分析升麻及其炮制品揮發(fā)性成分的異同點策劃方案

1、分析升麻及其炮制品揮發(fā)性成分的異同點策劃方案分析升麻及其炮制品揮發(fā)性成分的異同點 本文關(guān)鍵詞：升麻，揮發(fā)性，炮制，成分，分析分析升麻及其炮制品揮發(fā)性成分的異同點 本文簡介：摘要：目的：分析升麻及其炮制品揮發(fā)性成分的異同點。方法：采用頂空固相微萃取法（hs-spme）結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（gc-ms）對升麻及其炮制品揮發(fā)性成分進行分析鑒定，用峰面積歸一化法計算各成分的相對百分含量。結(jié)果：從升麻生品揮發(fā)性成分中分離出43個峰，鑒定出31個成分，占總揮發(fā)性成分的93.70%,含分析升麻及其炮制品揮發(fā)性成分的異同點 本文內(nèi)容：摘要：目的：分析升麻及其炮制品揮發(fā)性成分的異同點。方法：采用頂空固相微萃取法（h

2、s-spme）結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（gc-ms）對升麻及其炮制品揮發(fā)性成分進行分析鑒定，用峰面積歸一化法計算各成分的相對百分含量。結(jié)果：從升麻生品揮發(fā)性成分中分離出43個峰，鑒定出31個成分，占總揮發(fā)性成分的93.70%,含量最高的是y-檸檬烯，占總揮發(fā)性成分的36.28%;從其炮制品中分離出36個峰，鑒定出28種成分，占總揮發(fā)性成分的97.11%,含量最高的是3-蒈烯，占總揮發(fā)性成分的42.14%.結(jié)論：升麻生品和炮制品揮發(fā)性成分總離子流圖的峰型較相似，但化學成分差異較大，含量大不相同。本研究可為升麻藥材研發(fā)和綜合利用提供科學依據(jù)。關(guān)鍵詞：升麻； 炮制品； 揮發(fā)性成分； 頂空固相微萃?。?氣相色

3、譜-質(zhì)譜法；升麻為毛茛科植物大三葉升麻cimicifuga heracleifolia kom.、興安升麻cimicifuga dahurica（turcz.）maxim.或升麻cimicifuga foetida l.的干燥根莖1.入藥始載于 神農(nóng)本草經(jīng)，被列為上品。屬于多年生植物，主產(chǎn)于東北、四川、陜西、青海等省。性微寒，味辛、甘、無毒，歸脾、肺、大腸、胃經(jīng)。具有發(fā)表透疹，清熱解毒，升舉陽氣的功效。臨床主治風熱頭痛，齒痛，口瘡，咽喉腫痛，麻疹不透，陽毒發(fā)斑，脫肛，子宮脫垂。升麻中的化學成分主要是環(huán)阿爾廷烷型三萜、苯丙素類、色原酮類、揮發(fā)油等2,其中9,19-環(huán)阿爾廷型四環(huán)三萜（環(huán)菠蘿蜜烷型

4、四環(huán)三萜），是升麻屬的特征成分3,是近年來關(guān)于升麻成分研究的熱點。關(guān)于升麻的炮制品研究，有蜜炒升麻、醋炒升麻、酒炒升麻、升麻炭，現(xiàn)代臨床使用的升麻炮制品主要為升麻片和蜜升麻。晉代 肘后備急方 中有“蜜煎并數(shù)數(shù)食”的記載。升麻蜜炙后可緩和生品的辛散作用，增強其升舉脾陽之功，兼蜜炙的甘補之性，減少對胃的刺激性，更適應(yīng)于脾氣虛、中氣下陷所致的久瀉脫肛、子宮下垂、崩漏及胃下垂等證4.文獻報道，升麻蜜炙后，阿魏酸，異阿魏酸等酚酸成分含量均升高，推測可能是酸酯類成分在炮制過程中水解生成有機酸和醇類，使阿魏酸和異阿魏酸含量增加5-6.而揮發(fā)油作為升麻發(fā)表透疹、解熱鎮(zhèn)痛的主要活性成分7-8,在蜜炙后揮發(fā)性成分

