抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)原則

1、抗腫瘤藥物藥效學(xué)指導(dǎo)原則一、基本原則1. 抗腫瘤藥物分類(1) 細(xì)胞毒類藥物 (cytotoxic agent) ：包括干擾核酸和蛋白質(zhì)合成、抑制拓?fù)?異構(gòu)酶及作用于微管系統(tǒng)的藥物等；(2) 生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑 (biological response modifier)；(3) 腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑 (resistance reversal agent) ；(4) 腫瘤治療增敏劑 (oncotherapy sensitizer)；(5) 腫瘤血管生成抑制劑 (tumor angiogenesis inhibitor)；分化誘導(dǎo)劑 (differentiation inducing agent) ；(7

2、) 生長(zhǎng)因子抑制劑 (growth factor inhibitor) ；反義寡核苷酸 (antisense oligonucleotide) 。2. 抗腫瘤藥物藥效學(xué)需研究?jī)?nèi)容2.1 包括體外抗腫瘤試驗(yàn)，體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)。2.2 評(píng)價(jià)藥物的抗癌活性時(shí)，以體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果為主，同時(shí)參考體外試驗(yàn)結(jié)果以 做出正確的結(jié)論。2.3 I 類抗腫瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥物作用機(jī)制初步研究。二、體外抗腫瘤活性試驗(yàn)1. 試驗(yàn)?zāi)康?.1 對(duì)候選化合物進(jìn)行初步篩選；1.2 了解候選化合物的抗瘤譜；1.3 為隨后進(jìn)行的體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)提供參考，如劑量范圍、腫瘤類別等2. 試驗(yàn)方法選用 10-15 株人癌細(xì)胞株，根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康倪x擇相應(yīng)細(xì)

3、胞系及適量的細(xì)胞接種濃度，按常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行培養(yǎng)；推薦使用四氮唑鹽MTT還原法、XTT還原法、磺酰羅丹明 B(SR 染色法、或 51Cr 釋放試驗(yàn)、集落形成法等測(cè)定藥物的抗癌作 用。藥物與細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)間一般為 48-72 小時(shí)，貼壁細(xì)胞需先貼壁 24 小時(shí)后 再給藥。試驗(yàn)應(yīng)設(shè)陽性及陰性對(duì)照組，陽性對(duì)照用一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)抗腫瘤藥， 陰性對(duì)照為溶媒對(duì)照。3. 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) 以同一樣品不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制率作圖可得到劑量效應(yīng)曲線，然后采用 Logit法計(jì)算半數(shù)有效濃度(IC50值或EC50值)。體外試驗(yàn)至少重復(fù)一次。附注：評(píng)價(jià)藥物抗癌活性的方法：1. MTT 還原法1.1 基本原理：四 氮 唑 MTT

4、,3-(4,5-dimethylibiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-tetrazoliumbromide是一種能接受氫原子的染料?；罴?xì)胞線粒體中與NADP相關(guān)的脫氫酶在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的MTT轉(zhuǎn)化成不溶性的藍(lán)紫色的甲月替(formazan)，而死的 細(xì)胞則無此功能。用二甲基亞諷(DMSO溶解甲月替后，在一定波長(zhǎng)下用酶標(biāo) 儀測(cè)定光密度值，即可定量測(cè)出細(xì)胞的存活率。1.2 操作步驟 :，用胰酶消化后，用含 10小牛血清的 RPMI l640 培養(yǎng)基配成 5000 個(gè) ml 的 細(xì)胞懸液，接種在96孔培養(yǎng)板中，每孔接種200卩l(xiāng) , 37C, 5% C02培養(yǎng)24 h。1.2.2 實(shí)

5、驗(yàn)組換新的含不同濃度被測(cè)樣品的培養(yǎng)基，對(duì)照組則換含等體積溶劑的培養(yǎng)基，每組設(shè)35平行孔，37C, 5% CO2培養(yǎng)45 d。棄去上清液，每孔加入200卩I新鮮配制的含0.2 mg /ml MTT的無血清 培養(yǎng)基.37C繼續(xù)培養(yǎng)4 h。小心棄上清，并加入 200卩I DMSO,用微型超聲 振蕩器混勻后，在酶標(biāo)儀上以試驗(yàn)波長(zhǎng)為 570 nm,參比波長(zhǎng)為450 nm測(cè)定光密 度值。1.3 結(jié)果評(píng)定 :按下式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率：腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率= （1- OD實(shí)驗(yàn)/OD對(duì)照）X 100% 以同一樣品的不同濃度對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率作圖可得到劑量反應(yīng)曲線，從中 求出樣品的半數(shù)殺傷濃度IC50

