植物生理學(xué)實驗三植物光合速率測定

1、實驗實驗3-1 紅外線紅外線CO2氣體分析儀（氣體分析儀（CB-1101）法測定植物光合速率）法測定植物光合速率一、實驗?zāi)康?理解植物光合速度測定的方法 掌握紅外線CO2分析儀測定植物光合速率的原理 了解紅外線CO2分析儀的操作方法本實驗利用本實驗利用CO2的變化的變化來測定。來測定。二、實驗原理 許多由異原子組成的氣體分子對紅外線都有特異的吸收帶。CO2的紅外吸收帶有四處，其吸收峰分別在2.69m、2.77m、4.26m和14.99m處，其中只有4.26m的吸收帶不與H2O的吸收帶重疊，紅外儀內(nèi)設(shè)置僅讓4.26m紅外光通過的濾光片，當該波長的紅外光經(jīng)過含有CO2的氣體時，能量就因CO2的吸收

2、而降低，降低的多少與CO2的濃度有關(guān)，并服從朗伯-比爾定律。分別供給紅外儀含與不含CO2的氣體，紅外儀的檢測器便可通過檢測紅外光能量的變化而輸出反映CO2濃度的電訊號。采用開放式氣路系統(tǒng)：該系統(tǒng)用雙氣室IRGA,以氣泵為動力，將流經(jīng)同化室前的空氣（參比氣）泵入一個氣室，流經(jīng)同化室后的空氣（樣本氣）泵入另一個氣室（分析氣室），最后將氣體排空，由儀器指示參比氣和樣本氣的CO2濃度差，根據(jù)流量、同化室中葉片的面積，求出葉片的光合速率。泵流量計 進氣樣品IRGA（C2）參比IRGA (C1)葉室參比室排氣 植物材料植物材料：小白菜或者甘藍型油菜：小白菜或者甘藍型油菜 儀器：儀器：CB-1101紅外線紅

3、外線CO2氣體分析儀氣體分析儀三、材料三、材料與主要儀器與主要儀器CB-1101CB-1101操作面板及氣路圖四、實驗步驟四、實驗步驟1、儀器組裝及調(diào)零：、儀器組裝及調(diào)零：，打開電源預(yù)熱5 min打開氣泵開關(guān)用堿石灰管分別連接面板上的“OUT”和“IN”。利用CO2調(diào)零調(diào)零調(diào)試儀器。調(diào)試儀器。2、樣品測定：、樣品測定：將葉片正確放入葉室，并封閉葉室。將葉片正確放入葉室，并封閉葉室。 打開開路開關(guān)按下初測按鈕待數(shù)值穩(wěn)定后按下測終按鈕待數(shù)值穩(wěn)定后按下完成按鈕記錄測定結(jié)果【需要記錄起始CO2濃度濃度C1、測定完成后、測定完成后CO2濃度濃度C2，葉面溫，葉面溫度度t，氣體流速，氣體流速V】五、原始記

4、錄五、原始記錄 V， C1， C2， S ，t V為氣體流速，單位 L/min; C1，C2為測定啟始和反應(yīng)完成后的CO2濃度，單位 L/L；S為光合測定的葉面積，單位為m2，本實驗固定為6.510-4 m2 ；P為氣壓，單位 bar；t為同化室葉片表面溫度，單位。 S六、結(jié)果計算六、結(jié)果計算Pn-凈光合速率（單位為molm-2s-1）Pn(mmol CO2/m2S)=V(C1-C2)273P60S22.4(273+t)1.013七、分析討論七、分析討論1、測定時為何需要從高空采氣？、測定時為何需要從高空采氣？2、計算的結(jié)果為凈光合速率，為什么？、計算的結(jié)果為凈光合速率，為什么？3、本方法是否

5、可以用于測定植物的呼吸速率，、本方法是否可以用于測定植物的呼吸速率，如果要測定呼吸速率操作過程中應(yīng)注意什如果要測定呼吸速率操作過程中應(yīng)注意什么？么？4、如果要測定植物的實際光合速率，應(yīng)如何、如果要測定植物的實際光合速率，應(yīng)如何操作？操作？5、結(jié)合結(jié)合自已的自已的植物光合速率結(jié)果進行分析討植物光合速率結(jié)果進行分析討論。論。 實驗實驗3-2 葉綠素含量的測定葉綠素含量的測定一、實驗?zāi)康亩?、實驗原?、吸光度具有加和性：混和溶液在某一波長下的吸光度為各組分在該波長下吸光度之和。不同組分在某波長下具有不同的吸光系數(shù)。2、葉綠素在紅光區(qū)具有最大吸收峰，但在不同溶劑下有不同的最大吸收峰波長 在95%乙醇中

6、，葉綠素a和葉綠素b的最大吸收峰的波長分別為665 nm和649nm，兩者的濃度可根據(jù)以下方程組計算求得： Ca=13.95A6656.88A649 Cb=24.96A6497.32A665三、三、實驗實驗材料材料與儀器與儀器 實驗材料實驗材料：小白小白菜葉片或油菜葉片菜葉片或油菜葉片 主要儀器：分光光度計主要儀器：分光光度計四、實驗步驟稱取葉片稱取葉片0.050.1g，剪碎或撕碎后剪碎或撕碎后放放入入10mL刻度試管中，加入刻度試管中，加入56mL 95%乙醇，乙醇，置置80水浴鍋中，至組織水浴鍋中，至組織完全完全變白，取出變白，取出冷卻冷卻。用用95%乙醇定容至乙醇定容至10mL，搖勻。以，搖勻。以95%乙醇為空白，在波長乙醇為空白，在波長665nm、649nm下下測定吸光度。測定吸光度。五、原始數(shù)據(jù)記錄五、原始數(shù)據(jù)記錄 A665， A649， W， V六六、結(jié)果計算結(jié)果計算Ca (mg/L) = 13.95A665 6.88A649 Cb (mg/L) = 24.96A649 7.32A665 葉綠素總濃度葉綠素總濃度(mg/L) = Ca + Cb 葉綠素的比值葉綠素的比值 = Ca Cb=CVNW1000葉綠葉綠素的素的含量 (mg/g) 七、分析討論七、分析