畢業(yè)論文-散尾葵葉枯病病原菌鑒定和生物學(xué)特性研究

1、海南大學(xué)畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）題 目：散尾葵葉枯病病原鑒定及其生物學(xué)特性學(xué) 號：姓 名：年 級：07制藥工程（農(nóng)藥方向）學(xué)院：環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院系另u ：制藥工程系專業(yè)：制藥工程（農(nóng)藥方向）指導(dǎo)教師：完成日期：2010年 11月 5日散尾葵（chrysalidocqfpush（憶scens h.wendl）葉枯病是散尾葵上的一種 重要病害，該病嚴(yán)重影響了散尾葵的生長發(fā)育及其觀賞價值。目前，國內(nèi) 對該病的防治報道較多，但述未查到對其病原物相關(guān)研究的報道，為了進(jìn) 一步做好防治工作，本文對該病害病原的鑒定及生物學(xué)特性進(jìn)行了基礎(chǔ)性 研究。散尾葵葉枯病病原主要危害散尾葵葉部，尤其是幼嫩葉尖，輕者使整 片葉片干

2、枯，重者會導(dǎo)致植株整株死亡。通過試驗(yàn)及相關(guān)資料顯示，該病 原菌為真菌門半知菌類，絲抱綱，叢梗抱口，叢梗范科，帚梗柱范屬，帚 梗柱枝菌（cylindrocladium quinqueseptatu figueredo ）。該屬真菌常引起植 物焦枯病害（如桜樹焦枯病eucaly puts dieback）和根、莖腐敗?。ㄈ缢?葉鞘腐敗病rice sheath rot）等，對種植農(nóng)業(yè)、園藝行業(yè)等有較大影響。abstractchrysalidocarpus lutescens (chryscdidoccirpuslutescens h.wendl) leaf blight is an importa

3、nt disease on the chrysalidocarpus lutescens, chrysalidocarpus lutescens the disease has seriously affected the growth and development and ornamental value. at present, there is no report on the prevention and treatment of disease, but has not yet found its coverage of pathogen research, in order to

4、 further improve relevant prevention and control work, this pathogen in the disease and the biological characteristics of the basic research .chrysalidocarpus lutescens leaf blight pathogen primarily affecting san chrysalidocarpus lutescens leaves, especially the young tip,the light so that the enti

5、re piece dry leaves, weight of whole plant could cause death. by testing and related information, the pathogen fungus is fungi imperfect, hyphomycetes, moniliales, momliaceae, cylindrocladium/ cylindrocladium quinqueseptatu figueredo the fungi cause plant scorch diseases and more (such as eucaly put

6、s dieback) and the root and stem rot disease (such as rice sheath rot) and so on for agricultural, horticultural industries have a greater impact keywords chrysalidocarpus lutescens ； leaf blight ； identification ； biological characteristics；目 錄1材料與方法41. 1材料來源41. 2病原菌的分離及菌種的純化41.3分離菌株致病性測定51.4生物學(xué)特性測

7、定 51.4. 1不同溫度對菌絲生長的影響 51.4.2不同光照對菌絲生長的影響 51.4.3不同ph值對病原菌菌絲生長的影響 51.4.4不同碳源對病原菌菌絲生長的影響 61.4.5不同氮源對病原菌菌絲生長的影響 61.4.6病原菌菌絲致死溫度測定 61.4.7病原菌產(chǎn)抱誘導(dǎo)及病原菌鑒定 62結(jié)果與分析72. 1癥狀描述72.2病原菌致病性測定82.3不同溫度對菌絲生長的影響92.4不同光照對菌絲生長影響 102.5不同ph值對病原菌菌絲生長的影響 102.6不同碳源對病原菌菌絲生長的影響112.7不同氮源對病原菌菌絲生長的影響122.8病原菌菌絲致死溫度測定142. 9病原菌產(chǎn)抱誘導(dǎo)及病原

