高效液相色譜儀常用檢測器的種類及分析

1、高效液相色譜儀常用檢測器的種類及分析檢測器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供 檢測的信號，常用檢測器有紫外吸收、熒光、示差折光、化學(xué)發(fā)光等。1. 紫外可見吸收檢測器 (ultraviolet visibledetector ， UVD)紫外可見吸收檢測器(UVD是HPLC中應(yīng)用最廣泛的檢測器之一， 幾 乎所有的液相色譜儀都配有這種檢測器。其特點(diǎn)是靈敏度較高，線性范 圍寬，噪聲低，適用于梯度洗脫，對強(qiáng)吸收物質(zhì)檢測限可達(dá)1ng,檢測后不破壞樣品，可用于制備，并能與任何檢測器串聯(lián)使用。紫外可見檢 測器的工作原理與結(jié)構(gòu)同一般分光光度計(jì)相似， 實(shí)際上就是裝有流動地 的紫外可見光度計(jì)。(1

2、) 紫外吸收檢測器紫外吸收檢測器常用氘燈作光源，氘燈則發(fā)射出紫外 - 可見區(qū)范圍 的連續(xù)波長，并安裝一個(gè)光柵型單色器，其波長選擇范圍寬(190 nm800nm)。它有兩個(gè)流通池，一個(gè)作參比，一個(gè)作測量用，光源發(fā)出的紫 外光照射到流通池上，若兩流通池都通過純的均勻溶劑，則它們在紫外 波長下幾乎無吸收，光電管上接受到的輻射強(qiáng)度相等，無信號輸出。當(dāng) 組分進(jìn)入測量池時(shí)，吸收一定的紫外光，使兩光電管接受到的輻射強(qiáng)度 不等，這時(shí)有信號輸出，輸出信號大小與組分濃度有關(guān)。局限：流動相的選擇受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶劑不 能做流動相，每種溶劑都有截止波長，當(dāng)小于該截止波長的紫外光通過 溶劑時(shí)，溶劑的透

3、光率降至 10%以下，因此，紫外吸收檢測器的工作波 長不能小于溶劑的截止波長。(2) 光電二極管陣列檢測器 (photodiodearraydetector， PDAD)也稱快速掃描紫外可見分光檢測器，是一種新型的光吸收式檢測 器。它采用光電二極管陣列作為檢測元件，構(gòu)成多通道并行工作，同時(shí) 檢測由光柵分光，再入射到陣列式接收器上的全部波長的光信號，然后 對二極管陣列快速掃描采集數(shù)據(jù)，得到吸收值(A)是保留時(shí)間(tR)和波長(I)函數(shù)的三維色譜光譜圖。由此可及時(shí)觀察與每一組分的色譜圖相 應(yīng)的光譜數(shù)據(jù)，從而迅速決定具有最佳選擇性和靈敏度的波長。單光束二極管陣列檢測器，光源發(fā)出的光先通過檢測池，透射

4、光由 全息光柵色散成多色光，射到陣列元件上，使所有波長的光在接收器上 同時(shí)被檢測。陣列式接收器上的光信號學(xué)的方法快速掃描提取出來，每 幅圖象僅需要10ms遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過色譜流出峰的速度，因此可隨峰掃描。2熒光檢測器 (fIuorescencedetector，F(xiàn)D) 熒光檢測器是一種高靈敏度、有選擇性的檢測器，可檢測能產(chǎn)生熒光的化合物。某些不發(fā)熒 光的物質(zhì)可通過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，再進(jìn)行熒光檢測。其最小 檢測濃度可達(dá)0.1 ng/ml,適用于痕量分析；一般情況下熒光檢測器的 靈敏度比紫外檢測器約高 2 個(gè)數(shù)量級，但其線性范圍不如紫外檢測器寬。近年來，采用激光作為熒光檢測器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)

5、熒光檢測器 極大地增強(qiáng)了熒光檢測的信噪比，因而具有很高的靈敏度，在痕量和超 痕量分析中得到廣泛應(yīng)用。3. 示差折光檢測器 (differentialrefractiveIndexdetector， RID)示差折光檢測器是一種濃度型通用檢測器，對所有溶質(zhì)都有響應(yīng)， 某些不能用選擇性檢測器檢測的組分，如高分子化合物、糖類、脂肪烷 烴等，可用示差檢測器檢測。示差檢測器是基于連續(xù)測定樣品流路和參 比流路之間折射率的變化來測定樣品含量的。 光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種 介質(zhì)時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流 動相的折光指數(shù)不同，就可被檢測，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一 定濃度范圍內(nèi)

6、檢測器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。4. 電化學(xué)檢測器 (elec)chemicaldetector ， ED)電化學(xué)檢測器主要有安培、極譜、庫侖、電位、電導(dǎo)等檢測器，屬 選擇性檢測器，可檢測具有電活性的化合物。目前它已在各種無機(jī)和有 機(jī)陰陽離子、生物組織和體液的代謝物、食品添加劑、環(huán)境污染物、生 化制品、農(nóng)藥及醫(yī)藥等的測定中獲得了廣泛的應(yīng)用。其中，電導(dǎo)檢測器 在離子色譜中應(yīng)用最多。電化學(xué)檢測器的優(yōu)點(diǎn)是： 靈敏度高，最小檢測量般為 ng級，有目可達(dá)pg級； 選擇性好，可測定大量非電活性物質(zhì)中極痕量的電活性物質(zhì)； 線性范圍寬，一般為45個(gè)數(shù)量級； 設(shè)備簡單，成本較低； 易于自動操作。5.化學(xué)發(fā)光檢測器(c。iluminescencedetector, CD)化學(xué)發(fā)光檢測器是近年來發(fā)展起來的一種快速、 靈敏的新型檢測器， 因其設(shè)備簡單、 價(jià)廉、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反 應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基 態(tài)時(shí)，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學(xué)反應(yīng)，故叫作 化學(xué)發(fā)光。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光 試劑混合，引起化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì) 的濃度成正比。這種檢測器不需要光源， 也不需要復(fù)