6、。合成化合物或植物提取純品的IC50V 10卩g/ m1或植物粗提物的IC50 V 20卩g/m1時(shí)，貝卩判斷樣品在體外對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷 作用。2. 生長(zhǎng)曲線法的基本原理：在最適條件下，腫瘤細(xì)胞在培養(yǎng)液中呈指數(shù)生長(zhǎng)，如取細(xì)胞數(shù)的對(duì)數(shù)與培養(yǎng)時(shí) 間作圖可得一條直線，故稱此時(shí)為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。隨著細(xì)胞密度不斷增高，由于 代謝產(chǎn)物的積聚及營養(yǎng)物的消耗，細(xì)胞生長(zhǎng)逐漸減慢以致停止，此時(shí)稱高坪期 或穩(wěn)定期。因此藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響可通過生長(zhǎng)曲線反映出來。3. 染料排斥試驗(yàn)的基本原理： 活細(xì)胞有排斥某些染料如伊紅、臺(tái)盼藍(lán)、苯胺黑等的能力，而死細(xì)胞由于膜完 整性的破壞，可被著色。因此培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞中加入這些染料，一

7、定時(shí)間后， 對(duì)著色和未著色的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，即可算出被殺死的細(xì)胞比例。4. 集落形成法的基本原理： 克隆原細(xì)胞具有持續(xù)增殖能力，當(dāng)單個(gè)細(xì)胞分裂 6 代或 6 代以上時(shí)，其后代所 組成的群體 (集落)便含 50 個(gè)以上細(xì)胞。通過集落計(jì)數(shù)可對(duì)克隆原細(xì)胞作定量分 析。它反映了單個(gè)細(xì)胞的增殖潛力，故能較靈敏地測(cè)定抗癌藥的活性，日前被 認(rèn)為是一種較理想的檢測(cè)方法。常用的集落形成法可分為貼壁法及半固體培養(yǎng) 法兩種。5. SRB 法的基本原理：SRB(sulforhodamine 是一種蛋白質(zhì)結(jié)合染料，粉紅色，可溶于水。 SRB 可與生物大分子中的堿性氨基酸結(jié)合。其在 515 nm波長(zhǎng)的0D讀數(shù)與細(xì)胞數(shù)呈良好

8、的 線性關(guān)系。故可用作細(xì)胞數(shù)的定量。 MTT法的一個(gè)缺點(diǎn)是0D直可隨放置時(shí)間而 變，而SRB法無此現(xiàn)象。因此更適用于進(jìn)行大規(guī)模的試驗(yàn)。三、體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn) 體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)必須選用三種以上腫瘤模型，其中至少一種為人癌裸小鼠移植 模型或其它人癌小鼠模型。試驗(yàn)結(jié)果三種模型均為有效，再重復(fù)一次也為有效， 評(píng)定該化合物對(duì)這些實(shí)驗(yàn)性腫瘤具有治療作用。鼓勵(lì)使用人類腫瘤裸鼠移植瘤模型和多種類的移植瘤模型、原位接種模型和中 空纖維測(cè)定 (hollow-fiber assay)等方法。1. 動(dòng)物 動(dòng)物要求健康，符合等級(jí)動(dòng)物要求，有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證。雌雄均可，但同一批 實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物性別必須相同。小鼠鼠齡為 5-6 周，體