5、含量和種類的變化卻無相關(guān)文獻報道。本研究首次采用頂空固相微萃?。╤s-spme）結(jié)合氣質(zhì)（gc-ms）聯(lián)用對升麻及其蜜炙品揮發(fā)性成分分析，并比較升麻炮制前后成分法變化，以期為升麻的物質(zhì)基礎(chǔ)、藥理作用和質(zhì)量標準研究提供參考依據(jù)。1 材料1.1 儀器agilent6890/5973型氣相-質(zhì)譜-計算機聯(lián)用儀（美國hewlett-packard公司）；手動固相微萃取（spme）進樣裝置（德國 ika公司）；頂空瓶（15 ml）；65 m 聚二甲基硅氧烷-二乙烯基苯（pdms/dvb）萃取纖維頭（美國 supelco 公司）；alc-210.2 型電子天平（北京賽多利斯天平有限公司d=0.01 g）。

6、1.2 試藥實驗用升麻藥材購于安徽致鑫中藥飲片有限公司（批號 20200109,產(chǎn)地：四川），經(jīng)湖北中醫(yī)藥大學生藥教研室楊紅兵副教授鑒定為毛茛科升麻屬植物升麻cimicifuga foetida l.的干燥根莖。2 方法2.1 蜜炙升麻的制備參照2020版中國藥典四部通則0213炮制炙法：取50 g熟蜜，用適量開水稀釋，淋入200 g升麻片中內(nèi)拌勻，悶潤，置炒制鐵鍋內(nèi)，用文火加熱，炒至不粘手時，取出晾涼。炮炙過程由湖北中醫(yī)藥大學炮炙教研室王光忠教授指導。2.2 頂空固相微萃取條件將需要分析樣品粉碎成粗粉，經(jīng)過對藥材取樣量、萃取頭種類、萃取溫度、平衡時間、萃取時間、解析時間等因素進行考察9,得出

7、最佳萃取條件：稱取升麻生品樣品1.5 g,置于15 ml頂空瓶中，插入裝有65 m pdms/dvb萃取纖維頭的手動進樣器，在150 下平衡15 min后，再壓縮手柄伸出萃取頭萃取15 min,取出，立即插入氣相色譜儀進樣口（溫度230）解析3 min.蜜炙升麻的固相微萃取條件生品的條件一致。2.3氣相色譜-質(zhì)譜分析條件gc條件：色譜條件hp-5ms石英毛細管柱（30 m×0.25 mm,0.25 m）；升溫程序：從50 開始，以15 min-1升溫至90 ，再以8 min-1升溫至120 ，最后以15 min-1升溫至230 ；載氣：高純度he （99.999%），柱流速：0.8

8、mlmin-1,進樣口溫度：230 ，不分流進樣；ms條件：ei 源；離子源溫度230 ，電離電壓70 ev;四級桿溫度150 ；掃描質(zhì)量范圍35550 m/z.蜜炙升麻gc-ms條件與生品的條件一致。2.4 重復(fù)性試驗分別稱取升麻生品藥材及蜜炙品各6份，照最佳固相微萃取條件萃取升麻生品揮發(fā)性成分，照“2.3”項下氣相色譜條件進行分析。結(jié)果表明生品中各主要色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的rsd值分別為1.99%、2.12%;蜜炙品的為2.01%、2.29%.結(jié)果表明該方法重復(fù)性較好，適合升麻揮發(fā)性成分的分析鑒定。3 結(jié)果照最佳萃取條件和“2.2”和“2.3”項下方法，分析升麻生品與蜜炙品中揮

9、發(fā)性成分，得到各自揮發(fā)性成分的總離子流圖。各峰的質(zhì)譜圖經(jīng)化學工作站數(shù)據(jù)系統(tǒng)處理及采用面積歸一化法計算各成分的相對百分含量，各峰的質(zhì)譜圖經(jīng)計算機質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫nist08檢索，并且結(jié)合相關(guān)文獻進行人工譜圖解析，確定了升麻生品和蜜炙品中揮發(fā)性成分的化學組成。4 討論4.1 升麻生品揮發(fā)性成分的分析從圖1及表1可以看出采用頂空固相微萃取結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用法，從升麻生品中分離出43個峰，鑒定出31種成分，占總揮發(fā)性成分的93.70%.生品揮發(fā)性成分中主要是單萜類及其衍生物，共有13個成分，占總揮發(fā)性成分的80.20%,其中含量最高的成分為y-檸檬烯，占揮發(fā)性成分的36.28%.其他主要成分有-蒎烯（11.71%

