紫外光譜的應(yīng)用實用教案

1、會計學(xué)1紫外光譜紫外光譜(gungp)的應(yīng)用的應(yīng)用第一頁，共13頁。第1頁/共13頁第二頁，共13頁。正常人和乳腺癌癥例血清樣品(yngpn)的吸收譜 圖為測量的正常人和乳腺癌病例血清樣品的吸收(xshu)譜。 測量了乳腺疾病病例和正常人共40 例的血清紫外吸收(xshu)譜第2頁/共13頁第三頁，共13頁。 癌癥病例血清的吸收(xshu)譜大部分在414nm 處還有一較小的吸收(xshu)峰，而增生病例只有部分在414 n m 處有吸收(xshu)峰，而且強(qiáng)度比癌癥病例弱正常人血清吸收(xshu)譜在41 4 n m 處均未見到吸收(xshu)峰。有資料表明414nm處的吸收(xshu)峰是

2、紅細(xì)胞的貢獻(xiàn)。第3頁/共13頁第四頁，共13頁。 譜線A 為正常人血清的吸收光譜, 譜線B 為在樣品(yngpn)池中加人蒸餾水和微量紅細(xì)胞所測量的吸收光譜?？梢钥闯鲎V線B 在414nm 處的吸收峰比譜線A明顯增強(qiáng), 而譜線B 在279nm 處的吸收峰表現(xiàn)很弱, 這可能是紅細(xì)胞攜帶少量血清。血清(xuqng)與紅細(xì)胞的吸收光譜 結(jié)果(ji gu)分析第4頁/共13頁第五頁，共13頁。 在含金銀花的中藥復(fù)方制劑生產(chǎn)中,如痰熱清注射液!熱毒寧注射液等,通常以金銀花提取物作為原料藥,其主要成分為綠原酸!異綠原酸等有機(jī)酸因此有機(jī)酸含量的快速測定對于金銀花提取物和制劑的質(zhì)量控制具有(jyu)重要意義 鑒

3、于有機(jī)酸紫外吸收明顯,且紫外光譜靈敏度高,特征性好,因此以金銀花提取物為研究對象,建立了5種有機(jī)酸的紫外光譜定量分析模型,可實現(xiàn)對金銀花提取物的快速分析第5頁/共13頁第六頁，共13頁。 光譜采集條件:T6紫外分光光度計，波長采集范圍:220400nm;光譜掃描間隔:0.4nm;以50%甲醇溶液為參比進(jìn)行基線校正;吸取制備(zhbi)好的樣品溶液125mL于25mL量瓶中，加50%甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，取適量于光程1 cm的石英比色皿中掃描紫外吸收光譜。樣品的紫外吸收光譜見圖第6頁/共13頁第七頁，共13頁。 在T6紫外分光光度計上分別掃描5種有機(jī)酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液在220400nm范圍內(nèi)的紫外

4、吸收光譜，見左圖可以發(fā)現(xiàn)，5種有機(jī)酸的紫外吸收光譜較為相似，在330nm附近均具有最大吸收，這使得在金銀花提取物溶液的紫外光譜中，5種有機(jī)酸的吸收光譜重疊比較嚴(yán)重，難以找出每種有機(jī)酸的特征(tzhng)吸收波段，因此選用全波段進(jìn)行建模。a. 3. 5一二咖啡(kfi)酞奎寧酸；b.4.5一二咖啡(kfi)酞奎寧酸；c.咖啡(kfi)酸；d. 3. 4-二咖啡(kfi)酞奎寧酸；e.綠原酸第7頁/共13頁第八頁，共13頁。 提出一種用紫外光譜測定樣品中混合糖含量的方法。其原理是基于樣品中的糖經(jīng)濃硫酸處理(chl)后生成有紫外吸收的糠醛和輕甲基糠醛，進(jìn)行紫外波長吸收測定；通過化學(xué)訓(xùn)一量學(xué)軟件，根據(jù)

5、一組已知糖濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品的多波長光譜和所對應(yīng)組成濃度之間的數(shù)學(xué)關(guān)系，建立校正模型。將未知樣品的紫外光譜信息輸入校正模型即可預(yù)測其組成中糖的含量本方法無需使用有機(jī)試劑，操作簡便，可以測定樣品中戊糖、己糖和總糖的含量，適合于木質(zhì)生物質(zhì)煉制研究中溶解性糖類組分的分析。第8頁/共13頁第九頁，共13頁。1.標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制 一組共一組共14個已知個已知(隨機(jī)隨機(jī))濃度的木糖和葡萄糖混合糖的水溶液。其中木濃度的木糖和葡萄糖混合糖的水溶液。其中木糖濃度變化范圍為。糖濃度變化范圍為。00. 057 mol /L-1;葡萄糖的濃度變化范圍為葡萄糖的濃度變化范圍為.00. 057 mol /L-1;總

6、糖含量變化范圍為總糖含量變化范圍為0. 0115 0. 057 mol /L-1 。2.糖的濃硫酸脫水處理糖的濃硫酸脫水處理 用移液管分別準(zhǔn)確移取用移液管分別準(zhǔn)確移取1 ml糖標(biāo)準(zhǔn)溶液加入不同的糖標(biāo)準(zhǔn)溶液加入不同的30 ml試管試管(shgun)中。再用移液管向每個試管中。再用移液管向每個試管(shgun)準(zhǔn)確加入準(zhǔn)確加入5 ml濃硫酸，搖濃硫酸，搖勻后靜置勻后靜置10 min，放入，放入25水浴恒溫水浴恒溫20 min，使糖存濃硫酸作用下脫水，使糖存濃硫酸作用下脫水反應(yīng)完全反應(yīng)完全第9頁/共13頁第十頁，共13頁。3濃硫酸處理后糖溶液的紫外光譜測定濃硫酸處理后糖溶液的紫外光譜測定 用用1cm

7、的石英比色皿，分別測定上述濃硫酸處理后糖溶液的紫外光譜的石英比色皿，分別測定上述濃硫酸處理后糖溶液的紫外光譜，掃描范圍為，掃描范圍為190 400 nm，記錄全部吸光度值。，記錄全部吸光度值。4方法的校正方法的校正 將上述測定的光譜值以及所對應(yīng)的木糖和總糖含量的數(shù)據(jù)輸入化學(xué)計將上述測定的光譜值以及所對應(yīng)的木糖和總糖含量的數(shù)據(jù)輸入化學(xué)計量學(xué)軟件量學(xué)軟件(SMICA)程序中，選擇偏最小二乘法進(jìn)行多變量回歸程序中，選擇偏最小二乘法進(jìn)行多變量回歸(hugu)，得到方，得到方法的校正模型。法的校正模型。5未知樣品的測定未知樣品的測定 對未知樣品進(jìn)行濃硫酸處理后做紫外光譜掃描，將該吸光度值輸入對未知樣品進(jìn)行濃硫酸處理后做紫外光譜掃描，將該吸光度值輸入SMICA軟件程序，用軟件程序，用4得到的校正模型即可預(yù)測該未知樣品中糖的含量得到的校正模型即可預(yù)測該未知樣品中糖的含量。第10頁/共13頁第十一頁，共13頁。戊糖和己糖經(jīng)濃硫酸脫水(tu shu)后產(chǎn)物(糠醛及羥甲基糠醛)的紫外吸收光譜如圖1所示。糠醛和羥甲基糠醛在該介質(zhì)中,分別在316 nm和322 nm波長處有最大吸收峰。對于混合糖樣品的紫外光譜,其最大吸收峰值