9、重為 18-22 克。評(píng)價(jià)同一物 質(zhì)的活性時(shí)，不同批次的實(shí)驗(yàn)必須采用同一品系的小鼠。2. 腫瘤模型2.1 小鼠腫瘤模型淋巴細(xì)胞白血病腹水瘤 L1210和P388白血病L-615、宮頸癌U14肝癌H22Lewis肺癌、黑色素瘤B16、網(wǎng)織細(xì)胞瘤M5076腸癌26、腸腺癌38、乳腺癌CD8F1艾氏腹水瘤(EAC、肉瘤-180等，以及各種小鼠腫瘤的亞型和耐藥株等。2.2 人癌裸小鼠移植瘤模型 應(yīng)選用體外試驗(yàn)敏感細(xì)胞株進(jìn)行體內(nèi)抗人癌裸小鼠移植瘤試驗(yàn)。 模型建立和使 用應(yīng)注意：(1) 移植瘤一般由相應(yīng)的細(xì)胞株移植而建立，對(duì)細(xì)胞株和移植瘤的化療敏感性 應(yīng)予了解。(2) 移植瘤復(fù)蘇后一般應(yīng)傳 2-3 代后再

10、用于體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)。(3) 對(duì)模型生長(zhǎng)情況應(yīng)全面了解，尤其是生長(zhǎng)快的模型(4) 為了保持移植瘤的生物學(xué)特性和遺傳特性，復(fù)蘇后移植瘤體內(nèi)傳代應(yīng)少于15-20 代3. 試驗(yàn)過程3.1 接種： 腫瘤接種方法主要有皮下接種、腹腔接種和原位接種。3.1.1 皮下腫瘤模型 選擇腫瘤生長(zhǎng)旺盛且無潰破的荷瘤小鼠，頸椎脫臼處死，在無菌條件下（超凈 臺(tái)或接種罩），用碘酒、酒精或新潔爾滅消毒動(dòng)物皮膚，切開皮膚，剝離腫瘤。 將瘤組織剪成 1.5 mm3 左右，用套管針接種于動(dòng)物一側(cè)或雙側(cè)腋窩皮下；或制 成細(xì)胞懸液，然后按一定比例加入無菌生理鹽水，一般每只小鼠接種腫瘤細(xì)胞 數(shù)量為（1-5） x 106。3.1.2 腹水

11、瘤模型 無菌條件下，消毒動(dòng)物皮膚，吸取生長(zhǎng)良好的動(dòng)物腹水，以生理鹽水按一定比 例稀釋后接種于動(dòng)物腹腔，接種細(xì)胞數(shù)量一般為（1-5）x 106。3.1.3 原位接種模型 原位接種是指將來源于某臟器的腫瘤接種在動(dòng)物的某臟器，如將人肝癌接種在 裸小鼠的肝臟。原位接種不是常規(guī)的方法，但有其優(yōu)越性，是鼓勵(lì)使用的方法。 主要有肺、肝、胃、腸、乳腺、顱內(nèi)等原位接種方法。3.2 動(dòng)物分組3.2.1 試驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組、治療組。3.2.2 治療組設(shè)高、中、低三個(gè)劑量組。小鼠腫瘤和腹水瘤接種后次日將動(dòng)物 隨機(jī)分組，裸鼠移植瘤用游標(biāo)卡尺測(cè)量移植瘤直徑， 待腫瘤生長(zhǎng)至 100300mm3 后將動(dòng)物隨機(jī)分組。

12、3.2.3 動(dòng)物數(shù)普通小鼠每組 10 只，裸鼠 6 只。 陰性對(duì)照組動(dòng)物數(shù)為治療組動(dòng)物數(shù)X實(shí)驗(yàn)組數(shù)1/23.3 劑量設(shè)置3.3.1 治療組設(shè)高、中、低劑量治療組，一般按 4:2:1 設(shè)置，高劑量使用最大 耐受量或 LD 1 0的劑量。3.3.2 陰性對(duì)照組給予相應(yīng)的溶劑；3.3.3 陽性對(duì)照藥選用對(duì)該動(dòng)物敏感的、臨床應(yīng)用的抗腫瘤藥物，3.3.4 如受試物為一抗癌藥物的衍生物或類似物時(shí)，必須選用該抗癌藥物作為 陽性對(duì)照藥。3.4 陽性對(duì)照藥選擇原則療效確切；與被試物質(zhì)化學(xué)結(jié)構(gòu)類似；與被試物質(zhì)有類似的作用機(jī)理3.5 藥物配制 溶于水的藥物，用生理鹽水或蒸餾水配制；如用酸、堿溶解者，可先用小量酸(0

