消化道平滑肌生理特性及藥物對平滑肌收縮的影響

1、消化道平滑肌生理特性及藥物對平滑肌收縮的影響【目的和原理】觀察家兔離體胃腸平滑肌的電生理特性和一般特性；熟悉哺乳動物離體器官灌 流的一種方法；觀察不同濃度乙酰膽堿對家兔離體腸平滑肌的作用及阿托品對乙酰 膽堿的拮抗作用；熟悉研究藥物量效關系的實驗方法。消化道平滑肌具有自動節(jié)律性，較大的伸展性，對化學物質、溫度改變及牽張刺 激較為敏感等一般生理特性。電位變化方面，消化道平滑肌除了具有一般可興奮組 織的靜息電位和動作電位，還有其特有的慢波電位。乙酰膽堿通過激動腸管平滑肌上的M型膽堿受體可引起腸管平滑肌收縮，在一定劑量范圍內，其收縮強度呈劑 量 依賴性。阿托品作為M型膽堿受體阻斷劑，可競爭性地拮抗乙酰

2、膽堿對 M受體的 激動作用?！緦嶒瀸ο蟆?家兔，體重2.53.0Kg。【實驗器材和藥品】 超級恒溫器、恒溫浴管、BL-410生物機能實驗系統(tǒng)、木 槌、萬能支架臺、雙凹夾2個、溫度計、燒杯、石蠟作底面的表面皿、玻璃微電極、Ag-AgCl電極絲、張力換能器、注射器(1.0ml7支、注射針頭、手術器械、 蛙心夾、彈簧夾、 兔手術臺。臺氏液、1:10,000腎上腺素、1N NaOH、1N HCl、 不同濃度(3X10-1、3X10-3、3X10-5、3X10-7、3X10-9、3X10-11mol/L 氯化乙酰 膽堿?！緦嶒灢襟E和觀察項目】1.標本制作及實驗裝置準備(1首先裝好超級恒溫器和恒溫浴管，恒

3、溫浴管是循環(huán)供液式，恒溫工作點定在 室溫20o Co調節(jié)出氣管，使氣泡一個一個、不斷地逸出。(2用木槌猛擊家兔頭枕部致昏，迅速剖開腹腔，找出胃與十二指腸交界處，用線 結扎,將與十二指腸相連的腸系膜沿腸緣剪開，在結扎線近胃側剪斷小腸，立即取出長約2030cm的腸管。把離體腸管置于4o C的臺氏液中輕輕漂洗將腸內容物 沖洗干 凈,并將腸管剪成23cm數(shù)段，再換臺氏液備用。(3連接標本及記錄：輕取一段離體腸管標本，一端連于L型管的小鉤上，另一端 用蛙心夾與張力換能器相連。掛好腸管后穩(wěn)定約10min開機進入程序，可以描1記一段離體腸平滑肌正常收縮曲線。2.電生理特性觀察：(1灌制微電極：配置2N KC

4、l溶液做為電極液，拉制玻璃微電極，充入電極 液，使微 電極尖端無氣泡，電極電阻1030MD 。(2輕取一段離體腸管標本，放于盛有臺氏液的表面皿中，剪開腸管，用小鋼針將 標本固定在石蠟底面上，不要過分牽拉。表面皿中臺氏液略高于標本表面約1mm。(3將微電極安裝到微電極操縱器上，并將一根Ag-AgCl電極絲插入玻璃微電 極內，電極絲另一端連于微電極放大器、極輸入端。微電極放大器的-"極輸入端接參考電極，與表面皿中臺氏液接通。(4開機進入程序，降下微電極，使其尖端刺入平滑肌細胞內，觀察電位變化。3. 一般特性觀察：(1記錄腸管在室溫臺氏液里的活動。(2將臺氏液溫度逐漸升高至38o C,記錄

5、腸管運動的變化。(3待臺氏液溫度穩(wěn)定于38o C后，加腎上腺素(1:10, 000 1-2滴于浴管中，觀察 腸管運動的變化。在觀察到有明顯效應后，立刻用38o C臺氏液沖洗3次，使腸管活 動恢復正常。(4同法，分別加入1N NaOH溶液1-2滴;1N HCl溶液1-2滴，觀察對腸管 運動的 影響(5用含Ca 2+臺氏液沖洗3次,換入無Ca 2+臺氏液，觀察腸管運動變化(6將結果填入下表。家兔離體小腸平滑肌一般生理特性觀察項目緊張性收縮頻率收縮幅度室溫臺氏液38o C臺氏液1:10,000腎上腺2素1N NaOH1N HCl38o C無Ca 2+臺氏液注:表中虛線上方各項內容均為在含 Ca 2+

