低濃度二氧化硫暴露對大鼠氣道感覺神經(jīng)的影響(1)

1、低濃度二氧化硫暴露對大鼠氣道感覺神 經(jīng)的影響 (1) 這篇低濃度二氧化硫暴露對大鼠氣道感覺神經(jīng)的影響 論文是程序自動抓取于互聯(lián)網(wǎng)上， 查看更多請點擊： 論文頻 道： lwxz/ 作者：林漢軍戚好文 方麗萍 【關(guān)鍵詞】 二氧化硫；免疫組化；感覺神經(jīng)； P 物質(zhì) 【 Abstract 】 AIM:Tostudythepathologicalchangesofairwayinjuryandt heeffectontheaxonreflexofsensorynervebythesulfurdio xide ( SO2 ) oflowconcentration.METHODS ： SixteenSDma

2、leratsweredividedrandomlyinto2groups: c ontrolgroupandSO2group.Thecontrolgroupwasexposedtop ureair.SO2groupwasexposedtoSO2attheconcentrationofm g/,6hdailyforconsecutive3d.At4thday,wecollectedtheb ronchoalveolarlavagefluid,plasmaandlungtissue.Thenw ecountedthetotalcellnumberinBALF,measuredtheplasmaS

3、Pcontentandperformedtheimmunohistochemicalstainingo nthelungtissue.RESULTS:Comparedwiththecontrolgroup, thetotalcellnumberinBALFandplasmaSPcontentinSO2grou pincreasedsignificantly.HEstainingshowedtherewereag reatdealofinflammatorycellinfiltrationunderthetunic amucosabronchiorum;andSPimmunohistochemi

4、calstaining indicatedtherewasasignificantincreaseinthenumberofS PIRpositivefibersinSO2group.CONCLUTION:Exposuretolo wconcentrationofSO2wouldinjurehealthyratairway,ando neofitsmechanismsisneurogenicinflammationthatcanexa cerbatestheresponseofairwayinflammation. 【 Keywords 】 sulfurdioxide;immunohistoc

5、hemistry;sensoryneuron;su bstanceP 【摘要】目的 : 探討低濃度 SO2 損傷大鼠氣道病理變化 和對感覺神經(jīng)軸突反射的影響 . 方法 :SD 雄性大鼠 16 只，隨 機(jī)分為對照組和 S02 組.對照組暴露于正?？諝庵?S02 組暴 露于 mg/濃度的 SO2室內(nèi)空氣中，每日 6h,連續(xù) 3d.第 4 日采 集血清、 收集支氣管肺泡灌洗液 , 留取肺組織 . 分別進(jìn)行 BALF 細(xì)胞計數(shù)，測血清中 P 物質(zhì)（SP）的含量，作肺組織病理切 片行 HE 及 SP 免疫組化染色.結(jié)果:SO2 組與對照組比較，BALF 中細(xì)胞總數(shù)明顯升高；血清 SP 含量顯著增加.肺組

6、織病理切 片 HE染色顯示 SO2組支氣管黏膜下有大量炎性細(xì)胞浸潤； 免疫組化染色提示 SO2 組 SP 免疫陽性神經(jīng)纖維數(shù)量明顯增 加.結(jié)論：SO2 是損傷氣道的重要病理因素， 氣道內(nèi)感覺神經(jīng) 參與了氣道損傷病理過程 . 關(guān)鍵詞】二氧化硫；免疫組化；感覺神經(jīng)； P 物質(zhì) 0 引言 二氧化硫（SO2 是大氣污染中的最主要成分，它是一 種辛辣、窒息性氣體，能使呼吸系統(tǒng)生理功能減退，肺泡彈 性減弱， 肺功能降低， 引起氣管炎、 支氣管哮喘、 肺氣腫等 . 特別是 SO2 與另一種空氣污染物-可吸入性顆粒物的協(xié)同作 用對人體健康危害性更大.流行病學(xué)調(diào)查顯示空氣中 SO2濃 度超過mg/m3顆粒物濃度

7、超過 mg/m3時，呼吸系統(tǒng)疾病 的住院率明顯上升 1. 對于已存在有呼吸系統(tǒng)疾病的患者， SO2 濃度升高可使患者咳嗽、咳痰、呼吸困難等癥狀加重， 以及肺功能下降2.但是 SO2 損傷氣道的相關(guān)病理機(jī)制并 不十分清楚.P 物質(zhì)是存在于氣道內(nèi)無髓鞘感覺神經(jīng) （C 纖維） 中的一種神經(jīng)肽， SP 釋放能增加氣道內(nèi)黏液分泌物的分泌以 及氣道平滑肌收縮 3 . 本實驗我們以模擬空氣污染中 SO2 的濃度作為刺激因子，通過吸入觀察 SO2 對氣道內(nèi)感覺神經(jīng) 的刺激作用及氣道形態(tài)學(xué)的改變，探討 SO2 損傷氣道誘發(fā)哮 喘及慢性氣管炎的機(jī)制，為呼吸系統(tǒng)疾病的防治以及環(huán)保的 治理提供理論依據(jù) . 1 材料和

