，si hongyu2，huang chunyan1，han jiandong1，liang xiaohui2，zhang yuanqi1，li jin1，xie hongyan1（1.institute of

3、agricultural resources and environment， shandong academy of agriculturalsciences/ key laboratory of wastes matrix utilization， ministry of agriculture and rural affairs， jinan 250100， china;2.energy research institute of shandong academy of sciences/ shandong keylaboratory of biomass gasification te

4、chnology， jinan 250000， china）abstract aiming at the factory and large-scale production of flammulina velutipes in shandong area， the local main cultivated white flammulina velutipes variety was used as test strain， the diameter， density and dry weight of mycelium were used as detection indicators，

5、and the carbon source， nitrogen source and vitamins were as the influencing factors to screen out the formula of flammulina velutipes liquid culture medium suitable for local production. the results showed that the best liquid culture medium formula for flammulina velutipes was 3% of soluble starch，

6、0.33% of soy milk treasure， 0.080% of potassium dihydrogen phosphate （kh2po4），0.075% of magnesium sulfate （mgso4） and 50 mg/l vb2 .keywords white flammulina velutipes; liquid strain; culture medium我國(guó)是最早人工栽培金針菇的國(guó)家。傳統(tǒng)的固體栽培模式受各方面條件和季節(jié)性限制較強(qiáng)，生產(chǎn)周期長(zhǎng)，操作步驟繁瑣，難以大規(guī)模機(jī)械化生產(chǎn)，制約著整個(gè)金針菇產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。近年來(lái)，食用菌工廠(chǎng)化生產(chǎn)以金針菇發(fā)展最為迅速1-3

7、。白色金針菇（flammulina velutipes）是一種低溫型、含鋅等微量元素高的優(yōu)質(zhì)食用菌4，5，屬真菌門(mén)擔(dān)子菌亞門(mén)蘑菇目口蘑科類(lèi)火菇屬，又有冬菇、金菇、構(gòu)菌、毛柄類(lèi)火菇、樸菇、智力菇之稱(chēng)，也是一種多糖類(lèi)物質(zhì)豐富、高蛋白低熱量的保健性食品，具有食療及藥用效果6-10。目前金針菇生產(chǎn)主要為液體菌種栽培模式，具有生長(zhǎng)周期短、出菇整齊、產(chǎn)量穩(wěn)定、成本低廉、效率高等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛認(rèn)可11-13。此外液體菌種有發(fā)育菌齡一致、操作便利、分散性強(qiáng)等特點(diǎn)，為金針菇規(guī)?；C(jī)械化生產(chǎn)提供了良好條件14，15。液體菌種栽培模式是金針菇產(chǎn)業(yè)一個(gè)重要應(yīng)用16，如何給予菌絲體最適生長(zhǎng)環(huán)境、最適營(yíng)養(yǎng)配比，使菇產(chǎn)量、

8、菇品質(zhì)達(dá)到理想狀態(tài)，是金針菇精準(zhǔn)化生產(chǎn)的重要研究方向之一。本試驗(yàn)針對(duì)山東地區(qū)金針菇工廠(chǎng)化、規(guī)?；a(chǎn)實(shí)際，以當(dāng)?shù)刂髟园咨疳樄狡贩N為供試菌株，以菌絲球直徑、密度及菌絲體干重為檢測(cè)指標(biāo)，以不同材料的碳源、氮源、維生素為影響因素，研究篩選適合本地生產(chǎn)的金針菇液體菌種培養(yǎng)基配方，以期為金針菇產(chǎn)業(yè)發(fā)展提供技術(shù)支撐。1 材料與方法1.1 試驗(yàn)材料本試驗(yàn)于2019年在山東省友碩生物科技股份有限公司進(jìn)行。1.1.1 菌種 白色金針菇（flammulina velutipes）sdm-12，由山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境研究所保藏并提供。1.1.2 培養(yǎng)基 斜面培養(yǎng)基17：馬鈴薯200 g/l，葡萄糖20