8、菌鑒定 143 結(jié)論與討論15致謝17參考文獻(xiàn)18散尾葵葉枯病病原菌鑒定及其生物學(xué)特性散尾葵（ch rysa i id oca rp us lutescens h.wendl）, 乂名黃椰 了，為從生常 綠灌木或小喬木，棕稠科palmaceae,散尾葵屬chrysalidocarpus h. wendl. 植物。散尾葵原產(chǎn)非洲的馬達(dá)加斯加島，世界各熱帶地區(qū)多有栽培，我 國引種栽培廣泛，常栽種于草地、樹蔭、宅旁，也用于盆栽，是布置客廳、 餐廳、會議室、家庭居室、書房、臥室或陽臺的高檔盆栽觀葉植物。散尾 葵易發(fā)生葉枯病、根腐病和介殼蟲類危害等，尤以葉枯病為害較重。散尾葵葉枯病是一種常見病害，具植株

9、發(fā)病率高達(dá)36%,其中病株單 株葉片發(fā)病率平均約為23%,對散尾葵生長影響很大，輕者使葉片干枯， 重者會導(dǎo)致植株整株死亡。病菌最先侵染葉尖和葉緣，發(fā)病初期染病處呈 褐色斑點(diǎn)或條塊狀斑塊，中期斑點(diǎn)或斑塊逐漸擴(kuò)大并相互連接，后期葉片 呈現(xiàn)灰白狀干枯，嚴(yán)重影響到了散尾葵的觀賞性。為了更深入地了解該 病害病原菌及其病害特點(diǎn)，筆者對該病害病原進(jìn)行了鑒定及其生物學(xué)特性 的測定。1材料與方法1.1材料來源散尾葵病葉于2009年10月采自僑州兩院。1.2病原菌的分離及菌種的純化采用常規(guī)組織分離法分離病原菌。采集田間自然發(fā)病典型的散尾葵 葉片，剪取病健交界處組織，大小約為5mmx5mm；用70%乙醇消毒10s,

10、 0.1%hgc12（g/v）表面消毒30s；滅菌水沖洗34次，無菌操作接種到馬鈴薯 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（pda）呵上，培養(yǎng)34d。在平板上標(biāo)記上面pda長出 的不同類型的菌落，編號1號、2號，無菌操作分別將1號、2號菌利疲種 到pda平板上，培養(yǎng)45d。采用單菌絲分離純化（由于未觀察到砲子，所以選擇使用菌絲段純化） ，用分別用滅菌水將1號、2號菌株配置成菌絲懸浮液（注意打散菌絲， 使菌絲成為單個菌絲段，不互相纏繞），用接種環(huán)取1環(huán)菌絲懸浮液與10ml 已融化的pda培養(yǎng)基（約40°c）充分混合，倒入滅菌的培養(yǎng)皿小，置于28°c恒溫培養(yǎng)箱屮培養(yǎng)。2d后，從培養(yǎng)皿屮挑取單個分散

11、的菌落移植到pda 培養(yǎng)基上進(jìn)行純化培養(yǎng)，然后轉(zhuǎn)入pda試管斜面保存。1.3分離菌株致病性測定根據(jù)柯赫氏法則進(jìn)行寄主活體接種測定。在田間選取健康的散尾葵 葉片18片，用無菌水清洗葉片表面，在每其中9片葉面用消毒過的針輕輕 刺傷葉片表皮，將純培養(yǎng)在pda±的1號、2號菌打菌餅（菌餅大小約為 3mm）然后接種到葉片的傷口處，以無菌的pda培養(yǎng)基塊做對照并進(jìn)行分 組為a （1號）、b （2號）、c （ck）,每組三個重復(fù)，剩余9片葉片按上述 方法進(jìn)行無傷接種處理（不刺傷葉片表皮），分別依次編號為d （1號）、e （2號）、f（ck）,保溫保濕，5d后觀察。如果該病原菌能使散尾葵發(fā)病， 并與

12、hi間自然發(fā)病癥狀相比較，若存在相同癥狀則將長出的病斑采用1.2 所述方法分離得到病原菌，并將兩次獲得的病原菌作比較，判斷兩次提取 的病原菌是否相同，以確定該菌為致病菌。1.4生物學(xué)特性測定1.4.1不同溫度對菌絲生長的影響在無菌操作條件下，將直徑5mm菌齡相同的菌餅移到pda培養(yǎng)基平 板中央,分別置于15、20、25、28、30和37°c的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),觀察 菌絲生長情況，每天測量菌落直徑，比較在不同溫度下菌絲生長速率。5d 后用十字交叉法測量菌落直徑。每處理三個重復(fù)。1.4.2不同光照對菌絲生長的影響將直徑為5mm的菌齡相同（培養(yǎng)4d）的菌餅接種到pda培養(yǎng)基平板 中央,分別

