植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)及外植體部位對樹莓愈傷組織誘導的影響試驗初報

1、    植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)及外植體部位對樹莓愈傷組織誘導的影響試驗初報    陸楊輝摘 要 以有刺黑樹莓葉柄、葉片及莖段為外植體，接種在附加不同濃度和種類的生長素（naa、iba、2，4-d）及細胞分裂素（kt、6-ba）的ms基本培養(yǎng)基上，探討植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)及外植體部位對愈傷組織誘導的影響。結(jié)果表明：當選葉柄、葉片作為外植體時，誘導形成愈傷的最佳生長素為naa，濃度分別為1.0 mg·l-1、0.20.5 mg·l-1；當選莖段作為外植體時，宜用iba誘導形成愈傷，濃度為3.0 mg·l-1。經(jīng)比較分析，篩選出的誘導愈傷形

2、成的最佳外植體為葉柄，培養(yǎng)基為ms+naa 1.0 mg·l-1。關鍵詞 樹莓；愈傷組織；誘導分析：s567.239 文獻標志碼：b doi：10.19415/ki.1673-890x.2018.17.074樹莓屬于薔薇科懸鉤子屬，半灌木果樹，近年來在國際市場走俏，正在成為果樹行業(yè)增長熱點之一。樹莓不僅營養(yǎng)豐富，而且有些品種抗旱、抗寒、耐瘠薄，在西北地區(qū)可大面積推廣種植。樹莓所采用扦插、根蘗、壓條等傳統(tǒng)繁殖方法，其繁殖系數(shù)低、速度慢，影響了優(yōu)良品種的推廣速度，采用組織培養(yǎng)技術可以快速繁殖樹莓的優(yōu)良品種1-3。在植物組織培養(yǎng)中，植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對植物外植體形態(tài)產(chǎn)生的影響報道很多4-6，

3、但有關多種生長調(diào)節(jié)劑對黑樹莓不同外植體誘導形成愈傷的影響報道卻很少?；诖?，探討了植物生長調(diào)節(jié)劑及不同外植體部位對愈傷組織誘導的影響，從而找出適于黑樹莓形成愈傷的最佳培養(yǎng)基和最佳外植體，為更快、更好地繁育樹莓奠定良好的基礎。1 材料與方法1.1 材料研究所用的材料為有刺黑樹莓，來自園藝系組培室。試驗所用外植體葉片、葉柄和莖段均取自離體培養(yǎng)獲得的無菌苗。1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件試驗所用的基本培養(yǎng)基為ms培養(yǎng)基，通過在ms培養(yǎng)基上添加不同種類及濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑，研究其對樹莓不同外植體愈傷組織誘導的影響。各培養(yǎng)基中蔗糖的濃度為30 g·l-1，瓊脂為7 g·l-1，ph值為5

4、.65.8。培養(yǎng)室溫度為2224 ，光強為2 500 lx，每天光照14 h。1.3 方法在無菌條件下，從黑樹莓芽誘導形成的無菌苗上直接切取0.51.0 cm的葉柄、1.0 mm莖段及3.0 mm×4.0 mm葉片（葉片有一邊保持完好狀態(tài)，接種時將其完好的一邊朝向瓶壁）接到誘導愈傷形成的培養(yǎng)基上。葉片、葉柄、莖段每個處理分別接3瓶、3瓶、4瓶，每瓶接種7塊外植體。接種后每天觀察記錄外植體形態(tài)變化及愈傷組織增殖動態(tài)，接種14 d時統(tǒng)計形成愈傷組織的塊數(shù)，并計算出每種組合及每種外植體的愈傷組織誘導率。愈傷組織誘導率=形成愈傷組織塊數(shù)/接種外植體塊數(shù)×100%2 結(jié)果與分析2.1

5、 生長素對樹莓形成愈傷的誘導2.1.1 單一生長素的影響2.1.1.1 naa的影響當以葉柄作為外植體時，愈傷組織誘導率隨naa濃度的增加而升高，當naa濃度達到1.0 mg·l-1時，誘導率達到最高值100%，隨后則隨naa濃度的增加而下降。由表1還可看出，形成愈傷的時間隨naa濃度的增加而縮短；當以葉片作外植體時，隨naa濃度的增加誘導率逐漸降低，形成愈傷的時間則越來越長，這說明naa對于葉片誘導愈傷效果不顯著，試驗中所設計的naa濃度可能過高；當以莖段作外植體時，隨naa濃度的增加誘導率升高，當濃度為1.0 mg·l-1時，誘導率達最高值82.1%，隨后則隨濃度升高而

6、誘導率下降，開始形成愈傷的時間沒有表現(xiàn)出規(guī)律性變化?？傮w來說，不同外植體誘導愈傷對naa濃度有不同要求。當以naa作為外源激素添加到ms培養(yǎng)基上誘導樹莓形成愈傷時，其濃度宜設為1.0 mg·l-1，選用葉柄作為外植體。2.1.1.2 2，4-d的影響由表2可以看出，以葉柄作外植體時，濃度為0.21.0 mg·l-1，愈傷組織誘導率隨2，4-d濃度的增加而升高，最高值為68.2%，當2，4-d濃度超過1.0 mg·l-1時，愈傷組織誘導率隨濃度的增加而降低。由此可知，當用葉柄誘導愈傷時，2，4-d的濃度宜設為1.0 mg·l-1；當以葉片作外植體時，濃度為