9、g/l，瓊脂20 g/l。碳源篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基：豆粕0.33%，硫酸鎂0.075%，磷酸二氫鉀0.080%，vb1 50 mg/l，ph自然。氮源篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基：白砂糖3%，硫酸鎂0.075%，磷酸二氫鉀0.080%，vb1 50 mg/l，ph自然。維生素篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基：白砂糖3%，豆粕0.33%，硫酸鎂0.075%，磷酸二氫鉀0.080%，ph自然。所用原料均為普通市售原料。1.1.3 儀器設(shè)備 主要有超凈工作臺(tái)、生化恒溫培養(yǎng)箱、全溫度恒溫培養(yǎng)振蕩器、高壓蒸汽滅菌鍋、500 ml三角瓶若干、試管若干、電子分析天平。1.2 培養(yǎng)方法取出試驗(yàn)所用菌種，無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)接試管，25生化培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)至

10、菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)斜面，挑選菌絲濃密、粗壯、無(wú)污染的試管種備用。1.3 試驗(yàn)方法1.3.1 不同碳源液體培養(yǎng)基對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)的影響 在各供試碳源篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別添加3%的葡萄糖、麥芽糖、白砂糖、可溶性淀粉、乳糖，試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)平行。置往復(fù)式搖床20、190 r/min培養(yǎng)7 d后，檢測(cè)菌絲球干質(zhì)量，確定最適碳源。1.3.2 不同氮源液體培養(yǎng)基對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)的影響 在各供試氮源篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別添加0.33%的豆面、豆粕、豆奶寶、蛋白胨、玉米粉，試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)平行。置往復(fù)式搖床20、190 r/min培養(yǎng)7 d后，檢測(cè)菌絲球干質(zhì)量，確定最適氮源。1.3.3 添加不同維生素的液體培養(yǎng)基對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)

11、的影響 在各供試維生素篩選基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別添加30 mg/l的vb1、vb2、vb6，試驗(yàn)設(shè)置3個(gè)平行。置往復(fù)式搖床20、190 r/min培養(yǎng)7 d后，檢測(cè)菌絲球干質(zhì)量，確定最適維生素。1.4 指標(biāo)檢測(cè)18，19菌絲球密度計(jì)數(shù)法：取培養(yǎng)液1 ml，用無(wú)菌水稀釋至10 ml，均勻后取1 ml平涂于平皿中，平皿底部襯深色背景計(jì)數(shù)。菌絲球干重法：取培養(yǎng)液100 ml，經(jīng)80目網(wǎng)篩過(guò)濾，洗滌至水變清后把菌絲放置在恒重過(guò)的定性濾紙上面，再置于80恒溫干燥箱中烘至恒重稱(chēng)重（期間23次測(cè)重，直至各次測(cè)重相同或差別在允許誤差范圍內(nèi)達(dá)標(biāo)）。ph值用ph計(jì)測(cè)定。生長(zhǎng)指標(biāo)觀(guān)測(cè)：培養(yǎng)7 d后觀(guān)察各搖瓶中菌絲球大小、

12、密度。菌絲球密集、體積多為5 mm以下均勻分布者菌絲生長(zhǎng)情況則為良好。2 結(jié)果與分析2.1 不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響由表1、圖1可知，不同碳源對(duì)于菌絲生長(zhǎng)的影響差異明顯。其中可溶性淀粉作為培養(yǎng)基碳源時(shí)菌絲干重為0.0167 g/ml，ph為6.30，菌絲球小、密度大，菌液清亮，生長(zhǎng)快;麥芽糖和白砂糖作為培養(yǎng)基碳源時(shí)效果相近，菌絲干重分別為0.0136、0.0122 g/ml，ph分別為6.44、6.58;乳糖和葡萄糖作為培養(yǎng)基碳源時(shí)菌絲干重分別為0.0094、0.0116 g/ml，ph分別為6.26、6.72。不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響大小依次為：可溶性淀粉>麥芽糖>白砂糖>