13、置于24h完全光照，12小吋光照和黑暗交替,24小吋完全黑暗 3中壞境中，在28°c恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，6d后測量菌落宜徑。每處理三個 重復(fù)。1.4.3不同ph值對菌絲生長的影響制作pda培養(yǎng)基，用0.1mol/l的hc1和naoh將其ph值分別調(diào)節(jié)到 4、5、6、7、8、9、10這7個梯度，濕熱滅菌（121 °c,20min）,再用無菌 的0.1mol/l的hc1和naoh重新調(diào)節(jié)ph值后倒入己滅菌的培養(yǎng)川沖制成 平板；用直徑為5mm的打孔器，取菌落邊緣的菌餅（在pda平板上培 養(yǎng)4d）,接種到不同ph值的培養(yǎng)基平板屮央，置于2眈恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng), 6d后觀察菌落狀況。每處

14、理值三個重復(fù)。1.4.4不同碳源對菌絲生長的影響使用czapek固體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基：mgso4-7h2o 0.5g, kh2po4 lg, kc1 0.5g, feso4-7h2o o.olg, nano3 2g（純氮約 0.3294g）,瓊脂 20g,蒸飾水定容至looomlo另外，分別以等當(dāng)量的葡萄糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、d果糖、d廿 露糖、d木糖作為碳源（以20g葡萄糖含碳量為標(biāo)準(zhǔn)），配置成不同碳源 的培養(yǎng)基，濕熱滅菌（12tc, 20min）,然后制成平板，在平板中央接入直 徑為5mm菌齡相同的菌餅；置于28°c恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5d后觀察菌落 狀況。每處理三個重復(fù)。1.

15、4.5不同氮源對菌絲生長的影響使用czapek固體培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基：mgso4-7h2o 0.5g, kh2po4 lg, kc1 0.5g, feso4-7h2o o.olg,葡萄糖 20g,瓊脂 20g,蒸憾水 定容至looomlo另外,分別以等當(dāng)量硝鞍酸2.00g、硫氨酸1.53g、色氨酸2.40g、肌氨 酸l.oog、蛋口腺4.00g、l苯丙氨酸4.00g、磷酸二氫鞍2.70g為氮源，配 置成不同氮源的培養(yǎng)基，濕熱滅菌（12rc,20min）,然后制成平板，在平 板中央接入直徑為5mm菌齡相同的菌餅；置于28°c恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)， 5d后觀察菌落狀況。每處理三個重復(fù)。1.4

16、.6菌絲致死溫度測定將病原菌菌餅（5mm）移入己滅菌的試管內(nèi)，塞上橡皮塞，分別45°c、 50°c、55°c、60°c、65°c和70°c恒溫水浴處理lomin,然后再分別接種到 pda培養(yǎng)基平板中央，以未處理菌餅接種到pda培養(yǎng)基平板中央為對照, 28°c恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，5d后觀察菌落狀況。每處理三個重復(fù)。1.4.7病原菌產(chǎn)砲誘導(dǎo)及病原菌鑒定由于未在培養(yǎng)基上獲得病原菌砲子，設(shè)計(jì)了以下促使孑包子產(chǎn)生的方法 （表1）；觀察菌落及分生砲子顏色、形態(tài)、以及分生砲子梗形態(tài)并測量砲 了大小。表1促使他子產(chǎn)牛的方法培養(yǎng)基處理方式散尾葵

17、衙糖糖瓊脂培養(yǎng)基28°c恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8do散尾葵瓊脂培養(yǎng)基28°c恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8do燕麥片瓊脂培養(yǎng)基28°c恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8do馬鈴蓉瓊脂培養(yǎng)基28°c恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8do散尾葵葉組織pda培養(yǎng)棊28°c恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)8do散尾葵植株活體嫩葉保溫保濕直到葉病部灰白干枯，長出小黑點(diǎn)pda2lc正常培養(yǎng)4d,紫外燈（200275nm）照射20min,28°c恒溫培養(yǎng)4dopda28°c止常培養(yǎng)4d, 12小時光暗交替，28°c恒溫培養(yǎng)4dopda28°c,正常培養(yǎng)5d后，將培養(yǎng)皿置于5°