7、0.21.0 mg·l-1，愈傷組織誘導率隨2，4-d濃度的增加而降低，當濃度超過1.0 mg·l-1時，愈傷組織誘導率開始回升；當以莖段作外植體時，愈傷組織誘導率則隨濃度的升高而降低，這說明對莖段而言，試驗中所設計的2，4-d濃度有可能過高，應進一步降低濃度，確定能使莖段達到最高愈傷組織誘導率的2，4-d的濃度范圍。2.1.1.3 iba的影響由表3知，無論是以葉柄、葉片外植體，還是以莖段作外植體，愈傷組織誘導率均是隨iba濃度的增加而升高，說明試驗中所設計的iba濃度有可能過低。當濃度為3.0 mg·l-1，選莖段作外植體時，愈傷誘導率達到最高，為92.9%，

8、形成愈傷的時間也很短，在接種后的第5 d便形成了白色、致密的愈傷組織。所以當選用iba作為外源激素添加到ms培養(yǎng)基上誘導樹莓形成愈傷時，宜選莖段作為外植體。2.1.1.4 naa、2，4-d、iba對愈傷組織誘導率作用效果的比較由表1、表2、表3可知，當naa、2，4-d、iba處于低濃度狀態(tài)0.2 mg·l-1、0.5 mg·l-1時，除當它們的濃度為0.2 mg·l-1，均選用莖段作為外植體時所得到的誘導率外，均是naa的作用效果最好，誘導率最高達81%，2，4-d的作用次之，iba的作用效果最差，誘導率僅為14.3%-34.3%。當激素處于高濃度狀態(tài)1.0

9、mg·l-1、3.0 mg·l-1時，iba的作用效果得到加強，愈傷組織誘導率為19.0%92.9%，與naa的作用效果不分上下，2，4-d的作用效果最差，愈傷組織誘導率最高僅達68.2%。2.1.2 不同種類生長素配合使用對誘導愈傷的影響由于各種生長素對樹莓不同部位外植體的愈傷組織誘導效果不同，形成的愈傷在形態(tài)和數(shù)量上均存在一定的差異，為了更進一步確定生長素在樹莓愈傷誘導方面的作用，以ms為基本培養(yǎng)基，配合添加了不同種類及濃度的生長素，結(jié)果見表4。由表4可知，當naa、2，4-d、iba的濃度均處于0.2 mg·l-1時，naa與2，4-d配合使用對愈傷組織誘導

10、率的作用效果強于naa與iba配合使用時的效果。而當3者的濃度均處于0.5 mg·l-1、1.0 mg·l-1時，naa與iba組合的效果要優(yōu)于naa與2，4-d組合的效果，其中以naa 0.5 mg·l-1+iba 0.5 mg·l-1配合使用效果最好，愈傷組織誘導率為71.4%95.2%。2.2 細胞分裂素和生長素配合使用對誘導愈傷的影響由表5可知，單獨使用iba，愈傷組織誘導率為14.3%34.3%，當培養(yǎng)基中再添加6-ba時，愈傷組織誘導率下降為0%19%，這說明6-ba對愈傷形成有抑制作用。當iba與kt配合使用時，愈傷組織誘導率明顯提高，葉片

11、的誘導率可達100%，莖段的誘導率可達96.5%，然而美中不足的是，葉片形成的愈傷量少且十分緊密，莖段形成的愈傷則呈現(xiàn)褐色。3 主要結(jié)論植物生長調(diào)節(jié)劑是影響外植體形成愈傷的最主要因素之一，不同生長素對樹莓葉柄、葉片、莖段形成愈傷的促進作用不同，有報道指出，在某些植物中，不同種類的植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)適宜搭配所產(chǎn)生的效果要比單獨使用時的效果好7。而本試驗研究的結(jié)果則與之相反，無論是不同種類生長素之間配合使用，還是生長素和細胞分裂素配合使用，它們對形成愈傷的效果均不如使用單一生長素時好，如以naa 1.0 mg·l-1，選用葉柄作為外植體，形成愈傷的效果最好，誘導率達到100%。2，4-d的

12、作用效果居中，因為它可能對人體健康不利，有可能與細胞癌變有關，所以實際應用中，在培養(yǎng)基選擇方面還是應盡量選用不含2，4-d或2，4-d含量較低的培養(yǎng)基。在利用樹莓外植體形成愈傷組織時，雖然iba與kt配合使用會得到較高的愈傷組織誘導率，然而形成的愈傷組織質(zhì)量不好，所以在實際應用中應盡量避免添加細胞分裂素kt和6-ba。在安偉等8做的關于紅寶玉樹莓的莖段培養(yǎng)及試管繁殖的試驗中發(fā)現(xiàn)莖段極易褐變死亡，這一現(xiàn)象在本次研究所用的材料有刺黑樹莓中的表現(xiàn)也很明顯，這可能是因為莖段酚類物質(zhì)含量和酚氧化酶活性較高。在以后的試驗中，可預先在培養(yǎng)基中加入抗氧化劑，如維生素c、聚乙烯吡咯烷酮等，也可利用活性炭吸附有毒醌類物質(zhì)。參考文獻：1 胡建剛，黃巧興，濃秋云.黑樹莓的試管繁育j.植物生理學通訊，1994，30（5）：356.2 王國英，王建華.懸鉤子離體葉片和莖段的培養(yǎng)及植株再生j.北京農(nóng)業(yè)大學學報，1995，21（1）：12-16.3 代漢萍，潭呂華，黃慶文.樹莓莖尖培養(yǎng)技術及其應用j.中國果樹，2000（4）：18-20.4 莫磊興，牟海飛，鄒瑜，等.月季組培快繁技術研究j.四川農(nóng)業(yè)大學學報，1998，16（4）：439-443.5 畢艷娟，周麗艷，高書國，等.植物生長調(diào)節(jié)劑對含笑離