6、臺氏液的條件下進行4.乙酰膽堿量效關系曲線的描繪及阿托品對乙酰膽堿競爭性拮抗作用的觀察(1準備實驗裝置：此裝置由恒溫、供氣和排液以及記錄部分組成。恒溫部分 控制水浴 溫度38土 C。供氣部分由L型通氣管和氣源組成，氣流量以12個氣泡/秒為宜.供 液及排液部分主要是水浴管，具下端連有膠管及膠管夾以供排液使用，其上口端可隨 時充人新的恒溫營養(yǎng)液。(2連接標本1在1通道的輸入接口上安裝好張力傳感器2輕取一段離體腸管標本，一端連于通氣管L型的小鉤上，另一端連于張力換能 器上的L型的小鉤上，然后將標本懸浮在盛有30ml臺氏液的浴管中。(3設置計算機：1打開計算機,選才¥ BL-410生物機能實

7、驗系統(tǒng)。2選擇輸入信號”菜單中的“感道”子菜單。3在“通道”子菜單中選擇 張力”信號。4設置增益(一般為50、濾波(一般為30Hz、T(一般為DC、速度(一般為6。(4記錄一給藥一沖洗:開始一記錄正常平滑肌收縮曲線。1使用鼠標單擊工具條上的 開始”命令按鈕。2記錄正常平滑肌收縮曲線后，從低濃度開始，依次向浴管內加入各濃度的乙 酰 膽堿，同時選擇 通用標記”命令，記錄給藥后的平滑肌收縮曲線，每次加入乙 酰膽堿， 待離體腸平滑肌收縮幅度達到最大后，用臺氏液沖洗三次，使腸管恢復到 給藥前狀態(tài)， 然后再加入下一個濃度的乙酰膽堿，每次沖洗時一定選擇暫停"命3令按鈕，以減少對張力傳感器的刺激。3

8、給予各濃度乙酰膽堿后，腸管經(jīng)沖洗恢復正常，再用含有阿托品的臺氏液沖 洗, 然后以含有阿托品的臺氏液作為營養(yǎng)液重復步驟 (2 o4記錄結束后,選擇 停止”命令按鈕，起文件名保存實驗結果。(5求出Di和Ei:計算Di均以xi0-6mol/L為單位，效應E以克為單位。(計算機 內部計算時，會自動將Di轉化為mol/L進行計算。(6數(shù)據(jù)處理:選擇數(shù)據(jù)處理”菜單中的 計算PA 2、PD 2"子菜單:1選擇計算PD 2”計算類型后，分別輸入已計算好的無DH數(shù)據(jù)中相應Di值和 Ei值，然后點擊 計算結果”再點擊 量效曲線”即得PD 2值和其相應曲線。2選擇 計算PA 2”計算類型后；分別輸入已計算

9、好的無DH數(shù)據(jù)和加DH數(shù)據(jù)中相應的Di 值和Ei值然后點擊 計算結果”再點擊 量效曲線”即得PA 2值和其相應曲線?！咀⒁馐马棥? .在加藥前,必須先準備好更換用的38o C臺氏液。2 .每次加藥出現(xiàn)效果后，必須立即更換浴管內的臺氏液，待腸管恢復正常活動后 再觀察下一項目。3 .記錄電位時，要保持安靜，避免振動實驗臺，防止微電極移位或折斷；降下微電 極時要小心，當微電極接近平滑肌時，緩緩下移，刺入平滑肌。4 .隨時檢查恒溫裝置，確保水浴管內溫度控制在38±1 Co5 .離體腸管時，標本及其張力傳感器的連線不要觸及浴管及通氣管管壁，而且標 本與張力傳器的連線要垂直，不要過緊，也不要過松。6 .給藥時要將藥液直接滴于液面上，不要滴在線及管壁上，而且每次加藥的方式 要保持一致。7 .實驗中盡量不要按停止”命令按鈕，以免丟失實驗數(shù)據(jù)。8 .洗浴管時一定選擇暫?！泵畎粹o，以減少對張力傳感器的影響。【思考題】