18、;c低溫條件下2天，再轉(zhuǎn)入28°cffi溫培養(yǎng)3dopda2lc止常培養(yǎng)5d后,將菌絲挑出接種于無菌蒸帑水上，28°c恒溫培養(yǎng)5d。注：1、散尾葵葡糖糖瓊脂培養(yǎng)基配制營養(yǎng)為：新鮮散尾葵葉組織20g,匍糖糖2g,瓊脂2g,蒸憾水loomlo2、散尾葵葉組織pda培養(yǎng)基制作方法：將新鮮健廉的散尾葵葉片表面消毒，剪 成小塊（約3mmx3mm）散置于pda培養(yǎng)基平板上。2結(jié)果與分析2.1癥狀描述該病原菌主耍危害葉部，尤其是上部嫩葉。病菌最先侵染葉尖和葉緣, 發(fā)病初期染病處呈褐色斑點(diǎn)或條塊狀斑塊，中期斑點(diǎn)或斑塊逐漸擴(kuò)大并相 互連接，漸擴(kuò)展為條斑，并可匯合成不規(guī)則的壞死塊，后期葉片呈現(xiàn)

19、灰白 狀干枯，邊緣有深色線條圍繞；溫濕條件下病部散生一些小黑點(diǎn)，輕者使 葉片干枯，重者會導(dǎo)致植株整株死亡。（如圖1ad）2.2分離菌株致病性測定用口間口然發(fā)病的散尾葵病株分離獲得純菌種，按照柯赫氏法則進(jìn)行 接種，結(jié)果表明：刺傷接種a處理組3d后病原菌接種部位開始發(fā)病，出現(xiàn) 水漬狀小斑點(diǎn)，5d后染病處呈褐色斑點(diǎn)或條塊狀斑塊，約10d后斑點(diǎn)或斑 塊逐漸擴(kuò)大并相互連接，漸擴(kuò)展為條斑，并可匯合成不規(guī)則的壞死塊，最 后葉片呈現(xiàn)灰白狀干枯，邊緣有深色線條圍繞，溫濕條件下病部散生一些 小黑點(diǎn)，其發(fā)病率達(dá)100%； b處理組和c無發(fā)病現(xiàn)象。無傷接種d處理 組5d后病原菌接種部位開始發(fā)病，其發(fā)病過程與刺傷接種a

20、處理大體相似, 發(fā)病率為66%,無傷接種e、f處理組無發(fā)病現(xiàn)彖。用獲得的菌種接種后出現(xiàn)的癥狀與出間自然發(fā)病癥狀相同，從接種發(fā) 病的植株分離獲得的病原菌與田間自然發(fā)病獲得的病原菌相同；對照植株 生長良好，同樣進(jìn)行組織分離，無病原菌存在，證實(shí)分離菌是散尾葵葉枯 病的致病菌。abpcdpa：葉尖易受害；b：漸擴(kuò)展為條斑，并可匯合成不規(guī)則的壞死塊；c：病斑中心灰口色，邊緣有深色線條圍繞；d：葉片有一半以上干枯卷縮圖1散尾葵葉枯病發(fā)病癥狀24小時光照12小時光暗交替24 4耐黒暗*圖2病原菌在pda上的菌落圖3光照對病原菌菌絲生長的影響2.3不同溫度對菌絲生長的影響結(jié)果表明：病原菌在2037°

21、c均能生長；溫度在1528°c,菌落直徑 隨著溫度的升高而逐漸增加；溫度在2837°c范圍內(nèi)，菌落直徑隨著溫度 的升高而逐漸減小。試驗(yàn)屮最適宜菌絲生長的溫度為28°c,培養(yǎng)5d菌落平 均宜徑達(dá)到41.5mm； 15°c條件下菌絲生長受阻止或不能生長。所以菌絲生 長的最適溫度范圍在2530°c,而菌絲能否生長的低溫臨界溫度在為15 20°cz間。（表 2）表2溫度對菌絲生長的影響菌落百-徑溫度°c（5d/mm）菌落特征（5d）colony character (5d)temperature diameter ofcolony