10、）、羅勒烯（5.62%）、-側(cè)柏烯（5.06%）、萜品烯（4.76%）等。除單萜類成分，其他含量較高的成分有丁香酚（3.56%）、癸醛（1.51%），1-石竹烯（1.29%），植烷（1.22%）。y-檸檬烯具有芳香氣味，文獻報道在留蘭香，羅勒，黃檗果實，茴香菖蒲中檢測到該活性成分10,但目前未見有y-檸檬烯的藥理作用報道。-蒎烯具有殺菌、抗炎作用，并對人體呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等有保健作用，可抗癌、利膽。除此之外-蒎烯具有拮抗溶血、改善丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和顯著的抗氧化活性11.羅勒烯具有對多種真菌都有抑制作用，能導致真菌細胞膜損傷甚至細胞死亡以及消炎、止咳、平喘和祛痰作用，臨床上用于

11、治療氣管炎12,也有文獻報道羅勒烯還具有解熱、解毒、活血止痛和提神的作用13,這與升麻具有解熱鎮(zhèn)痛的功效相符合。升麻生品中這些有效成分不僅能為升麻生品的藥理作用提供支撐，還能為升麻生品物質(zhì)基礎(chǔ)的進一步研究提供參考依據(jù)。4.2 升麻蜜炙品揮發(fā)性成分的分析從升麻炮制品中分離出36個峰，并鑒定出28種成分，占總揮發(fā)性成分的97.11%.蜜炙升麻揮發(fā)性成分中也主要是單萜類成分，共鑒定出15個成分，占總揮發(fā)性成分的88.78%.其中含量最高的為3-蒈烯，占揮發(fā)性成分的42.14%,其他主要成分有-蒎烯（11.32%）、羅勒烯（7.73%）、萜品烯（3.50%）、芳樟醇（2.78%）、蒎烯（2.89%）、

12、萜品油烯（2.55%）、丁酸芳樟酯（1.31%）。3-蒈烯為單萜烯的主要組分，具有強烈的松木樣香氣，常被用于抗炎、抗菌。如含3-蒈烯的山松精油，獨活揮發(fā)油具有抗炎作用14.芳樟醇常應(yīng)用于香精香料化妝品產(chǎn)業(yè)，是一種重要的醫(yī)藥中間體，有研究表明芳樟醇具有鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤、抗焦慮、鎮(zhèn)靜催眠、抗菌等藥理活性15.另外還具備降血壓和強心的作用和對氣管平滑肌也起松弛作用，丁酸芳樟酯、蒎烯、1-石竹烯、-月桂烯等多種成分為化工生產(chǎn)中的常用香精、香料，在食品香料、化妝品、香精產(chǎn)業(yè)中應(yīng)用非常廣泛16.4.3升麻及其蜜炙品揮發(fā)性成分的對比分析從圖1、圖2可以看出升麻生品和蜜炙品色譜峰型相似，不易區(qū)別。從表1中可

13、以看出兩者揮發(fā)性成分主要是烯類，醇類，醛酮類。兩者的共有成分18種，分別為己醛、3-崖柏烯、蒎烯、-側(cè)柏烯、萜品烯、-蒎烯、d2-蒈烯、3-蒈烯、羅勒烯、萜品油烯、4-萜烯醇、癸醛、丁酸芳樟酯、十三烷、丁香酚、1-石竹烯、橙花基丙酮、十五烷，共有成分分別占白前和蜜炙白前揮發(fā)性成分總量的49.07%、87.88%.說明生品與蜜炙品的主要揮發(fā)性成分含量和種類具有較大的差異，生品中y-檸檬烯（36.28%）相對含量最多，蜜炙品中3-蒈烯（42.14%）相對含量最多，兩者出峰時間接近，互為c10h16同分異構(gòu)體。本文升麻生品經(jīng)過炮炙后，y-檸檬烯未在蜜炙品中檢測到，推測炒制過程中可能y-檸檬烯不耐高溫

14、大量消失或轉(zhuǎn)化，3-蒈烯大量生成或其他成分轉(zhuǎn)化而成。同時后期還需收集多個升麻樣本，進一步驗證升麻進行炮炙后，揮發(fā)性成分規(guī)律性的的變化。升麻不同炮制品在臨床上使用的側(cè)重點是不同的，升麻生品和蜜炙品中揮發(fā)性成分具有一定的差異，從而為升麻臨床使用提供參考依據(jù)。本實驗采用頂空固相微萃取法（hs-spme），并結(jié)合氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)（gc-ms）分析檢測升麻及其蜜炙品的揮發(fā)性成分，為升麻炮制前后藥理作用發(fā)生變化提供科學依據(jù)，并為升麻后期物質(zhì)基礎(chǔ)的研究開發(fā)利用提供參考依據(jù)。參考文獻1 ch.p.volume ones.2020:73-74.2 liu w,chen sj,chen sb.research pro

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