13、葡萄糖>乳糖，其中白砂糖成本最低。因此，金針菇工廠(chǎng)化生產(chǎn)過(guò)程中液體菌種制備培養(yǎng)基碳源首選可溶性淀粉，其次為白砂糖。2.2 不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響由表2可知，豆奶寶作為培養(yǎng)基氮源效果最好，菌絲干重為0.0173 g/ml，且菌絲球小、密度大，菌液清，菌絲生長(zhǎng)快;玉米粉作為培養(yǎng)基氮源，菌絲干重為0.0158 g/ml;豆面和豆粕作為培養(yǎng)基氮源，菌絲干重分別為0.0127、0.0155 g/ml;蛋白胨作為培養(yǎng)基氮源，菌絲干重為0.0151 g/ml。不同氮源對(duì)于菌絲生長(zhǎng)的影響大小依次為：豆奶寶>玉米粉>豆粕>蛋白胨>豆面。豆奶寶是以大豆為原料，經(jīng)過(guò)粉碎、去皮、浸提、

14、分離、洗滌、干燥等加工工藝，去除其油脂、低分子可溶性非蛋白組分后所制得的含有65%（干基）以上蛋白質(zhì)的產(chǎn)品。玉米粉內(nèi)含大量生物素，可為金針菇提供所需的維生素等。而豆粕因其來(lái)源及提取工藝差異影響，營(yíng)養(yǎng)成分有所不同;豆面則由大豆直接粉碎而成，其成分最為復(fù)雜且蛋白質(zhì)含量最低。早期研究表明豆面和豆粕中含有能抑制菌絲生長(zhǎng)的抗胰蛋白酶等物質(zhì)。本試驗(yàn)經(jīng)對(duì)比分析，表明作為氮源以豆奶寶效果為佳，其次為玉米粉。2.3 不同b族維生素對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響由表3可知，b族維生素中，vb2對(duì)金針菇菌絲生長(zhǎng)效果最好，菌絲干重為0.0121 g/ml，且菌液中菌絲球小，密度大，菌液清亮，菌絲生長(zhǎng)快;vb6同空白對(duì)照對(duì)菌絲生長(zhǎng)效

15、果不大。b族維生素對(duì)于菌絲生長(zhǎng)的影響大小依次為：vb2>vb1>vb6。本試驗(yàn)表明維生素添加以vb2效果為佳。3 討論與結(jié)論金針菇屬于低溫型木腐菌，不同的碳源、氮源種類(lèi)包括環(huán)境條件等因素都對(duì)其良好生長(zhǎng)發(fā)育有著直接影響。金針菇屬于b族維生素缺陷型菌株，b族維生素的補(bǔ)充對(duì)其菌絲生長(zhǎng)發(fā)育有很大影響。本試驗(yàn)基于金針菇菌株特殊營(yíng)養(yǎng)需求所作研究表明，適宜金針菇栽培的最佳液體菌種培養(yǎng)基配方為：可溶性淀粉3%、豆奶寶0.33%、磷酸二氫鉀（kh2po4）0.080%、硫酸鎂（mgso4）0.075%、vb2 50 mg/l。此配方培養(yǎng)的液體菌種菌絲球大小適中、密度大，菌液清亮且菌絲生長(zhǎng)快，有金針菇

16、特有的清香氣息。按照本試驗(yàn)所述培養(yǎng)環(huán)境條件培養(yǎng)67 d即可達(dá)到要求。該試驗(yàn)培養(yǎng)12 d時(shí)菌絲生長(zhǎng)緩慢，未見(jiàn)有特殊效果，屬于菌絲萌發(fā)期;24 d時(shí)菌絲生長(zhǎng)進(jìn)入快速期，菌絲生長(zhǎng)活力達(dá)到頂峰，57 d時(shí)隨著營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗和生長(zhǎng)空間等環(huán)境因素的影響，菌絲生長(zhǎng)速率下降并且趨于穩(wěn)定，菌絲球密度達(dá)到最適。該結(jié)果與郭欣欣20、張怡21等的研究結(jié)果相吻合，也進(jìn)一步闡釋了本試驗(yàn)結(jié)果的適宜性。此外，在工廠(chǎng)化生產(chǎn)過(guò)程中，由于配方成分對(duì)于無(wú)機(jī)鹽、維生素所需量較少，加上稱(chēng)量?jī)x器的準(zhǔn)確性有所不同等外在因素而導(dǎo)致存在偏差，可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果也有一定影響。參 考 文 獻(xiàn)：1 du h j，hu q h，yang w j，et al.

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