22、(5d/mm)15o.oaa菌絲不牛長，耒有任何菌絲特征2026lbb2535.0cc2841.5dd303o.3eb菌落圓形、邊緣較整齊、淺褐色、棉絮狀，邊緣 菌絲稀疏，未產(chǎn)孑包。菌落圓形、邊緣較整齊、褐色，菌絲牛長旺盛， 棉絮狀，菌落平幣，背面有褐色色素，未產(chǎn)他。菌落圓形、邊緣較整齊、紅褐色，菌絲牛氏旺盛, 棉絮狀，菌落平整，背而有黑褐色色素，未產(chǎn)他 菌落i員i形、邊緣較整齊、褐色，菌絲生長肚盛，棉絮狀，菌落平整，背面有深褐色色素，未產(chǎn)飽。37h.off菌落不規(guī)則形、灰片至淺褐色，菌絲稀疏，棉絮狀，未產(chǎn)跑。注：差界顯著性使用lsr法計(jì)算，小寫字母代表a=0.05水平差異顯著性；大寫 字母代

23、表a=0.01水平差界顯著性。2.4不同光照對菌絲生長影響不同光照下，菌絲生長有所不同（圖3）,從菌絲生長速率和菌絲顏色 上來看：24h光照處理組的菌落直徑最大，其次是12h光暗交替處理組，24h 黑暗處理組的菌落直徑相對較小；24h光照處理組的菌落深褐色、表而有大 量白色菌絲，12h光喑交替處理組菌落深褐色、表面有少量口色菌絲，24h 黑暗處理組菌落深黃褐色。（表3）農(nóng)3光照對菌絲綸長影響處理菌落直徑（6d/mm）菌落特征（6d）24h全光照57.3aa菌落較規(guī)則1員1形、深紅褐色，表面有人量白色菌絲，周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)他。12h光暗交替53.5bb菌落不規(guī)則形、深紅褐色，表面有少量口色菌

24、絲， 周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)他。24h全黑暗52.0bb菌落不規(guī)則形、深黃褐色，周圍菌絲灰口色，未產(chǎn) 他。注：差異顯著性使用lsr法計(jì)算，小寫字母代表a=0.05水平差異顯著性；大寫 字母代表a=0.01水平差異顯著性。2.5不同ph值對菌絲生長的影響試驗(yàn)結(jié)果表明：ph值在410的范圍內(nèi)，菌絲均能良好生長，除ph=4 處理組外，其他組生長速率沒有顯著差異，但各ph值對菌絲疏密程度及顏 色有明顯影響。其中，ph=6、7、8三處理組無顯著并界但對ph=4處理組 生長速率有極顯著差異，ph=5、9處理組對ph=4處理組生長速率有顯著 差異，所以菌絲生長最適ph值是在ph=68。（表4）表4 ph值對病

25、原菌菌絲牛長的影響ph值菌落直徑(6d/mm)菌落特征(6d)443.7aa菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊，菌絲較密、較長、淺紅褐色，未產(chǎn)抱。551.0bab菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊，菌絲較密、較長、紅褐色略帶紫色，未產(chǎn)抱。655.0bb菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊、中部隆起，菌絲較密、較長、紅褐色，未產(chǎn)砲。753.3bb菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊、屮部降起，菌絲較密、較長、紅褐色，未產(chǎn)鞄。855.3bb菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊、中部隆起，菌絲較密、較長、淺褐色，未產(chǎn)葩。950.7bab菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊，菌絲較密、較長、淺褐至灰白色，未產(chǎn)抱。104&3abab菌落形狀規(guī)則、邊緣整齊，菌絲較密、較長、灰

26、白色，未產(chǎn)抱。注：差異顯著性使用lsr法計(jì)算，小寫字母代表a=0.05水平差異顯著性；大場 字母代表a=0.01水平差界顯著性。2.6不同碳源對菌絲生長的影響從菌落5d生長直徑來看(圖4),在供試的含有不同碳源的czapek固體 培養(yǎng)基上，該菌在只含有葡萄糖或麥芽糖做碳源的培養(yǎng)基中生長狀況最好, 顯著優(yōu)于在只含有乳糖、蔗糖、d果糖、d甘露糖或d木糖的培養(yǎng)基上的 生長狀況，而在只含有d甘露糖做碳源的培養(yǎng)基上生長狀況最差，顯著差 于在只含有其他六種糖類培養(yǎng)基上的生長狀況。(表5)表5不同碳源対病原菌菌絲牛長的影響碳源菌落直徑(5d)菌落特征(5d)葡萄糖29.3aa菌絲致密，紅褐色，平鋪，菌落不規(guī)