13、.1-0.5N HCI)或堿(NaHC03 Na2CO3 NaOH溶解，調(diào)節(jié) pH在 4.5-9.0 的范圍 內(nèi)。用乙醇、丙二醇、吐溫80、DMS助溶的藥物，或用吐溫60、吐溫80、2-3% 淀粉、 0.5%羧甲基纖維素制成混懸液的藥物，可腹腔注射或口服，但必須設(shè)相 同濃度的溶劑對(duì)照組。用注射用花生油配制的溶液或乳劑可口服、皮下或肌肉 注射。3.6 給藥方案和給藥途徑 分組當(dāng)日開始給藥，根據(jù)不同藥物的代謝動(dòng)力學(xué)和毒性反應(yīng)等確定給藥方案。給藥途徑應(yīng)與推薦臨床用藥的途徑相同。 給藥次數(shù)較多，或被試物質(zhì)溶解性較 差，靜脈給藥有困難時(shí)，可考慮使用腹腔給藥，但在評(píng)價(jià)藥效時(shí)要注意這兩種 給藥途徑是有差別的

14、。 可采取瘤周、瘤內(nèi)、肌肉、皮下給藥途徑。腹水瘤試驗(yàn) 時(shí)一般不能應(yīng)用腹腔給藥途徑。4 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)4.1 腹水瘤模型 接種給藥后，觀察和記錄動(dòng)物死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。如陰性對(duì)照組20%動(dòng)物存活時(shí)間超過 4 周，表明腹水瘤生長(zhǎng)不良，實(shí)驗(yàn)作廢。采用中位生存時(shí)間(即 median survival time,MST )來評(píng)價(jià)每組的生存時(shí)間 ， 其計(jì)算公式為：每組鼠數(shù)的中間數(shù) - 中間生存天數(shù)前死亡的鼠數(shù)MST=(中間生存天數(shù)-0.5 ) +中間生存天數(shù)死亡的鼠數(shù)治療組與對(duì)照組的比較，采用 T/C( %)來表示，計(jì)算公式為：T MSTT/C % =X 100%C MSTT MST治療組MST; C MS

15、T陰性對(duì)照組 MST評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)以125%界，當(dāng)T/C%> 125%時(shí)。視為有效，反之則無效。4.2 裸鼠移植瘤模型 推薦使用測(cè)量瘤徑的方法，動(dòng)態(tài)觀察受試物抗腫瘤的效應(yīng)。腫瘤直徑的測(cè)量次 數(shù)根據(jù)移植瘤的生長(zhǎng)情況而定，一般為每周 2-3 次, 每次測(cè)量同時(shí)還需稱鼠重。 腫瘤體積 (tumor volume,TV) 的計(jì)算公式為：V = 1/2 x aX b2 或 n /6 x ax bXc其中 a、b、c 分別表示長(zhǎng)寬高。兩公式的相關(guān)性極好，可采用任一公式。 根據(jù)測(cè)量結(jié)果計(jì)算出相對(duì)腫瘤體積( relative tumor volume，RTV)， RTV = Vt / VO。其中VO為分籠給藥

16、時(shí)(即dO)測(cè)量所得腫瘤體積，Vt為每一次測(cè)量時(shí)的 腫瘤體積?？鼓[瘤活性評(píng)價(jià)指標(biāo)為相對(duì)腫瘤增殖率 T/C(%) TRTVT/C % =X 100%CRTVTRTV治療組RTV ; CRTV陰性對(duì)照組 RTV療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：T/C % >60 %為無效；T/C % < 60%并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 PV0.05為 有效。4.3 小鼠腫瘤模型 生長(zhǎng)較慢小鼠腫瘤采用與裸鼠移植瘤同樣的測(cè)量瘤徑的評(píng)價(jià)方法。 生長(zhǎng)較快小鼠腫瘤可采用稱瘤重的方法評(píng)價(jià)。試驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，稱體重， 解剖剝離瘤塊，稱瘤重。陰性對(duì)照組腫瘤平均瘤重小于 1 克，或 20%腫瘤重量小 于 400毫克，表示腫瘤生長(zhǎng)不良，試驗(yàn)作廢。療

