有機(jī)磷實(shí)驗(yàn)過(guò)程精品資料

1、一、有機(jī)磷提?。悍謩e測(cè)定H2O、HCl、 NaOH-EDTA提取液的DTP、 SRPH2O-Po:DTP ：取 4mL 水提取液于25mL 比色管中，定容至10mL ，加入 1.6mL 5%的過(guò)硫酸鉀，在高壓消煮鍋中消煮45min ，冷卻，定容至 25mL，加入 4ml 顯色劑充分混勻，顯色 15min 后，在 880nm 下比色。SRP：取 4mL 水提取液于25mL比色管中，定容至25mL ，加入4ml顯色劑充分混勻，顯色15min 后，在 880nm 下比色。標(biāo)曲： 分別吸取 2mg/L 的磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使用液 0、 0.5、 1、 1.5、 2、3、 5、 7mL 于 25mL 比色管中，

2、按 DTP 、 SRP 測(cè)定方法測(cè)定。HCl-P o:DTP ：取 0.4mL HCl 提取液于 25mL 比色管中，定容至10mL ，加入 1.6mL 過(guò)硫酸鉀，在高壓消煮鍋中消煮45min ，冷卻，定容至25mL ，加入 4ml 顯色劑充分混勻，顯色15min 后，在 880nm 下比色。SRP：取 0.4mL HCl 提取液于 25mL 比色管中，定容至25mL ，加入 4ml 顯色劑充分混勻，顯色 15min 后，在 880nm 下比色。標(biāo)曲： 分別吸取2mg/L 的磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使用液0、 0.5、 1、 1.5、 2、3、 5、 7mL 于 25mL 比色管中，按 DTP 、 SRP

3、測(cè)定方法測(cè)定。NaOH-EDTA-P o:DTP ：取 2mL NaOH-EDTA提取液定容至50mL, 再取稀釋后的4mL 于 25mL 比色管中，定容至 10mL ，加入 1.6mL 過(guò)硫酸鉀，在高壓消煮鍋中消煮45min ，冷卻，定容至25mL，加入 4ml 顯色劑充分混勻，顯色15min 后，在 880nm 下比色。SRP：取 2mL NaOH-EDTA提取液定容至50mL, 再取稀釋后的4mL于25mL比色管中，定容至 25mL ，加入 4ml 顯色劑充分混勻，顯色標(biāo)曲： 分別吸取 2mg/L 的磷酸鹽標(biāo)準(zhǔn)使用液管中，按 DTP 、 SRP 測(cè)定方法測(cè)定。15min 后，在 880n

4、m 下比色。0、 0.5、 1、 1.5、 2、3、 5、 7mL于25mL比色顯色劑配制：5N 硫酸70mL 濃 H 2SO4 定容至 500mL酒石酸銻鉀1.3715g 定溶至 500mLH 2O 中鉬酸銨20g 定溶至 500mL 水中0.1M 抗壞血酸1.76g 定溶至 100mL 水中顯色劑的配制（ 100mL ）：50mL5N H2SO45mL酒石酸銻鉀15mL鉬酸銨30mL0.1M 抗壞血酸將上面四種溶液按比例混合，一般混合好的顯色劑可以保存4h。磷鉬藍(lán)比色法是在50mL 樣品中加入8mL 配好的顯色劑，顯色10 15min ，在色。880nm下比二、酶解 :H2O-Po 酶水解

5、取 5mL水提取液， 分別加入0.44ml的不同類(lèi)型酶溶液，加入0.5ml 0.4mol/L的 MgCl2 溶液，0.05ml 0.68mol/L 的檸檬酸鈉溶液，于 37條件下培養(yǎng) 16h，（植酸酶培養(yǎng)條件為 55），取出后加入 1ml 20%的 SDS溶液（ sigma L4509，氣溫較低時(shí)易凝結(jié)，使用時(shí)需加熱融化）定容至 10ml ，加入 1.6ml 顯色劑 880nm 顯色測(cè)定正磷酸鹽量。標(biāo)線：取 1mg/L 的磷標(biāo)液0、0.2、 0.5、 1、 2、3、 5ml，與水提取液酶解同步進(jìn)行。APase 溶液：稱(chēng)取 2.5mg 堿性磷酸酶用即可配制出活性為1U/mlTris9.0 定容至

6、 10ml ，此時(shí)堿性磷酸酶活性為的堿性磷酸酶使用液。7U/ml ，再取1.4285mlAPase+PDEase：稱(chēng)取 10mg 二酯酶和1.4285ml活性為7U/ml的堿性磷酸酶溶液，用Tris9.0 定容至10ml。Phytase 溶液：取 120mg 植酸酶定溶于 10ml 的 10mM 的 HAc-NaAc（ PH5.15）緩沖溶液中，轉(zhuǎn)移至透析管中（ MWCo：3500-5000 ，spectum laburationes.Inc,10ml ），懸浮于裝有 2L 10mM 的 HAc（ 0.16ml至 1L）-NaAc(0.59g 至 1L)緩沖溶液的燒杯中透析，每隔3 小時(shí)更換燒

7、杯中透析液一次，連續(xù)更換 5 次，透析后的酶溶液于10000r/min 離心 10min 。植酸酶在4條件下只能保存一周。使用 Tris7.0 配制成活性為0.06U/ml 的酶溶液使用。取 1.6667ml 透析后的植酸酶溶液（活性為0.36U/ml ）用 Tris7.0 定容至 10ml。APase+PDEase+ Phytase 溶液：分別取 1.4285ml 堿性磷酸酶溶液（ 7U/ml ），10mg 二酯酶、 1.6667ml 植酸酶（ 0.36U/ml ）用 Tris7.0 定容至 10ml 。NaOH-EDTA-Po酶水解取 4mL NaOH-EDTA提取液定容至 100mL，PH值調(diào)為 7.0（植酸酶為 5.15 ），取 2mL定容至 5mL，分別加入 0.44ml 的不同類(lèi)型酶溶液，加入 0.5ml 0.4mol/L 的 MgCl2 溶液，于