27、則形，底部黑褐色，周i羽菌絲灰白色，未產(chǎn)也。乳糖25.7bab菌絲疏松，淺褐色，平鋪，菌落圓形，周圍飾射 狀菌絲灰白色，耒產(chǎn)他。麥芽糖29.7aa菌絲致密，淺褐色至褐色，平鋪，菌落不規(guī)則形，底部褐色，周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)抱。蔗糖23.0bb菌絲致密，紅褐色，平鋪，菌落不規(guī)則形，底部 黑褐色，周圍菌絲致密、灰口色，未產(chǎn)他。d 果糖23.0bb菌絲致密，淺褐色至褐色，平鋪，菌落近圓形形，底部褐色，周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)他。d-廿露糖18.7ccb菌絲致密，褐色，平鋪，菌落近圓形，底部褐色，周圍菌絲灰白色，未產(chǎn)拖!。d 木糖23.0bb菌絲致密，褐色，平鋪，菌落近鬪形，底部褐色，周圍菌絲灰口色，未產(chǎn)抱

28、。注：差異顯著性使用lsr法計(jì)算，小寫字母代表a=0.05水平差異顯著性；大寫字母代表a=0.01水平差異顯著性。乳糖麥芽糖蔗槌d 果糖d 甘壽擔(dān)d木糠圖4不同氮源的對病原菌菌絲生長的影響2.7不同氮源對菌絲生長的影響從圖5可以看出，在供試的含不同氮源的czapek固體培養(yǎng)基上，該菌在只含有肌氨酸做氮源的培養(yǎng)基上菌絲生長狀況最好，極顯著優(yōu)于在只含 有其它六種氮源的培養(yǎng)基上的生長狀況；在只含有色氨酸或蛋門月東做氮源 的培養(yǎng)基上菌絲生長狀況較好，極顯著優(yōu)于只含有硝鞍酸、磷酸二氫鉀、 l苯丙氨酸或磷酸二氫錢的培養(yǎng)基上的牛長狀況。（表6）硝酸鎖硫酸驗(yàn)色氨酸肌氨酸蛋白陳l苯丙氨酸磷酸二氫鈕圖5不同氮源對

29、病原菌菌絲牛長的影響表6不同氮源對病原菌菌絲牛長的影響氮源菌落直徑（5d）菌落特征（5d）硝酸錢24.7aa菌絲致密，淺褐色，平鋪，菌落岡形，底部褐色,周圍整齊、菌絲灰白色，未產(chǎn)他。硫酸餃色氨酸22.3aa35.7bb菌絲致密，淺褐色，平鋪，菌落圓形，底部褐色,周圍整齊、菌絲灰白色，未產(chǎn)抱。菌絲致密，褐色，平鋪，菌落圓形，底部褐色,周圍整齊、菌絲灰白色，未產(chǎn)抱。肌氨酸45.7cc菌絲較疏松，褐色至黃褐色，平鋪，菌落惻形,底部褐色,周囤菌絲輻射狀、黃褐色，未產(chǎn)砲。蛋白腺36.0bb菌絲致密,褐色，平鋪,菌落圓形，底部褐色,周圍整齊、菌絲灰白色,未產(chǎn)砲。l 苯丙氨酸27.7aa菌絲致密,褐色，平鋪

30、,菌落岡形，底部褐色,周圍整齊、菌絲灰白色,未產(chǎn)抱。磷酸二氫鞍28.0aa菌絲致密，褐色，平鋪，菌落圓形，底部褐色，周圍整齊、菌絲灰白色，未產(chǎn)他。注:差異顯著性使用lsr法計(jì)算，小寫字母代表a=0.05水平差異顯著性；大寫 字母代表a=0.01水平差異顯著性。2.8菌絲致死溫度測定2口經(jīng)過45°c恒溫水浴lomin處理的病原菌菌絲生長狀態(tài)良好，5（1菌落平 均直徑達(dá)到41mm,且生長過程及菌落平均直徑均與ck組并無明顯并界 （ck組菌絲id后開始生長，5d菌落平均直徑為42mm）；經(jīng)過5o°c恒溫 水浴lomin處理的病原菌生長較差，5d菌絲生長直徑僅為14mm,約為ck