17、效評(píng)價(jià)公式：X 100%給藥組平均瘤重-陰性對(duì)照組平均瘤重腫瘤生長(zhǎng)抑制率二 陰性對(duì)照組平均瘤重評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤生長(zhǎng)抑制率40%為無效；腫瘤生長(zhǎng)抑制率40%并經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 PV0.05 為有效。4.4原位接種模型不同原位接種模型可采用不同評(píng)價(jià)方法，主要有瘤重和生存時(shí)間評(píng)價(jià)法。如肝 原位接種可用瘤重評(píng)價(jià)，顱內(nèi)接種可用生存時(shí)間評(píng)價(jià)。評(píng)價(jià)方法、標(biāo)準(zhǔn)和注意 事項(xiàng)同腹水瘤模型和小鼠腫瘤模型。四、抗腫瘤藥物的特殊要求I類抗腫瘤新藥應(yīng)進(jìn)行藥物作用機(jī)制的初步研究。 非細(xì)胞毒類藥物除完成體內(nèi)外 抗腫瘤試驗(yàn)，還應(yīng)進(jìn)行特定抗腫瘤作用研究。1.生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑藥效學(xué)包括：體內(nèi)抗癌試驗(yàn)和免疫功能研究。1.1體內(nèi)抗癌試驗(yàn)注意點(diǎn)

18、：模型：裸鼠是免疫缺陷動(dòng)物，一般應(yīng)用正常免疫鼠腫瘤模型。給藥時(shí)間：可按常規(guī)給藥，也可在接種前預(yù)先給藥，接種后繼續(xù)給藥或停藥。腫瘤細(xì)胞接種量：可比細(xì)胞毒類藥物低一個(gè)數(shù)量級(jí)， 一般為(1-5)105個(gè)瘤細(xì)胞/小鼠。給藥方法：可單獨(dú)給藥，也可與其它抗腫瘤藥物合并使用，觀察增效或減毒作 用。1.2 免疫功能試驗(yàn)方法具有抑瘤作用的生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，還需作免疫功能測(cè)定 , 以明確其抑瘤作用是否 與免疫功能調(diào)控有關(guān)。免疫功能測(cè)定包括細(xì)胞免疫和體液免疫兩方面。 免疫功能測(cè)定有：（ 1） 巨噬細(xì)胞功能測(cè)定（ 2） 天然殺傷細(xì)胞 （natural kill cell）測(cè)定（ 3） 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（ 4） 淋巴因子

19、活化的殺傷細(xì)胞測(cè)定 （lymphocyte- activated killer cell）（5） 各種細(xì)胞因子測(cè)定，如 IL-2、IL-6、IL-12、IFN- 丫、TNF-a 等。（ 6） 遲發(fā)型超敏反應(yīng)檢測(cè)2. 腫瘤耐藥逆轉(zhuǎn)劑2.1 體外抗耐藥活性試驗(yàn)選擇2-3對(duì)腫瘤耐藥/敏感細(xì)胞株，采用MTT法或SRB法測(cè)定細(xì)胞毒性。一般在 無毒劑量或相當(dāng)于 IC 1 0的劑量下設(shè)三個(gè)劑量， 并設(shè)立相應(yīng)的陽性和陰性對(duì)照組。評(píng)價(jià)逆轉(zhuǎn)效果用逆轉(zhuǎn)倍數(shù)（fold reversal, FR）表示：FR=IC50（不加逆轉(zhuǎn) 劑）/IC50（加逆轉(zhuǎn)劑）。注意的方面：耐藥株的耐藥性：耐藥株因傳代，尤其是撤藥后耐藥性可改

20、變或消失；試驗(yàn)前必須對(duì)試驗(yàn)?zāi)退幹赀M(jìn)行耐藥倍數(shù) (FR) 測(cè)定，確保試驗(yàn)的可靠性。若非逆轉(zhuǎn)多藥 耐藥 (MDR) 而是逆轉(zhuǎn)單藥耐藥，則實(shí)驗(yàn)的瘤株中需有針對(duì)該藥的耐藥細(xì)胞株。 陽性對(duì)照藥建議采用維拉帕米(verapamil) 10 卩M環(huán)孢菌素 A (cyclosporin A) 3 卩 M。2.2 體內(nèi)抗腫瘤耐藥活性試驗(yàn)小鼠敏感和對(duì)應(yīng)的耐藥腫瘤和人癌裸鼠敏感和對(duì)應(yīng)的耐藥移植瘤。2.3 耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)物測(cè)定 可測(cè)定腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度變化和耐藥基因及其表達(dá)產(chǎn)物，初步明確其逆轉(zhuǎn) 耐 藥 機(jī) 制 。 包 括 多 藥 耐 藥 基 因 及 其 編 碼 蛋 白 (multidrug resistance