8、方法 1.1 材料二級雄性 SD 大鼠，6 周齡，16 只，體質(zhì)量 g , 購自第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心 .1 X 10-7mL/LSO2 氣體購自 北京普萊克斯實用氣體有限公司；大鼠血清 SP 的 ELISA 檢 測試劑盒購自美國 RapidBioLab 公司；抗 SP 兔抗大鼠一抗 及免疫組化染色試劑盒購于武漢博士德生物有限公司 . 1 2 方法 12 1 動物分組將大鼠隨機(jī)分為 2 組即對照組和 SO2 組；每組 8 只. 對照組置于過濾空氣室內(nèi) .SO2 組暴露于 mg/ （甲醛吸收副玫瑰苯胺分光光度法） 濃度的 S02 室內(nèi)空氣中， 每日 6h, 連續(xù) 3d. 整個實驗過程控制溫度和

9、濕度變化在 10 以內(nèi).室內(nèi) S02 濃度由西安市室內(nèi)環(huán)境監(jiān)測站協(xié)助監(jiān)測 . 1. 2. 2 組織標(biāo)本制作實驗動物在 SO2 暴露結(jié)束后第 2 日后用戊巴比妥鈉麻醉， 從腹主動脈取血 4mL 注入試管中 凝固后分離血清，在 4C條件下，3000r /min 離心 10min , 取上清液，待測血清中 SP 含量.隨即結(jié)扎大鼠右肺，用 37 C 生理鹽水 2mL 作左肺支氣管肺泡灌洗 3 次，支氣管肺泡灌洗 液（BALF）回收率約 80% .BALF1500r / min 離心 10min，力口 入與 BALF 等體積的生理鹽水重懸沉淀的細(xì)胞， -20 C凍存. 分離心肺，將輸液器針從右心室刺入

10、肺動脈，動脈夾固定， 剪掉左心耳，先用生理鹽水量約 100mL 灌注，待流出液清亮 時，40mL/L 多聚甲醛 50mL 灌注，固定 24h,入 200g/L 蔗糖 PS 溶液中,4 C過夜恒冷箱切片，片厚分別為 8 卩 m 和 16 卩 m,待 做 HE 常規(guī)染色及免疫組化染色 . 1 . 2. 3BALF 細(xì)胞計數(shù)取 BALF 細(xì)胞懸液 1 滴置入血細(xì)胞 計數(shù)板中，光鏡下分別計數(shù)各組 BALF 中細(xì)胞總數(shù). 1. 2. 4 血清 SP 含量測定取血清上清液，用 ELISA 法測 血清 SP 含量，具體操作步驟參照 ELISA 試劑盒說明進(jìn)行. 1. 2. 5 病理觀察取 8 卩 m 冰凍切

11、片，常規(guī) HE 染色，顯 微鏡下觀察 . 1.2.6 免疫組化染色取 16 卩 m 冰凍切片，室溫下干燥， 甲醇雙氧水封閉組織內(nèi)過氧化物酶，小牛血清封閉非特異性 抗體，加入 1 : 200 兔抗大鼠 SP 抗體，4 C過夜，滴加鏈親 和霉素復(fù)合物（SABC,最后以葡萄糖氧化酶 DAB 硫酸鎳銨 法顯色 . 常規(guī)脫水、 透明、封片 . 顯微鏡下計數(shù)細(xì)支氣管內(nèi) 直 徑卩m SP 免疫陽性神經(jīng)纖維數(shù).對照組以 PBS 代替 1 : 200 兔抗大鼠SP 抗體，其余步驟相同. 統(tǒng)計學(xué)處理： 所有數(shù)據(jù)以 x s 表示，采用 SPSS 統(tǒng)計 軟件進(jìn)行處理，組間比較采用 t 檢驗，組間方差不齊時采用 t 檢驗，P0. 05 認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)差異. 2 結(jié)果 2.1BALF 細(xì)胞總數(shù)對照組（n=8）為X 106/L ,S02 組（n=8） 為X 106/L, 兩組比較，SO2 組 BALF 細(xì)胞總數(shù)顯著升高. 血清 SP 含量對照組（n=8）為 pg/L , SO2 組（n=8）為 pg/L，兩組比較，S