31、的1/3, 口在培養(yǎng)第4d才開始生長，較ck晚兩天，說明50 °c tn溫水浴lomin 處理對菌絲生長產(chǎn)生了較犬影響；55°c、60°c、65°c和70°c恒溫水浴lomin 處理組菌絲5d不生長，說明該病原菌菌絲致死溫度應(yīng)該是55°ce圖6分牛砲子梗圖7細(xì)而伸長的分枝端牛球形膨大物2.9病原菌產(chǎn)抱誘導(dǎo)及病原菌鑒定圖8分生鞄子長圓柱形、3隔4細(xì)胞 圖9分生抱子山粘液保持在一起成束病原菌在pda培養(yǎng)基平板上的菌落形態(tài)為：菌絲生長速度為55mm （6d）；菌落形態(tài)為較規(guī)則圓形、紅褐色、邊緣為灰白色，較整齊；菌絲生 長吒盛，較密、棉絮狀、

32、中部稍微隆起，菌落背面有黑褐色色素，菌絲稠 密或疏松呈放射狀；未產(chǎn)砲。（如圖2）誘導(dǎo)產(chǎn)抱顯示:病原菌在散尾葵葉組織pda培養(yǎng)基上能少量產(chǎn)生砲子, 在散尾葵植株活體嫩葉接種處的病斑上能刮下大量分生抱子；而其他處理 組均未觀察到砲子產(chǎn)生。可能原因?yàn)椋?、該病原菌只能在寄主上通過砲子 繁殖；2、當(dāng)前使用的培養(yǎng)基缺少某些營養(yǎng)元素或者某些營養(yǎng)元素比例不能 提供該病原菌產(chǎn)生砲子的條件。在顯微鏡下觀察散尾葵葉枯病病原菌抱子梗及分生砲子的特征是：分 生砲子梗直立，無色，規(guī)則和重復(fù)二叉或三叉分枝（圖6）,每端有2到3個 小梗，部分有細(xì)而伸長的分枝端生球形膨人物（圖7）；分生砲子無色至微 綠色，長岡柱形（圖8）,

33、單個著生但通常由粘液保持在一起成束（圖9）, 每個分生砲子3隔4細(xì)胞（圖8）,大小為2448.5 （42.6） pm><2.33.6（3.1） pm。結(jié)合對病原菌菌落及菌絲的觀察結(jié)果，通過真菌形態(tài)學(xué)的比對，鑒定 出該病原菌為帚梗柱枝菌（cylindrocladiumquinquesepgu figueredo）卜"。 3結(jié)論與討論該病原菌在pda固體培養(yǎng)基上菌絲生長狀態(tài)良好，但未能觀察到砲子 產(chǎn)生。該病原菌菌絲生長對ph值適應(yīng)范圍廣，在ph=410范圍均能生長, 在ph=68時生長最好；菌絲在2037°c均能生長，最適溫度范圍在25 30°c之間，溫度

34、低于15°c菌絲不生長，其致死溫度在5055°c之間。該菌 對葡萄糖或麥芽糖的利用率較好，其次是乳糖、蔗糖、d果糖、d木糖和 d廿露糖；其對肌氨酸的利用率明顯優(yōu)于色氨酸、蛋門月東、硝鞍酸、磷酸 二氫鉀、l苯丙氨酸和磷酸二氫鞍。通過試驗(yàn)及和關(guān)資料顯示，該病原菌為真菌門半知菌類，絲鞄綱，絲 孑包目，絲砲科，帚梗柱砲屬屮的帚梗柱枝|w（hughes-tubaki-barron分類系 統(tǒng)）io。該屬真菌還常引起水稻葉鞘腐敗病(rice sheath rot)等，水稻葉鞘腐敗 病(ricw sheath rot)的病原為稻帚枝霉(sarocladiiun oryzae (saw ad