21、gene/p-glycoprotein,Mdr1/Pgp)resistance-related多 藥 耐 藥 相 關(guān) 蛋 白 (multidrugprotein, MRP) 、 肺 耐 藥 相 關(guān) 蛋 白 (lungresistance-related protein, LRP)、其它與耐藥相關(guān)的基因 / 蛋白及酶等。3. 抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物 腫瘤是否轉(zhuǎn)移不僅依賴于腫瘤細(xì)胞本身具有的內(nèi)在轉(zhuǎn)移潛能，而且也取決于機(jī) 體抗轉(zhuǎn)移因素的消長(zhǎng)。所以，抗轉(zhuǎn)移藥物只有在動(dòng)物體內(nèi)模型上才能得出符合 實(shí)際的結(jié)果。3.1 體外試驗(yàn)測(cè)定候選化合物作用下腫瘤細(xì)胞對(duì)基底膜的侵襲、粘附和腫瘤細(xì)胞趨化性運(yùn)動(dòng) 的能力。3.2 體內(nèi)

22、試驗(yàn)小鼠 B16 黑色素瘤、小鼠 Lewis 肺癌等和人癌裸鼠移植高轉(zhuǎn)移瘤模型。3.2.2 接種方法： 常用靜脈注射方法，也可用皮下接種等方法。3.2.3 評(píng)價(jià)指標(biāo) 接種給藥后，觀察記錄動(dòng)物死亡時(shí)間，計(jì)算生存天數(shù)。試驗(yàn)結(jié)束后，稱動(dòng)物體 重、肺重、移植瘤重，解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)肺轉(zhuǎn)移瘤灶、測(cè)瘤徑 （ 計(jì)算肺轉(zhuǎn)移瘤體 積）和病理組織學(xué)切片觀察等；計(jì)算轉(zhuǎn)移率轉(zhuǎn)移抑制率二1 -（ 治療組轉(zhuǎn)移率/對(duì)照組轉(zhuǎn)移率）X 100%4. 腫瘤血管生成抑制劑4.1 體外試驗(yàn) 體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ陀?:（ 1 ）人血管內(nèi)皮細(xì)胞模型： 人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞和人微血管（肺、皮膚等）內(nèi)皮細(xì)胞。（2）血管形成促進(jìn)因子等刺激細(xì)胞DNA合成

23、、增殖、遷移、血管形成（tube或堿性成纖formation） 來觀察藥物的抗血管形成作用。如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF) 維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 (basic fibroblast growth factor,bFGF)(3)腫瘤細(xì)胞模型：主要應(yīng)用國內(nèi)已建立的人實(shí)體癌細(xì)胞系，確定VEGF FGF等高分泌的細(xì)胞株。檢測(cè)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移能力及血管形成因子的基因表達(dá)狀況來評(píng)價(jià)藥物。4.2 體內(nèi)試驗(yàn)4.2.1 血管抑制試驗(yàn)經(jīng)典的血管形成評(píng)價(jià)方法有：雞絨毛膜尿囊和卵黃膜囊( CAM、嚙齒動(dòng)物虹膜 和角膜等。也可用如皮下移植塑料或多孔的 polytetrafluoroethylene 管、皮 下移植無菌的海綿； 一些自然的或化學(xué)修飾的物質(zhì)如 Matrigel 和纖維凝膠等用 于體內(nèi)模型。4.2.2 抗腫瘤試驗(yàn) 通過觀察新生血管生成抑制劑的體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)檢測(cè)移植瘤的血管密度、血管 生成因子和抑制因子的分泌和表達(dá)，以及腫瘤的轉(zhuǎn)移情況等綜合評(píng)價(jià)腫瘤血管 生成抑制劑的作用和作用機(jī)制。5. 分化誘導(dǎo)劑 分化誘導(dǎo)劑的藥效學(xué)研究包括體外和體內(nèi)研究模型；目前的藥物主要能對(duì)急性 白血病進(jìn)行有效的分化治療。陽性對(duì)照藥選用維甲酸類 (