35、 a) w. gams, et webster)0病部產(chǎn)生的分生抱了梗圓柱狀，有12回分枝，每次分枝3-4 根，在分枝頂端著生分生抱了。分生他了單胞無色，圜柱形至橢圓形， 大小3-20x1.5-4(im)o病菌生長溫限1035°c,菌絲生長和產(chǎn)生砲子適 溫為2530°c,適宜ph值為39,其屮ph5.5最適。與本試驗(yàn)的獲取病 原菌有較大差異。據(jù)鄧玉森冋等報道，帚梗柱枝菌(cylindrocladium quinqueseptatu figueredo)在華南地區(qū)除危害散尾葵外，還能引起桜樹焦枯病(eiicalypms dieback),本試驗(yàn)菌株能否引起桜樹焦枯病(euca

36、ly puts dicbuck)仍有待做 進(jìn)一步研究。致謝大學(xué)木科的學(xué)習(xí)生活即將結(jié)束，在此，我要感謝所有教授我知識的老 師，學(xué)院給予我關(guān)心和幫助的領(lǐng)導(dǎo)，以及兒年來共同學(xué)習(xí)的同學(xué)們，是你 們在我的成長屮給了我鼓勵和幫助。本文能夠順利完成，首先需要感謝張榮意老師在我試驗(yàn)期間的悉心指 導(dǎo)和嚴(yán)格要求，讓我在試驗(yàn)操作技能上得到很人進(jìn)步，在此我向張老師致 以深深的敬意。同時也感謝一直幫助我的呂娟師姐、黃麗師姐和劉海師兄 的全力幫助。參考文獻(xiàn)1 歐文軍，龔康達(dá),王祝年巴西鐵散尾葵等切葉花卉市場調(diào)研報告j.熱帶林 業(yè),2003,31(03):4546.2 趙小萍，岳紅霞.盆栽散尾葵j.山西農(nóng)業(yè),2007,07

37、:67-68.張榮意.熱帶園藝植物病理學(xué)m.北京:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版2009.3-7.4方中達(dá).植病研究方法m,笫三版.北京:科技出版社,1998.122-140.周徳慶.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)手冊m.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1986.91287.6謝聯(lián)輝.普通植物病理學(xué)m.北京:科技出版社,2006.268. 許耀文.普通植物病理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)m.北京:科學(xué)岀版社,2006.161-162.8 j.h.柏內(nèi)特.真菌學(xué)基礎(chǔ)m.北京:科學(xué)出版?±,1989.227-237.9 鄭美珠.桜樹焦枯病發(fā)病規(guī)律的研究j.福建林學(xué)院學(xué)報,2006,26(04):339343.10 邵力,沈瑞祥，張素軒等.

38、真菌分類學(xué)m.北京:中國林業(yè)出版tt,1984.303-307.11 h.l.巴尼特,b.b.亨特.半知菌圖解m 北京:科學(xué)出版|±, 1977.64-167.12 魏景超.真菌鑒定手冊m.上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社,1979.487-520.13 鄧玉森，岑炳沾.桜樹焦枯病病原菌特性的觀察j.廣東林業(yè)科技,1997,13(01):30-35.附錄：外文翻譯in wang zuoliangs translation practices, he translated many poems, especially the poems written by robert burns. his

39、 translation of burnt “a red, red rose" brought him fame as a verse translator. at the same time, he published about ten papers on the translation of poemssome argue that poems cannot be translated. frost stresses that poetry might get lost in translation. according to wang, verse translation i

40、s possible and necessary, for “the poet-translator brings over some exciting work from another culture and in doing so is also writing his own best work, thereby adding something to his culture .in this tran smission and exchange, a richer, more colorful world emerges"(wang, 1991:112).then how

41、can we translate poems? according to wang understanding, the translation of poems is related to three aspects: a poem's meaning, poetic art and language(1) a poem's meaning"socio-cultural differences are formidable enough, but the matter is made much more complex when one realizes that

42、meaning does not consist in the meaning of words only, but also in syntactical structures, speech rhythms, levels of style.” (wang, 1991:93)(2) poetic artaccording to wang, “bly's point about the 'marvelous translation being made possible in the united states only after whitman, pound and williams carlos will